评阅人 : 2012 年 5 月

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婆锣池
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1 学校编码 :10384 分类号密级学号 : UDC 硕士学位论文墨旱莲对高脂血症动物降血脂及肝脏的保护作用 The hypolipidemic and liver protective effect of Eclipta prostrata Linn in hyperlipidemic animal models 卢伟指导教师姓名 : 金鑫教授赵云助理教授专业名称 : 药理学论文提交日期 :2012 年月论文答辩时间 :2012 年月学位授予日期 : 答辩委员会主席 :

2 评阅人 : 2012 年 5 月

3 厦门大学学位论文原创性声明本人呈交的学位论文是本人在导师指导下, 独立完成的研究成果本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果, 均在文中以适当方式明确标明, 并符合法律规范和厦门大学研究生学术活动规范 ( 试行 ) 另外, 该学位论文为 ( ) 课题 ( 组 ) 的研究成果, 获得 ( ) 课题 ( 组 ) 经费或实验室的资助, 在 ( ) 实验室完成 ( 请在以上括号内填写课题或课题组负责人或实验室名称, 未有此项声明内容的, 可以不作特别声明 ) 声明人 ( 签名 ): 年月日

4 厦门大学学位论文著作权使用声明本人同意厦门大学根据中华人民共和国学位条例暂行实施办法等规定保留和使用此学位论文, 并向主管部门或其指定机构送交学位论文 ( 包括纸质版和电子版 ), 允许学位论文进入厦门大学图书馆及其数据库被查阅借阅本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士硕士学位论文共建单位数据库进行检索, 将学位论文的标题和摘要汇编出版, 采用影印缩印或者其它方式合理复制学位论文本学位论文属于 : ( )1. 经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文, 于年月日解密, 解密后适用上述授权 ( )2. 不保密, 适用上述授权 ( 请在以上相应括号内打或填上相应内容保密学位论文应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文, 未经厦门大学保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文此声明栏不填写的, 默认为公开学位论文, 均适用上述授权 ) 声明人 ( 签名 ): 年月日

6 摘要墨旱莲 (Eclipta prostrata Linn) 作为中药, 在我国应用历史悠久本研究采用 HPD-450 型大孔树脂富集的墨旱莲不同浓度乙醇洗脱部位对高脂血症动物降血脂及肝脏保护的作用在 HPD-450 型大孔树脂富集得到墨旱莲不同浓度乙醇洗脱部位的基础上, 通过活性部位筛选 :KM 小鼠腹腔注射 Triton WR-1339 建立急性高脂血症, 同时灌胃不同浓度乙醇洗脱部位 (800 mg/kg),12 h 及 20 h 后取血测定 TC TG LDL-C 及 HDL-C, 筛选出活性部位 70% 乙醇洗脱部位, 而后采用 HPLC 建立质量评价标准 70% 乙醇洗脱部位药效验证 : 叙利亚金黄地鼠随机分为 7 组 : 正常对照组高脂模型组血脂康组阿伐他汀组, 墨旱莲 70% 乙醇洗脱部位低 (75 mg/kg) 中(150 mg/kg) 高(250 mg/kg) 剂量组, 除正常组外各组给予高脂饲料, 同时灌胃给药,6 周后测定总胆固醇 (TC) 甘油三酯(TG) 低密度脂蛋白 (LDL-C) 高密度脂蛋白(HDL-C) 超氧化物歧化酶(SOD) 丙二醛(MDA) 谷草转氨酶 (GOT) 谷丙转氨酶(GPT) 和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 水平, 同时观察肝脏结构变化结果表明, 与模型组相比, 墨旱莲给药组 TC,TG,LDL-C, MDA,GOT,GPT 水平均降低,HDL-C,SOD,GSH-Px 水平升高, 但以 150 mg/kg 及 250 mg/kg 剂量组结果具有显著性差异, 且呈剂量依赖性墨旱莲 70% 乙醇洗脱部位 250 mg/kg 剂量组 HE 染色可见明显程度抑制肝脏脂肪性病变本研究表明采用大孔树脂富集的墨旱莲 70% 乙醇洗脱部位可通过调节脂质代谢降低血脂水平并通过抗氧化作用减轻高脂血症肝脏的损伤关键词 : 墨旱莲 ; 高脂血症 ; 金黄地鼠 I

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8 Abstract Eclipta prostrata Linn, as a traditional Chinese medicine, has a long history in treating diseases. The hypolipidemic and liver protective effect of ethanol elutions of Eclipta by a macroporous resin column chromatography was estimated in animal models. First, a ethanol extract of Eclipta and 4 elutions (800 mg/kg) by a macroporous resin column chromatography from the ethanol extract were investigated in male KM mice with acute hyperlipidemia induced by Triton WR Then the standard of the active elution (70% ethanol elution) preparation technology was established by HPLC. And the hypolipidemic effect of 70% ethanol elution by the macroporous resin column chromatography was verified in high fat-fed hamster models. The morphologic changes of the livers were examined by light microscopy. The results showed that 70% ethanol elution group showed a significant decrease in plasma cholesterol (TC), triglyceride (TG), LDL-cholesterol (LDL-C) levels, compared with the hyperlipidemic group. Also it showed significant reduction in liver weight, liver tissue malondialdehyde (MDA), glutamic-oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic-pyruvic transaminase (GPT) levels and a raising in liver tissue superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px) activity, in a dose dependent way. 250 mg/kg of 70% ethanol elution showed a apparent inhibition of fatty liver lesion. Our study suggests that Eclipta has the potential for use in treatment of hyperlipidemia and liver protection. Key words: Eclipta prostrate; Hyperlipidemia; golden hamster III

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10 目录中文摘要...I 英文摘要...III 第一章前言高脂血症概述临床常用的降血脂药物中医对高脂血症的病因病机研究墨旱莲 (Eclipta prostrata Linn) 概述墨旱莲药理学研究墨旱莲化学成分研究本课题研究目的参考文献第二章建立动物高脂血症模型实验材料试剂和器材实验动物实验方法建立急性小鼠高脂血症模型建立饮食性金黄地鼠高脂血症模型结果小结参考文献第三章墨旱莲提取物的制备及质量标准的建立试剂与器材操作步骤结果... 34

11 3.4 小结参考文献第四章墨旱莲对高脂血症动物降血脂及肝脏保护作用墨旱莲不同浓度乙醇洗脱部位对急性高脂血症小鼠降血脂作用实验材料方法结果小结参考文献墨旱莲 70% 乙醇洗脱部位对高脂血症金黄地鼠降血脂及肝保护作用实验材料方法结果小结参考文献第五章结论与展望缩略语表致谢... 73

12 Catalogue Abstract in Chinese...I Abstract in English. III Chapter 1 Introduction Overview of hyperlipemia Blood lipid-lowering drugs for clinical therapy Research Progress on TCM Syndrome of Hyperlipemia Overview of Eclipta prostrate Linn Pharmacological studies of Eclipta Chemical constituents of Eclipta The purpose of the paper.15 Reference. 15 Chapter 2 Establish the model of hyperlipemia in animals Materials Reagent and equipment Animals Methods Animal models of hyperlipidemia induced by Triton WR Animal models of hyperlipidemia induced by high-fat diet Results Conclusions..28 Reference. 29 Chapter 3 Extraction of Eclipta and establishment of the standards Materials and equipments...31

13 3.2 Methods Results Conclusion...35 Reference. 36 Chapter 4 Hypolipidemic and liver protective effect of Eclipta in animals The hypolipidemic effect of Eclipta in Triton WR-1339 induced hyperlipidaemia mice Materials Methods Results Conclusion 43 References The hypolipidemic effect of 70% ethanol elution of Eclipta in fat-fed golden hamsters Materials Methods Results Conclusion 69 References 69 Chapter 5 Conclusion and expectation..71 List of Abbreviations Acknowledgement...73

14 第一章前言第一章前言高血脂对身体的损害是一个缓慢的逐渐加重的隐匿过程随着血脂的升高以及血脂异常时间的延长, 它会引发动脉粥样硬化冠心病高血压 [1-2] 糖尿病 [3-4] 中风脂肪肝 [5-6] 等多种疾病在美国澳大利亚, 高血脂引起心脑血管病症而死亡的人数, 在所有疾病中占第一位而我国高脂血症实际平均发病率可能达到一成以上, 全国有超过一亿的人口需要接受调脂治疗随着人们生活水平的不断提高, 血脂异常还将呈现明显的增长趋势高脂血症在中老年人当中发病率高, 随着我国步入老龄化社会, 高脂血症的发病率日益增高, 逐渐成为我国全民保健中一个重要内容随着高脂血症人群的不断增加, 以及人们对其危害性认识的提高, 对降血脂药物的需求不断扩大,2003 年全球最畅销的 200 种药品中, 有 8 种是降血脂产品 : 全球销量排名第一第二的药品都是降血脂制剂, 分别为辉瑞的阿伐他汀和默克的辛伐他汀令人瞩目的是, 降血脂药保持着每年 9% 的快速增长态势因此, 研究和开发新型降血脂药物具有重大的社会效益和经济效益综上所述, 高脂血症是一种常见病症, 它引起动脉粥样硬化, 乃至冠心病脑血栓脑出血等, 危及生命因此, 高脂血症不仅是血脂高一点, 其严重性绝对不能忽视另外, 高血脂的发病率呈逐年上升趋势, 仅我国就有接近一亿人口需要接受调脂治疗, 市场前景大故本项目选择调脂作为研究目的, 符合我国国情, 具有实际意义 1.1 高脂血症概述血浆中所含有的脂类统称为血脂, 包括甘油三酯 (TG) 胆固醇(CH) 胆固醇酯 (CE) 游离脂肪酸(FFA) 和磷脂 (PL) 血浆中的脂类能与血浆中的载脂蛋白(apo) 结合成为脂蛋白复合物, 是脂类在血液中存在转运及代谢的形式脂蛋白复合物呈球形, 颗粒内部为非极性分子如胆固醇酯和三酰甘油, 颗粒表面由磷脂游离胆固醇以及载脂蛋白组成的单分子层外壳覆盖 1

15 第一章前言图 1.1 脂蛋白结构示意图 Fig. 1.1 Structure of lipoprotein Apo 是一组水溶性的多肽, 是构成血浆脂蛋白的重要组分, 赋予脂类以可溶的形式, 迄今为止已从人血浆中分离出 18 种 apo 不仅在结合转运脂质和稳定脂蛋白结构上面发挥重要的作用, 并且还可以调节脂蛋白代谢关键酶的活性, 参加脂蛋白受体的识别, 引导血浆脂蛋白同细胞表面受体结合如 apoa-i 可以激活血浆中的卵磷脂胆固醇脂酰转移酶 (LCAT), 并且可以识别高密度脂蛋白 (HDL) 受体 ;apoa-ii 可以激活肝脂肪酶 (HL), 稳定 HDL 的结构 ;apob48 可以促进乳糜微粒 (CM) 的合成 ;apob-100 可以识别低密度脂蛋白 (LDL) 受体 ;apoc-i 可以激活卵磷脂胆固醇脂酰转移酶 (LCAT);apoC-II 可以激活脂蛋白脂肪酶 (LPL);apoD 可以转运 CE;apoE 可以识别 LDL 受体等脂蛋白根据密度的不同可分为乳糜微粒 (CM) 极低密度脂蛋白(VLDL) 低密度脂蛋白 (LDL) 中间密度脂蛋白(IDL) 和高密度脂蛋白 (HDL) 及脂蛋白 (a)[lp(a)] CM 主要含有外源性甘油三酯, 是转运外源性甘油三酯及胆固醇到肝脏及外周组织的主要形式, 而 VLDL LDL IDL 可将肝内合成的内源性脂质转运至肝外组织一般 CM 和 VLDL 直径较大, 不易透过血管内膜, 因此均无致动脉粥样硬化 (AS) 作用但病理情况下 CM 和 VLDL 的分解代谢产物, 直径相对较小, 胆固醇含量相对较高, 因而会产生强烈的致动脉粥样硬化作用 2

16 第一章前言 VLDL 在肝细胞内合成, 是转运肝脏合成的 TG 进入血循环的主要形式 VLDL 中的载脂蛋白 apoc-ii 激活 LPL, 并水解其内的 TG, 进而转变为 IDL 部分的 IDL 与肝细胞膜 apoe 受体结合, 由肝细胞摄取代谢 ; 未被肝细胞摄取的 IDL, 其 TG 被 HL 和 LPL 进一步水解, 转变为 LDL 继续进行代谢 LDL 由 VLDL 转变而来, 富含胆固醇, 主要功能是把胆固醇运输到全身各处细胞大部分 LDL 是通过其中的 apob-100 和 apoe 特异性结合 LDL 受体, 使 LDL 吞入细胞内降解少部分 ( 约 1/3)LDL 被周围组织 ( 包括血管壁 ) 摄取异化 HDL 是颗粒最小的血浆脂蛋白, 主要功能是将外周的胆固醇转给 LDL 或 IDL, 而后被肝脏利用, 担负着将内源性胆固醇 ( 以胆固醇酯为主 ) 从组织往肝脏的逆向转运, 因此具有保护血管的作用 HDL 是抗动脉粥样硬化因子, 是冠心病的保护因子, 俗称血管清道夫 LP(a) 是一种特殊独立的血浆脂蛋白, 生理作用尚不清楚 20 世纪 80 年代末, 人们发现其与动脉粥样硬化有关, 并且与纤溶酶原 (PLG) 的结构具有高度同源性, LP(a) 仍是当今脂蛋白研究中最热门的内容之一血脂异常的类型血脂异常是血液脂质代谢异常的简称, 按病因可以分为原发性和继发性两大类, 原发性血脂异常指由于遗传因素或后天的饮食习惯生活方式以及其他自然环境因素等引起的脂质代谢异常, 根据升高的脂蛋白类型不同可分为 6 种类型 ( 表 1.1) 继发性血脂异常多由于代谢紊乱性疾病或其他因素所致, 如肾病综合征糖尿病甲状腺功能低下肝脏疾病和药物因素如应用 β 肾上腺素受体阻断药噻嗪类利尿药等血脂代谢异常主要表现为易致动脉粥样硬化的脂蛋白 ( 如 IDL LDL VLDL) 及其载脂蛋白 ( 如 apob) 含量过高, 或是抗动脉粥样硬化的脂蛋白 ( 如 HDL) 及其载脂蛋白 ( 如 apoa) 含量过低, 前者称为高脂血症或高脂蛋白血症表 1.1 原发性高脂血症的类型 Table 1.1 The type of primary hyperlipidemia 类型升高的脂蛋白 Ch TG 致动脉粥样硬化的作用 I CM IIa LDL ++ 高度 IIb LDL VLDL 高度 3

17 Degree papers are in the Xiamen University Electronic Theses and Dissertations Database. Full texts are available in the following ways: 1. If your library is a CALIS member libraries, please log on and submit requests online, or consult the interlibrary loan department in your library. 2. For users of non-calis member libraries, please mail to etd@xmu.edu.cn for delivery details.

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