学校编码 :10384 分类号密级 学号 : UDC 硕士学位论文 基于显微成像流式细胞技术的近岸水域 浮游植物类群组成和动态研究 Composition and Dynamics of Coastal Phytoplankton Groups by Flow Cytom
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1 基于显微成像流式细胞技术的近岸水域浮游植物类群组成和动态研究曹振指导教师黄邦钦教授陈纪新高工厦门大学
2 学校编码 :10384 分类号密级 学号 : UDC 硕士学位论文 基于显微成像流式细胞技术的近岸水域 浮游植物类群组成和动态研究 Composition and Dynamics of Coastal Phytoplankton Groups by Flow Cytometry Coupled with Microscopic Images 曹振 指导教师姓名 : 黄邦钦教 授 陈纪新高级工程师 专业名称 : 环 境 科 学 论文提交日期 : 年 月 论文答辩时间 : 年 月 学位授予日期 : 年 月 2015 年 0 6 月
3 厦门大学学位论文原创性声明 本人呈交的学位论文是本人在导师指导下, 独立完成的研究成果 本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果, 均在文 中以适当方式明确标明, 并符合法律规范和 厦门大学研究生学术活 动规范 ( 试行 ) 另外, 该学位论文为 ( ) 课题 ( 组 ) 的研究成果, 获得 ( ) 课题 ( 组 ) 经费或实验室的资 助, 在 ( ) 实验室完成 ( 请在以上括号内填写课题 或课题组负责人或实验室名称, 未有此项声明内容的, 可以不作特别 声明 ) 声明人 ( 签名 ): 年 月 日
4 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人同意厦门大学根据 中华人民共和国学位条例暂行实施办法 等规定保留和使用此学位论文, 并向主管部门或其指定机构送交学位论文 ( 包括纸质版和电子版 ), 允许学位论文进入厦门大学图书馆及其数据库被查阅 借阅 本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士 硕士学位论文共建单位数据库进行检索, 将学位论文的标题和摘要汇编出版, 采用影印 缩印或者其它方式合理复制学位论文 本学位论文属于 : ( )1. 经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文, 于 2013 年 12 月 1 日解密, 解密后适用上述授权 ( )2. 不保密, 适用上述授权 ( 请在以上相应括号内打 或填上相应内容 保密学位论文应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文, 未经厦门大学保密 委员会审定的学位论文均为公开学位论文 此声明栏不填写的, 默认 为公开学位论文, 均适用上述授权 ) 声明人 ( 签名 ): 年 月
5 目录 目录 缩略词中英文对照表...I 摘要... II Abstract... IV 第一章绪论 浮游植物 浮游植物检测方法 浮游植物原位观测技术的发展与应用 流式细胞技术在浮游植物检测中的应用与发展 模型分析在浮游植物研究中的发展与应用 本论文的科学问题和研究内容 第二章材料与方法 研究海域 Cytosub 观测参数 分析和测试方法 技术路线 第三章浮游植物类群聚类方法 实验藻种选择和培养 CytoSub 仪器参数设置 浮游植物细胞特征提取方法 浮游植物类群的确定 实验结果 浮游植物类群划分 浮游植物生物量的估算 讨论 单种培养浮游植物类群划分... 45
6 目录 现场浮游植物类群划分 现场浮游植物细胞体积和生物量估算 小结 第四章厦门湾水域浮游植物类群的周年变化 环境参数动态 浮游植物类群组成的周年变化 浮游植物类群粒径的周年变化 浮游植物类群细胞丰度百分比的变化 浮游植物类群细胞生物量百分比的变化 浮游植物类群多样性指数周年变化 讨论 浮游植物类群周年变化 浮游植物类群的空间分布特征 小结 第五章总结与展望 主要结论 创新点与特色 不足之处 未来工作 参考文献 致谢... 93
7 Contents Contents Abbreviations...I Abstract in Chinese... II Abstract in English... IV Chapter 1 Introduction Phytoplankton Research progress of the marine phytoplankton Development of in situ observation on phytoplankton Development of flow cytometry Development and application of model analysis in the study of phytoplankton Scientific questions and contents in this study Chapter 2 Materials and methods Research area Cytosub Observed parameters Analysis and test methods Technical routes Chapter 3 Approaches to cluster phytoplankton Culture of single species phytoplankton Parameters setting of CytoSub Flow cytometry approach to phytoplankton particle characterization Identify of phytoplankton clusters Results Clusters selection of phytoplankton... 27
8 Contents Estimation of cell volume and carbon biomass Discussion Clusters selection of single species phytoplankton Clusters selection of field phytoplankton Estimation of cell volume and carbon biomass Summary Chapter 4 Temporal distribution of phytoplankton in Xiamen Bay Environmental factors Temporal variation of phytoplankton abundance and biomass Temporal variation of phytoplankton cell size Phytoplankton abundance ratio in each station Phytoplankton biomass ratio in each station Temporal variation of Shannon-Weaner index Discussion Temporal variation of phytoplankton Spatial distribution of phytoplankton Summary Chapter 5 Summary and prospect Conclusion of the dissertation Characteristics and innovations Insufficients Prospects References Acknowledgements... 93
9 缩略词 缩略词中英文对照表 Abbreviations 缩略词 英文名称 中文名称 AMs Additive models 加性模型 CCA Canoncial correspondence analysis 典型对应分析 Chl a Chlorophyll a 叶绿素 a Crypto Cryptophytes 隐藻 Cyano1 Cyanobacteria group 1 蓝藻类 1 Cyano2 Cyanobacteria group 2 蓝藻类 2 Cyano3 Cyanobacteria group 3 蓝藻类 3 DO Dissolved oxygen 溶解氧 FCM Flow cytometry 流式细胞术 FLO Orange fluorescence 橙色荧光 FLR Red fluorescence 红色荧光 FLY Yellow fluorescence 黄色荧光 FWS Forward scatter 前向散射 GAMMs Generalized additive mixed models 广义加性混合模型 GAMs Generalized additive models 广义加性模型 HABs Harmful algal blooms 有害藻华 HPLC High performance liquid chromatography 高效液相色谱 Micro1 Micro-size eukaryotic phytoplankton 小型真核类 Nano1 Micro-size eukaryotic phytoplankton group 1 微型真核类 1 Nano2 Micro-size eukaryotic phytoplankton group 2 微型真核类 2 NH4 Ammonium 铵盐 NO2 Nitrite 亚硝酸盐 NO3 Nitrate 硝酸盐 PO4 Phosphate 磷酸盐 Sal Salinity 盐度 SiO3 Silicate 硅酸盐 SWS Sideward scatter 侧向散射 TChl Total chlorophyll 总叶绿素 TDN Total nitrogen 总溶解态氮 TDP Total phosphorus 总溶解态磷 Temp Temperature 温度 I
10 摘要 摘要 浮游植物是海洋生态系统重要的初级生产者, 同时也是有害藻华等生态灾害的原因生物, 由于研究手段的限制, 人们目前还无法以高时间分辨手段探讨浮 游植物群落的演替及其机制问题 浮游植物原位观测技术为上述科学问题的解 决提供了技术平台, 但离其现场应用尚存在诸如便携性 稳定性 续航能力等 问题 本研究以具显微成像功能 -CytoSub ( 原位流式细胞仪 ) 为主要分析仪器, 采用实验室单种培养的浮游植物为参照, 开展了类群划分 粒级和生物量估算等应用技术研究 ; 同时应用该技术并结合多参数环境参数探头与叶绿素活性荧光仪技术, 开展了厦门湾表层水中浮游植物群落组成 ( 类群 粒级和碳生物量 ) 时空变动的研究 取得如下主要结果 : 通过 103 株单种藻类的测试结果得到了浮游植物类群的流式谱图, 选取了红色荧光 橙色荧光和前向散射的积分值作为浮游植物类群聚类参数, 共划分出甲藻和链状硅藻类群 (Micro- 级 ) 单细胞硅藻类群 (Nano- 级 ) 绿藻类群 (Nano- 级 ) 隐藻类群 (Crypto) 聚球藻类群 (Cyano) 和其他蓝藻类群 (Cyano), 为原位观测数据提供类群划分的参照与佐证 厦门湾水域表层水的浮游植物与单种藻类的流式谱图信息比对后共聚类识别出 7 个浮游植物类群, 分别是蓝藻类 Cyano1 Cyano2 Cyano3, 隐藻类 Crypto, Nano- 级 (Nano1 Nano2) 和 Micro- 级浮游植物 通过流式细胞仪 (CytoSub) 显微成像图像对以上 7 种浮游植物类群的细胞粒径进行了校准, 并通过细胞体积转换 碳含量来表征生物量 周年分布上, 蓝藻类 Cyano3 和 Nano1 类群在细胞丰度上 占优势,Nano2 和 Micro1 类群占据生物量优势, 而在秋 冬季蓝藻类生物量所占比例有所提升, 其丰度也占主要优势 Nano1 Nano2 Micro1 和 Crypto 类群是碳生物量的主要贡献者, 并且和营养盐的浓度呈负相关, 在春夏成为优势类群并且抑制了蓝藻类的增殖 不同站位之间浮游植物类群分布无显著性差异 ; 并且不同站位的 Shannon-Wiener 多样性指数亦无显著性差异, 但是在温度较高和光照较强的春夏季节具有高值, 其中冬季时多样性指数也随着蓝藻类的增殖出现高值 II
11 摘要 关键词 : 浮游植物 ; 类群划分 ; 显微成像流式细胞仪 ; 走航观测 ; 周年分布 III
12 Abstract Abstract Phytoplankton is the most important primary producer in marine ecosystem, while harmful algal species as well and make ecological disaster. Due to liminations of research methods, it is hard to explore phytoplankton community succession and its mechanism with high resolution of time and space. The application of in situ instruments afford a new platform to solve the above technique problems, but liminations and challenges of these instruments such as portability, stability and endurance still exist during field applications. In this study, the flow cytometry coupled with microscopic images (CytoSub) as the main platform to monitor the phytoplankton based on the single species phytoplankton spectrograms to calibrate cell size, clustering analysis and cell carbon estimation. Multi-parameter probe and chlorophyll fluorescence probe were also applied at the same time to determine the temporal variations of phytoplankton communities in Xiamen Bay. The application of in situ observation technology in biological oceanography makes a big promotion in the field of marine biology, ecology and the knowledge of different spatial and temporal biogeochemistry process. Some in situ instruments, which included CytoSub, YSI and BBE, had been applied to the underway and continuous observation on surface water phytoplankton in Xiamen Bay. 103 mono-species culture phytoplankton species were analyzed with CytoSub and gained several flow cytometry spectra. Integral red fluorescence, orange fluorescence and forward scatter size were selected as features to characterize phytoplankton clusters. 7 clusters were classified by CytoSub include dinoflagellates & euglenophytes & chain forming diatoms (Micro), unicellular diatoms & haptophytes (Nano), green alga (Nano), cryptophytes (Crypto), synechococcus (Cyano) and other cyanobacteria (Cyano). During the underway observation in Xiamen Bay from 2012 to 2013, with the application of CytoSub, and compared with the spectrograms of mono-species phytoplankton, 7 phytoplankton clusters were realized, which were cyanobacteria IV
13 Abstract (Cyano1, Cyano2, Cyano3), cryptophyte (Crypto), eukaryote (Nano1, Nano2 & Micro1). Images captured by the flow cytometry could be used to calibrate the size of phytoplankton cells, thus the cell volume could be calculated to transform the carbon content (biomass) of each cell. With the seasonal variation, the abundance of Nano1 cells clusters (Cyano1, Cyano2, Cyano3 & Nano1) took advantage on total abundance, while the biomass of Nano2 cells clusters (Nano2 & Micro1) took advantage on total biomass. In autumn and winter cyanobacteria increased biomass contribution, also dominating in the total abundance. The clusters of Nano2, Micro1, Nano1 and Crypto made the main contribution to total carbon biomass, and had a negative correlation with the nutrient concentration. They were dominated groups in spring and summer thus inhibited the growth of cyanobacteria. The distributions of phytoplankton didn t have a significant difference among those in the 6 stations, so did the Shannon-Weiner index; but the index got a high value in spring and summer, it also increased in winter with the increasing of cyanobacteria. Key Words: Phytoplankton; Clustering analysis; CytoSub; Underway observation; Temporal distribution V
14 第一章绪论 第一章绪论 1.1 浮游植物 浮游植物 (Phytoplankton) 是指浮游生物中一类具有色素或色素体, 能够进 行光合作用并制造有机物的自养型单细胞浮游生物 (Autotrophic plankton) ( 郑重, 1984; Thurman and Burton, 1997) 海洋浮游植物广泛存在于全球真光层海水中, 其总生物量达到 kg C (Nee, 2004), 几乎占到全球总初级生产的 50% (Field et al., 1998) 海洋浮游植物是海洋生态系统中不可或缺的一环, 数量大 种类多, 主要包括硅藻门 甲藻门 绿藻门 蓝藻门 金藻门和隐藻门等 海洋浮游植物是海洋生态系统中重要的初级生产者之一, 在海洋食物网中发挥着极其重要的作用, 其数量的多少影响到整个海洋生态系统的生产力, 对海洋生态系统中的物质循环和能量流动起到重要作用 在全球碳循环中, 它们将空气中的 CO2 固定后合成有机物, 这种有机物的生产 消费 传递 沉降和分解等一系列生物学过程形成的碳从海洋表层向深层的迁移称为海洋生物泵 (Biological pump); 海洋生物泵主要体现在以下三种形式上 :(1) 生物吸收 CO2 后迁出海洋真光层 ;(2) 碳在海洋真光层的再循环, 主要涉及到微生物的分解作用 ;(3) 游泳性 的迁移过程, 如浮游动物等 ( 戴民汉等, 2001) 海洋浮游植物的生物量 群落结构和生产力的变动会使碳通量 (Sarmiento et al., 1988), 云反照率 (Charlson et al., 1987) 和海水光通量与热通量 (Sathyendranath et al., 1991) 发生 改变, 致使全球气候以及海洋生态系统的改变 如 : 在浮游植物的生物量较高的 上升流系统中, 形成较短的食物链, 鱼类的产量也相应增高 (Pitcher, 1988; Chavez et al., 1991) 并且海洋浮游植物在海洋中的分布也是不均匀的, 这种差异会影响到海区的具体功能 在近岸海域, 由于海源和陆源营养盐的输入支持了较大粒径藻类的生长, 如硅藻 甲藻等 ; 孙军等 (2008) 在春季东海产卵场及邻近水域进行的浮游植物调查中发现硅藻是主要的优势类群, 其次为甲藻 ;Cermeño (2006) 在西班牙近岸海域上升流研究中也发现小型浮游植物 (Micro- 级 ) 贡献了 80% 的生物量 ; 而在远离近岸的大洋中, 浮游植物常常受到营养盐的限制, 细胞粒径较小, 多以微微型浮游植物为主 ; 如西太平洋暖池区表层上升流很弱甚至不存在, 1
15 第一章绪论 浮游植物的生长受到营养盐的限制, 而次表层上升流的存在使叶绿素最大层 (DCM 层 ) 具有较高的营养盐, 却又受到光的限制 ( 庄燕培, 2012);Agawin (2000) 分析了大量的海洋浮游植物数据后证实了 Pico- 级浮游植物在温暖 ( > 26 ) 的寡营养盐海区 (NO3 - + NO2 - < 1 μm) 是主要优势类群 ; 在大西洋的研究中 (Moreno-ostos et al., 2011) Pico- 级浮游植物在 DCM 层占优势, 而大于 2 μm 的浮 游植物在混合层所占比例才有增加, 可见小粒级浮游植物在大洋中占主要优势 浮游植物的生物量水平和群落结构也是经常变动的, 通常是由海区的环境条 件 ( 光 温度 盐度以及营养盐等 ) 的不同导致的 例如美国的 JGOFS 项目在阿拉伯海的研究表明 : 季风间期具有浮游植物的生物量较低 ( 主要是 Pico- 级浮游植物 ), 有着较低的有机碳输出 ; 而在季风期浮游植物的生物量较高 ( 主要是 Micro- 级浮游植物 ) 有着较高的有机碳输出 (Garrison et al., 2000) 另外不同粒级的浮游植物对海洋碳循环的贡献也不尽相同, 例如具有较大粒径的硅藻和甲藻沉降速率较快, 它们在碳泵中起到更重要的作用 ; 而较小粒级的原绿球藻和聚球藻等浮游植物通常难以沉降而作为再生生产力存在 ; 球石藻的主要成分中含有大量碳酸钙, 对海洋的碳通量有着独特的作用 (Mackey, 2002) 棕囊藻等产生的二甲基硫 (Dimethylsulphide, DMS) 对温室效应有负反馈作用 (Charlson et al., 1987); 束毛藻的固氮能力可以改变水体中总氮的含量 水体中环境因素的改变有时也会导致浮游植物短时间内出现大量增殖或聚集的现象, 这种事件称为藻华 (Algae bloom) 而一定条件下, 海洋浮游植物 原生动物或细菌等短时间内大量增殖和聚集引起水体变色或导致海洋生态系统严重破坏的现象称为有害藻华 (Harmful algal bloom, HAB) 有害藻华主要对海洋的生态平衡造成破坏: 在植物 性藻华发生初期, 由于植物的光合作用, 水体会出现高叶绿素 a 高溶解氧和高 化学耗氧量, 浮游植物的群落结构也显著改变 ; 这种环境的改变, 致使一些海洋生物不能正常生长 发育和繁殖, 导致一些生物逃避甚至死亡, 破坏了原有的生态平衡 因此浮游植物的生物量水平和群落结构的改变将会影响到海区的功能, 所以对浮游植物的生物量水平和结构的研究具有非常重要的理论价值与实际意义 2
16 第一章绪论 1.2 浮游植物检测方法 浮游植物鉴定的传统方法是使用光学显微镜镜检不同的藻类的形态学特征来区分种类并且能获得较清晰的藻类图片 但是这种方法需要前期对水样进行预处理 ( 一般采用鲁格试剂 多聚甲醛或戊二醛固定藻类细胞 ), 后期样品处理也要 耗费大量的时间和人力 除此之外, 开放大洋中浮游植物的个体微小, 形态也大 多趋于球形 (Potter et al., 1997) 这些个体微小的微微型真核浮游植物而缺乏显 著的形态学分类标准而难以区分, 因而使用显微镜来评估微微型浮游植物的多样性受到限制 70 年代末, 荧光显微镜 (Epifluorescence microscopy) 的发展为微微型浮游植物的研究提供了新的途径, 它利用叶绿素 a 的自发荧光或者被染色的遗传物质的荧光来研究海洋中微微型浮游植物的丰度 分布和多样性 (Murphy and Hangen, 1985) 浮游植物光合色素也是研究浮游植物类群的有效方法之一, 高效液相色谱 (High performance liquid chromatography, HPLC) 的发展为准确估算浮游植物类群生物量打下了基础 高效液相色谱通过分离和定量大约 50 种不同的浮游植物光合色素 (Gibb et al., 2000); 这些色素可以用来表征浮游植物类群的分布和组成, 例如岩黄藻素 (Fucoxanthin) 可以作为硅藻的特征色素, 青绿藻素 (Prasinoxanthin) 作为青绿藻的特征色素 (Gibb et al., 2000) 将色素的定量数据和化学分类法算法 (Chemical taxonomy, CHEMTAX) 相结合可以得到浮游植物类群的生物量以及类群组成 色素分析方法 (Pigment analysis) 虽然提供了生态系统中浮游植物类群组成的综合信息, 但是由于采样频率和样品处理的难度无法获 得更高时空分辨率的数据 (Ston et al., 2002), 并且所获得的数据只是对浮游植物 类群丰度或者生物量的估计 分粒级叶绿素 a 是研究浮游植物类群的基础方法, 利用不同孔径的滤膜过滤水样得到不同粒级 ( 小型 > 20 μm, 微型 2~20 μm, 微微型 < 2 μm) 的叶绿素 a 含量, 从而表征浮游植物类群的粒级组成 但是分粒级方法过滤中会有堵塞效应, 产生一定的误差 除此之外, 用叶绿素 a 表征浮游植物生物量还有两个缺点 :(1) 光合作用一旦停止, 叶绿素 a 含量会迅速下降 ;(2) 随着外界环境的变化, 尤其是光照的变化导致叶绿素 a 含量的改变在种间差异很大 (Falkowski, 1980; Halldal, 1970; Perry et al., 1981; Prezelin, 1981) 多项研究 (Gieskes and Kraay, 1975; Banse, 3
17 Degree papers are in the Xiamen University Electronic Theses and Dissertations Database. Fulltexts are available in the following ways: 1. If your library is a CALIS member libraries, please log on and submit requests online, or consult the interlibrary loan department in your library. 2. For users of non-calis member libraries, please mail to etd@xmu.edu.cn for delivery details.
10384 9707005 UDC 1 1 5 5 5 6 7 10 10 10 12 13 16 16 17 18 19 21 21 23 24 27 27 27 28 28 29 29 31 32 1789 1846 1857 1859 46 173 34 35 28 442 5 319 88 87 46 211 2 82 46 219 1862 1945 Degree papers
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1 2.1 2.2 3.2 3.3 2 3 2.1 2.2 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Degree papers are in the Xiamen University Electronic Theses and Dissertations Database. Full texts are available in the following ways: 1.
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10384 9715101 UDC MBA 2000 5 2000 6 2000 2000 1995 10 26 1995 1995 10 1999 7 1 1986 SEC, Securities Exchange Committee 20 7 1996 1998 1998 1 2 3 1999 4 1 1 3000 2 3 1997 5 Degree papers are in
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Frost & Sullivan 2006 65% 1 50 2 IDCITUMII1990 1999 10%, 49.2% 1-1 1-1 3 4 2005 GSM 3 2006 3G 2008 GSM GPRSCDMA 5 6 7 8 Frost & Sullivan 2006 65% 9 Email Ovum 2005 19.7% 164 10 11 12 13 14 Jupiter Media
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10384 K9607315 U D C 1999 1999 1999 1999 3 2 30 1957 1953 1953 1958 1978 1955 1956 1979 60 1980 BG(! BHDFG3 FK3 K6 K2 K12 K3 K7F BHDG3 FK3 K20ZQ K3 K7F BHDG21 CD#4 CD#4 CD#12 BHDG5 FK33ZQF SQ*2 JY(Z
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10384 985007 UDC 001.8 001.8 001 8 .. Abstract... 1 1.1.1 1...1 1.3.. 1.4..3.6.1.6..7..1...7.....8..3...8..4...10..5.11.3...1.3.1.1.3..13.3.3.13.3.4..17.3.5.19.4...0.5...6 9 3.1...9 3....30 3..1.31 3...31
蔡 珠 兒 及 其 散 文 研 究 摘 要 第 一 章 緒 論 蔡 珠 兒 是 一 九 九 年 代 崛 起 的 散 文 家, 近 人 研 究 多 其 以 飲 食 書 寫 為 主, 而 忽 略 其 散 文 其 他 面 貌, 本 論 文 檢 視 其 散 文 的 意 義 與 價 值 本 章 主 要 詳 明
東 吳 大 學 中 國 文 學 研 究 所 碩 士 專 班 碩 士 論 文 指 導 教 授 : 鍾 正 道 先 生 蔡 珠 兒 及 其 散 文 研 究 研 究 生 : 謝 舒 怡 撰 中 華 民 國 一 四 年 七 月 蔡 珠 兒 及 其 散 文 研 究 摘 要 第 一 章 緒 論 蔡 珠 兒 是 一 九 九 年 代 崛 起 的 散 文 家, 近 人 研 究 多 其 以 飲 食 書 寫 為 主, 而
学校编码 :10384 学号 :17920061151605 分类号 密级 UDC 硕士学位论文 天音控股投资价值分析 An Investment Analysis of Telling Communication Holding 谢作修 指导教师姓名 : 王志强 教授 专业名称 : 工商管理 (MBA) 论文提交日期 :2009 年 4 月 论文答辩时间 :2009 年 学位授予日期 :2009
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致 谢 本 人 自 2008 年 6 月 从 上 海 外 国 语 大 学 毕 业 之 后, 于 2010 年 3 月 再 次 进 入 上 外, 非 常 有 幸 成 为 汉 语 国 际 教 育 专 业 的 研 究 生 回 顾 三 年 以 来 的 学 习 和 生 活, 顿 时 感 觉 这 段 时 间 也
精 英 汉 语 和 新 实 用 汉 语 课 本 的 对 比 研 究 The Comparative Study of Jing Ying Chinese and The New Practical Chinese Textbook 专 业 : 届 别 : 姓 名 : 导 师 : 汉 语 国 际 教 育 2013 届 王 泉 玲 杨 金 华 1 致 谢 本 人 自 2008 年 6 月 从 上 海 外