中国中西医结合杂志 年 月第 卷第 期! " 中药复方提取物,"' 对 - 慢性感染中国恒河猴胸腺输出功能的影响 朱惠斌 陈 颂 陈滢宇 卢芳国 宁兴旺 摘要 目的 探讨中药复方提取物湘 ',." / ',"' 对猴免疫缺陷病毒 - /./ 0 1 /. - 慢性感染中国恒河猴胸腺输出功能的影响 方法 采用 - & 病毒液对 # 只中国恒河猴进行感染 个月 随机分为对照组和治疗组 每组 % 只 治疗组给予,"' 灌胃 治疗 每日 次 对照组给予等体积生理盐水灌胃 两组给药 个月 观察两组一般情况 体重 采用实时荧光定量 方法检测两组血浆病毒载量 采用流式细胞法检测 )% 比例及数量 )% 的初始亚群 实时荧光定量 法检测 细胞受体 )"' 重排删除环 常规, 染色后观察胸腺组织的病理情况 分析胸腺组织病变情况与 )% 细胞数 初始型 )% 细胞数及 的关联性 结果 治疗后两组体重 病毒载量 )% 比例绝对数比较 差异无统计学意义 2 对照组 改变倍数明显呈下降趋势 治疗组总体呈明显的上升趋势 两组间差异有统计学意义 3 两组动物的胸腺组织均可见结构破坏 粉红色无结构样物质填充 结缔组织增多 细胞密度降低 排列紊乱等病理改变 未见明显区别 含量与初始型 )% 去除极值后 呈正相关 4 & 4 而初始型 )% 数量与 )% 数量呈正相关 4 & 4 结论 检测 含量来测定新胸腺迁出细胞数量可作为评价胸腺输出功能的检测方法 且,"' 可增加胸腺的输出功能 而 初始型 )% 数量及胸腺组织病理情况之间存在一定相关关系 在感染晚期尤为明显 关键词 猴免疫缺陷病毒 细胞受体 )"' 重排删除环 初始型 )% 中药提取物 11 5 1 /, 6 75 5,"' / 5 *.58.5 9./ 5 / / - /./0 1 /. / /1 5 0 /. (. :,;,. 6 /, " -/, " /. ; 9 /. /0 "" / / 0 5 / /5 9 5 '11 5 0, 8 5,./ / ;/ 5 1 / 0 / / %$ / 5 5.5 1 8 0 /. /. ;/ 5 1 / 0 /. /. % 0 -,./ / ;/ 5 1 / 0 / / %# '<- ' *6= 5 6 5 11 5 1 / 6 75 5,." / ',"' / 5 5.58.5 1./ 5 / / - /./0 1 /. - / /1 5 0. (.! 5 0 5 /. (. 0 6 / /1 5 0 6 - & 1 5 /5 /0 5 / 5 /0 0 0 0 /5 5 5 5 /5.8 /0 5 /5.8 % /.8! / > / 5 5 5 /5.8 0 / 5 0 5,"' 6 5 / 0 1. /5 5 / 5 /5.8 0 / 5 0 5 (.. 1 / / 6 5 / 0 1. /5! / /0 5 / /0 60 5 1 /> 6 0! 0 0 5 5 0. / 5 1. /5 (. /5 5 5! )% 8 /5 /0./5 / ).6 5 0 5 5 0. / 1 5 5! 85 7 / 0 5 5 0. / 5 1. /5 (. /5 5 5! 5. 基金项目 国家自然科学基金资助项目 "#$%& 湖南省高等学校科学研究重点项目 "' 作者单位! 湖南中医药大学第一附属医院医学检验中心 长沙 %$! 广州中医药大学热带医学研究所 广州 %! 湖南中医药大学医学院 长沙 %# 通讯作者 朱惠斌 %#$## #$$& ((! )* $+
中国中西医结合杂志 年 月第 卷第 期! " 5. 8 5 6 0. /.5 /, 5 / /! 5 / 6 5 / / 1 5 5. 5. )%./5 / )./5 /0 / 0!. 5 / 5 5 5 0 11 / / 60 5 0 6.5 ) 5 6 5 / 5 5.8 15 5 5 /5 2! 5 0. 5 8 0 / 6. 0 / 5 /0 / / 5 /5.8 5 0 / / / 5 /0 / / 5 5 5 /5.8 3! / 65.8 0 5 0 5. 5. 1 5 5. 5.. 0 6 / 1 0 5 8 />./ 5. 5. 0 5! / 0 // 5 5. 0 // 5 0 / 5 /0 /1. 0 / /5. 0 6 / / 5 5.8 5 / 6. 0 11 /! /5 /5 8 5 5 0 5 / )%./5 15 / 75. 4 & 4! " )%./5 8 5 5 0 5 )%./5 4 & 4! /. / /5 /5 0 5 / 5 / > 1 / 5 /5. 0 6 5 > / 5 5 / 5 0 1. 5 / 5 5.58.5 1./ 5 /! < 0,"' 5 5 /5 / 0 5 5.58.5 / 1 /5 / - / /1 5 0 />! 5 / 7 5 0 / / 5 /5 / )%./5 /0 8 5 1 5. 5. 8 / 5 /1 5 / 5!? * )- - /./0 1 /. 85 7 / / )% / 6 75 5 中药复方提取物湘 ',." / ',"' 是湖南省艾滋病防治小组推荐在艾滋病定点医院免费使用的中药复方提取物 原方由白蔻仁 茵陈 石菖蒲 黄芩等 味中药组成 具有清热祛湿解毒的功效 本课题组在前期研究中发现,"' 具有促进免疫重建的疗效 且研究中未发现不良反应 治疗, 感染患者 有一定疗效 笔者用猴免疫缺陷病毒 - /./0 1 /. - & 感染的中国恒河猴模型进行了初步的实验 证实,"' 虽然不能降低血浆病毒载量 但能明显提高 - 感染猴模型的 )% @ 细胞数 改善淋巴结组织结构的病理退变 在亚群分布上 主要体现为初始型 )% @ 细胞大幅上升 )# @ 细胞也有上升的趋势 % 由于初始型 )% 主要来自于胸腺 因此,"' 极可能提高了胸腺输出的功能 因此 本研究中进行了 细胞受体 )"' 重排删除环 85 7 / 的分析 以证实笔者假设 材料和方法 动物 恒河猴 # 只 全部为雄性 体重 %$ A $ > A$ 岁 外观健康 经血清学检测 - 猴逆转录 ) 型病毒 - 猴疱疹病毒, 8 <. 和猴 淋巴细胞 型病毒 - 抗体阴性 结核菌素阴性 痢疾菌阴性 动物由广东康达实验动物公司繁育并提供动物实验室 动物合格证号为 -? 粤 & 并参照美国 实验动物饲养和使用指南 的相应规范进行管理 本实验获湖南中医药大学伦理委员会审批 - & 毒株及,"' 的制备 健康中 国恒河猴外周血单核细胞 < 体外扩增 代的 - & 病毒液 经 7$% 细胞滴定为 ) +,"' 由白蔻仁 茵陈 石菖蒲 黄芩 连翘 白花蛇舌草 藿香 虎杖 滑石 川木通 薄荷 薏苡仁 组成 由湖南中医药大学药学院制剂教研室制备 薄荷提取挥发油用 环糊精包裹 其余药物与提取后的薄荷水煎 醇沉 制备干膏粉 根据猴 + 人换算系数 # $ 估算临床等效剂量 得出干膏粉与 环糊精包含物的等效剂量分别为 $% +> 和 $% +> 配成水溶液混悬剂 使得每毫升混悬液含干膏粉 # 环糊精包含物 %% 即 > 猴灌胃 试剂与仪器 单克隆鼠抗人 )& / ) ) $ / - % )#9 / # )%9 / )# / '# 均购自 <) / / 公司 美国 "' 提取液 /5 ( / 法实时荧光定量 检测试剂盒 "'55-5 8? 5 购自 1 / 公司 美国 非人灵长类 )% 细胞分离试剂盒 )% < 0? 5 购自 5 / < 5 公司 美国 )"' 提取试剂盒 B' 8 )"' /? 5 - < " 法实时荧光定量 检测试剂盒 B. /5 9 5 - < /? 5 购自 B / 公司 美国 流式细胞仪为 9'- 6. <) 公司 美国 实时荧光定量 仪为 $ '< 公司 美国 血细胞分析仪为 ' 0 11< > /. 5 公司 美国 病理切片的观察及拍摄使用 ) 荧光
中国中西医结合杂志 年 月第 卷第 期! " 生物显微镜 )9% ) 和 B / 图文分析系统 % 病毒感染 分组及给药方法 本研究所采用的 # 只恒河猴来自其他项目对照组 病毒感染后均未接受任何药物治疗 原项目已结束 个月以上 其中 % 为直肠感染 病毒用量 % ) 其余均使用静脉注射 含 ) 的病毒液感染 本课题组成员对使用 - & 病毒经不同途径感染中国恒河猴的方法 以及感染后的病毒 免疫学各项参数的改变 进行过详细的观察研究并已发表 未发现不同的感染途径对于模型的各项参数有影响 - 感染 个月后 根据 )% 数量对 # 只恒河猴分层后 随机分为对照组和治疗组 每组 % 只 治疗组给予,"' 灌胃治疗 每日 次 对照组给予等体积生理盐水灌胃 两组给药 个月 具体各组动物情况见表 组别 猴号 表 实验动物情况及分组表 年龄 岁 性别 感染后 月 )% 数 个 + 感染途径 对照 $ 雄 % 静脉 & 雄 & 静脉 % 雄 静脉 % $ 雄 直肠 治疗 雄 & 静脉 雄 静脉 雄 %# 静脉 雄 $ 静脉 一般情况 体重观察及采样 从动物进入实验室后 每天均对饮食 精神 粪便 行为状态等进行观察 每 周称 次体重 并采集 )' 抗凝全血 分离血浆及外周血单个核细胞 8 8 6 0 //. < 冻存 病毒载量检测 按文献报道 # 采用实时荧光定量 的 ( / 探针法检测血浆病毒载量 使用 "': 按说明书操作 从 冻存的抗凝血浆中提取病毒 "' 定量 的上游引物为 ' '' '' ''' ' ' '' 下游引物为 ' '' '' 探针序列为 9 '' ' ' '' ' ' ' ' ' ' ' 反应条件为 %# /& / % 个循环 每个样品均提取和检测复孔 每次反应均建立标准曲线 标准品由法国巴黎第五大学卢葳教授惠赠 稀释范围为 A 拷贝数 + 根据标准曲线计算出样品中所含 - 病毒的拷贝数 取 个 复孔的平均值作为最终结果 $ 外周血 )% 及其初始 记忆亚群分析 每 周使用流式细胞法常规检测 )% @ 细胞比例 具体步骤为 按照每管 个细胞数的量加入含适量抗体的反应管中 % 避光反应 / 后 按常规洗去多余抗体 以 C 多聚甲醛固定及上机检测 获得 )% @ 细胞的比例后 结合淋巴细胞数计算 )% 细胞的绝对数 而初始 + 记忆 )% @ 细胞亚群的划分则 & 参照 ">5 ' 等建立的方法 使用 )#+)& 的组合进行划分 流式染色的方法同上 分析时 先对 ) @ )% @ 群体进行设门 再根据 )#+)& 的表达情况 将细胞划分为 )# @ )& 初始型 " )# @ )& @ 中央记忆型 和 )# )& @ 效应记忆型 等 个群体 着重分析初始型 )% 亚群细胞的比例及绝对数 # 冻存 < 的 检测 < 经 $ 水浴复苏后 按照 )% 6 0 的说明书进行阳性分选纯化出 )% 随后提取细胞 )"' 参照参考文献 的方法 以 5 方法检测 的引物 探针序列为 正向引物 ' ' ' ' 反向引物 ' ' ' ' ' 探针序列 9' ' ' ' 反应条件为 /& / 继以 & /% 个循环 所有 )"' 样品同时以 - < " 法检测 ' ), 作为外参以确定细胞的相对数量 引物序列为 '' ' ' ' ' ' ' ' ' 反应条件为 &% # $ 个循环 并继以 到 & 的融解曲线以确认无明显非特异性扩增 综合 和 ' ), 的 5 值 5 0 即每个反应孔内的荧光信号到达仪器自动设定的域值时所经历的循环数 结果 按照参考文献 计算 )"' 相对变化倍数 计算公式为 改变的倍数 4 指 '< 两个样本 ' ), 值的差值 其含义为在相等 )% 数量中 治疗后 %# 周 含量相对于治疗前 标化为 的改变倍数 & 胸腺组织病理检测 治疗结束后 次日即麻醉下经颈动脉放血处死动物 取胸腺组织 福尔马林固定 石蜡包埋 切片后, 染色 进行观察和摄像 $ 由于胸腺已完全萎缩 未能成功取材 是 精英控制型 因此移入其他研究项目未处死
"!" $ '" 中国中西医结合杂志!"#$ 年 % 月第 %$ 卷第 % 期 &'()*+! +,-./!"#$! 0123 %$! 41!% #" # 相关性分析检测 # 为进一步分析胸腺组织 病变 情 况 与 &A7 细 胞 数' 初 始 型 &A7 细 胞 数 及 于 (#"g %&而 O:": 实验前即有轻微下降$ 图 #9 %( 在 )O<& 的关联!根据胸腺组织的保持程度从好到差进 行了排序' 并对 )O<& 含量 $ 以 &))O<&"\9NAD 来代表! 实验期间! 对照组 O:"6 在实验开始后 %8 天死亡 $ 紫 色%!而其他动物的体重多维持稳定或略下降( 而治疗 此值越低则含量越高 % 与初始型 &A7 的数量之间的 关联进行了 N;,-L1G 相关分析( 考虑到 :#7 在感染 组有 % 只动物的体重呈上升趋势&仅 O:": $ 绿色% 的体 #$ 个月后 &A7 依然长期稳定于 P #""" 个C $M 的水 平!属于长期不进展型&而 :#: 属于 - 精英控制型.!因 此在进行初始型 &A7 与 )O<& 相关分析时进行了去 除极值处理( ## #统计学分析#采用 ENEE!"! " 软件包进行 分析( 计量资料以 U (L 表示!多个时点的比较采用重 表现( 治疗前大多数动物的体重均较为稳定 $ 变化低 重在使用 D49 " # 后依然呈下降趋势!但在 7 '$ '5 周 % 个时间点体重维持稳定$ 图 #` %(! # 两组病毒载量' &A7 比例及细胞数结果比较 #在实验期间!两组动物的病毒载量大多呈小范围内 $ Q ("! % 21Z#" 拷贝数C=M % 波动( 治疗组经 D49 " # 治疗 7 周时! 病毒载量略有升高! 但组间比较! 差异无 复测量&&A7 的组间比较采用 +,GG " */>SG;J 分析( 统计学意义 $N P "! ": %! 之后回落 $ 图!9 % ( &A7 的 比例$ 图!` % 和绝对数$ 图!& % 两组间比较!差异无统 部分数据进行线性拟合以观察其变化趋势( N Q "! ": 为差异有统计学意义( 计学意义$N P "! ": % ( % #两组 )O<& 结果比较 # 对照组经线性拟合后 结##果 )O<& 改变倍数明显呈下降趋势! 其中 % 只动物降至 接近治疗前的 #C! ( 治 疗 组 在 经 过 D49 " # 治 疗 后! # #两组一般情况及体重比较$ 图 # %#所有 5 只动 物在实验期间!食欲'精神'运动均正常!无腹泻等异常 )O<& 改变倍数总体呈明显的上升趋势( 经重复测量 分析显示两组间差异有统计学意义$N Q "! ": % ( ##注#9 为两组治疗前体重变化&` 为两组感染后体重变化 图 #$D49 " # 治疗对 E(0 感染恒河猴体重的影响 ##注#9 为 D49 " # 治疗后血浆病毒载量&` 为 &A7 比例&& 为 &A7 细胞数 图!$两组病毒载量'&A7 比例及细胞数结果比较
中国中西医结合杂志 年 月第 卷第 期! " 注 彩色细线为每个动物 改变倍数的线性拟合 治疗前为 黑色粗线为该组动物的整体线性拟合 图,"' 治疗后外周血 改变的相对倍数 % 两组胸腺的病理学结果比较 图 % 在获得的 份病理样品中 % 的组织结构保存最好 & 仅取到了部分被脂肪填充的退化组织 其他则介于二者之间 大多数动物的胸腺组织均可见结构破坏 粉红色无结构样物质填充 结缔组织增多 细胞密度降低 排列紊乱等病理改变 治疗组与对照组之间 未见明显区别 两组 )% 初始型 )% 细胞数 ' ), 值的结果比较 表 从表 中可以看出 )% 数量与初始型 )% 数量的排序完全一致 经 / 相关分析 4 & 4 呈正相关 与胸腺组织保存情况的排序也很接近 但差异无统计学意义 2 在取得胸腺的 个动物中 % 和 的组织病理情况较差 )% 和初始型 )% 数量也最低 含量也处于最低的水平 例外的是 & 的 含量较高 但胸腺为脂肪组织填充 可能与取材有关 而 的病毒载量一直维持在低于检测水平 其初始型 )% 也较高 其相同数量的细胞中 含量也最高 但因动物未处死 无法进行胸腺病理情况的比较 对 含量与初始型 )% 的数量进行 / 相关分析无明显相关性 4 4 $ 而在去除极值 % 后 显示 与初始型 )% 数存在正相关关系 4 & 4 而 含量与 )% 数量无明显相关关系 2 讨 论中医药因其安全 廉价 有效 在艾滋病的临床治疗中逐渐得到了广泛运用 并取得了较好的效果 但由于中医药大多作用缓慢温和 作用机制很不清楚 因此对其临床运用尚存在着不少质疑 特别是目前评价艾滋病疗效的指标 通常仅限于病毒载量和 )% 而绝大多数中医药即使临床反应良好 却并非通过降低病毒载量起作用 而 )% 细胞数改变缓慢 个体差异大 也难以得到统计学的支持证据 因此 阐释中医药治疗艾滋病的作用机制 有赖于对, 感染的病理机制的研究深入以及检测手段的更新 近年来的研究发现 艾滋病患者的免疫功能是否能够重建 取决于 )% @ 细胞群中胸腺新生亚群的数量 % 这一发现解释了为何部分, 感染者即使病毒载量被 表 各动物 )% 初始型 )% 的 值 病毒载量和病理情况的比较 组别 猴号 )% 个 + )% 排序 初始型 )% 个 + 病理情况排序 ' ), 病毒载量 8 + 对照 % &# # # % 治疗 # % # ;) &# 3 $ 治疗 %% # $ 对照 & %$ % $ # 治疗 # ;) # 对照 $ # ;) & # 治疗 # $ & 对照 % & # % $# $ 注 ;) 未获得组织标本 其中 $ 为胸腺完全退化未能取材 为病毒载量一直低于检测水平 纳入其他研究
"!" $ (" 中国中西医结合杂志!"#$ 年 % 月第 %$ 卷第 % 期 &'()*+! +,-./!"#$! 0123 %$! 41!% ##注#9 为治疗组 :":!` 为治疗组 :"$!& 为治疗组 :"8&A 为对照组 :#7!< 为对照组 :7#&# 的 放大倍数为 : 倍!! 的放大倍数为!" 倍!% 的放大倍数为 7" 倍&短箭头$ "% 示粉红色无结构样物 质填充&长箭头$ #% 示细胞密度降低'排列紊乱 图 7$各实验猴胸腺组织的病理改变$$ D< 染色% 完全抑制!却无法成功实现免疫重建 )#:* ( 很多中医药 被认为有帮助免疫重建的效果! 提示改善胸腺功能可 能是中医药治疗艾滋病的重要疗效机制之一( 初始型 &A7 d ) 细胞是免疫能否维持- 自稳. 和免 疫重建能否成功的关键( 在 D(0CE(0 感染后! 记忆性 &A7 d ) 细 胞 快 速 减 少! 而 随 着 疾 病 的 进 展! 初 始 型 )#$* &A7 d ) 细胞也会大幅减少! 从而导致对新病原体 免疫应答的降低和 &A7 d ) 细胞- 池. 结构的失衡( 而
中国中西医结合杂志 年 月第 卷第 期! " 在高效抗逆转录病毒, 5 /5 5 5 8,'' 治疗后 )% @ 细胞的数量重建过程分为两个时相 在治疗的前 个月 以记忆型 )% @ 细胞为主 在治疗 A 个月后 以初始 )% @ 细胞为主 $ 如果初始 )% @ 细胞的比例和绝对计数均显著增加 提示着成功的免疫重建 免疫功能是否能够重建 取决于 )% @ 细胞群中胸腺新生亚群的数量 由于初始型 )% @ 细胞的重要作用 它一直是多种艾滋病辅助治疗药物研制过程中的靶点 包括重组人生长激素的临床试验 # & $ 胸腺肽 等 但至今为止 还未有成功上市的药物 考虑到胸腺功能在,'' 治疗后初始型 )% @ 细胞重建的过程中的重要作用 以及在前期研究中,"' 能增加 )% 特别是初始型 )% 的作用 % 本研究重点观测了,"' 治疗对 - 慢性感染猴胸腺输出功能的影响 是胸腺内早期 细胞的抗原识别受体基因重排时删除掉的环状 )"' 片段 该片段稳定地存在于细胞内 不会扩增 因此可以较直接反映人体内新近从胸腺迁出 细胞的含量及胸腺的输出功能 本项研究发现,"' 治疗可使 含量明显增加 提示,"' 可能促进了胸腺输出 此外 研究结果提示,"' 能缓解 ')- 导致的体重快速降低 甚至可增加其体重 对动物的精神 食欲 活动等均无明显影响 显示出良好的研究价值和应用前景 通过对 与 )% 初始型 )% 及胸腺病理的比较还发现 在晚期感染的动物 含量与初始型 )% 数量 胸腺的组织结构有更好的相关性 这可能是由于在感染早期 初始型 )% 可能通过外周增殖来加以补充 而在感染后期 )% 极低时 外周 )% 池 更依赖于胸腺输出 这也提示使用 含量作为指标来评价胸腺输出功能 对于,+- 晚期感染者更为可靠 此外 由于,"' 以祛湿类中药为主 这一研究结果还提示 中医学理论中的 祛湿 可能与与胸腺初始型 细胞的输出有着一定的联系 循着这一思路 可尝试能否将处方进一步优化 以简化药物组成 便于制剂 另外 由于 - 感染猴模型的个体差异较大 且胸腺输出水平明显受不同病程的影响 本研究还将有针对性地设定研究方案 进一步深入探讨,"' 促进胸腺输出的疗效机制 并对其长期疗效进行全面评判 以期研发出针对 )% 自稳和免疫重建的辅助药物 致谢 邓文娣 赖春辉 周映云 于靓提供的技术支持 本研究的检测分析在广州中医药大学省 工程 建设项目 广州中医药大学中医临床基础国家重点学科实验室完成 特此致谢 参考文献 白静峰! 湘 ' 号 湘 ' 号合并抗病毒治疗艾滋病发病期患者的临床观察 )! 长沙 湖南中医药大学 $! 朱惠斌 卢芳国 黄顺玲 等! 湘 ' 号 号对免疫缺陷动物免疫保护作用的研究! 中华中医药学刊 &% ## #! 朱惠斌 符林春 陈颂 等! 中药复方提取物,"' 治疗猴免疫缺陷病毒感染的实验研究! 中华中医药杂志 % $& $! % 朱惠斌 陈颂 符林春 等! 中药复方提取物对猴免疫缺陷病毒感染恒河猴外周 )% @ 淋巴细胞亚群的影响! 中国医药 #! / -. 5! 6 5 1 6 / 8 5 / / /. (. /1 5 0 5 /./0 1 /. //. / 8 5 ')- 0! - */ # $$! / 5 5.5 1 6 5 '/. / / 1 - / " 5 /./!. 0 1 5 /0. 1 6 5 /! / 5/ ) " 5 / ' 0 1 - /! $ 黄继汉 黄晓晖 陈志扬 等! 药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算! 中国临床药理学与治疗学 % && & $! #... 5! 8.5 0 /0 5 / 1 / 0! " 5 0 & $! & ">5 ' ) " 5!, 5 1 / /0.688. 5 / / 8 8 6 0 /0 8 0 5. / 5 /5 75 1. /./0 1 /. /1 5 /! /1 5 ) #& %! ". /.7 < ( - 5! $ 5. 5 / 5.5 / / 8 5 / / /./0 1 /. / 1 5 0 (.!./ $ # %%%$ %%! ' /?,. > - 5! - 5 / 1 / 5 / 1 / / 1 - < / ( 5.0 1. />. 55 5.! < < # & $#!
中国中西医结合杂志 年 月第 卷第 期! " - 55 / ) >?! '/ / 5 0 5 6 5 8 5 5 0! " 5 5 # #!. / /!, 6 0 / 1 5 5 /, /1 5 / /0 ')-! / ) 5 6-5 )&$! %. " ) 5! 0. 0 5.58.5 = / 1./ / 5 5.5 / 1. /, /1 5 0 8 5 /5 15 / 5 / 5 5 5 8! / /1 5 ) & &%% &! '.5 9! 9. 5 / 5 5.5 )% @ 0 8 5.88 / 1, 8 5 /./ 0,''! ')- # ## &$! ". <. > 5 ' 5! 1 / 8 / )% @ 0 8 5 / 0. / / 5 8 / 5 ')- / - /./0 1 /. /1 5 0 (.! $ # #& &! $ ) - 5 55 5! " 0 / /. /./0 1 /. 5 8 /1 5 / 11 5 1 5 / 5 5 5 8 8 0 / 5 /5 5 / 1 / 0 8 5 /! # $%! # - 5? : / < 5! 5 /5 5 6 / /5 5 / 5 0 5 0 5 8 /5 / )% 8 5 / 5 5.5 / /, /1 5 0 8 / / /5 5 5 8. 5 1 ' ' $%! ')-,. 5. % % %! & - 1. /5 1. /5 < // 9! / 5.> / 5 8 / 8 5 /5 5, /1 5 /! " / 0 $ $! / ' /> 0> *> ' 5! / 0 )% @ 0. / $ 0 / 5 5 / 1 /5 5 5 8 5 5 0 /. /0 1 /. 8 5 (. /5 0 8 /0 /5 / 5 / 8 1 5 8/!./ # &! 0 > ) 0 8 ' 5! ' 8 5 5.0 1 5 1 5 /0 11 1 5 / 8 /. /5 /./ / 5 5.5 / /, /1 5 0 8 5 /5 5 )%./5 5 > / 5 /5 5 5 8! / 78./ % %$$ %#! 6 0 <! /5 6.5 / 1 5 5. 5 5 1 8 8 / /. 6 0. / /5 5 5 5 /5 1, / 1 5 /! ' (../ ) 1 - /0 # %& #! 收稿 % 修回 $ 第 $ 次全国中西医结合传染病学术会议征文通知 由中国中西医结合学会传染病专业委员会主办的第 $ 次全国中西医结合传染病学术会议将于 年 月在山东省青岛市召开 现征文要求如下 征文内容 各种传染病的中西医结合诊疗和实验研究 中医药及中西医结合防治传染病的经验总结 中西医结合传染病的研究方法 思路和发展战略 % 中医药和中西医结合诊疗传染病的进展和评价 运用多种疗法 如针灸 气功等 多种给药途径 栓剂 保留灌肠 皮肤给药 器官给药 腧穴给药等 治疗各种传染病的应用和配合研究 各种传染病动物模型 病理机制 检测技术 诊断标准的最新进展及动态 $ 中西医结合传染病学术定位及体系研讨 稿件要求 在 字以内 未经正式发表 提供 字以内的中文摘要 注明作者姓名 单位 地址 邮编及 投稿方式 广东省深圳市龙岗区布澜路 & 号 邮编 # 深圳市第三人民医院 聂广 收 欢迎通过电子邮件投稿 请发至 7 = 6! 并注明 会议征文 截稿日期 年 月 日