第 43 卷第 9 期 27 年 9 月 CHINA MEASUREMENT & TEST Vol.43 No.9 September 27 doi院.857/j.issn.674-524.27.9.4 三维荧光光谱法和圆二色谱法研究氨基比林与 牛血清白蛋白分子的相互作用 王晓霞袁 李松波袁 马力通袁 郭贵宝袁 刘金彦袁 王正德袁 闫 慧 渊内蒙古科技大学化学与化工学院袁内蒙古 包头 4冤 摘 要院该文在模拟生理条件下袁采用荧光光谱法尧三维荧光光谱法以及圆二色谱法袁研究氨基比林渊PYM冤与牛血清 白蛋白渊BSA冤之间的相互作用遥 研究结果表明 PYM 对 BSA 有强烈的荧光猝灭作用袁其荧光猝灭机制为静态猝灭遥 由 热力学参数判定 PYM 和 BSA 的主要作用力为氢键和范德华力袁并且相互作用是自发进行的遥 根据 觟rster 的偶极-偶 极非辐射能量转移理论可以得出 PYM 与 BSA 之间的结合距离为 2.9 nm遥 利用三维荧光光谱和圆二色谱技术袁分析 PYM 对 BSA 蛋白构象的影响袁表明 PYM 与 BSA 相互作用后使 BSA 的微环境和构象发生改变遥 关键词院氨基比林曰牛血清白蛋白曰荧光猝灭曰三维荧光光谱曰圆二色谱 文献标志码院A 文章编号院674-524渊27冤9-74-7 Study on the interaction between aminopyrine and bovine serum albumin by three-dimensional fluorescence spectrometry and circular dichroism spectrum WANG Xiaoxia袁 LI Songbo袁 MA Litong袁 GUO Guibao袁 LIU Jinyan袁 WANG Zhengde袁 YAN Hui 渊School of Chemistry and Chemical Engineering袁Inner Mongolia University of Science and Technology袁 Baotou 4袁China冤 Abstract: The interaction between aminopyrine 渊PYM冤 and bovine serum albumin 渊BSA冤 were investigated with fluorescence spectroscopy袁 three -dimensional fluorescence spectroscopy袁 circular dichroism 渊CD冤 spectrum and under imitated physiological conditions. The results show that PYM could strongly quenching the fluorescence of BSA and the quenching process is a static process. The thermoclynamic parameters demonstrated that PYM can spontaneously bind with BSA through hydrogen bonds and Van der Waals forces. The binding distance of 2.9 nm between PYM and BSA was obtained by the 觟rster爷s theory on resonance energy transfer. Three -dimensional fluorescence spectroscopy and circular dichroism 渊CD冤 spectrum show that PYM could change the miro-enviroment and conformation of BSA. Keywords: aminopyrine曰 bovine serum albumin曰 fluorescence quenching曰 three-dimensional fluo鄄 rescence spectroscopy曰 circular dichroism spectrum 收稿日期院27--曰收到修改稿日期院27-3-23 基金项目院国家自然科学基金渊24636冤曰内蒙古自然科学基金渊23MS29冤曰内蒙古高等学校科学研究项目渊NJZZ46冤 作者简介院王晓霞渊984-冤袁女袁内蒙古包头市人袁讲师袁硕士袁研究方向为荧光光谱分析遥
第 43 卷第 9 期 王晓霞等院三维荧光光谱法和圆二色谱法研究氨基比林与牛血清白蛋白分子的相互作用 75 引言 氨基比林又名匹拉米洞渊 Pyramidon 冤袁为解热镇 痛药袁其镇痛作用强而持久袁对胃肠道刺激性小 [] 遥血 清白蛋白是血浆中最为丰富的蛋白质袁能与进入血液 中的药物进行可逆结合从而起到在体内转运的作 用遥因为结构上和人血清白蛋白的相似性袁牛血清白 蛋白渊 BSA 冤被广泛用于与药物结合作用的研究 [2] 遥 BSA 可运载不溶性药物小分子袁依靠的作用力有范德华 力尧静电引力尧氢键尧疏水作用力等 [3] 遥 血清白蛋白与各种药物小分子的作用涉及很 多领域与学科袁关于这方面的研究一直没有间断过遥 ang 等 [4] 利用光谱研究白果酚与牛血清白蛋白之间 的相互作用遥张玉明等 [5] 利用荧光光谱研究杆菌肽与 牛血清白蛋白相互作用遥目前尚未见氨基比林与牛 血清白蛋白间作用的荧光光谱法研究袁本文主要在 模拟生理状况条件下袁用荧光光谱法探讨了氨基比 林和牛血清蛋白结合的特征袁确定了 PYM 与 BSA 作用 力种类袁分析 PYM 对 BSA 构象的影响袁以期为氨基 比林的应用和开发提供数据参考遥 实验部分. 实验仪器与试剂 荧光分光光度计渊 LS-55 袁美国 PerkinElmer 公司冤曰 紫外分光光度计渊 SPECORD5 袁德国耶拿分析仪器 股份公司冤曰数显恒温水浴振荡器渊 SHA-B 袁金坛市医 疗仪器厂冤曰圆二色光谱仪渊 Jasco-75 袁北京国嘉恒业 科学仪器有限公司冤曰实验室 ph 计渊 EL2 袁上海梅特 勒 - 托利多公司冤曰电子天平渊 TP-4 袁北京丹佛仪器 有限公司冤遥 无水乙醇渊天津市光复科技有限发展公司冤曰 HCl 渊北京化工厂袁分析纯冤曰 NaCl 渊天津市光复科技发展 有限公司袁分析纯冤曰氨基比林渊 Pyramidon 袁 PYM 袁中 国药品生物制品检定所袁分析纯冤曰牛血清白蛋白 渊 bovine serum albumin 袁 BSA 袁 sigma 公司袁分析纯冤曰 三渊羟甲基冤氨基甲烷渊 Tris 袁天津市华东试剂厂袁分析 纯冤曰实验所用试剂均为分析纯袁实验用水均为二次 去离子水遥.2 溶液配制. mol/l 的 Tris-HCl 缓冲液渊 ph 7.4 冤院称取 3.28 5 g 三渊羟甲基冤氨基甲烷袁用二次去离子水溶 解袁配制 25 ml Tris 溶液备用曰将配好的 Tris 溶液 取适量于 5mL 烧杯中袁用盐酸调节 ph 为 7.4 遥 牛血清白蛋白溶液院准确称取.67 g BSA 用 二次去离子水溶解袁配置成 ml 伊 -4 mol/l 的 BSA 储备溶液备用曰取 伊 -4 mol/l BSA 5 ml 于 ml 容量瓶中袁加入 2mL.5mol/L 的 NaCl 袁用 ph 为 7.4 的 Tris-HCl 缓冲液定容袁即可得到 5 伊 -6 mol/l 的 BSA 溶液遥 伊 -4 mol/l 氨基比林溶液院准确称取.2 3 g 氨基比林袁二次去离子水溶解袁配制成 伊 -4 mol/l 的氨基比林溶液备用遥.3 实验方法.3. PYM 与 BSA 的荧光光谱尧同步光谱测定 向 ml 具塞比色管分别加入 ml 5 伊 -6 mol/l 的 BSA 溶液袁然后分别加入 袁.5 袁. 袁.5 袁 2. 袁 2.5 袁 3. 袁 3.5 袁 4. 袁 4.5 ml 伊 -4 mol/l PYM 溶液袁二次去 离子水定容袁摇匀遥分别在渊 299 依. 冤 K 袁渊 37 依. 冤 K 袁 渊 35 依. 冤 K 的恒温水浴锅中放置.5 h 袁作为待测 溶液遥固定荧光激发波长 28 nm 袁激发与发射狭缝 9 nm 袁扫描速度 5 nm/min 袁扫描 29 耀 55 nm 的发 射光谱袁每次记录发射波长在 345 nm 附近的荧光强 度遥在同步荧光光谱扫描中袁扫描发射波长范围为 25 耀 55 nm 的发射光谱袁扫描速度 5 nm/min 袁记 录驻姿 =6 nm 和驻姿 =5 nm 的荧光强度遥.3.2 BSA 尧 PYM-BSA 的三维荧光光谱的测定 使用荧光仪测定溶液的三维荧光光谱遥其参数 设置为院发射波长 耀 5 nm 袁激发波长 nm 袁狭 缝宽度 9 nm 袁扫描速度 5 nm/min 袁组分数 3 袁激 发波长间隔 5 nm 遥.3.3 PYM 与 BSA 圆二色谱测定 测量时 BSA 与 PYM 的浓度比为 颐 袁 颐 袁 颐 5 袁 并且以 Tris-HCL 缓冲液作为参比袁所有数据经过 4 次 扫描取平均值袁溶液中 BSA 样品浓度为. 伊 -5 mol/l 袁 PYM 浓度为. 伊 -5 袁 5. 伊 -5 mol/l 遥扫描范围为 9 耀 25 nm 袁扫描时间为.5 s 袁石英样品池的光程为. cm 袁扫描速度为 3.3 nm/s 袁灵敏度为 2 mdeg/cm 袁分 辨率为. nm 袁光谱校正设为开启以消除光栅和检测 器相应的波长遥 2 分析结果与讨论 2. PYM 与 BSA 相互作用的荧光光谱分析 测定 299 袁 37 袁 35 K 3 个温度下 BSA 与 PYM 的荧光光谱图袁如图 所示袁固定荧光激发波长为 28 nm 袁 BSA 的最大发射荧光强度会出现在 345 nm 处袁并且在 BSA 浓度不变的情况下袁随着 PYM 的不 断加入袁 BSA 在 345 nm 附近的荧光强度明显减弱袁 但最大荧光强度发射波长位置基本不变袁表明 PYM 对 BSA 有荧光猝灭作用遥 2.2 PYM 与 BSA 猝灭作用机理的确定 PYM 与 BSA 的相互作用属于荧光猝灭袁而已知 的荧光猝灭分为静态猝灭与动态猝灭两种袁均符合 Stern-Volmer 公式 [6] 院
76 27 年 9 月 8 6 2..8.6 299 K 37 K 35 K.4.2. 2 3 4 5 35 45 渊 a 冤 299 K 图 2 咱 Q 暂 / 渊 -5 mol 窑 L - 冤不同温度下 PYM 对 BSA 的荧光猝灭 Stern-Volmer 曲线图 7 6 5 6 5 35 45 渊 b 冤 37 K 式中院 尧 要要未加入和加入 PYM 的 BSA 的荧光强度曰 [ Q ] 要要 PYM 的摩尔浓度袁 mol/l 曰 K SV 要要动态猝灭常数袁 L/mol 曰 K q 要要由扩散过程控制的双分子动态猝灭速率常数袁 L/ 渊 mol 窑 s 冤曰 要要没有 PYM 存在的情况下荧光分子平均寿命袁通常 约为 -8 s [7] 遥当温度不断升高袁动态猝灭常数会变大袁但静态猝灭常数会变小袁可依据计算结果辨别出此反应的荧光猝灭种类遥根据 Stern-Volmer 公式袁以 / 对 [Q] 作图袁得到 299 袁 37 袁 35 K 下的 Stern-Volmer 曲线图袁如图 2 所示袁线性方程与相关系数如表 所示遥 表 Stern-Volmer 线性方程相关系数 温度 /K 回归方程 r K SV/ 渊 L 窑 mol - 冤 K q/ 渊 L 窑 mol - 窑 s - 冤 299 y=.96 x+.96 9.99 6.96 伊 4.96 伊 2 37 y=.93 7x+. 5.99 2.937 伊 4.937 伊 2 35 y=.73 7x+.27.982.737 伊 4.737 伊 2 一般来说袁由于各种猝灭剂对生物大分子的最 大扩散碰撞猝灭常数为 2. 伊 L/ 渊 mol 窑 s 冤 [8] 袁由表 35 45 渊 c 冤 35 K 耀 院 袁.5 袁. 袁.5 袁 2. 袁 2.5 袁 3. 袁 3.5 袁 4. 袁 4.5 ml PYM 溶液遥图 不同温度下 PYM 与 BSA 相互作用的荧光光谱图 / = +K SV [ Q ] = +K q [ Q ] 渊 冤 可以看出袁 PYM 对 BSA 的动态荧光猝灭速率常数 K q 远大于最大扩散碰撞猝灭常数袁证明 PYM 对 BSA 的 作用是静态猝灭曰并且随着温度升高袁曲线斜率降 低袁而曲线斜率代表猝灭常数 K SV 袁即猝灭常数 K SV 随 着温度的升高而降低袁进一步证明了 PYM 对 BSA 的 作用是静态猝灭遥 2.3 PYM 与 BSA 结合常数及结合位点数的确定 当小分子与大分子相互结合时结合位点数 n 和
第 43 卷第 9 期 王晓霞等院三维荧光光谱法和圆二色谱法研究氨基比林与牛血清白蛋白分子的相互作用 77 结合常数 K [9] 袁可以由下式得出院 lg [ 渊 - 冤 / ] =lgk +nlg [ Q ] 渊 2 冤式中院 K 要要 PYM 与 BSA 的结合常数袁 L/mol 曰 n 要要 PYM 与 BSA 的结合位点数遥分别做不同温度下的 lg[ 渊 - 冤 /]-lg[q] 的关系图袁根据式渊 2 冤得出不同状态下的 K 和 n 袁见表 2 遥 表 2 PYM 对 BSA 反应的结合常数 K 与结合位点数 n 温度 /K 回归方程 r K/ 渊 L 窑 mol - 冤 n 299 y=.247x+5.383.996 5 2.4 伊 5.25 37 y=.x+4.87.99 9 6.4 伊 4. 35 y=.7x+4.759.998 5.74 伊 4. 由表中可以看出 PYM 与 BSA 的结合常数都很大袁而且由计算得出的结合位点数都接近 袁由此可知 PYM 与 BSA 的结合很紧密袁但是随着温度的升高袁结合位点数与结合常数不断减小袁也进一步佐证 PYM 与 BSA 的作用属于静态猝灭袁与猝灭常数 K SV 的结论相吻合遥 2.4 PYM 和 BSA 结合作用的热力学参数以及作用力的判定分子间的作用力包括氢键尧范德华力尧静电引力尧疏水作用力等遥当温度改变不大时袁反应的焓变 [] 驻 rh m 相当于一个常数遥根据文献 [] 袁当驻 H> 袁驻 S> 时袁反应主要为疏水作用力曰当驻 S< 袁驻 H< 时袁作用力为氢键和范德华力曰当驻 H< 袁驻 S> 时袁作用力为静电引力遥由热力学公式院 ln 渊 K 2 / K 冤 = 驻 rh m 渊 / T - / T 2 冤 / R 渊 3 冤驻 rg m =- RTlnK 渊 4 冤驻 rs m = 渊驻 rh m - 驻 rg m 冤 / T 渊 5 冤式中院 T 要要热力学温度袁 K 曰 K 要要 PYM 与 BSA 的结合常数袁 L/mol 曰驻 rg m 要要吉布斯自由能袁 J/mol 曰驻 rh m 要要反应焓变袁 J/mol 曰驻 rs m 要要反应熵变袁 J/ 渊 mol 窑 K 冤遥分别计算得出 299 袁 37 袁 35K 下 PYM 与 BSA 作用的自由能变驻 rg m 尧驻 rh m 和驻 rs m 结果如表 3 所示遥 表 3 K/ 温度 /K 渊 L 窑 mol - 冤 PYM 与 BSA 热力学参数驻 rh m/ 驻 rs m/ 渊 kj 窑 mol - 冤渊 J 窑 mol - 窑 K - 冤 驻 rg m/ 渊 kj 窑 mol - 冤 299 2.43 伊 5-3.8 37 6.42 伊 4-26.3-33.5-34.3 35 5.744 伊 4-34.73 由表可以看出袁 PYM 与 BSA 的热力学参数驻 rh m < 和驻 rs m < 袁可以推断出 PYM 与 BSA 之间的 25 5 5 35 45 图 3 主要作用力是氢键和范德华力遥而驻 rg m < 袁所以 PYM 与 BSA 的相互作用是自发进行的遥 2.5 PYM 与 BSA 的结合距离 觟 rster 的偶极 - 偶极非辐射能量转移理论指出院 当供能体物质发射荧光袁供能体的荧光发射光谱与受 能体的紫外吸收光谱有重叠袁供能体与受能体足够靠 近袁最大距离不超过 7 nm 时袁会发生非辐射能量转 移现象袁导致荧光物质的荧光强度猝灭 [2] 遥实验测出 PYM 的紫外可见吸收光谱与 BSA 的荧光发射光谱袁 发现两光谱之间有一定的重叠袁如图 3 所示遥 根据以下公式计算出 PYM 与 BSA 的结合距离院 E= R 6 / 渊 R 6 + r 6 冤 = -/ 渊 6 冤 J= 紫外吸收 荧光光谱 C BSA=2 伊 -7 mol/l 曰 C PYM=2 伊 -7 mol/l 遥 PYM 的紫外吸收光谱与 BSA 的荧光光谱 R 6 =8.8 伊 - 25 K 2 渍 N - 4 J 移 渊姿冤着渊姿冤姿 4 驻姿移 渊姿冤驻姿 渊 7 冤 渊 8 冤 式中 R 是临界距离渊能量转移效率为 5% 时冤曰 r 为 供体 - 受体间的结合距离曰 K 2 为偶极空间取向因子 渊可取受能体和供能体各向随机分布的平均值袁即 2/3 冤曰 N 为介质折射指数渊一般取水和有机物折射指 数的平均值袁即.336 冤曰渍为供能体荧光量子产率渊通 常取蛋白质中色氨酸的量子产率袁即.8 冤曰 J 为供 体渊蛋白冤荧光发射光谱与受体渊药物冤吸收光谱间的 光谱重叠部分曰 渊姿冤为供能体在波长姿处的荧光强 度曰着渊姿冤为受能体在波长姿时的紫外摩尔吸收系数曰 为 C BSA 颐 C PYM = 颐 时 BSA 的荧光强度遥.8.6.4.2..8.6 由式渊 8 冤采用矩形分割法能够求出图中 PYM 与 BSA 两光谱阴影部分面积积分值 J=9.8 伊 -5 L/ 渊 mol 窑 cm 3 冤袁 由 K 2 =2/3 尧 N=.336 尧渍 =.8 并利用式渊 7 冤可计算出 临界距离 R =2.235 nm 袁根据式渊 6 冤求得能量转移效 率 E=.658 袁进而由 R 和 E 求出供体 - 受体间的结 合距离 r=2.9 nm 遥本实验计算求得 PYM 与 BSA 中
78 27 年 9 月 示色氨酸残基的荧光信息遥 因为蛋白质中氨基酸残 基的最大发射波长与它所存在环境的极性和疏水性 8 有关袁 所以由发射波长的变化可判断蛋白质构象变 化袁若体系的极性增大袁则会发生红移袁疏水性增大 则会发生蓝移 [3]袁图 4 为 驻姿=5 nm袁驻姿=6 nm 的荧 6 5 4 光光谱图遥 由图可知 驻姿=6 nm 时袁随着 PYM 浓度的逐渐 2 变大袁PYM-BSA 体系的最大发射波长出现红移袁表 明色氨酸残基存在的环境极性变强遥 当 驻姿=5 nm 时 26 28 波长/nm 32 34 PYM 对 BSA 的猝灭作用较弱渊K SV=2.68伊4 L/mol冤袁 而 驻姿=6 nm 时的猝灭作用较强渊K SV=3.6伊4 L/mol冤袁 色氨酸残基对 BSA 荧光猝灭的贡献高于酪氨酸残 渊a冤驻姿=5 nm 8 基袁由此可判断 PYM 主要结合在 BSA 中的色氨酸残 基上遥 2.7 三维荧光光谱图 6 为进一步考查样品的分布情况和构型变化袁测 得三维荧光光谱图袁如图 5尧图 6 所示遥 5 由图 5尧 图 6 可以看出三维荧光光谱图主要有 两种峰袁一种是野山脊冶状的瑞丽散射峰如峰 a 和峰 b袁 另一种是类似野驼峰冶的典型荧光峰如峰 和峰 2遥 26 28 波长/nm 32 34 相对应的峰顶坐标和荧光强度渊姿ex/姿em袁冤为渊225/336袁 耀5院袁袁2袁3袁4 ml PYM溶液遥 423.36冤曰当加入 PYM 之后峰 相对应的峰顶坐标 PYM-BSA的同步荧光光谱图 和荧光强度渊姿ex/姿em袁冤为渊28/338袁5.9冤袁峰 2 相 色氨酸残基渊Trp冤之间的距离明显小于 7 nm袁表明 PYM 与 BSA 之间能发生非辐射能量转移遥 2.6 PYM 与 BSA 的同步荧光光谱图 当 驻姿=5 nm 时同步荧光光谱仅仅表示酪氨酸 残基的荧光信息袁当 驻姿=6 nm 时同步荧光光谱只表 8 峰b 6 峰2 峰 25 对应的峰顶坐标和荧光强度渊姿ex/姿em袁冤为渊225/34袁 346.83冤遥 从数据中可以明显的看出荧光峰的强度降 低遥 峰 袁峰 2 的发射波长均红移了 4 nm遥 这表明 PYM 与 BSA 相互作用之后使得体系所处的微环境的 极性增强袁由此说明加入PYM 之后 BSA 的构象发生 了改变遥 5 峰a 35 强度有所降低袁单独 BSA 的峰 相对应的峰顶坐 标 和荧光强度渊姿ex/姿em袁冤为渊28/334袁84.95冤袁峰 2 渊b冤驻姿=6 nm 图4 从图中可以看出加入 PYM 溶液后袁荧光峰 和 2 的 图5 5-2. 84. 7. 256. 342. 428. 54. 6. 686. 772. 858. 45 35 25 24 28 姿ex / nm 伊-7 mol/l BSA溶液的三维荧光光谱及等高线图 32 34-2..2 222.3 334.5 446.7 558.9 67. 783.2 858.
第 43 卷第 9 期 5 峰a 8 峰 25 峰2 5 图6 表4-5. 88.5 82. 275.5 369. 462.5 556. 649.5 743. 836.5 93. 组分 B PYM+BSA 峰 渊姿ex/姿em袁冤 BSA 28/334袁84.95 28/338袁5.9 3 2 峰 2渊姿ex/姿em袁冤 225/336袁423.36 225/34袁346.83-2 22 波长/nm 23 24 25 a. C渊BSA冤=.伊-5 mol/l曰 b. C渊BSA冤=.伊-5 mol/l袁c渊pym冤=.伊-5 mol/l曰 c. C渊BSA冤=.伊-5 mol/l袁c渊pym冤=5.伊-5 mol/l曰 T=298 K曰pH=7.4遥 图7 35 25 24 28 姿ex / nm -5. 7. 238.9 36.9 482.8 64.8 726.7 848.7 93. 32 MRE 值渊MRE28冤[4]计算袁公式如下院 a b c -2 9 45 PYM+BSA溶液的三维荧光光谱及等高线图 三维激发发射荧光光谱特征参数 体系 A 6 峰b 35 79 王晓霞等院三维荧光光谱法和圆二色谱法研究氨基比林与牛血清白蛋白分子的相互作用 BSA与PYM相互作用的CD谱图 2.8 PYM 与 BSA 的圆二色谱分析 为了进一步研究 PYM 对 BSA 构象的影响袁运 用圆二色谱进行分析袁PYM 与 BSA 相互作用的结果 如图 7 所示遥 从图 9 的结果可知院BSA 分子的 CD 谱 分别在 28 nm 和 222 nm 处具有双负峰形袁这是典型 的 琢-螺旋结构袁随着 PYM 加入到 BSA 中的比例增 大袁BSA 分子在 28 nm 和 222 nm 这两处的负峰所 表示的摩尔椭圆率显著降低袁但是光谱的峰位置并没 有改变袁CD 的测量结果用平均摩尔椭圆 率 渊mean residue ellipticity袁mre冤表示袁单位是 deg窑cm2/dmol袁 琢-螺旋结构的含量用下列方程根据在 28 nm 处的 MRE = 兹 / 渊 伊 CNL 冤 渊9冤 琢-Helix=[渊-MRE28-4 冤/渊33-4 冤]伊% 渊冤 式中院兹 要要 要CD 谱测得的摩尔椭圆率袁mdeg曰 N 要要 要 BSA 中氨基酸残基个数袁583曰 L 要要 要 所用样品池的光程袁 mm曰 C 要要 要 蛋白质的摩尔浓度袁mol/L曰 MRE28 要要 要28 nm 的平均摩尔椭圆率曰 4 要要 要茁原折叠和无规卷曲构象跨过 28 nm 的 MRE曰 33 要要 要纯 琢-螺旋在 28 nm 的 MRE遥 由式渊9冤与式渊冤计算结果知袁在游离态的 BSA 中袁琢-Helix 含量为 52.32%袁当 BSA 与 PYM 的浓度比 为 颐 时袁琢-Helix 含量为 45.22%袁浓度比为 颐5 时袁 琢 -Helix 含 量 为 4.2 % 袁 在 加 入 PYM 后 BSA 的 琢-Helix 含量均发生了降低遥 PYM 与 BSA 之间结合 主要是多肽链的氨基酸残基相结合袁结果说明 PYM 与 BSA 的结合破坏了原有的蛋白质的氢键结构袁导 致疏水性降低袁肽链伸展袁使 琢-螺旋结构含量降低遥 说明 BSA 在运输 PYM 时不仅改变了氨基酸的微环 境袁还使 BSA 的二级结构发生了改变遥 3 结束语 实验表明院氨基比林对 BSA 的猝灭作用是静态 猝灭袁 由热力学公式得出的 驻rH m<曰驻rsm<曰驻rg m< 说明 PYM 与 BSA 之间的主要作用力是氢键和范德 华力袁而且是一个自发的过程遥 由同步荧光光谱图以 及三位荧光光谱图可知袁PYM 对 BSA 的结合位点更 接近于色氨酸残基袁而且随着 PYM 的加入引起 BSA 中酪氨酸残基尧色氨酸残基所处的环境极性增强袁表 明 BSA 的构象发生改变遥 通过 PYM 与BSA圆二色谱 分析得出在加入 PYM 后 BSA 的 琢-Helix 含量均发
8 27 年 9 月 生了降低袁 PYM 与 BSA 之间结合主要是多肽链的氨基酸残基相结合袁结果说明 PYM 与 BSA 的结合破坏了原有的蛋白质的氢键结构遥这些探索能够帮助了解 PYM 的作用机理袁 PYM 的毒副作用袁为 PYM 的进一步探索做了铺垫遥参考文献 [] 任娟清. 实用药物手册 [M]. 济南院山东科学技术出版社袁 22 院 75-75. [2] 王晓霞袁张文宁袁王正德袁等. 氯诺昔康 - 铜渊 II 冤 - 牛血清白蛋白三元配合物的荧光光谱法研究 [J]. 化工技术与开发袁 24 袁 43 渊 4 冤院 5-8. [3] 吴雨杭袁韩忠保袁马嘉泽. 同步荧光光谱法结合分子对接研究金雀花碱与牛血清白蛋白间相互作用 [J]. 光谱学与光谱分析袁 26 袁 36 渊 3 冤院 765-769. [4] ANG Y Y 袁 YANG X M. Spectroscopic studies on the interaction of bovine serum albumin with Ginkgol C5: from Ginkgo biloba L[J]. Journal of Luminescence 袁 25 袁 6 渊 2 冤院 23-2. [5] 张玉明袁倪志华. 杆菌肽与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱 [J]. 江苏农业科学袁 26 袁 44 渊 冤院 245-247. [6] YUE Y Y 袁 SUN Y Y 袁 DONG Q 袁 et al. Interaction of human serumalbumin with novelimidazole derivatives studied by spectroscopyand molecular docking[j]. The journal of Biological and Chemical Luminescence 袁 26 袁 3 渊 2 冤院 67-68. [7] 邹华袁周享春袁鲍翠. 食用色素苋菜红与牛血清白蛋白的相互作用研究 [J] 援中国食品添加剂袁 25 袁 5 渊 2 冤院 6-66 援 [8] 刘艳菊袁李晓飞袁凡杭袁等. 荧光光谱及分子模拟研究 - 榄香烯与牛血清白蛋白的相互作用 [J]. 袁 25 袁 4 渊 9 冤院 5-55. [9] HAN B 袁 LONG 袁 YU W 袁 et al. Interaction of isoliquiritigenin with bovine serum albumin studied by fluo 鄄 rescence quenching method[j]. Journal of Chinese Phar 鄄 maceutical Sciences 袁 26 袁 23 渊 3 冤院 96-. [] YANG K 袁 HU Z J 袁 YU T. Studies on the interaction of carbazochrome sodium sulfonate and bovinen serum albumin by spectroscopic method[j]. Strait Pharmaceuti 鄄 cal Journal 袁 25 袁 27 渊 4 冤院 23-234. [] ROSS P D. Subramanian S themodynamics of protein association reactions forces contributing to stability [J]. Biochemistry 袁 98 袁 2 渊 冤院 396-32. [2] 付彩霞袁高宗华. 金属离子对叶酸与牛血清白蛋白相互作用的影响 [J]. 理化检验渊化学分册冤袁 24 袁 5 渊 2 冤院 77. [3] 刘里袁彭洪生袁伏云红. 荧光光谱法研究头孢孟多酯与牛血清白蛋白的相互作用 [J]. 袁 24 袁 4 渊 3 冤院 64-67. [4] 王艳妮袁马红燕袁高春燕袁等. 基于邻氟苯基荧光酮荧光探针的荧光光谱法测定牛血清白蛋白 [J]. 理化检验渊化学分册冤袁 26 袁 52 渊 3 冤院 266-27. 渊编辑院莫婕冤 渊上接第 67 页冤用油用乙腈涡旋萃取袁 PAEs 检测玻璃萃取管净化袁气相色谱 - 质谱联用仪测定遥在 ~5 滋 g/l 范围内具有良好的线性关系渊 r 跃.999 5 冤袁方法检出限分别为. 袁.4 滋 g/kg 袁定量限分别为 3.3 袁 4.5 滋 g/kg 遥在 2~ 滋 g/kg 的添加水平袁高效氟吡甲禾灵和吡氟甲禾灵的回收率在 95%~% 之间袁方法精密度试验的相对标准偏差在 5% 以内遥该方法简便尧快速尧灵敏尧准确袁适合食用植物油中高效氟吡甲禾灵和吡氟甲禾灵定性和定量检测遥参考文献 [] 除草剂高效氟吡甲禾灵渊 Haloxyfop-P-methyl 冤 [J]. 山东农药信息袁 8 渊 6 冤院 4-4. [2] 王迪轩. 蔬菜常用除草剂 - 氟吡甲禾灵的使用与注意事项 [J]. 农药市场信息袁 25 渊 9 冤院 54-54. [3] 朱海霞袁翁华袁程亮袁等. L 高效氟吡甲禾灵乳油对春油菜田野燕麦的防治效果 [J]. 湖北农业科学袁 23 袁 52 渊 4 冤院 3297-3298. [4] 魏桂华袁闫强袁高兴贵. 8 g/l 高效氟吡甲禾灵乳油防除大豆田杂草效果研究 [J]. 现代农业科技袁 25 渊 4 冤院 3-3. [5] 吴菊香袁王宝亮袁许曼琳袁等. 48% 灭草松水剂与.8% 高效氟吡甲禾灵乳油防除夏直播花生田杂草效果研究 [J]. 现代农业科技袁 25 渊 4 冤院 27-3. [6] 武秀停袁赵静袁吴加伦袁等. 气相色谱法测定穿心莲及其土壤中高效氟吡甲禾灵残留 [J]. 分析科学学报袁 23 袁 29 渊 2 冤院 227-23. [7] 谢勇波袁周清明袁龚道新袁等. 高效液相色谱法测定土壤尧烟草和油菜中高效氟吡甲禾灵残留 [J]. 农药袁 2 袁 5 渊 3 冤院 29-22. [8] 卢晓蕊袁许海东袁杜洪淼袁等. 超高效液相串联质谱法测定食用油中高效氟吡甲禾灵 [J]. 粮油加工渊电子版冤袁 25 渊 4 冤院 29-3. [9] 刘慧袁曹赵云袁张利强袁等. 分散固相萃取 - 液相色谱 - 串联质谱法测定农产品中吡氟甲禾灵 [J]. 分析试验室袁 2 袁 3 渊 3 冤院 83-86. [] 张艳. 农药残留分析中不同提取溶剂的评价 [J]. 甘肃农业科技袁 6 渊 9 冤院 28-29. [] 韩梅袁侯雪. 气相色谱串联质谱法测定香菇中几种氨基甲酸酯农药残留量 [J]. 袁 23 袁 39 渊 冤院 52-55. [2] 化学分析实验室中的职责和质量控制指南院 SN/T 359-23[S]. 北京院中国质检出版社袁 23. 渊编辑院莫婕冤