利用封群策略某 5000 头母猪场在 120 天内成功净化 PRRSV NADC 30 毒株 Eradication of PRRSV NADC 30 strain from a 5000-sow farm through herd closure in 120 days 环山集团养猪事业部 曲向阳 (13851710676) 2016 年 10 月 16 日 1
提纲 01 PRRSV NADC 30 毒株简介 PPRSV NADC 30 Strain 02 病史与临床症状 Clinical Signs 03 综合诊断 Comprehensive diagnosis 04 封群净化程序 Herd closure 05 断奶仔猪的跟踪检测 Follow-up testing of weaning piglets 06 讨论与总结 Dicussion & Summary 2
1.PRRSV NADC 30 毒株简介 蓝耳病是威胁全球养猪业的最重要的病毒性疾病之一, 特别是新型高致病性蓝耳病毒感染可诱发更严重的临床症状 在美国,60% 的感染性流产是由蓝耳病毒所导致的 [1] 杨汉春老师等报告 :2014 年 08 月份以来我国多地发现新的蓝耳病毒株 NADC30 的感染 [2] 但同行对 NADC30 所导致的蓝耳病的临床表现 诊断要点 净化与防控等认知尚不足 2015 年 11 月 23 日起, 笔者经历了一场由蓝耳病毒 NADC30 毒株感染导致的以母猪流产为主要临床表现的蓝耳病 通过及时采取封群净化策略, 在 120 天内成功将 NADC30 毒株净化, 重新生产出蓝耳抗原阴性的仔猪 [1] Jeffrey 等. 猪病学 ( 第 10 版 )[M].353. [2] Xiuling Yu et al.pathogenic Pseudorabies Virus, China, 2012.Emerging Infectious Diseases. 2014,20:102-105. 3
1. 病史与临床症状 该猪场为小栋舍多单元传统母猪场, 存栏 5100 头 ; 母猪场 + 合作养殖模式 ; 发病前, 猪瘟 蓝耳 伪狂犬 口蹄疫等均抗原阴性 断奶 - 上市保育育肥猪平均成活率高于 95%, 健康状态良好 ; 蓝耳免疫 : 母猪群普免, 一年免疫 3 次 蓝耳疫苗选用某品牌天津毒株 ; 断奶仔猪不免疫蓝耳疫苗, 转群到养户家饲养, 且可持续保持阴性 ; 后备母猪由体系内供种, 每两个月引种一次 ; 最近一次引种是 2015 年 10 月 30 日 免疫背景 : 蓝耳 6 月 22 日 ; 伪狂犬 :11 月 11 日 ; 该猪场周围 3 公里处有另一母猪场,2014-2015 年曾感染蓝耳病 4
2. 临床症状 Clinical Signs 2015 年 11 月 23 日母猪场报告 :47 周 11 月 21 日 -26 日 流产 8 头, 周流产数显著高于正常值 ( 依照流产率 2% 推算, 周流产数应控制在 4 头 ) ( 图 1 流产数曲线 ) 第一周的流产母猪主要集中于妊娠前期 ( 妊娠 30-60 天 )( 图 2. 流产胎儿 ) 两周后逐渐向妊娠中期 ( 妊娠 60-90 天 ) 转移 ; 四周后以妊娠后期 ( 妊娠 90-120 天 ) 流产为主 发病初期, 流产母猪体温在 40 左右, 流产前母猪采食量未发现明显异常, 流产后 1-2 天内体温恢复正常 (38.5 ) 发病第二周 : 部分母猪发烧 ( 产 5,178 头母猪,8 头发烧, 发烧率 :4.49% ), 体温 40-41.5, 采食量下降 随后出现 跳跃式 采食量下降 流产 ( 流产母猪栏位不是相邻的, 呈跳跃式分布 ) 12 月 05 日起 ( 发病 2 周后 ), 产房部分母猪奶水变差, 仔猪整窝表现出呼吸急促, 断奶前死亡率显著升高 ; 5
2. 临床症状 Clinical Signs 图 1. 周流产数变化曲线 (2015 年 44 周至 52 周的周流产窝数统计, 正常每周流产不超过 4 头 ) 6
2. 临床症状 Clinical Signs 图 2. 妊娠前期 (30-60 天 ) 流产胎儿 : 全身充血 出血 7
2. 临床症状 Clinical Signs 图 3. 流产母猪妊娠日龄及流产数变化曲线 8
2. 临床症状 Clinical Signs 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 11 月 26 日 11 月 28 日 11 月 30 日 12 月 2 日 12 月 4 日 12 月 6 日 12 月 8 日 12 月 10 日 12 月 12 日 12 月 14 日 12 月 16 日 12 月 18 日 12 月 20 日 12 月 22 日 12 月 24 日 12 月 26 日 12 月 28 日 12 月 30 日 1 月 1 日 1 月 3 日 1 月 5 日 1 月 7 日 1 月 9 日 1 月 11 日 1 月 13 日 1 月 15 日 1 月 17 日 1 月 19 日 1 月 21 日 1 月 23 日 1 月 25 日 1 月 27 日 1 月 29 日 1 月 31 日 2 月 2 日 2 月 4 日 2 月 6 日 2 月 8 日 2 月 10 日 2 月 12 日 2 月 14 日 图 4. 每日流产母猪头数监控 9
2. 临床症状 Clinical Signs 图 5. 妊娠 90 天以上胎儿的剖检病变 : 明显的间质性肺炎, 肺脏充血 出血 水肿 10
3. 综合诊断 Comprehensive diagnosis 疑似病因分析 伪狂犬 蓝耳病 其他全身性细菌感染 ( 丹毒 链球菌 弓形体等 ) 11
3. 综合诊断 Comprehensive diagnosis ( 续 ) 实验室与临床诊断过程 伪狂犬 : 11 月 07 日至 12 月 20 日间共采集 152 份流产母猪与正常母猪血液, 检测 ge 抗体, 均阴性 基本排除了伪狂犬感染 检测日期 病料来源 检测数量 检测情况 2015/11/7 随机采样母猪群 31 阴性 2015/11/9 流产母猪血样 4 阴性 2015/11/25 流产母猪血样 16 阴性 2015/12/4 流产母猪血样 25 阴性 2015/12/20 流产母猪血样 76 阴性 前次伪狂犬的免疫时间 : 伪狂犬 11 月 11 日 ; 12
3. 综合诊断 Comprehensive diagnosis ( 续 ) 实验室与临床诊断过程 细菌性感染排除 : a. 分为三组投药,10% 阿莫西林 :20 g/ 头 / 天 ( 丹毒 链球菌 );62.5% 磺胺氯哒嗪钠 :1.5 g / 头 / 天 ( 弓形体 ); 20% 替米考星 :20g/ 头 / 天 ( 蓝耳病 ) b. 临床反馈 : 替米考星组流产数量较少 但各组之间差异性不大 c. 根据用药后的临床反馈, 基本排除全身性细菌性感染因素 ; 13
3. 综合诊断 Comprehensive diagnosis( 续 ) 蓝耳病诊断 : 流产胎儿及流产母猪血液利用 PCR 进行病原检测 : a. 实验室一 (12 月 01 日 ):9 头流产的死胎, 蓝耳 猪瘟 圆环 伪狂犬均 real-time PCR 阴性 ; b. 实验室二 (12 月 06 日 ): 将 21 份流产母猪血液与流产胎儿, 混合成 4 个样品,Real-time PCR 诊断, 蓝耳病毒阳性 ( 血液 + 胎儿 ), 伪狂犬阳性 ( 胎儿 ), 圆环阳性 ( 胎儿 ); 14
3. 综合诊断 Comprehensive diagnosis( 续 ) 蓝耳病诊断 : ELISA(12 月 02 日 ) 5 S/P Value 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 5 10 15 20 25 发病后第 2 周, 流产母猪的血清 PRRSV ELISA S/P 值 1 份阴性 (3.8%);5 份 (19.2%) 0.4<S/P<2.0;20 份 (77%) 2.0<S/P<4.5 15
3. 综合诊断 Comprehensive diagnosis( 续 ) 蓝耳病诊断 : ELISA(06 月 23 日 ) 3 2.5 2 1.5 1 0.5 S/P Value 0 0 5 10 15 20 25 发病前 5 个月妊娠母猪的血清 PRRSV ELISA S/P 值 16 份 (64%) 0.4<S/P<2.0;9 份 (36%) 2.0<S/P<3.0 16
3. 综合诊断 Comprehensive diagnosis( 续 ) 蓝耳病血清性诊断 : ELISA 检测结果对比分析 时间 6 月 23 日 12 月 02 日 70% 发病前后猪群 PRRSV ELISA S/P 值 S/P<0.4 0/25 (0%) 1/26 (3.8%) 60% 50% 0.4<S/P< 2.0 2.0<S/P< 3.0 3.0<S/P< 4.5 16/25 (64%) 9/25 (36%) 0/25 (0%) 5/26 (19.2%) 4/26 (15.4%) 16/26 (61.5%) 40% 30% 20% 10% 0% S/P<0.4 0.4<S/P<2.0 2.0<S/P<3.0 3.0<S/P<4.5 6 月 23 日 12 月 2 日 17
3. 综合诊断 Comprehensive diagnosis( 续 ) 蓝耳病 PCR 诊断 12 月 06 日北京某实验室确认 : 流产母猪血清存在 PRRSV 病毒血症 18
致病毒株的测序与遗传进化树 12 月 05 日 : 对流产母猪 胎次重新采样 ; 送检实验室 ; 并测序, 结果为 NADC30 感染 所检测 NADC30 蓝耳毒株的遗传进化树 ( 依据 ORF 6 /7 序列 ) 与 CH-1a,JXA1 及 VR2332 均不在同一个分枝上 19
产房仔猪病料 PCR 及序列分析 母猪血清与仔猪组织病料 PRRSV 属于同一分支 ; 该病毒株与周边 2 公里内某场的病毒株基因属于同一分支 ; 故运转车辆 风媒是本次疾病传播的最大因素 ; 20
4. 封群净化方案 Herd closure 后备猪引入 : 一次性引入足量的后备母猪, 满足未来 7 个月使用 ; 同群感染 / 免疫 : 通过全群暴露 PRRSV, 让猪群取得一致的免疫状态 基础种猪群 a) 采用带毒血清或疫苗 =>> 我们选择活疫苗 b) 所有存栏种猪 ( 不包括哺乳仔猪 ) 免疫 1 头份蓝耳苗 ;(11 月 27 日 ) c) 间隔 30 天, 第二次普免 1 头份蓝耳苗 ;(12 月 27 日 ) d) 让种猪群 100% 处于同期感染, 同期康复状态 ; 后备母猪群 : 利用流产母猪进行驯化 ; 21
4. 封群净化方案 Herd closure( 续 ) 产房管理 a) 闭群期间减少产房仔猪之间的传播 b) 所有断奶仔猪全部出售, 不允许留在场内 ; c) 产房 3 日龄一次性完成去势 断尾 补铁 保健 ; d) 每窝更换手套,24 小时后不再寄养, 人员不允许上产床, 不允许产床刮粪, 抓猪治疗需换手套 22
5. 断奶仔猪的跟踪检测 Follow-up testing of weaning piglets 第 12 周开始对病弱断奶仔猪进行蓝耳病毒的 PCR 检测, 每窝一头 第一次 : 检测 30 头 (Pool-PCR), 如果阳性,4 周后重新检测 ; 如果全阴,2 周后检测 30 头 ( 第二次 ) 如果阳性,2 周后重新检测 ; 如果全阴,2 周后测 60 头 ( 第三次 ) 如果阳性,2 周后重新检测 ; 如果全阴,2 周后 120 头 ;( 第四次 ) 23
5. 断奶仔猪的跟踪检测 Follow-up testing of weaning piglets 检测次数 时间 血清份数 结果 ( 阳性率 ) 第一次 2016/3/5 30 0/6 第二次 2016/3/23 30 0/6 第三次 2016/4/11 30 1/6 第四次 2016/4/25 60 1/12 第五次 2016/5/5 40 0/8 第六次 2016/5/15 110 0/22 第七次 2016/5/29 120 0/24 自 2015 年 11 月 21 日至 2016 年 03 月 05 日历时 105 天, 首次检测即获得蓝耳阴性仔猪 自蓝耳感染 230 天后, 宣布净化成功 24
6. 讨论与总结 Dicussion & Summary 此案例的主要表现为母猪流产 ; 对产房仔猪的危害较小 但爆发后前两周, 母猪流产均集中于妊娠 30-60 天, 之后逐渐向后转移 并非典型的妊娠后期流产 ; 蓝耳病的实验室诊断可结合 ELISA 方法与 PCR 方法进行 ; 某些实验室无法通过 PCR 方法检测出 NADC30 毒株 后备猪的引种 运猪车辆控制是本次感染的最大潜在风险 封群净化的重点 : 后备猪一次性引入, 全群感染, 严格的产房管理, 持续性断奶仔猪跟踪检测 通过封群净化措施, 在 120 天内成功将蓝耳病毒从母猪场内净化, 生产出蓝耳阴性的仔猪 ; 25
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