第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!" #$# # %&'& & 临床研究 在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义 党万太 王 婧 谢文光 周京国 川北医学院附属医院风湿免疫研究所 四川南充 成都中医药大学临床医学院 四川成都 甘肃中医学院 甘肃兰州 摘要 目的 探讨可溶性白细胞分化抗原 %&' 在痛风性关节炎 患者炎症反应中的变化及其意义 方法 选取 例急性 患者 例非 患者和 名健康对照者 & 用实时荧光定量聚合酶链反应 ()*& 检测其外周血单个核细胞 *+,&% 中 &' 的 - 表达水平 用酶联免疫吸附法./01 检测各组血浆 %&' 白介素 0/) 肿瘤坏死因子 () 蛋白表达水平 用免疫比浊法测定各组血浆 & 反应蛋白 & * 含量 检测各组白细胞计数 +& 嗜中性粒细胞绝对值 淋巴细胞绝对值 / 单核细胞绝对值, 等血常规及血尿酸 等指标变化 比较 组指标的差异并分析其与 *+,&% 的 &'- 表达及血浆 %&' 表达的相关性 结果 组 *+,&% 中 &'- 表达量高于 & 组 & 与 组血浆 %&' 蛋白表达低于 组 且 组表达低于 & 组 组 & * 蛋白水平高于 & 与 组 组血浆 0/) () 蛋白水平均显著高于 & 组 且 组 0/) 蛋白水平高于 组 组和 组 +& 高于 & 组 分别 组, 均高于 & 组 组, 高于 组 与 组 均显著高于 & 组 组 *+,&% 的 &'- 表达与 0/) 呈正相关 组血浆 %&' 蛋白表达与 呈正相关 2 结论 %&' 在 患者的炎症反应中表达异常 提示 %&' 在 患者的炎症反应中可能发挥重要的调控作用 关键词 痛风性关节炎 %&' 炎症 白介素 0/) 肿瘤坏死因子 ()& 反应蛋白 & * 中图分类号 32 文献标志码 3!"# $"$" % ""& '"$#$ " ' 4") 45 65"7 80. $")7#4"7 9 65"7)7#: 0"% 5 # $:; $#-4 : :74" 0--#": :7 $ ;5 54 $:% 5 4 :; :15!#4",$ 5!4 &: $7$ 4"!:"7 1!:: :;& 5"5!4,$ 5!5"$ &$"7 # "5 $ %5 :;( 4 5 5:"4 &5"$%$,$ 5!5"$&$"7 # 4"%# "5 $ %5 :;( 4 5 5:"4 &5"$%$,$ 5!5"$/4" :#&5"4 " #"## ( & )'* ( "+, - )." ##-/! &0 )'* -/! (#". (( # *1* ",# '*1* " # &,#(# "# & 0," ',( " ". 2$* & 0 )- ( ". " &)." ".". # "0 ( ".." ".". # ( *1*'*1* " &3 "#. ( )'* 0"# ## " # & 收稿日期,, 修回日期,, 基金项目 国家自然科学基金资助项目 '&3 四川省科技创新苗子工程资助项目 '&,3 $ ". '' $# # " '&3" # " -4# $ # -#'&,3 通迅作者 周京国 &2,"( "(,"( &# 王婧为共同第一作者 & 优先出版 (((&#&# "&22&)&&3&&,,!" # $ #!"
期 党万太 王 婧 谢文光 等 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义 3 #"( *1* )'*0 #"# -/! &&3 #" ( " '*1* 0 #"# *1*&& 0(# ( '*1* && 0 #"# *1* #" ( " '*1* &&3 #" ( 00/)" () #"# *1* " '*1* && 3 #"( '*1* 0, #"# *1* && "03/#"# *1*#"( &"3/#"# '*1*#"( && "01)"!5 #"# *1*#"( &"!5 #"# *1*#" ( '*1* && "0 * #"# *1*"'*1*#"( &&( #. ( )'*0", -/!*1* & &&* #( ". (1) " 0 '*1* &2 && ""0 )'* -/! "1* ( # #& () *.., # #, ', # )- 痛风 7:# 是一种单钠尿酸盐 -:":%: 5#- #) 4 $,1 沉积所致的晶体相关性关节病 与嘌呤代谢紊乱及 或 尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直 接相关 属于代谢性风湿病范畴 研究发现 除代谢因素外 免疫与炎症也参与痛风的发病 尤其是固有免疫 5""4 $5--#"5 在痛风的急性炎症发生发 展过程中发挥着重要作用 &' 即 /*1 5 : :) %4!4 5 $ 受体 最初是一种存在于巨噬细胞 单核 细胞等细胞表面的白细胞分化抗原 &' 属于固有免疫反应系统的模式识别受体 在体内以 种形式存在 膜 &'-$- 4"$&'-&' 和可溶性 &'%&'%&' 是 &' 分子在体内的主要存在形式 是调控 /*1 作用于非髓样细胞的重要介质 血浆中的 %&' 能特异性识别 结合 /*1 或 /*1 脂多糖结合蛋白 5 : : %4!!4 5 $ 5" 5"7 : $5"/+* 复合物 递呈给 (: 样受体 (:5 $ $!$: %(/ %(/ 通过 0/) 信号转导通路中的信号分子髓样分化因子 -$ :55;$ $" 54 5:" ;4! : 33,'33 端粒重复序列结合蛋白 $ :) -$ 5!) $ $4 5" 5"7;4! : ( 等间的相互作用 激活核因子 +"#! $4 ;4! : ) 44)+ 信号转导通路 引起多种炎性细胞因子的合成与分泌 最终导致过度的全身炎症反应及组织器官损伤 已有研究显示 %&' 在炎性肠病等多种疾病中发挥 ) 重要的作用 然而 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的作用仍不清楚 本研究通过 ()*& 法检测 患者 *+,&% 的 &'- 表达水平 并结合相关实验及临床指标进行分析 探讨 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义 对象与方法 临床资料 应用 2 年美国风湿病协会 & 痛风诊断标准 排除肾脏 心血管 血液疾病引起的继发性痛风 排除合并感染或自身免疫性疾病者 收集 年 2 月至 年 3 月川北医学院附属医院风湿门诊和住院的 例急性痛风性炎节炎 4!# $7:# 4 5 5% 患者 例非 ":")4!# $7:# 4 5 5% 患者 均为男性 年龄 2 岁 病程 3 年 健康对照 $4!:":& 组为 名同期在川北医学院附属医院体检的健康男性 年龄 2 岁 入选者实验室指标均无异常且无心血管系统疾病 糖尿病 肝脏疾病及痛风等病史 并排除感染及自身免疫性疾病 各组人群年龄差异无统计学意义 该实验通过当地伦理委员会的同意与支持 所有参与者均签订知情同意书 + 主要试剂与仪器 * 5-$1! 5 ( $47$" <5 5 7'. 4%$ *$ ;$!$4 (5-$ 试剂盒 1 + (, 日本 (4<4 4 公司 0/) 北京四正柏生物科技有限公司 ()./01 <5 试剂盒 博士德生物工程有限公司 =#4" 5 5"$./01 #) -4"%&' >'1% $-% 1 +$! -4")&:#$ 原装 & * 试剂 +$! -4")&:#$ 公司 +.&<, 特种蛋白分析仪 0,,.3+.&<,&/(. 1 2 实时 *& 仪 +0 公司 1,- 实时荧光定量. 检测 / 的表达变化 实时荧光定量 *& 检测的基因引物设计依据 $"+4" 中人肌动蛋白 )4! 5"&' 由南京金斯!" # $ #!"
西安交通大学学报 医学版 第 卷 瑞生物科技有限公司合成 )4! 5" 上游引物?) ((((& ( ( && &)? 下游引物?) &( & &( &&(& )? 片段大小 &' 上游引物?)( &(&&&(&(&( (&) ()? 下游引物?)&&& (&&( (& () ( ()? 片段大小 取外周静脉血 -/ 用肝素钠抗凝 用人淋巴细胞分离液 5!: 无菌分离 *+,&% 严格按照说明书操作提取 *+,&% 的总 并进行电泳检测 完整性!' 的合成严格按照逆转录试剂盒说明书操作 条件为 @ -5"3 @ % 终止反应 将逆转录的!' 在 +02 实时 *& 仪上进行检测 / 的反应体系 1 + (, /8 $;$ $"!$'$ / 上 下游引物各 -: / 3/ 灭菌蒸馏水 / 反应条件为 2@ -5"2@ %@ -5" 共 个循环 以 A & 值进行统计分析目的基因 - ) 表达水平,(0 检测血清 01 / 101./01 <5 检测严格按照操作说明进行 各孔用酶标仪在 "- 测定吸光度值 用试剂盒标准品制作标准曲线 根据样品的吸光度值在坐标上找出对应的浓度 样品最终浓度 所测浓度 B 稀释倍数 收集临床实验指标及检测方法 所有受试者禁食 于清晨采集肘静脉血 用 8.) 全自动血液分析仪检测血常规 包括白细胞计数 5 $ ::!:#"+& 嗜中性粒细胞绝对值 7 4"# :! $ 淋巴细胞绝对值 - :! $/ 单核细胞绝对值 -:":! $, 用日立 ) 全自动生化分析仪检测血尿酸 # 5!4!5 血清 & * 检测采用免疫比浊法 统计学分析 采用 1*112 统计软件进行统计分析 各组实验数据采用 表示 组间比较采用单因素方差分析 "$) 4 C 各组间数据若不符合正态分布 采用秩变换进行转换 组间两两比较采用最小显著差数法 各组间的相关分析采用 相关分析 为差异有统计学意义 + 结 果 +, 各组. 的 / 表达 各组 *+),&% 的 提取效果良好 图 组患者 *+,&% 的 &'- 表达量高于 & 组 差异有统计学意义 组表达与 & 组相比较 差异无统计学意义 图 + 图 & 图 各组. 的 / 表达 57.$%%5:":;&'- 5"*+,&%5"7:# 4 5 5% *+,&% 的 质量电泳图 +& 患者 *+,&% 的 &'- 表达 +,+ 各组血浆.01 / 1 蛋白的表达 组血浆 %&' 蛋白水平高于 & 和 组 但 组低于 & 组 差异均有统计学意义 分别 图 组 & * 蛋白表达高于 & 与 组 差异有统计学意义 图 + 组血浆 0/) () 蛋白表达均高于 & 组 且 组 0/) 蛋白表达显著高于 组 差异均有统计学意义 均 图 & + - 各临床指标的比较 组和 组 +& 均高于 & 组 差异均有统计学意义 分别 图 组, 均高于 & 组 组患者, 高于 组 差异均有统计学意义 均 图 与 组 均高于 & 组 差异有统计学意义 图 + 与 组 / 与 & 组相比较 差异均无统计学意义 +,/ 表达与其临床实验指标的相关性 组 *+,&% 的 &'- 表达与 0/) 呈正相关 与 +&/, & *() 均未见相关性 与 & 组 *+,&% 的 &' - 表达与 +&/, & *0/) () 均未见相关性!" # $ #!"
期 党万太 王 婧 谢文光 等 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义 图 + 各组血浆. 和 01 / 1 表达 57 ($$$%%5:"%:;%&' & * +0/)4" ()&5" $4%-4:;7:# 4 5 5% 4 5$" % 图 - 各组血常规与血尿酸检测指标的比较 57 &:- 4 5%:":; :::# 5"$ 4" +5"7:# 4 5 5% 4 5$" % +, 血浆 蛋白表达与其临床实验指标的相关性 组血浆 %&' 蛋白表达与 呈正相关 2 与 & 组血浆 %&' 蛋白表达与 +&/, & * 0/) () 均未见相关性 组血浆 %&' 蛋白表达与 +&/, & *0/) () 均未见相关性 - 讨 论近年来 痛风的发病率呈明显增高的趋势 已引 起了医学界的高度重视 有研究表明炎症与免疫在 痛风发病过程中发挥重要作用 研究表明,1 晶体主要通过识别细胞表面受体而激活细胞 启动炎 3 症反应 固有免疫的 (: 样受体 (: ) 5 $ $)!$: (/ 与 (: 样受体 (: ) 5 $ $!$ ) : (/ 可协助,1 晶体识别并激活巨噬细 2 胞,1 晶体可能通过激活 (/ % 或 &' &' 等使 (/ % 激活介导炎症反应 研究已证 实 痛风患者外周血 0/) 明显升高 0/) 通过与 0/) 受体结合激活 0/) 信号通路和,'33 依赖 的 )+ 信号转导通路 引起大量的 0/) () 0/)3 等促炎因子表达 产生炎症级联放大效应 本研究结果显示 患者急性期 *+,&% 的 &' - 表达量显著高于健康对照组 而 患者非急性期较健康对照差异无统计学意义 进一步检测血浆 %&' 蛋白表达 结果显示 患者急性期表达显著高于健康对照与非急性期组 这提示 &' 在痛风的急性炎症反应中可能发挥重要调控作用 已知 %&' 是 级急性蛋白 /+* 是 级急性蛋白 0/) 可抑制 %&' 的表达 而 0/) 则促进其表 达 且有研究显示 %&' 是体内固有的 /*1 和 () 的拮抗剂 本研究发现 患者急性与非急性期 0/) () 表达均显著高于健康对照组 提示 %&' 在痛风的炎症反应中可能发挥双向调控作用 其机制可能与 %&' 对 *+,&% 的双重调 节效应相关 该机制同时可能与痛风炎症反应的 自限性相关 本研究检测并分析 患者 +&, 结果显示 除 患者非急性期 与健康对照相比较差异无统计学意义外 患者急性期的!" # $ #!"
3 西安交通大学学报 医学版 第 卷 +&, 均显著高于健康对照组 且 非急性期组, 显著低于急性期组 表明在 患者的病变过程中炎症反应较为显著 值得注意的是 本研究对实验相关指标进行相关性分析后发现 患者 *+,&% 的 &'- 表达与 0/) 呈正相关 患者血浆 %&' 表达与 患者 呈正相关 提示 &' 可能参与 患者炎症的发生并发挥重要的调控作用 其机制有待进一步研究 参考文献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编辑 国 荣!" # $ #!"