理 類 CN9626 行 96 年 1 1 96 年 12 31 參 行 97 年 2 28 1
行 離 Lactic acid bacteria 金 Staphylococcus aureus 行 離 159 API 50 CHL 行 離 159 不 度 了 行 H 2 O 2 1 Lactobacillus plantarum 了 識 益 益 來 不 利 來 益 切 了 流 Joerger 2003 Lactic acid bacteria, LAB 蘭 利 糖類 類 來 理 羅 Reuterin Bacteriocins 不 狀 易 降 不 不良 飼料 Cotter et al. 2005 Bacteriocins 殺 飼料 Nisin 了拓 北 量 離 利 類 行 2
料 料 1. 離 料來 良 北 2. 2.1 參 Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 11454 Nisin 2.2 Escherichia coli ATCC 43886 Salmonella typhi BCRC 12948 Staphylococcus aureus FR 12653 Bacillus cereus ATCC 21778 Listeria monocytogenes BCRC 14845 Saccharomyces cerevisiae strain K 來 3. 3.1 MRS 離 0.5% CaCO 3 不 CaCO 3 PY PYG 理 3.2 參 Brain heart infusion agar 3.3 LB Potato dextrose broth 1. 離 10 不 類 行 1 ml 冷 45~50 MRS 0.5% CaCO 3 30 2~3 d 狀 異 落 MRS 復 落 MRS 4 2. 離 落 行 蘭 蘭 落 4 不 3. (1) 3~5 10 ml MRS 30 24 h 0.5 ml 50 ml 3
MRS 30 48 h 4 10,000 rpm 離 10 min (2) 量 Staphylococcus aureus 50 ml 37 120 rpm 2% 冷 45~50 數 列 10 8 CFU/mL 0.1 ml (3) 6 mm x 10 mm 200 µl ph 4.5 3 h 30 16 h 量 參 落 MRS 24 h 4. 理 (1) ph 2.0 離 (2)H 2 O 2 ph 2.0 離 ph 5.0 catalase 200µl (3)pepsin ph 2.0 離 pepsin 200µl 5. 5.1 理 利 BioMerieux API 50 行 APILAB Plus 讀 BioMerieux, S.A., Marcy I'Etoile, France 行 5.2 利 Lane 1991 16S rdna primers 27F/1492R 行 16S rdna 列 6. Yang et al. 1992 行 Lactobacillus plantarum MRS broth 37 18 80 30 理 1N NOH ph 6.0 4 4 9,000 rpm 4 離 20 0.15 0.005 M ph 6.0 0.1 M NaCl 1N HCl ph 2.0 4 離 4
4 7. SDS ( 0.1 SDS bromophenol blue 0.05 M Tris-HCl buffer, ph 6.8) 100 5 冷 10 µl 12.5 % 行 SDS-PAGE 論 1. 利 行 0.5 CaCO 3 MRS 來 CaCO 3 狀 異 落 利 API 50CHL 行 落 行 不 49 利 APILAB Plus 讀 (BioMerieux, S.A., Marcy I'Etoile, France) 行 159 159 2. 159 行 金 Staphylococcus aureus FR 12653 不 ( ) Lactobacillus lactis BCRC 10791 Nisin 行 13 39 55 126 134 5 H 2 O 2 bacteriocins pepsin 13 力 3. 13 API 50 行 Lactobacillus plantarum primer 27F/1492R 行 16S rdna 列 16S rdna 列 13 Lactobacillus plantarum 99 % 4. 殺 硫 離 來 行 降 來 精 來 率 行硫 離 來 行 5
令 不 來 來 行 率 不 行 pediocin AcH Carolissen-Mackay et al. 1997 SDS-PAGE 量 不 降 5. 行 SDS-PAGE 切 行 SDS-PAGE 見 參 Carolissen-Mackay V, Arendse G, Hastings JW (1997) Purification of bacteriocins of lactic acid bacteria Problema and pointers. Int. J. Food Microbiol. 34: 1-16. Cotter PD, Hill C, Ross RP (2005) Bacteriocins: developing innate immunity for food. Nat. Rev. Microbiol. 3:777-788. Joerger RD (2003) Alternatives to antibiotics: bacteriocins, antimicrobial peptides and bacteriophages. Poult. Sci. 82:640-647. Lane DJ (1991) 16S/23S rrna sequencing. In Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics, pp. 115 175. Edited by E. Stackebrandt & M. Goodfellow. Chichester: Wiley. Yang R, Johnson MC, Ray B (1992) Novel method to extract large amounts of bacteriocins from lactic acid bacteria. Appl. Environ. Microbiol. 58: 3355-3359. 6
7
16S rdna 8
SDS-PAGE 9
10
Specific Total protein Total activity activity (mg) (AU) (AU/mg) Recovery (%) 3324 512000 154 100 29.9 7680 256.9 1.5 11