第 卷 第 期 0 年 月 JOURNAL OF DALI UNIVERSITY Vol. No. Feb. 0 DOI 0. 99 / j. issn. 7-4. 0. 0. 00 邵维在 段治尚 万德生 刘必辞 阙玉玲 云南腾药制药股份有限公司研发部 云南腾冲 7900 摘要 目的 修订提高参苓白术颗粒的质量标准 方法 采用 TLC 法对制剂中的甘草 人参 白术进行定性鉴别 采用 HPLC 法 对其人参中的人参皂苷 Rg Re 进行定量分析 结果 用 HPLC 法测定人参皂苷 Rg Re 的含量 Rg 在 0.~.74 μg 范围内 Re 在 0.44~.0 μg 范围内 峰面积与进样量有良好的线性关系 r=0.999 8 和 r=0.999 9 平均加样回收率分别为 98.%和 97.4% RSD%=.8% n= 和 RSD%=.0% n= 结论 所建立的方法重现性好 专属性强 可控制该制剂的质量 关键词 参苓白术颗粒 薄层 高效液相色 甘草 白术 人参皂苷 中图分类号 R84. 文献标志码 A 文章编号 7-4 0 0-000-0 参苓白术颗粒为云南腾药制药股份有限公司 的普药品种 处方源于宋代 太平惠民和剂局方 由人参 茯苓 白术 山药 白扁豆 莲子 薏苡仁 砂 仁 桔梗和甘草共 0 味药组成 具有益气健脾之功 效 现行版标准载于 部颁标准 第二十册 但质 量标准偏低 为了控制其产品质量 笔者采用薄层 批 号 0704-0 人 参 对 照 药 材 批 号 097-0008 上述对照品均购于中国食品药品 检定研究院 参苓白术颗粒 批号 00 0 0 由 云 南 腾 药 制 药 股 份 有 限 公 司 生 产 HPLC 用乙腈为色谱纯 水为娃哈哈饮用纯净水 大理娃哈哈食品有限公司生产 其他试剂均为 鉴别对方中甘草 人参 白术进行定性鉴别 采用 分析纯 高效液相色谱 HPLC 法对人参所含成分人参皂苷 Rg 和 Re 进行定量测定 现报告如下.. 仪器与试药 仪器 三用紫外仪 ZF- 型 上海市安亭电子 仪器厂 美国 Agilent-00 液相色谱仪 安捷伦科 技有限公司 UV700 紫外分光光度计 岛津苏州 有限公司 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 Agi lent TC- C8 0 mm 4. mm μm 色 谱 柱 SK00H 型超声仪 上海科导超声仪器有限公司 方法与结果 甘草的薄层鉴别 取本品适量于乳钵中研细 称取 g 置 0 ml 平底烧瓶中 加乙醇 0 ml 超 声处理 0 min 滤过 滤液置蒸发皿中蒸干 残渣加 水 0 ml 使溶解 转移至分液漏斗中用二氯甲烷提 取 次 每次 0 ml 收集水层 再用水饱和正丁醇 振摇提取 次 每次 0 ml 合并正丁醇液 正丁醇 液蒸干 残渣加甲醇 ml 使溶解 作为供试品溶 液 另取不含甘草的阴性对照品 同法制备阴性对 电子分析天平 AE40 梅特勒托利多仪器上海有限 照品溶液 再取甘草对照药材 0. g 加乙醇 0 ml 设备有限公司 层色谱法实验 吸取上述 种溶液各 μl 分别点于 公司 数显恒温水浴锅 DRHH-S4 上海双捷实验. 试药 甘草对照药材 批号 0904-00 白术对照药材 批号 09-009 人参皂苷 Rg 对照品 批号 070-08 人参皂苷 Re 对 照品 批号 074-04 人参皂苷 Rb 对照品 收稿日期 0-0- 加热回流 h 滤过 同法制成对照药材溶液 照薄 同 一 % 氢 氧 化 钠 硅 胶 G 板 薄 层 板 上 以 二 氯 甲 烷 甲醇 甲酸 0 0. 为展开剂 展开 取出 晾干 喷以 0 硫酸乙醇溶液 0 加热 min 置 紫外光灯 nm 下检视 -4 供试品色谱中 在与 修回日期 0-0-0 作者简介 邵维在 工程师 主要从事新产品研发 产品工艺优化及中药质量标准研究.
总第 期 医学 对照药材色谱相应的位置上 应显相同颜色的荧光 斑点 阴性对照品无干扰 具有专属性 见图 注 ~. 供 试 品 4. 人 参 皂 苷 Rb Re Rg 对 照 品. 阴性供试品 注 ~. 供试品 4. 甘草对照药材. 阴性供试品 图 甘草紫外光灯 nm TLC. 人参的薄层鉴别 取本品适量于乳钵中研细 称取 4 g 置 0 ml 三角烧瓶中 加三氯甲烷 40 ml 加热回流 h 弃去三氯甲烷液 药渣挥干溶剂 加 水 ml 搅拌使充分湿润 加水饱和正丁醇 0 ml 超声处理 0 min 吸取上清液加氨试液 0 ml 摇匀 放置分层 取上层液蒸干 残渣加甲醇 ml 使溶解 作为供试品溶液 另取不含人参阴性对照品 同法 制备阴性对照品溶液 再取人参皂苷 Rb 对照品 图 人参 TLC 同法制备阴性对照品溶液 再取白术对照药材.0 g 加水饱和的正丁醇 0 ml 超声处理 0 min 滤过 滤液用水洗涤 次 每次 0 ml 弃除水液 正 丁醇液蒸干 残渣加丙酮 ml 使溶解 作为对照药 材溶液 照薄层色谱法试验 吸取上述 种溶液各 0 μl 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 以三氯甲 烷 丙酮 9 为展开剂 展开 取出 晾干 置紫 外光灯 nm 下检视 供试品色谱中 在与对照 药材色谱相应的位置上 现相同的蓝色斑点 阴性 对照品无干扰 具有专属性 见图 人参皂苷 Re 对照品及人参皂苷 Rg 对照品 加甲醇 制成每 ml 各含 mg 的混合溶液作为对照品溶 液 照薄层色谱法实验 吸取上述 种溶液各 μl 分别点于同一硅胶 G 板薄层板上 以三氯甲烷 甲 醇 水 7 0 以下放置的下层溶液为展开 剂 展开 取出 晾干 喷以 0 硫酸乙醇溶液 在 0 加热至斑点显色清晰 供试品色谱中 在与 对照品色谱相应位置上 分别显相同颜色的斑点 阴性对照品无干扰 具有专属性 见图. 白术的薄层鉴别 取本品适量于乳钵中研细 称取 0 g 置 0 ml 平底烧瓶中 加水饱和的正丁 醇 0 ml 超声处理 0 min 滤过 滤液用水洗涤 次 每次 0 ml 正丁醇液蒸干 残渣加丙酮 ml 使 注 ~. 供试品 4. 白术对照药材. 阴性供试品 图 白术紫外光灯 nm TLC 溶解 作为供试品溶液 另取不含白术对照品
总第 期.4.4. 邵维在 段治尚 万德生 等 人参皂苷 Rg Re 的含量测定方法与结果 第卷 色谱条件选择 取人参皂苷 Rg 人参皂苷 Re 色谱柱 Agilent 对照品溶液 在 90~0 nm 范围内做紫外扫描 磷酸溶液 9 8 为流动相 流速.0 ml/min 检测 Rg 和人参皂苷 Re 有较大吸收值 见图 4A 4B 色谱条件及系统适应性 TC-C8 0 mm 4. mm μm 以乙腈 0.0% 波长 0 nm 柱温 0 进样量 0 μl 理论板 数按人参皂苷 Re 峰计算应不低于 000 吸光度/ABs 7 从 紫 外 光 谱 图 可 以 看 出 在 0 nm 处 人 参 皂 苷 参照中国药典 人参 项下的条件 故选择检测波 长为 0 nm.00.00.000.000.000.000 0.000-0.00 90.00 0.00 波长/mm 00.00 0.00 0.000-0.00 90.00 0.00 波长/mm 00.00 0.00 注 A. 人参皂苷 Rg 对照品 B. 人参皂苷 Re 对照品.4. 图 4 人参皂苷 Rg 对照品紫外光谱图 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷 Rg 对照品 人参皂苷 Re 对照品适量 加甲醇制 成每 ml 中人参皂苷 Rg 含 90 μg 人参皂苷 Re 含 0 μg 的混合溶液 摇匀 即得.4. 供试品溶液的制备 取本品 g 研细 精 密称定 置具塞锥形瓶中 精密加入甲醇 00 ml 密 塞 称定重量 加热回流提取 h 放置至室温 再精 密称定重量 用甲醇补足减失的重量 摇匀 滤过 精 与人参皂苷 Rg Re 对照品色谱图中相同的保留时 间处无吸收峰 表明阴性对照品无干扰 见图.4. 标准曲线的制备及线性关系考察 取人参 皂苷 Rg 对照品贮备液 每 ml 中人参皂苷 Rg 含 量 0.44 mg 人参皂苷 Re 对照品贮备液 每 ml 中人参皂苷 Re 含量 0.0 mg 精密量取上述两种 溶液各 0.4 0.8.. 与.0 ml 分别置 ml 量 瓶中 加甲醇至刻度 摇匀 即得 分别精密吸取 密吸取续滤液 0 ml 蒸干 残渣加 0%氢氧化钠溶 0 μl 测定 以进样量为横坐标 峰面积为纵坐 用水饱和正丁醇提取 4 次 每次 0 ml 合并正丁醇 归方程为 Y= 0 9.098X+.700 r=0.999 8 液 ml 使溶解 加水 ml 并转移至分液漏斗中 提取液 用水洗涤 次 每次 0 ml 弃去水液 正丁 醇液蒸干 残渣加水 ml 使溶解 通过 D0 型大 孔吸附树脂柱 内径. cm 长 0 cm 上 先以水 00 ml 洗脱 弃去水液 再以 70%乙醇 00 ml 洗 脱 收集洗脱液 蒸干 残渣用甲醇溶解并转移至 0 ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 用微孔滤 标 绘制标准曲线 回归方程 人参皂苷 Rg 的回 结果表明人参皂苷 Rg 在 0.~.74 μg 范围内线 性关系良好 人参皂苷 Re 的回归方程为 Y= 09 0.4X- 4.700 r=0.999 9 结果表明人参皂苷 Re 在 0.44~.0 μg 范围内线性关系良好.4. 精密度试验 取人参皂苷 Rg 人参皂苷 Re 对照品混合溶液 连续重复进样 次 每次 0 μl 按 膜 0.4 μm 滤过 即得 同法制备人参药材溶液.4. 项下色谱条件进样 分别测得人参皂苷 Rg 除人参外的其余药材 制备缺人参阴性对照品 按 峰面积的 RSD%=0.77% n= 人参皂苷 Re 峰面积.4.4 缺人参阴性样品的制备 按处方比例 称取.4. 项下方法制成缺人参的阴性对照溶液 在 7 Re 的峰面积 考察其精密度 结果 人参皂苷 Rg 的 RSD%=0.% n= 表明进样精密度良好
总第 期 医学 注 A. 人参皂苷 Rg 人参皂苷 Re 混合对照品 B. 人参药材 C. 参苓白术颗粒样品 D. 参苓白术颗粒阴性样品 图 高效液相色谱图.4.7 稳定性试验 取 同 一 供 试 品 溶 液 批 号 00 分别于 0 8 4 h 按.4. 项下色谱 条件进样 次 测定峰面积 结果 人参皂苷 Rg 峰 面 积 的 RSD% =0.% 人 参 皂 苷 Re 峰 面 积 的 RSD%=0.4% 表明供试品溶液在 4 h 内峰面积基 本稳定.4.8 重复性试验 取同一批样品 批号 00 9 份 每份约 7. g 精密称定 精密加入人参皂苷 Rg 对照品溶液.9 ml 每 ml 中人参皂苷 Rg 含 量 0.44 mg 人参皂苷 Re 对照品溶液.0 ml 每 ml 中人参皂 Re 含量 0.7 mg 按.4. 项下方法 制成供试品溶液 并按.4. 项下色谱条件进行测 定 计算加样回收率 见表 表 人参皂苷 Rg 回收率试验结果 适量 研细 取 份 每份约 g 精密称定 置具塞 编号 按.4. 项下色谱条件进样 测定其人参皂苷 Rg 7.0 8 0.7 0.87 9.9 8.90 7 0.908 0.87 9.7 0. 锥形瓶中 按.4. 项下方法制成供试品溶液 并 Re 的 含 量 结 果 人 参 皂 苷 Rg 含 量 的 RSD% =.% n= 人 参 皂 苷 Re 含 量 的 RSD% =0.74% n= 结果表明本方法重复性较好.4.9 加样回收率试验 取已测定含量的同一批 样品 批号 00 已测定含人参皂苷 Rg 的含量 为 0.0 0 mg/g 人参皂苷 Re 的含量为 0.090 7 mg/g 样品称 样品含 量/g 加入 测得 7.08 0.7 9 0.87 9.9 4 8 平均回 RSD/ 收率/% % 98.7 98.99 7.4 4 0.78 0.87 9.9 4 9.7 7.04 4 0.7 0.87 9.89 9 98.9 8.0 9 0.88 0.87 9.0 0 回收 率/% 99. 98.7.8
总第 期 邵维在 段治尚 万德生 等 表 人参皂苷 Re 回收率试验结果 编号 样品称 样品含 量/g 加入 测得 回收 率/% 7.0 8 0.80 4. 8 98.84 8.90 7 0.807.44 9.9 4 7.08 0.8 0 7.4 4 0. 8 8.0 9 0.78 0 7.04 4 0.80 7.4.0..9 9. 4. 均为臣药 砂仁芳香渗湿 醒脾和胃 行气化滞 是 平均回 RSD/ 收率/% % 97.4.0 9.9 规格 g/袋 按.4. 项下方法制成供试品溶 液 并按.4. 项下色谱条件 依法测定 见表 样品/ mg/袋 批号 00 批号 0 批号 0 人参皂苷Rg含量 0. 0. 9 0.0 0. 0.04 8 0.0 人参皂苷Re含量 0.4 0.4 0.49 0.4 0.4 0.4 总量 批总量平均值 总量平均值.7 4.4 4..4 9.48.. 9.. 性鉴别 在含量测定方面 对君药人参的成分 Rg Re 进行定量控制 经过严格的方法学考察实验 定 性 定量质控方法成熟 专属性强 纳入标准 97.9 表 样品测定结果 胃 调和诸药为使药 8 结合该药品组方的君臣佐 定性鉴别 并进行优化 增加人参 白术两味君药定 取参苓白术颗粒三批样品 样品含量测定 为佐药 桔梗宣肺利气 通调水道 炙甘草健脾和 使 全面的控制其质量 我们保留原标准中甘草的 98.09 97.4 第卷.0 参考文献 中华人民共和国卫生部. 中华人民共和国卫生部药品标 准中药成方制剂 第二十册 S. 998 84. 曲婷丽 邓亚宁 郝丽宏 等. 参苓白术颗粒的薄层色谱 鉴别方法研究 J. 中成药 008 00-8. 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 一部 S. 北京 中国医药科技出版社 00 8-9. 4 刘敬 赵斌 王琼 等. 克刻胶囊中甘草薄层鉴别方法的 改进 J. 中国民族民间医药 0 8 9-40. 肖霞 曹俊凯. 人参当归颗粒的薄层鉴别 J. 中国实用 医药 0 7 9 49-0. 讨论 参苓白术颗粒是我企业常年生产的品种 原质 量标准较低 仅有一个甘草定性鉴别项 没有其他 定性或定量项 方中人参 白术 茯苓为君药 人参 益气 白术健脾 茯苓渗湿 配伍山药 莲子 白扁 豆 薏苡仁健脾益气渗湿止泻 内助君药增强药效 付 丽 芳 付 丽 萍. 健 脾 口 服 液 中 党 参 白 术 的 薄 层 鉴 别 J. 时针国医国药 000. 7 周 芳. HPLC 法 测 定 参 苓 白 术 颗 粒 中 人 参 皂 苷 的 含 量 J. 中国试验方剂学杂志 00-7. 8 黄道金 李瑞云. 参苓白术散临床运用拾遗 J. 海南医 药 990 -. Study on the Quality Standards of Shenglingbaizhu Granule Shao Weizai, Duan Zhishang, Wan Desheng, Liu Bici, Que Yuling Research and Development Department of Tengyao Pharmaceutical Company, Tengchong, Yunnan 7900, China Abstract Objective: To develop a method for revising and improving the quality standards of Shenlingbaizhu Granule. Methods: Glycyrrhiza, ginseng and atractylodes were identified by Thin- layer chromatography TLC method, Ginsenoside Rg and Re in ginseng were quantitatively analyzed by high performance liquid chromatography HPLC methed. Results: HPLC assay results showed good linear relationships of range 0.~.74 μg r=0.999 8 for Rg and range 0.44~. μg r=0.999 9 for Re, respectively. The average recoveries n= was 98.% RSD:.8% for Rg and 97.4% RSD:.0% for Re. Conclusion: The established method has good reproducibility and specificity, which could be used as the quality control strandard of Shenlingbaizhu Granule. Key words Shenlingbaizhu Granule; thin-layer; HPLC; glycyrrhiza; atractylodes; ginsenoside 责任编辑 9 毛本勇