生 态 学 杂 志 Chinese Journal of Ecology 2015,34(9):2530-2536 黑 龙 江 流 域 绥 芬 河 水 系 野 生 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 1 郭 文 学 1 张 永 泉 1 佟 广 香 2 陈 子 文 齐 2 鹏 1 尹 家 胜 ( 1 中 国 水 产 科 学 研 究 院 黑 龙 江 水 产 研 究 所, 哈 尔 滨 150070; 2 东 北 农 业 大 学 动 物 科 技 学 院 水 产 系, 哈 尔 滨 150030) 摘 要 采 用 活 体 观 察 和 固 定 观 察 2 种 方 法, 对 野 生 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 进 行 了 系 统 观 察, 分 析 了 洛 氏 鱥 胚 胎 及 仔 鱼 发 育 过 程 及 各 时 期 特 点 结 果 表 明 : 洛 氏 鱥 成 熟 卵 为 圆 球 形, 米 黄 色, 略 透 明, 卵 沉 粘 性, 卵 膜 适 中, 略 有 弹 性 ; 受 精 卵 吸 水 后 极 度 膨 胀, 弹 性 增 大 明 显 ; 受 精 卵 在 水 温 15.0 ~ 17.1 条 件 下, 历 经 170 h 孵 出, 整 个 发 育 期 间 所 需 积 温 为 2612.8 h, 整 个 胚 胎 发 育 过 程 可 分 为 受 精 卵 卵 裂 囊 胚 原 肠 胚 神 经 胚 器 官 形 成 至 破 膜 等 6 个 阶 段, 各 阶 段 发 育 所 需 积 温 分 别 为 17.0 119.0 145.0 132.0 164.0 2035.8 h; 在 胚 胎 发 育 期 间, 许 多 器 官 分 化 形 成, 至 孵 化 时, 胚 胎 已 具 有 较 完 善 的 内 部 器 官, 胸 鳍 尾 鳍 臀 鳍 均 已 形 成, 背 鳍 原 基 开 始 出 现 ; 初 孵 仔 鱼 卵 黄 囊 为 长 椭 圆 形, 鱼 体 透 明, 无 色 素,3 日 龄 仔 鱼 黑 斑 呈 块 状, 卵 黄 基 本 吸 收 完 全, 不 久 便 可 以 摄 食 单 胞 藻 草 履 虫 或 蛋 黄 关 键 词 洛 氏 鱥 ; 胚 胎 发 育 ; 积 温 中 图 分 类 号 S965.199 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 1000-4890(2015)9-2530-07 Embryonic development of wild Phoxinus lagowskii Dybowskii collected from Suifen River in Heilong River Valley. GUO Wen xue 1, ZHANG Yong quan 1, TONG Guang xiang 1, CHEN Zi wen 2, QI Peng 2, YIN Jia sheng 1 ( 1 Heilongjiang Fisheries Research Institute, Chinese Aca demy of Fishery Sciences, Harbin 150070, China; 2 College of Animal Science and Technology, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China). Chinese Journal of Ecology, 2015, 34 (9): 2530-2536. Abstract: The features of embryonic and early larvae development of Phoxinus lagowskii Dy bowskii were studied by live body observing and fixed samples observing methods. The results showed that the mature oocyte eggs of wild P. lagowskii are spherical in shape, slightly transpa rent with light yellow in color, sink adhesive with moderate and elastic egg envelopes. At water temperature of 15.0-17.1, the development of fertilized eggs from fertilization to hatching took 170 h with an accumulative temperatures of 2612.8 h. The whole embryonic development processes of P. lagowskii were divided into 6 stages, including fertilization stage, cell division stage, blastula stage, gastrula stage, neurula stage and organogenesis stage, and the accumula tive temperatures of each stage were 17.0, 119.0, 145.0, 132.0, 164.0, and 2035.8 h, re spectively. The organs differentiated during the embryonic development stage and basically formed after hatching, and pectoral fin, caudal fin and anal fin were fully differentiated, and dorsal fin anlage appeared. The newly hatched larvae were diaphanous and non pigmented with an elliptic shape yolk sac. At 3 days after hatching, black spots at body surface gathered into block type and the yolk sac was nearly exhausted, soon after the larvae can ate exogenous food such as microal gal diets, paramecia and egg yolk. Key words: Phoxinus lagowskii Dybowskii; embryonic development; accumulated temperature. 洛 氏 鱥 ( Phoxinus lagowskii Dybowskii), 隶 属 鲤 形 目 ( Cypriniformes) 鲤 科 ( Cyprinidae) 雅 罗 鱼 亚 国 家 科 技 支 撑 计 划 项 目 (2012BAD25B10) 和 公 益 性 行 业 ( 农 业 ) 科 研 专 项 (201003055 14) 资 助 通 讯 作 者 E mail: xwsc20@ tom.com 收 稿 日 期 : 2014 12 12 接 受 日 期 : 2015 06 03 科 (Leuciscinae) 鱥 属 (Phoxinus), 主 要 分 布 在 中 国 的 黄 河 辽 河 图 们 江 黑 龙 江 等 流 域, 国 外 见 于 朝 鲜 俄 罗 斯 ( 伍 献 文 等,1982; 陈 宜 瑜 等,1998) 其 肉 质 细 嫩, 味 道 鲜 美, 市 场 价 位 较 高, 养 殖 前 景 广 阔 目 前 国 内 外 对 洛 氏 鱥 的 研 究 较 少, 仅 见 于 栖 息 地
郭 文 学 等 : 黑 龙 江 流 域 绥 芬 河 水 系 野 生 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 ( 康 鑫 等,2011) 繁 殖 力 ( 王 茂 林 等,2013) 形 态 学 ( 张 永 泉 等,2013) 营 养 成 分 ( 张 永 泉 等,2013) 等 方 面, 在 中 国 洛 氏 鱥 人 工 育 苗 技 术 已 经 突 破, 但 其 胚 胎 发 育 过 程 尚 不 清 晰, 仅 牟 振 波 等 (2014) 报 道 了 人 工 养 殖 的 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 情 况 本 研 究 以 黑 龙 江 流 域 绥 芬 河 水 系 的 二 道 沟 河 和 大 肚 川 河 的 东 宁 县 河 段 采 捕 的 野 生 洛 氏 鱥 为 研 究 对 象, 通 过 活 体 观 察 和 取 样 固 定 观 察 2 种 方 法, 系 统 地 研 究 了 该 水 系 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 情 况, 为 洛 氏 鱥 全 人 工 繁 育 及 种 质 资 源 保 护 提 供 科 学 资 料 1 材 料 与 方 法 1 1 材 料 试 验 动 物 于 2012 年 10 月 捕 自 黑 龙 江 流 域 绥 芬 河 水 系 的 二 道 沟 河 和 大 肚 川 河 的 东 宁 县 河 段, 共 采 捕 野 生 洛 氏 鱥 80 尾 作 为 繁 殖 亲 本, 暂 养 于 黑 龙 江 水 产 研 究 所 渤 海 冷 水 性 鱼 试 验 站, 暂 养 期 间 水 温 变 化 范 围 为 4.33 ~ 9.26, 溶 氧 高 于 6 mg L -1, 每 天 投 喂 3 次 人 工 饲 料, 饲 料 主 要 营 养 成 分 见 表 1 1 2 亲 鱼 催 产 人 工 授 精 及 孵 化 至 2013 年 5 月 水 温 达 到 12 ~ 14, 亲 鱼 性 腺 发 育 至 成 熟, 采 用 背 鳍 注 射 的 方 法 对 亲 鱼 进 行 催 产, 雌 鱼 采 用 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 (HCG) + 鲑 鱼 促 性 腺 激 素 释 放 激 素 类 似 物 (S-GnRH) + 地 欧 酮 (DOM) 混 合 剂 一 次 性 注 射, 注 射 剂 量 分 别 为 800 IU + 20 μg + 2 mg, 雄 鱼 采 用 HCG+S-GnRH 混 合 剂 一 次 性 注 射, 注 射 剂 量 分 别 为 600 IU + 6 μg 亲 本 平 均 体 质 量 为 87 80 ± 8.47 g, 雌 性 洛 氏 鱥 平 均 怀 卵 量 为 6738.50 ± 1024.3 粒 以 雌 雄 比 1 2 的 比 例 对 精 卵 进 行 人 工 授 精, 授 精 方 法 为 干 法 授 精, 共 收 集 5 尾 雌 鱼 的 成 熟 卵, 依 次 挤 入 10 尾 雄 鱼 的 精 液, 每 尾 雄 鱼 挤 入 大 约 1 / 2 左 右 的 精 液 即 可 将 获 得 的 受 精 卵 置 于 特 制 孵 化 设 备 ( 专 利 号 :ZL 2014 20256051.6) 中 进 行 控 温 孵 化, 孵 化 期 间 水 温 值 幅 15.0 ~ 17.1, 溶 氧 高 于 8 0 mg L -1, 试 验 在 黑 龙 江 水 产 研 究 所 渤 海 冷 水 性 鱼 试 验 站 进 行 1 3 1 3 1 胚 胎 发 育 观 察 活 体 观 察 活 体 观 察 时 用 Motic BA 300 显 微 表 1 人 工 饲 料 的 主 要 营 养 成 分 Table 1 Main nutrition components of artificial diet 粗 蛋 白 粗 脂 肪 碳 水 化 合 物 粗 灰 分 粗 纤 维 53 14 14 10 1 2531 镜 配 合 Motic SML 168 解 剖 镜 进 行 观 察, 记 录 各 发 育 时 期 的 形 体 特 征 并 用 Motic Imales Plus 3.0ML 成 像 系 统 进 行 拍 照 具 体 观 察 及 采 样 时 刻 为 : 受 精 后 12 h 之 内 每 15 min 采 样 一 次,12 ~ 24 h 每 30 min 采 样 一 次,24 ~ 132 h 每 1 h 采 样 一 次,132 h 以 上 4 h 采 样 一 次, 直 至 破 膜, 每 次 观 察 10 ~ 15 粒 胚 胎 的 发 育 情 况 及 特 点, 当 样 本 中 有 70% 以 上 个 体 呈 现 出 新 的 发 育 特 征 作 为 新 时 期 划 分 的 依 据, 胚 胎 发 育 分 期 参 照 谢 仰 杰 等 (1996) 方 法 进 行 划 分, 积 温 采 用 TU ( h) 表 示,TU = T N, 式 中,T 为 该 发 育 期 的 平 均 温 度,N 为 各 发 育 时 期 所 需 时 间, 图 版 借 助 Adobe Photoshop CS2 软 件 制 作 1 3 2 取 样 固 定 观 察 每 次 采 集 30 粒 受 精 卵 用 Bouin 液 固 定 后 备 用, 观 察 前 用 解 剖 针 剥 去 卵 膜, 采 样 时 刻 及 观 察 方 法 同 1.3.1 活 体 观 察 2 结 果 与 分 析 2 1 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 各 阶 段 经 历 的 时 间 及 所 需 积 温 水 温 15 ~ 17.1 条 件 下, 洛 氏 鱥 受 精 卵 历 经 约 170 h 孵 化 破 膜, 孵 化 率 达 60% ~ 70%, 整 个 胚 胎 发 育 所 需 积 温 为 2612.8 h, 约 合 108.87 d 整 个 胚 胎 发 育 过 程 可 分 为 6 个 阶 段,29 个 时 期 ( 表 2) 受 精 卵 阶 段 历 经 1.0 h, 所 需 积 温 为 17.0 h, 卵 裂 阶 段 历 经 8.0 h, 所 需 积 温 为 119.0 h, 囊 胚 阶 段 历 经 9.0 h, 所 需 积 温 为 145.0 h, 原 肠 胚 阶 段 历 经 8.0 h, 所 需 积 温 为 132.0 h, 神 经 胚 阶 段 历 经 10.0 h, 所 需 积 温 为 164.0 h, 器 官 形 成 至 破 膜 阶 段 历 经 135.0 h, 所 需 积 温 为 2035.8 h 2 2 洛 氏 鱥 各 发 育 时 期 的 形 态 特 征 2 2 1 受 精 卵 阶 段 洛 氏 鱥 成 熟 卵 为 圆 球 形, 直 径 约 1.65 mm, 米 黄 色, 略 透 明, 卵 沉 粘 性, 卵 膜 适 中, 略 有 弹 性 受 精 卵 吸 水 后 极 度 膨 胀, 弹 性 增 大 明 显, 类 似 橡 皮 球, 卵 黄 与 卵 膜 之 间 形 成 围 卵 黄 周 隙 ( 图 1 1) 经 过 1.0 h 的 发 育, 当 积 温 达 到 17.0 h, 卵 内 原 生 质 向 动 物 极 移 动 并 聚 集, 逐 渐 在 卵 黄 表 面 形 成 隆 起 胚 盘, 胚 盘 帽 状 ( 图 1 2) 2 2 2 卵 裂 阶 段 受 精 后 2. 0 h, 积 温 达 到 34 0 h 受 精 卵 开 始 第 1 次 卵 裂, 隆 起 的 胚 盘 向 两 边 拉 长, 继 而 被 由 盘 顶 中 央 产 生 并 逐 渐 加 深 形 成 的 分 裂 沟 分 为 2 个 基 本 相 等 的 分 裂 球, 进 入 2 细 胞 期 ( 图 1 3); 受 精 后 3.0 h, 当 积 温 达 到 51.0 h, 受 精 卵 进 行 第 2 次 卵 裂, 分 裂 沟 方 向 与 第 一 次 卵 裂 垂 直, 形 成
2532 生 态 学 杂 志 第 34 卷 第 9 期 表 2 洛 氏 鱥 胚 体 发 育 时 序 Table 2 Duration of embryogenesis in Phoxinus lagowskii Dybowskii 阶 段 序 号 发 育 时 期 起 始 时 刻 (h) 平 均 水 温 ( ) 发 育 积 温 ( h) 受 精 卵 阶 段 1 受 精 卵 0 17.0 1 1 2 胚 盘 隆 起 1.0 17.0 17.0 1 2 卵 裂 阶 段 3 2 细 胞 2.0 17.0 34.0 1 3 4 4 细 胞 3.0 17.0 51.0 1 4 5 8 细 胞 5.0 17.0 85.0 1 5 6 16 细 胞 6.0 17.0 102.0 1 6 7 多 细 胞 8.0 17.0 136.0 1 7 囊 胚 阶 段 8 囊 胚 早 期 9.0 17.0 153.0 1 8 9 囊 胚 中 期 15.5 16.0 257.0 1 9 10 囊 胚 后 期 17.0 16.0 281.0 1 10 原 肠 胚 阶 段 11 原 肠 早 期 21.0 16.0 345.0 1 11 12 原 肠 中 期 23.5 17.0 387.5.0 1 12 13 原 肠 后 期 25.0 17.0 413.0 1 13 神 经 胚 阶 段 14 神 经 胚 期 29.0 17.0 481.0 1 14 15 胚 孔 关 闭 期 35.0 16.0 577.0 1 15 器 官 形 成 至 破 膜 阶 段 16 眼 原 基 出 现 期 37.0 16.0 609.0 1 16 17 肌 节 出 现 期 43.0 16.0 705.0 1 17 18 胸 鳍 原 基 出 现 期 47.0 16.0 769.0 1 18 19 眼 囊 形 成 期 57.0 16.0 929.0 1 19 20 脑 分 化 期 64.0 15.0 1034.0 1 20 21 尾 芽 形 成 期 79.0 16.0 1274.0 1 21 22 眼 晶 体 出 现 期 91.0 16.0 1466.0 1 22 23 听 囊 形 成 期 98.0 16.0 1578.0 1 23 24 背 鳍 原 基 出 现 期 112.0 16.0 1802.0 1 24 25 尾 鳍 形 成 期 119.0 16.0 1914.0 1 25 26 臀 鳍 形 成 期 134.0 17.0 1999.0 1 26 27 眼 点 出 现 期 142.0 17.0 2135.0 1 27 28 循 环 期 160.0 17.1 2442.8 1 28 29 破 膜 期 170.0 17.0 2612.8 2 A 图 版 4 个 大 小 近 似 相 等 的 细 胞, 细 胞 排 列 紧 密, 进 入 4 细 胞 期 ( 图 1 4); 再 经 过 2.0 h 的 发 育, 即 受 精 后 5.0 h, 细 胞 开 始 第 3 次 卵 裂, 每 个 细 胞 一 分 为 二, 形 成 8 个 细 胞, 进 入 8 细 胞 期, 此 时 发 育 温 达 到 85.0 h ( 图 1 5); 第 4 次 卵 裂 出 现 在 受 精 后 6.0 h, 此 时 积 温 达 到 102.0 h, 每 个 细 胞 分 裂 为 2 个 细 胞, 细 胞 开 始 出 现 重 叠, 进 入 16 细 胞 期 ( 图 1 6); 受 精 后 8.0 h, 当 积 温 达 到 136.0 h, 随 着 细 胞 的 不 断 分 裂, 细 胞 越 来 越 小, 形 成 多 细 胞 的 胚 体, 细 胞 层 叠 明 显, 进 入 多 细 胞 期 ( 图 1 7) 2 2 3 囊 胚 阶 段 随 着 分 裂 次 数 的 增 加, 细 胞 越 来 越 小, 分 裂 层 越 来 越 高, 胚 盘 逐 渐 隆 起, 在 受 精 后 9.0 h, 积 温 达 到 153.0 h, 胚 盘 隆 起 到 最 高, 高 度 接 近 卵 径 的 1 / 3, 形 成 了 高 囊 胚, 进 入 囊 胚 早 期 ( 图 1 8) 经 6.5 h 后, 积 温 达 到 257.0 h, 囊 胚 由 于 向 四 周 扩 张 而 变 扁 变 低, 高 度 约 占 卵 径 的 1 / 4, 囊 胚 边 缘 细 胞 增 多, 已 分 不 出 细 胞 界 线, 进 入 囊 胚 中 期 ( 图 1 9) 受 精 后 17.0 h, 积 温 达 到 281.0 h, 囊 胚 继 续 扩 张, 边 缘 细 胞 开 始 沿 卵 黄 表 面 向 植 物 极 方 向 下 包, 胚 盘 隆 起 降 到 最 低, 胚 体 出 现 薄 厚 两 面, 进 入 囊 胚 后 期 ( 图 1 10) 2 2 4 原 肠 胚 阶 段 受 精 后 21.0 h, 积 温 达 到 345 h, 胚 体 进 入 原 肠 早 期, 此 时 囊 胚 层 细 胞 下 包 到 卵 黄 的 1 / 3 位 置 处, 侧 面 观 可 见 一 新 月 形 的 盾 状 增 厚, 即 为 胚 盾 ( 图 1 11) 受 精 后 23.5 h, 积 温 达 到 387.5 h, 胚 层 细 胞 继 续 下 包 到 卵 黄 1 / 2 位 置 处, 胚 环 位 于 赤 道 附 近, 进 入 原 肠 中 期 ( 图 1 12) 1.5 h 后, 即 受 精 后 25.0 h, 积 温 达 到 413.0 h, 胚 层 细 胞 下 包 到 卵 黄 4 / 5 位 置 处, 植 物 极 方 向 仅 漏 出 小 部 分 卵 黄, 胚 孔 出 现, 进 入 原 肠 晚 期 ( 图 1 13)
２５３３ 郭文学等 黑龙江流域绥芬河水系野生洛氏鱥胚胎发育 图 １ 洛氏鱥胚胎发育图谱 Ｆｉｇ １ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏ ｉｎ Ｐｈｏｘｉｎｕｓ ｌａｇｏｗｓｋｉｉ Ｄｙｂｏｗｓｋｉｉ １ 受精卵 ２ 胚盘隆起 ３ ２ 细胞 ４ ４ 细胞 ５ ８ 细胞 ６ １６ 细胞 ７ 多细胞 ８ 囊胚早期 ９ 囊胚中期 １０ 囊胚后期 １１ 原肠早 期 １２ 原肠中期 １３ 原肠后期 １４ 神经胚期 １５ 胚孔关闭期 １６ 眼原基出现期 １７ 肌节出现期 １８ 胸鳍原基出现期 １９ 眼囊形 成期 ２０ 脑分化期 ２１ 尾芽形成期 ２２ 眼晶体出现期 ２３ 听囊形成期 ２４ 背鳍原基出现期 ２５ 尾鳍形成期 ２６ 臀鳍形成期 ２７ 眼点出现期 ２８ 循环期 ２ ２ ５ 神 经 胚 阶 段 受 精 后 ２９ ０ ｈ 积 温 达 到 展和隆起 匍匐在卵黄上 围绕卵黄约 １ ２ 大小 脊 越来越小 卵黄受到细胞包裹的压力变得外凸 如栓 糊 进入胚孔关闭期 图 １ １５ ４８１ ０ ｈ 胚层下包至卵黄 ５ ６ 位置 胚孔变得 索呈柱状 神经板头端隆起 胚孔逐渐封闭 变得模 子一样拴在口上 称为卵黄栓 胚体转为侧卧 神经 ２ ２ ６ 器官形成至破膜阶段 受精后 ３７ ０ ｈ 积温 受精后 ３５ ０ ｈ 积温达到 ５７７ ０ ｈ 胚体极为伸 雏形越来越明显 头部前端两侧出现一对点状突起 板形成 进入神经胚期 图 １ １４ 经 ６ ０ ｈ 发育 即 达到 ６０９ ０ ｈ 胚体前端逐渐膨大和隆起 头部
2534 生 态 学 杂 志 第 34 卷 第 9 期 图 2 洛 氏 鱥 仔 鱼 发 育 图 谱 Fig.2 Development of hatching larvae in Phoxinus lagowskii Dybowskii A. 初 孵 仔 鱼 ; B. 1 日 龄 仔 鱼 ; C. 2 日 龄 仔 鱼 ; D. 3 日 龄 仔 鱼 即 为 眼 原 基, 进 入 眼 原 基 出 现 期 ( 图 1 16) 受 精 后 43.0 h, 积 温 达 到 705.0 h, 脊 索 两 侧 出 现 体 节, 肌 节 明 显 发 育, 进 入 肌 节 出 现 期 ( 图 1 17) 受 精 后 47.0 h, 积 温 达 到 769.0 h, 眼 囊 雏 形 明 显, 头 部 后 方 两 侧 出 现 2 个 点 状 突 起, 为 胸 鳍 原 基, 进 入 胸 鳍 原 基 出 现 期 ( 图 1 18) 再 经 过 10.0 h 的 发 育, 积 温 达 到 929.0 h, 眼 囊 基 本 形 成, 胚 体 极 为 伸 展, 几 乎 包 围 整 个 卵 黄, 为 眼 囊 形 成 期 ( 图 1 19) 受 精 后 57.0 h, 积 温 达 到 1034.0 h, 脑 部 开 始 分 化, 分 为 明 显 的 前 脑 中 脑 后 脑, 进 入 脑 分 化 期 ( 图 1 20) 受 精 后 79.0 h, 积 温 达 到 1274.0 h, 胚 体 发 生 扭 曲, 盘 旋 在 卵 黄 上, 尾 芽 形 成 并 与 卵 黄 分 离, 进 入 尾 芽 形 成 期 ( 图 1 21) 经 12.0 h 的 发 育, 当 积 温 达 到 1466.0 h, 眼 囊 进 一 步 发 育, 眼 晶 体 形 成, 臀 鳍 及 腹 鳍 原 基 开 始 出 现, 进 入 眼 晶 体 形 成 期 ( 图 1 22) 受 精 后 98.0 h, 积 温 达 到 1578.0 h, 头 部 发 育 更 加 成 熟, 胸 鳍 亦 更 加 明 显, 头 部 后 方 出 现 一 对 听 囊, 进 入 听 囊 形 成 期 ( 图 1 23) 受 精 后 112.0 h, 积 温 达 到 1802.0 h, 胚 体 进 一 步 发 育, 背 鳍 原 基 发 育 明 显, 进 入 背 鳍 原 基 出 现 期 ( 图 1 24) 受 精 后 119.0 h, 积 温 达 到 1914.0 h, 头 部 极 为 伸 展, 眼 睛 开 始 外 凸, 头 尾 逐 渐 与 卵 黄 脱 离, 尾 鳍 形 成, 鳍 褶 变 宽, 进 入 尾 鳍 形 成 期 ( 图 1 25) 受 精 后 134.0 h, 积 温 达 到 1999.0 h, 侧 线 清 晰 可 见, 臀 鳍 发 育 明 显, 为 臀 鳍 形 成 期 ( 图 1 26) 受 精 后 142.0 h, 积 温 达 到 2135.0 h, 眼 色 素 沉 积 明 显, 胸 鳍 进 一 步 发 育, 卵 黄 仅 位 于 鱼 体 胸 腹 部, 与 臀 部 及 尾 部 开 始 分 离, 心 脏 开 始 形 成, 跳 动 微 弱, 频 率 低, 血 管 仅 出 现 在 胸 腹 部 及 背 部 ( 图 1 27) 受 精 后 160.0 h, 积 温 达 到 2442.8 h, 眼 色 素 加 速 沉 积, 眼 囊 逐 渐 变 黑, 心 脏 搏 动 有 力, 血 管 遍 布 全 身, 血 流 清 晰, 胚 胎 与 卵 膜 分 离 开 来, 整 个 鱼 体 不 时 扭 动 一 次, 进 入 循 环 期 ( 图 1 28) 受 精 后 170 h, 积 温 达 到 2612.8 h, 消 化 管 开 始 形 成, 鳃 盖 原 基 开 始 出 现, 鳃 丝 明 显, 卵 膜 变 得 薄 而 透 明, 胚 体 开 始 剧 烈 扭 动, 不 久 即 破 膜 而 出 ( 图 2 A) 2 3 仔 鱼 发 育 初 孵 仔 鱼 卵 黄 囊 为 长 椭 圆 形, 消 化 管 长 管 状, 肛 门 尚 未 开 通, 鱼 体 透 明, 无 色 素, 常 静 止 在 池 壁, 可 作 短 距 离 游 动 1 日 龄 仔 鱼 色 素 开 始 沉 积, 头 部 沉 积 明 显, 鳃 盖 基 本 形 成, 吻 部 发 育 明 显, 口 裂 开 始 形 成, 头 部 及 体 侧 均 出 现 较 小 黑 斑, 背 鳍 胸 鳍 及 臀 鳍 鳍 条 开 始 发 育, 肛 门 开 始 贯 通, 眼 睛 由 淡 褐 色 变 为 黝 黑 色 ( 图 2 B) 2 日 龄 仔 鱼 油 球 逐 渐 缩 小, 卵 黄 囊 吸 收 过 半, 色 素 进 一 步 沉 积, 黑 斑 增 大 增 多, 背 部 黑 斑 连 成 两 条 直 线, 胸 鳍 鳍 条 形 成, 仔 鱼 游 动 能 力 明 显 增 强, 对 外 源 食 物 触 碰 式 嗅 探 ( 图 2 C) 3 日 龄 仔 鱼 黑 斑 呈 块 状, 背 部 及 体 侧 各 出 现 一 对 条 状 黑 色 斑 块, 卵 黄 基 本 吸 收 完 全, 至 此 各 器 官 发 育 基 本 完 善 ( 图 2 D) 此 后 不 久 便 可 以 摄 食 单 胞 藻 草 履 虫 或 蛋 黄 3 讨 论 3 1 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 特 点 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 与 多 数 硬 骨 鱼 类 相 似, 整 个 发 育 过 程 都 可 以 分 成 6 个 大 的 阶 段, 但 又 有 其 自 己 的 特 殊 性 :(1) 洛 氏 鱥 成 熟 卵 为 圆 球 形, 直 径 约 1.65 mm, 米 黄 色, 略 透 明, 卵 沉 粘 性, 卵 膜 适 中, 略 有 弹 性 受 精 卵 吸 水 后 极 度 膨 胀, 弹 性 增 大 明 显, 类 似 橡 皮 球, 这 与 翘 嘴 红 鲌 ( Erythroculter ilishaeformis) ( 顾 志 敏 等,2008) 等 卵 膜 较 薄 的 鱼 类 差 别 明 显 ( 2) 洛 氏 鱥 眼 原 基 等 其 他 器 官 发 生 均 出 现 在 胚 孔 关 闭
郭 文 学 等 : 黑 龙 江 流 域 绥 芬 河 水 系 野 生 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 2535 后, 这 与 胭 脂 鱼 ( Myxocyprinus asiaticus) ( 张 春 光 等, 2000) 倒 刺 鲃 ( Spinibarbus denticulatus denticulatus) ( 易 祖 盛 等,2004) 厚 颌 鲂 ( Megalobrama pellegrini) ( 王 剑 伟 等,2005) 等 多 数 鲤 科 鱼 类 相 似, 与 哲 罗 鲑 (Hucho taimen) ( 张 永 泉 等,2008) 细 鳞 鲑 ( Brachy mystax) ( 杜 佳 等, 2010) 白 点 鲑 ( Salvelinus leuco maenis)( 张 永 泉 等,2010) 等 冷 水 性 鱼 类 眼 原 基 出 现 在 胚 孔 关 闭 之 前 有 很 大 差 别 (3) 洛 氏 鱥 肌 节 出 现 在 眼 原 基 之 后, 这 与 鞍 带 石 斑 鱼 (Epinephelus lanceo latus)( 周 玲 等,2010) 相 似, 与 暗 纹 东 方 豚 ( Takifugu obscurus) ( 莫 根 永 等, 2009) 唐 鱼 ( Tanichtys albo nubes)( 刘 汉 生 等,2008) 光 唇 鱼 ( Acrossocheilus fas ciatus)( 张 玉 明 等,2010) 黑 尾 近 红 鲌 ( Anoherythro culter nigrocauda) ( 殷 海 成 等,2009) 等 肌 节 出 现 在 眼 原 基 发 生 之 前 不 同 (4) 洛 氏 鱥 听 囊 出 现 在 尾 芽 发 生 之 后, 这 与 翘 嘴 红 鲌 ( 顾 志 敏 等,2008) 唐 鱼 ( 刘 汉 生 等,2008) 光 唇 鱼 ( 张 玉 明 等,2010) 黑 尾 近 红 鲌 ( 殷 海 成 等,2009) 相 似, 与 鞍 带 石 斑 鱼 ( 周 玲 等,2010) 大 鳞 鲃 (Barbus capito) ( 徐 伟 等,2011) 等 鱼 类 听 囊 先 于 尾 芽 发 生 相 反 (5) 洛 氏 鱥 体 色 素 沉 积 出 现 在 破 膜 之 后, 这 与 哲 罗 鲑 ( 张 永 泉 等,2008) 细 鳞 鲑 ( 杜 佳 等,2010) 白 点 鲑 ( 张 永 泉 等,2010) 等 相 似, 与 河 川 沙 塘 鳢 (Odontobutis potamophila)( 谢 仰 杰 等,1996) 等 体 色 素 在 破 膜 前 已 开 始 沉 积 差 别 明 显 (6) 洛 氏 鱥 各 鳍 原 基 均 在 破 膜 之 前 开 始 发 育, 其 中 胸 鳍 原 基 最 早 出 现, 其 次 为 臀 鳍 背 鳍 原 基, 这 与 亚 东 鲑 (Salmo truttafario)( 豪 富 华 等,2006) 沙 塘 鳢 ( 谢 仰 杰 等,1996) 相 似 3 2 野 生 洛 氏 鱥 与 人 工 养 殖 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 差 异 牟 振 波 等 (2014) 对 人 工 养 殖 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 进 行 了 研 究 报 道, 对 比 本 研 究 发 现 野 生 洛 氏 鱥 与 人 工 养 殖 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 主 要 有 以 下 几 点 不 同 :(1) 人 工 养 殖 洛 氏 鱥 在 14.0±0.3 条 件 下, 当 积 温 达 到 2005.02 h 时 便 开 始 破 膜, 整 个 胚 胎 发 育 过 程 可 分 为 卵 裂 前 期 卵 裂 期 囊 胚 期 和 器 官 形 成 期 4 大 个 阶 段, 而 野 生 洛 氏 鱥 在 15. 0 ~ 17. 1 条 件 下, 需 2612.8 h 才 能 完 成 破 膜, 胚 胎 发 育 过 程 可 分 为 受 精 卵 阶 段 卵 裂 阶 段 囊 胚 阶 段 原 肠 胚 阶 段 神 经 胚 阶 段 和 器 官 形 成 至 破 膜 阶 段 6 大 阶 段 比 较 而 言 野 生 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 较 人 工 养 殖 洛 氏 鱥 长, 这 可 能 是 长 期 的 较 高 温 驯 养 环 境 造 成 的, 洛 氏 鱥 为 偏 冷 水 性 鱼 类 ( 董 崇 智 等,2001), 其 胚 胎 发 育 历 时 较 一 般 温 水 性 鱼 类 长, 而 人 工 驯 养 后 的 洛 氏 鱥 缩 短 胚 胎 发 育 时 间 可 能 是 对 长 期 较 高 温 度 驯 养 环 境 的 一 种 适 应 (2) 胚 胎 发 育 时 间 的 长 短 造 成 了 组 织 器 官 发 育 方 面 的 差 异, 野 生 洛 氏 鱥 破 膜 前 各 器 官 组 织 发 育 较 完 善, 破 膜 前 胸 鳍 尾 鳍 臀 鳍 发 育 基 本 形 成, 背 鳍 原 基 也 已 出 现, 听 囊 亦 发 生 在 破 膜 之 前, 而 人 工 养 殖 洛 氏 鱥 破 膜 前 仅 胸 鳍 尾 鳍 完 成 发 育, 未 见 臀 鳍 背 鳍 原 基, 听 囊 也 发 生 在 仔 鱼 阶 段 这 与 杜 佳 等 (2010) 对 细 鳞 鲑 的 研 究 相 似, 即 鱼 类 器 官 发 生 的 迟 早 或 程 度 与 胚 胎 期 的 长 短 有 关, 胚 胎 期 长 的 鱼 类, 出 膜 时 器 官 发 育 较 完 善, 胚 胎 期 短 的 鱼 类, 孵 出 时 器 官 发 育 较 幼 稚 3 3 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 重 要 环 节 本 研 究 结 果 结 合 近 2 年 洛 氏 鱥 人 工 繁 育 试 验, 总 结 出 洛 氏 鱥 胚 胎 发 育 应 注 意 以 下 关 键 几 点 :(1) 洛 氏 鱥 成 熟 卵 为 沉 粘 性 卵, 为 避 免 孵 化 过 程 中 缺 氧 或 霉 菌 的 发 生, 可 脱 粘 后 孵 化, 但 另 一 方 面 洛 氏 鱥 受 精 后 2 h 就 进 入 卵 裂 阶 段,9 h 即 完 成 细 胞 分 裂 进 入 囊 胚 期, 因 此 授 精 后 应 尽 量 减 少 剧 烈 震 动, 防 止 因 不 当 操 作 影 响 孵 化 效 果 综 合 考 虑 该 两 方 面 因 素, 建 议 将 受 精 卵 平 铺 在 网 目 适 中 的 孵 化 盘 中 进 行 孵 化, 孵 化 密 度 以 卵 无 大 块 重 叠 过 水 均 匀 为 宜 (2) 洛 氏 鱥 为 偏 冷 水 性 鱼 类, 其 胚 胎 发 育 历 时 较 其 他 鲤 科 鱼 类 长, 因 此, 为 避 免 因 水 质 污 染, 缺 氧 或 卵 霉 等 事 故 影 响 孵 化 效 果, 可 采 用 控 温 水 处 理 循 环 系 统 进 行 孵 化, 以 缩 短 孵 化 时 间, 提 高 孵 化 率 (3) 洛 氏 鱥 初 孵 仔 鱼 较 小, 仅 4 mm 左 右, 加 之 游 动 能 力 差, 极 大 多 数 鱼 苗 会 从 孵 化 盘 中 漏 出, 沉 入 底 部, 因 此 受 精 卵 孵 化 前 应 在 孵 化 盘 底 部 增 加 一 层 防 逃 网, 其 网 目 以 32 目 左 右 为 宜, 以 防 止 初 孵 仔 鱼 的 逃 逸, 造 成 损 失 (4) 洛 氏 鱥 仔 鱼 发 育 较 快,2 日 龄 仔 鱼 即 对 外 源 食 物 进 行 触 碰 式 嗅 探,3 日 龄 仔 鱼 卵 黄 囊 基 本 吸 收 完 全, 因 此 建 议 破 膜 后 第 3 天 开 始 投 喂 少 量 单 胞 藻 草 履 虫 或 蛋 黄, 以 提 供 外 源 性 营 养 源, 为 苗 种 驯 化 工 作 做 好 充 足 准 备 参 考 文 献 陈 宜 瑜. 1998. 中 国 动 物 志 硬 骨 鱼 纲 鲤 形 目 ( 中 卷 ). 北 京 : 科 学 出 版 社. 董 崇 智, 李 怀 明, 牟 振 波, 等. 2001. 中 国 淡 水 冷 水 性 鱼 类. 哈 尔 滨 : 黑 龙 江 科 学 技 术 出 版 社 : 85-87. 杜 佳, 徐 革 锋, 韩 英, 等. 2010. 尖 吻 细 鳞 鲑 胚 胎 及 仔 稚 幼 鱼 发 育 的 研 究. 大 连 海 洋 大 学 学 报, 25(5): 379-385. 顾 志 敏, 朱 俊 杰, 贾 永 义, 等. 2008. 太 湖 翘 嘴 红 鲌 胚 胎 发 育 及 胚 后 发 育 观 察. 中 国 水 产 科 学, 15(2): 204-212.
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