麦 类 作 物 学 报 2011,31(3):402 406 JournalofTriticeaeCrops 小 麦 抗 叶 锈 基 因 犔 狉 20 犔 狉 28 犔 狉 29 的 犛 犜 犛 犛 犆 犃 犚 标 记 在 近 等 基 因 系 上 的 特 异 性 验 证 刘 莉 1, 陈 云 芳 2, 杨 文 香 3, 闫 红 飞 3, 刘 大 群 3 (1. 河 北 省 植 保 植 检 站, 河 北 石 家 庄 050011;2. 苏 州 出 入 境 检 验 检 疫 局, 江 苏 苏 州 215126;3. 河 北 农 业 大 学 植 物 保 护 学 院 植 物 病 理 系, 河 北 省 农 作 物 病 虫 害 生 物 防 治 工 程 技 术 研 究 中 心, 河 北 保 定 071001) 摘 要 : 为 了 把 特 异 性 分 子 标 记 与 抗 病 性 鉴 定 有 效 地 结 合 起 来, 用 含 有 不 同 抗 叶 锈 基 因 的 54 个 以 Thatcher 为 遗 传 背 景 的 近 等 基 因 系 (Near isogeniclines,nils) 对 与 抗 叶 锈 基 因 Lr20 Lr28 和 Lr29(Lr29UBC 和 Lr29OPY) 连 锁 的 STS SCAR 标 记 进 行 特 异 性 验 证, 结 果 分 别 扩 增 出 片 段 大 小 依 次 为 540 378 1000 900 bp 的 条 带, 与 报 道 片 段 大 小 一 致 同 时 发 现 与 抗 病 基 因 Lr20 Lr29 连 锁 的 STS 分 子 标 记 及 与 Lr29 连 锁 的 两 个 SCAR 标 记 Lr29UBC Lr29OPY 在 NILs 中 特 异 性 较 好, 但 Lr28 的 PCR STSLr28 扩 增 产 物 不 仅 在 其 亲 本 中, 而 且 在 其 余 53 个 近 等 基 因 系 中 都 扩 增 出 与 报 道 大 小 相 同 的 378bp 的 条 带 验 证 结 果 表 明, 与 抗 病 基 因 Lr20 Lr29 连 锁 的 STS SCAR 分 子 标 记 在 NILs 中 特 异 性 较 好, 可 方 便 地 用 于 小 麦 抗 叶 锈 的 分 子 标 记 辅 助 选 择 育 种, 而 Lr28 的 STS 分 子 标 记 没 有 特 异 性, 不 能 用 于 分 子 标 记 辅 助 选 择 育 种 关 键 词 : 小 麦 ; 叶 锈 ; 近 等 基 因 系 ; 抗 叶 锈 病 基 因 ;STS 分 子 标 记 ;SCAR 分 子 标 记 中 图 分 类 号 :S512.1;S336 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :1009 1041(2011)03 0402 05 犞 犲 狉 犻 犳 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狅 犳 犛 犜 犛 犪 狀 犱 犛 犆 犃 犚 犕 狅 犾 犲 犮 狌 犾 犪 狉 犕 犪 狉 犽 犲 狉 狊 犳 狅 狉 犔 犲 犪 犳 犚 狌 狊 狋 犚 犲 狊 犻 狋 犪 狀 犮 犲 犌 犲 狀 犲 狊 犔 狉 20, 犔 狉 28 犪 狀 犱 犔 狉 29 犻 狀 犖 犲 犪 狉 犻 狊 狅 犵 犲 狀 犻 犮 犔 犻 狀 犲 狊 狅 犳 犠 犺 犲 犪 狋 犮 狏. 犜 犺 犪 狋 犮 犺 犲 狉 犔 犐 犝 犔 犻 1, 犆 犎 犈 犖 犢 狌 狀 犳 犪 狀 2 犵, 犢 犃 犖 犌 犠 犲 狀 狓 犻 犪 狀 3 犵, 犢 犃 犖 犎 狅 狀 犵 犳 犲 犻 3 3, 犔 犐 犝 犇 犪 狇 狌 狀 (1.HebeiStationofPlantsProteciontandPlantsQuarantine,Shijiazhuang,Hebei050011,China;2.SuzhouEntry exitinspectionand QuarantineBureau,Suzhou,Jiangsu215126,China;3.DepartmentofPlantPathology,ColegeofPlantProtection,HebeiAgricultural University/BiologicalControlCenterofPlantDiseasesandPestsofHebeiProvince,Baoding,Hebei071001,China) 犃 犫 狊 狋 狉 犪 犮 狋 :Sequencetagsite(STS)andSCAR markersforgeneslr20,lr28,lr29 (Lr29 OPYand Lr29 UBC)against 犘 狌 犮 犻 狀 犻 犪 狋 狉 犻 狋 犮 犻 狀 犪 wereusedtoscreenasetofnear isogeniclines(nils)ofwheat cv.thatcher,whichcontainingintotal54diferentlrgenesandtheiraleles.polymerasechainreac tion (PCR)analysisusingSTSandSCARprimersspecificfortheseleafrustresistancegenesindicated themarkerlociof540bp,378bp,900bpand1000bpcouldbeobtainedasthesameasreportedpre viously.theresultshowedthelociofmarkerssts Lr20 STS 638,SCAR Lr29 UBCandSCAR Lr29 OPY wereu niqueandspecific,andcouldbeusedformolecularmarker assistedselection.butthelocusofthests Lr28markerforLr28 wasdetectedinalthenear isogeniclinesusedinthisstudy,whichindicatedthat thelocusofmarkersts Lr28wasnotspecific,andcouldnotbeusedformolecularmarker assistedse lection. 犓 犲 狔 狑 狅 狉 犱 狊 :Wheat;Leafrust;Near isogeniclines;resistancegenes;sts molecular marker;scar molecularmarker 收 稿 日 期 :2010 12 20 修 回 日 期 :2011 02 20 基 金 项 目 : 国 家 公 益 性 行 业 ( 农 业 ) 科 研 专 项 (200903035); 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (30771391) 作 者 简 介 : 刘 莉 (1980-), 女, 硕 士 研 究 生, 主 要 从 事 农 作 物 病 虫 害 发 生 与 防 治 研 究 E mail:liulihbnd@163.com 通 讯 作 者 : 刘 大 群 (1958-), 男, 教 授, 博 士 生 导 师, 主 要 从 事 作 物 病 虫 害 生 物 防 治 研 究 E mail:ldq@mail.hebau.edu.cn
第 3 期 刘 莉 等 : 小 麦 抗 叶 锈 基 因 Lr20 Lr28 Lr29 的 STS SCAR 标 记 在 近 等 基 因 系 上 的 特 异 性 验 证 403 由 小 麦 隐 匿 柄 锈 菌 ( 犘 狌 犮 犻 狀 犻 犪 狋 狉 犻 狋 犮 犻 狀 犪 狀 ) 引 起 的 小 麦 叶 锈 病 是 影 响 世 界 小 麦 稳 产 高 产 的 重 要 [1] 病 害 之 一 国 内 外 的 研 究 和 实 践 证 明, 选 育 并 合 理 利 用 抗 锈 品 种 是 防 治 小 麦 叶 锈 病 的 最 经 济 安 全 有 效 的 方 法 但 由 于 小 麦 叶 锈 菌 的 高 度 变 异 性, 特 别 是 大 面 积 种 植 单 一 抗 性 品 种, 加 速 了 对 病 原 菌 的 定 向 选 择, 促 进 优 势 生 理 小 种 的 形 成, 最 终 导 致 抗 锈 品 种 丧 失 抗 性 因 此, 深 入 研 究 小 麦 抗 叶 锈 性 遗 传 及 进 行 抗 叶 锈 基 因 育 种, 进 而 对 抗 病 品 种 进 行 基 因 累 加 和 合 理 布 局, 具 有 十 分 重 要 的 意 义 目 前 已 发 现 90 多 个 抗 叶 锈 病 基 因, 有 66 个 基 因 已 被 正 式 命 名, 统 一 编 号 到 Lr66 [2] 分 子 标 记 辅 助 选 择 (Molecularmarker asist edselection,mas) 是 利 用 与 抗 病 基 因 紧 密 连 锁 的 分 子 标 记 追 踪 抗 病 基 因, 具 有 鉴 定 简 便 准 确 能 对 每 代 植 株 开 展 早 期 和 大 范 围 选 择 的 优 越 性 [3] 刘 志 勇 等 已 利 用 PCR 方 法 对 抗 叶 锈 基 因 Lr9 和 Lr24 进 行 了 分 子 标 记 的 诊 断, 证 明 了 PCR 标 记 在 小 麦 抗 病 基 因 的 标 记 辅 助 选 择 和 基 因 累 加 中 有 很 [4] 好 的 潜 力 本 人 前 期 研 究 验 证 了 Lr24 STS J9 310bp Lr35 Sr39 900bp 两 个 分 子 标 记 在 54 个 近 等 基 因 系 中 [5] 的 稳 定 性 及 特 异 性 魏 新 燕 等 分 别 用 试 验 表 明 了 Lr24 STS J9 310bp Lr35 Sr39 900bp 分 子 标 记 在 不 同 的 遗 传 背 景 下 仍 能 作 为 稳 定 可 靠 的 辅 助 标 记 但 关 于 小 麦 叶 锈 病 Lr20 Lr28 Lr29 分 子 标 记 验 证 的 研 究 目 前 少 见 报 道 本 实 验 检 测 和 验 证 了 分 别 与 抗 病 基 因 Lr20 Lr28 和 Lr29 连 锁 的 STS 及 SCAR 标 记 在 以 Thatcher 为 背 景 的 近 等 基 因 系 (NILs) 中 的 稳 定 性 和 特 异 性, 进 一 步 确 定 这 几 个 分 子 标 记 可 用 于 辅 助 选 择 的 准 确 性, 以 期 把 这 些 特 异 分 子 标 记 能 与 抗 病 基 因 鉴 定 有 效 地 结 合 起 来, 加 速 抗 病 基 因 的 鉴 定 与 抗 病 育 种 的 进 程 1 材 料 与 方 法 1.1 试 验 材 料 供 试 材 料 为 53 个 以 春 小 麦 Thatcher 为 遗 传 背 景 的 近 等 基 因 系 及 品 种 Thatcher, 种 子 均 由 河 北 农 业 大 学 植 物 免 疫 研 究 室 提 供, 具 体 见 表 1 表 1 本 研 究 中 应 用 的 犜 犺 犪 狋 犮 犺 犲 狉 犖 犐 犔 狊 犜 犪 犫 犾 犲 1 犜 犺 犪 狋 犮 犺 犲 狉 狀 犲 犪 狉 犻 狊 狅 犵 犲 狀 犻 犮 犾 犻 狀 犲 狊 狌 狊 犲 犱 犻 狀 狋 犺 犲 狆 狉 犲 狊 犲 狀 狋 狊 狋 狌 犱 狔 序 号 No. 名 称 Name 序 号 No. 名 称 Name 序 号 No. 名 称 Name 1 TcLr1 19 TcLr16 37 TcLr33 2 TcLr2a 20 TcLr17 38 TcLr34 3 TcLr2b 21 TcLr18 39 TcLr33+34 4 TcLr2c 22 TcLr19 40 TcLr35 5 TcLr3 23 TcLr20 41 TcLr36 6 TcLr3a 24 TcLr21 42 TcLr37 7 TcLr3bg 25 TcLr22a 43 TcLr38 8 TcLr3ka 26 TcLr22b 44 TcLr39 9 TcLr9 27 TcLr23 45 TcLr40 10 TcLr10 28 TcLr24 46 TcLr41 11 TcLr11 29 TcLr25 47 TcLr42 12 TcLr12 30 TcLr26 48 TcLr43 13 TcLrB 31 TcLr28 49 TcLr44 14 TcLr13 32 TcLr29 50 TcLr45 15 TcLr14a 33 TcLr30 51 TcLrT3 16 TcLr14b 34 TcLr27+31 ( 有 芒 ) 52 TcLr47 17 TcLr14ab 35 TcLr27+31 ( 无 芒 ) 53 TcLr50 18 TcLr15 36 TcLr32 54 Thatcher 1.2 犇 犖 犃 提 取 参 照 刘 莉 [4] 所 用 方 法 进 行 DNA 提 取 及 PCR 扩 增 扩 增 产 物 电 泳 1.3 引 物 序 列 根 据 报 道, 由 上 海 生 工 生 物 工 程 技 术 服 务 有 限 公 司 合 成 与 Lr20 Lr28 Lr29 连 锁 的 STS
404 麦 类 作 物 学 报 第 31 卷 SCAR 标 记 的 引 物 序 列, 见 表 2 1.4 犘 犆 犚 扩 增 PCR 扩 增 所 用 仪 器 试 剂 反 应 体 系 及 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 所 用 仪 器 试 剂 等 参 照 文 献 [4] 表 2 犛 犜 犛 或 犛 犆 犃 犚 的 引 物 序 列 犜 犪 犫 犾 犲 2 犘 狉 犻 犿 犲 狉 狊 犲 狇 狌 犲 狀 犮 犲 狊 狅 犳 犛 犜 犛 狅 狉 犛 犆 犃 犚 犿 犪 狉 犽 犲 狉 狊 犳 狅 狉 犾 犲 犪 犳 狉 狌 狊 狋 狉 犲 狊 犻 狊 狋 犪 狀 犮 犲 犵 犲 狀 犲 狊 基 因 Gene 引 物 代 号 Markerset. 引 物 序 列 (5 3 ) Sequenceofprimer(5 3 ) 参 考 文 献 Reference Lr20 STS638 L ACA GCG ATG AAGCAA TGA AA [6] STS638 R GTCCAG TTG GTT GAT GGA AT Lr28 Lr28 01 CCCGGCATA AGTCTA TGG TT [7] Lr28 02 CAA TGA ATG AGA TACGTG AA Lr29 UBC219/1 GTG ACCTCA GGCAATGCACACAGT [8] UBC219/2 GTG ACCTCA GAACCG ATG TCCATC Lr29 OPY10/1 GTG ACCTCA GGCAATGCA [9] OPY10/2 GTG ACCTCA GAACCG ATG 表 3 不 同 引 物 组 合 的 犘 犆 犚 反 应 程 序 犜 犪 犫 犾 犲 3 犘 犆 犚 犪 犿 狆 犾 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狆 狉 狅 犵 狉 犪 犿 狊 犳 狅 狉 犱 犻 犳 犲 狉 犲 狀 狋 狆 狉 犻 犿 犲 狉 犮 狅 犿 犫 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀 狊 狌 狊 犲 犱 基 因 Gene Lr20 Lr28 Lr29UBC Lr29OPY 反 应 程 序 Cyclecondition 94-3min;40cycles(94-1min;65-1min;72-2min);72-10min;4,pause. 94-6min;35cycles(94-1min;50-1min;72-2min);72-5min;4,pause. 94-3min;34cycles(94-1min;59-1min;72-2min);72-5min;4,pause. 94-3min;34cycles(94-1min;65-1min;72-2min);72-5min;4,pause. 2 结 果 与 分 析 2.1 犔 狉 20 的 犘 犆 犚 犛 犜 犛 结 果 用 与 春 小 麦 Thatcher 为 背 景 的 53 个 近 等 基 因 系 材 料 对 Lr20 的 STS Lr20 STS638 标 记 进 行 检 测, 扩 增 产 物 用 1.5% 琼 脂 糖 凝 胶 进 行 电 泳, 结 果 ( 图 1) 表 明, 与 Lr20 连 锁 的 STS Lr20 STS638 标 记 成 功 地 从 近 等 基 因 系 中 扩 增 出 与 报 道 大 小 相 同 的 540bp 的 DNA 片 段, 且 该 片 段 仅 在 含 有 Lr20 植 株 中 得 到 表 达, 重 复 结 果 相 同, 证 明 与 Lr20 紧 密 连 锁 的 STS Lr20 STS638 标 记 的 稳 定 可 靠, 且 特 异 性 较 好, 可 作 为 分 子 辅 助 选 择 标 记 用 于 分 子 育 种 M 为 DL2000marker, 泳 道 1~54 代 表 的 材 料 与 表 1 相 同, 箭 头 所 指 为 540bp 图 2~ 图 4 同 LaneMisDL2000marker,Lane1to54isThatchernear isogeniclinesasshowedintable1,thespecificbandwasindicatedbyar row.thesameareasinfigure2 4. 图 1 犔 狉 20 的 犘 犆 犚 犛 犜 犛 扩 增 结 果 犉 犻 犵.1 犃 犿 狆 犾 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊 狅 犳 犿 犪 狉 犽 犲 狉 犛 犜 犛 狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 狋 狅 犔 狉 20 犵 犲 狀 犲 2.2 犔 狉 28 的 犘 犆 犚 犛 犜 犛 扩 增 结 果 将 与 Lr28 连 锁 的 STSLr28 引 物 对 Thatcher 和 以 Thatcher 为 遗 传 背 景 的 小 麦 抗 叶 锈 病 近 等 基 因 系 植 株 DNA 进 行 PCR 扩 增, 扩 增 产 物 用 1.5% 琼 脂 糖 凝 胶 进 行 电 泳 ( 图 2) 从 图 2 中 可 以 看 出, 除 了 TcLr28 植 株 中 扩 增 出 片 段 大 小 为
第 3 期 刘 莉 等 : 小 麦 抗 叶 锈 基 因 Lr20 Lr28 Lr29 的 STS SCAR 标 记 在 近 等 基 因 系 上 的 特 异 性 验 证 405 378bp 的 条 带 外, 其 他 泳 道 所 对 应 的 植 株 中 也 均 扩 增 出 了 片 段 大 小 为 378bp 的 条 带, 说 明 引 物 STSLr28 除 在 其 亲 本 中 能 得 到 表 达 外, 在 其 他 53 个 不 含 有 Lr28 植 株 DNA 中 也 都 得 到 表 达, 如 果 用 此 引 物 进 行 Lr28 基 因 筛 选, 结 果 不 能 说 明 被 检 测 植 株 确 切 含 有 Lr28 抗 叶 锈 基 因 箭 头 所 指 为 378bp Thearrowindicates378bp. 图 2 犔 狉 28 的 犘 犆 犚 犛 犜 犛 扩 增 结 果 犉 犻 犵.2 犃 犿 狆 犾 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊 狅 犳 犿 犪 狉 犽 犲 狉 犛 犜 犛 狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 狋 狅 犔 狉 28 犵 犲 狀 犲 2.3 犔 狉 29 的 犘 犆 犚 犛 犆 犃 犚 犔 狉 29 犝 犅 犆 结 果 用 与 Lr29 连 锁 的 SCAR Lr29 UBC 引 物 对 Thatcher 和 以 Thatcher 为 遗 传 背 景 的 小 麦 抗 叶 锈 病 近 等 基 因 系 植 株 DNA 进 行 PCR 扩 增, 结 果 如 图 3 所 示, 在 54 个 基 因 组 DNA 中, 只 有 位 于 32 泳 道 的 TcLr29 植 株 中 扩 增 出 了 一 条 1000bp 的 片 段, 片 段 大 小 同 报 道 相 同, 说 明 SCAR Lr29 UBC 标 记 具 有 单 一 连 锁 特 异 性, 可 作 为 分 子 辅 助 选 择 标 记 用 于 目 的 基 因 的 选 择 箭 头 所 指 为 1000bp Thearrowindicates1000bp. 图 3 犔 狉 29 的 犘 犆 犚 犛 犆 犃 犚 犔 狉 29 犝 犅 犆 扩 增 结 果 犉 犻 犵.3 犃 犿 狆 犾 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊 狅 犳 犿 犪 狉 犽 犲 狉 犛 犆 犃 犚 犔 狉 29 犝 犅 犆 狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 狋 狅 犔 狉 29 犵 犲 狀 犲 箭 头 所 指 为 900bp Thearrowindicates900bp. 图 4 犔 狉 29 的 犘 犆 犚 犛 犜 犛 犔 狉 29 犗 犘 犢 扩 增 结 果 犉 犻 犵.4 犃 犿 狆 犾 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊 狅 犳 犿 犪 狉 犽 犲 狉 犘 犆 犚 犛 犜 犛 犔 狉 29 犗 犘 犢 狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 狋 狅 犔 狉 29 犵 犲 狀 犲 2.4 犔 狉 29 的 犘 犆 犚 犛 犆 犃 犚 犔 狉 29 犗 犘 犢 扩 增 结 果 用 与 Lr29 连 锁 的 的 SCAR Lr29 OPY 引 物 对 Thatcher 和 以 Thatcher 为 遗 传 背 景 的 小 麦 抗 叶 锈 病 近 等 基 因 系 的 模 板 DNA 进 行 PCR 扩 增, 扩 增 结 果 如 图 4 所 示 只 在 TcLr29(32 泳 道 ) 中 扩 增 出 同 报 道 片 段 相 同 大 小 的 900bp 的 条 带, 虽 然 用 SCAR Lr29 OPY 引 物 在 100~500bp 之 间 扩 增 出 了 许 多 非 特 异 性 的 小 片 段, 但 扩 增 出 的 900bp 的 片 段 在 NILs 间 特 异 却 很 好, 表 明 SCAR Lr29 OPY 引 物 对 小 麦 抗 叶 锈 基 因 Lr29 具 有 特 异 性, 可 作 为 分 子 辅 助 选 择 标 记 3 讨 论 传 统 小 麦 基 因 鉴 定 方 法 如 系 谱 推 导 单 体 分
406 麦 类 作 物 学 报 第 31 卷 析 染 色 体 定 位 抗 谱 分 析 寄 主 与 病 原 互 作 产 生 的 侵 染 型 分 析 等 方 法, 技 术 要 求 较 高, 影 响 因 素 多, 实 际 操 作 存 在 较 多 的 局 限 性, 尤 其 在 亲 本 遗 传 背 景 不 清 楚 或 鉴 定 和 筛 选 含 两 个 以 上 基 因 的 材 料 时 尤 为 复 杂 利 用 与 特 定 基 因 紧 密 连 锁 的 分 子 标 记 追 踪 基 因, 可 使 目 的 基 因 的 鉴 定 摆 脱 上 述 困 难 且 结 果 更 加 准 确 可 靠 分 子 标 记 辅 助 育 种 可 在 种 子 或 幼 苗 期 鉴 定, 利 用 与 目 的 基 因 紧 密 连 锁 的 分 子 标 记 进 行 辅 助 选 择, 可 大 大 提 高 选 择 效 率, 缩 短 世 代 间 隔 及 育 种 年 限 通 过 优 化 试 验 条 件, 建 立 了 一 套 稳 定 性 较 好 重 复 性 较 高 灵 敏 度 较 强 操 作 简 单, 适 合 于 小 麦 基 因 组 STS 标 记 的 反 应 体 系 及 程 序, 并 且 对 这 些 标 记 进 行 了 特 异 性 验 证 验 证 结 果 表 明, 与 小 麦 抗 叶 锈 基 因 Lr20 连 锁 的 STS 标 记 及 与 Lr29 连 锁 的 两 个 SCAR 标 记 特 异 性 都 较 好 且 稳 定 可 靠, Lr20 540bp Lr29 1000bp 和 Lr29 900bp 分 子 标 记 可 以 用 于 小 麦 抗 叶 锈 基 因 Lr20 和 Lr29 的 分 子 标 记 辅 助 选 择 育 种 Lr28 的 STS Lr28 分 子 标 记 的 扩 增 产 物 除 在 其 亲 本 出 现 外, 在 其 他 的 53 个 近 等 基 因 系 中 也 都 扩 增 出 与 亲 本 同 样 大 小 的 条 带, 说 明 抗 叶 锈 基 因 Lr28 的 STS Lr28 分 子 标 记 无 特 异 性, 不 能 用 于 分 子 标 记 辅 助 选 择 育 种, 需 要 寻 找 与 其 连 锁 的 其 他 特 异 性 引 物 或 寻 找 更 好 的 其 他 方 法 来 研 究 引 物 SCAR Lr29 OPY 在 亲 本 及 部 分 近 等 基 因 系 中 扩 增 出 许 多 小 于 500bp 的 非 特 异 性 小 片 段, 虽 然 这 些 小 片 段 对 目 的 基 因 的 检 测 无 影 响, 但 在 今 后 的 工 作 中, 应 进 一 步 研 究 出 现 这 些 小 片 段 的 原 因, 最 终 建 立 一 套 使 SCAR Lr29 OPY 更 为 优 化 的 反 应 体 系 及 程 序 当 前 利 用 分 子 标 记 辅 助 选 择 育 种 已 成 为 植 物 育 种 领 域 的 热 点, 将 分 子 标 记 辅 助 选 择 应 用 于 作 物 改 良 的 实 践 中 也 已 取 得 了 实 质 性 进 展, 但 其 也 存 在 一 定 的 局 限 性, 由 于 是 特 异 的 分 子 标 记, 所 获 得 的 分 子 标 记 必 须 稳 定 且 具 有 准 确 的 特 异 性, 不 同 的 反 应 体 系 程 序 可 能 会 得 到 不 同 的 扩 增 结 果, 甚 至 出 现 非 特 异 性 条 带 因 此 在 应 用 前 建 议 先 将 其 分 子 标 记 进 行 特 异 性 验 证, 再 进 行 辅 助 验 证 参 考 文 献 : [1]DenissenCJM.Influenceofraceandpostinfectiontempera tureontwocomponentsofpartialresistancetowheatleafrust inseedlingsofwheat[j].euphytica,1991,58(1):13 20. [2]McIntoshR A,DubcovskyJ,Rogers W J, 犲 狋 犪 犾.Catalogueof genesymbolsforwheat:2009supplement.htp://www.shi gen. nig. ac. jp/wheat/komugi/genes/macgene/supple ment2009. [3] 刘 志 勇, 王 晓 玲, 倪 中 福, 等. 小 麦 抗 叶 锈 基 因 Lr9 Lr24 的 分 子 标 记 辅 助 选 择 研 究 [J]. 农 业 生 物 技 术 学 报,2000,8(1):13 16. [4] 刘 莉, 陈 云 芳, 刘 华 梁, 等. 小 麦 抗 叶 锈 基 因 Lr24 Lr35 的 STS SCAR 标 记 在 近 等 基 因 系 (NILs) 上 的 特 异 性 验 证 [J]. 分 子 植 物 育 种,2008,6(3):471 474. [5] 魏 新 燕, 杨 文 香, 刘 大 群, 等.150 个 小 麦 品 种 ( 系 ) 抗 叶 锈 基 因 Lr35 分 子 检 测, 中 国 农 业 科 学,2004,37(12):1951 1954. [6]NeuC,Stein N,KelerB,GeneticmappingoftheLr20/Pm1 resistancelocusrevealssuppressedrecombinationonchromo somearm7alinhexaploidwheat[j].genome,2002,45:737 744. [7]NaikS,GilK S,PrakasaRao V S, 犲 狋 犪 犾.Identificationofa STSmarkerlinkedtothe 犃 犲 犵 犻 犾 狅 狆 狊 狆 犲 犾 狋 狅 犻 犱 犲 狊 derivedleafrust resistancegenelr28inwheat[j].theoriticalandappliedge netics,1998,97(4):535 540. [8]ProcunierJD,Townley SmithT F,FoxS, 犲 狋 犪 犾.PCR based RAPD/DGGE markerslinkedtoleafrustresistancegenes Lr29andLr25inwheat( 犜 狉 犻 狋 犮 狌 犿 犪 犲 狊 狋 犻 狏 狌 犿 L.)[J].Journal ofgeneticbreeding,1995,49:87 89. [9]TarM,PurnhauserL,CsoszL, 犲 狋 犪 犾.Identificationofmolecu larmarkersforaneficientleafrustresistancegenelr29in wheat[j].actabiologicaszegediensis,2002,46:133 134.