6 上海农业学报 A A S DOI? j 4 6 4 6 文章编号 梨炭疽病菌生物学特性及防治药剂的室内筛选 陈国平 赵 杰 上海市浦东新区农业服务中心泥城站 上海 6 上海市浦东新区农业技术推广中心 上海 摘 要研究了梨炭疽病菌的生物学特性 并对防治药剂进行了室内初步筛选 结果表明植物煎汁培养基 中以梨果和梨枝培养基较有利于菌丝生长 梨果培养基有利于产孢 PDA培养基最适宜菌落生长 葡萄糖蛋白胨 最适温度 菌落产孢能适应较广的 H范围 琼脂培养基产孢量最多 菌丝生长的适宜温度为 H 产孢量最多 菌丝的致死温度为 6 黑暗条件下产孢量最大 在测试的碳源中 麦芽糖 乳糖和葡萄 以 糖最适宜菌丝生长 蔗糖最适宜产孢 氮源中以酵母膏 蛋白胨和牛肉膏最适宜菌丝生长 蛋白胨和牛肉膏最适 4种杀菌剂对病菌的抑制作用 其中多菌灵 咪鲜胺锰盐 氟啶胺 苯醚甲环唑 宜产孢 采用生长速率法测定了 和吡唑醚菌酯的毒力较高 关键词梨炭疽病 梨炭疽病菌 生物学特性 杀菌剂 4 6 6 文献标识码A 中图分类号S B C m P CHENG ZHAOJ N S P N wd A S C S 6 C P N wd A T E C S C A T C m P w w m T w m m m mw j m m w m PDA m m mw P m mw m w T m m w w w TH m w q w H w T m m w k Am m w 6 T w m w w m Am w m w w T 4 C w m m m m m K w P C m P B F 鲜梨是我国主要果品之一 也是上海浦东新区的优势产业 其中 翠冠 梨因果形大 外观好 风味佳 66 6 m 产值达 元 人民币 下同 大众水果中 深受广大消费者喜爱 市场销售情况常供不应求 m P 引起的真菌性病害 能侵 仅次于葡萄 梨炭疽病是由胶孢状炭疽菌 C 收稿日期 第 4号 基金项目上海市科技兴农推广项目 沪农推字 男 大专 农艺师 研究方向植物保护 T E m 46 4 4 q q m 作者简介陈国平 通信作者赵杰 男 E m 6 m 硕士 高级农艺师 研究方向 园艺作物栽培与植物保护 T
6 陈国平 等梨炭疽病菌生物学特性及防治药剂的室内筛选 染桃 梨 葡萄和柑橘等多种果树 随着果树老龄化的发展 该病发生日益严重 已成为影响果品产量和 品质的重要病害之一 近几年 国内对梨炭疽病的病菌诊断 发生规律和药剂防治方面开展了大量研 究 并取得了一定成绩 然而目前生产上仍将化学防治作为控制该病害的主要措施 本试验通过对当 地梨炭疽病菌的生物学特性和室内杀菌剂的筛选研究 以期探索改善果园环境控制病害的方法 材料与方法 供试病原菌 m P 采自浦东新区梨园 经室内组织分离 纯化 梨炭疽病菌 C 菌于 PDA培养基上培养 用于试验 6 病原 供试药剂 咪鲜胺锰盐可湿性粉剂 江苏辉丰农化股份有限公司 腈菌唑乳油 深圳诺普信农化股 丁子香酚可溶液剂 南通神雨绿色药业有限公司 代森联水分散粒剂 允发化工 份有限公司 上海 有限公司 苯醚甲环唑水分散粒剂 江苏丰登农药有限公司 克菌丹可湿性粉剂 江苏 代森锰锌可湿性粉剂 江苏省农垦生物化学有限公司 丙森锌可湿性粉剂 龙灯化学有限公司 拜耳作物科学 中国 有限公司 二氰蒽醌悬浮剂 江西禾益化工有限公司? L醚菌酯悬浮 4 咪鲜胺乳油 以色列马克西姆化学公司 多菌灵悬浮剂 剂 先正达 苏州 作物保护有限公司 江苏龙灯化学有限公司? L氟啶胺悬浮剂 浙江石原金牛农药有限公司 吡唑醚菌酯悬浮剂 深圳诺普信农化股份有限公司 生物学特性观察 植物煎汁对梨炭疽病菌菌落生长和产孢量的影响 梨树叶片 枝条和未成熟梨果的煎汁液培养基上 培养 观察菌落生长 将梨炭疽病菌于 情况 并测产孢量 不同培养基对菌落生长和产孢量的影响 A 察贝克氏 葡萄糖蛋白胨琼脂 淀粉琼脂和麦芽糖琼脂等 6种培养基 于直径为 选用 PDA PS m的平板中央接种直径为 m的病原菌菌丝块 培养 后测量菌落直径 第 天测产孢量 温度和 H对菌落生长和产孢量的影响 m的病原菌菌丝块接种到 PDA平板中央 分别于 4 下培养 后测量菌落直径 将直径为 OH配制 H 的 PDA培养基 于平板中央接种直径为 m的病原菌菌丝块 用乳酸和 N 培养 后测量菌落直径 第 天测产孢量 4 菌落致死温度的测定 m的菌丝块于不同温度的试管中处理 m 然后接种到 PDA平板中央 于 培养 取直径为 观察菌丝生长情况 光照对菌落生长和产孢量的影响 m 的菌丝块接种到 PDA平板中央 分别于连续光照 连续黑暗 光照 黑暗交替 将直径 培养 后测量菌落直径 第 天测产孢量 下 6 不同碳 氮源对菌落生长和产孢量的影响 采用真菌生理培养基 以 KNO 为氮源 测定葡萄糖 蔗糖 麦芽糖 乳糖 果糖和淀粉等碳源对菌落 培养 测量菌落直径 第 天测产孢量 以蔗糖为碳源 测定硝酸钾 硫酸铵 氯化 生长的影响 培养 后测量菌落直径 第 天测产 铵 酵母膏 牛肉膏 蛋白胨和尿素等氮源对菌落生长的影响 孢量 4 杀菌剂的毒力测定 m的 进行测定根据试验情况 配置 个浓度的含药 PDA培养基 将直径为 培养 测量菌落直径 计算抑制率 以药剂有效成分的浓度为测试 菌丝块放在含药培养基中央 采用生长速率法 浓度计算回归方程和抑制中浓度 EC
上 海 农 业 学 报 107 2 结 果 与 分 析 2.1 菌 落 培 养 性 状 观 察 梨 炭 疽 病 菌 在 梨 果 和 梨 枝 培 养 基 上 生 长 较 好,5d 后 直 径 分 别 为 6.58cm 和 6.37cm, 在 梨 叶 培 养 基 上 生 长 较 慢 ; 培 养 7d 时 的 产 孢 量 以 梨 果 培 养 基 最 多, 梨 叶 和 梨 枝 培 养 基 较 少 ( 表 1) 表 1 梨 炭 疽 病 菌 在 植 物 煎 汁 培 养 基 上 菌 落 生 长 和 产 孢 情 况 Table1 ColonygrowthandsporeproductionofC.gloeosporioidesinplantjuicemedia 菌 落 直 径?cm 产 孢 量?10 6 梨 果 培 养 基 6.58±0.08a 4.250±1.068a 梨 枝 培 养 基 6.37±0.21a 1.250±1.014b 梨 叶 培 养 基 5.89±0.16b 1.750±1.061b 2.2 不 同 培 养 基 对 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 梨 炭 疽 病 菌 在 PDA 培 养 基 上 生 长 最 好, 培 养 5d 后 的 直 径 为 8.48cm, 其 次 为 麦 芽 糖 琼 脂 培 养 基 和 PSA 培 养 基 ;7d 后 的 产 孢 量 以 葡 萄 糖 蛋 白 胨 琼 脂 培 养 基 最 多, 为 2.900 10 7 个? 皿, 其 余 依 次 为 PDA PSA 麦 芽 糖 琼 脂 培 养 基 淀 粉 琼 脂 培 养 基 和 察 贝 克 氏 培 养 基 ( 表 2) 表 2 6 种 培 养 基 对 梨 炭 疽 病 菌 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 Table2 Efectsof6mediaoncolonygrowthandsporeproductionofC.gloeosporioides 菌 落 直 径?cm 产 孢 量?10 7 PDA 培 养 基 8.48±0.18a 1.483±0.301b 麦 芽 糖 琼 脂 培 养 基 7.58±0.02b 0.383±0.236cd PSA 培 养 基 7.37±0.08b 0.533±0.170c 察 贝 克 氏 培 养 基 6.30±0.36c 0.028±0.011d 葡 萄 糖 蛋 白 胨 琼 脂 培 养 基 6.05±0.03c 2.900±0.436a 淀 粉 琼 脂 培 养 基 5.00±0.05d 0.147±0.094d 2.3 温 度 和 ph 对 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 梨 炭 疽 病 菌 在 温 度 为 5 30 均 能 生 长, 其 中 以 25 最 为 适 宜, 直 径 为 8.48cm 菌 落 在 ph=3 10 均 能 正 常 生 长, 且 都 有 孢 子 产 生, 其 中 菌 落 生 长 以 ph=5 8 最 为 适 宜, 菌 落 直 径 在 7cm 以 上 ; 产 孢 量 以 ph=3 强 酸 环 境 最 大, 达 到 6.167 10 6 个? 皿, 但 菌 丝 稀 疏, 紧 贴 培 养 基, 其 次 为 ph=7 8 的 中 性 至 弱 碱 性 ( 表 3) 表 3 温 度 和 ph 对 梨 炭 疽 病 菌 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 Table3 EfectsoftemperatureandpH oncolonygrowthandsporeproductionofc.gloeosporioides 温 度? 菌 落 直 径?cm ph 菌 落 直 径?cm 产 孢 量?10 6 5 2.09±0.06f 3 6.72±0.10c 6.167±1.403a 10 2.45±0.13e 4 6.88±0.16bc 2.633±0.115b 15 3.60±0.24d 5 7.23±0.10ab 2.333±0.604c 20 5.65±0.19b 6 7.29±0.23ab 3.600±0.651b 25 8.48±0.18a 7 7.30±0.20ab 5.833±1.754ab 30 5.25±0.10c 8 7.45±0.17a 5.167±1.403ab 35 1.43±0.05g 9 7.29±0.10ab 2.400±0.261c 40 1.10±0.00g 10 6.88±0.53bc 2.700±0.436c 2.4 菌 落 致 死 温 度 将 菌 丝 块 在 40 54 的 水 浴 中 处 理 10min, 于 PDA 平 板 上 培 养 7d 后 均 能 形 成 菌 落, 而 56 以 上 不 能 生 长, 因 此 菌 落 的 致 死 温 度 为 56 处 理 10min 2.5 光 照 对 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 病 原 菌 不 同 光 照 条 件 下 菌 落 生 长 差 异 不 大 ; 产 孢 量 以 全 暗 条 件 下 最 大, 为 1.4833 10 7 个? 皿, 其 次 为 光 暗 交 替 和 全 光 条 件 ( 表 4) 表 4 光 照 条 件 对 梨 炭 疽 病 菌 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 Table4 EfectsoflightoncolonygrowthandsporeproductionofC.gloeosporioides 菌 落 直 径?cm 产 孢 量?10 7 全 光 8.53±0.08a 0.750±0.050b 光 暗 交 替 8.38±0.02a 0.967±0.252b 全 暗 8.48±0.18a 1.483±0.301a
108 陈 国 平, 等 : 梨 炭 疽 病 菌 生 物 学 特 性 及 防 治 药 剂 的 室 内 筛 选 2.6 不 同 碳 氮 源 对 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 菌 落 生 长 最 适 宜 的 碳 源 为 麦 芽 糖 乳 糖 和 葡 萄 糖, 菌 落 直 径 分 别 为 6.15cm 5.68cm 和 5.60cm, 最 不 适 宜 的 为 果 糖 ; 产 孢 量 最 适 宜 的 碳 源 为 蔗 糖, 产 孢 量 为 5.833 10 6 个? 皿 ( 表 5) 表 5 碳 源 对 梨 炭 疽 病 菌 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 Table5 EfectsofcarbonsourcesoncolonygrowthandsporeproductionofC.gloeosporioides 菌 落 直 径?cm 产 孢 量?10 6 麦 芽 糖 6.15±0.05a 0.267±0.106b 乳 糖 5.68±0.09ab 0.250±0.233b 葡 萄 糖 5.60±0.13ab 0.133±0.131b 蔗 糖 5.55±0.05b 5.833±1.021a 淀 粉 5.31±0.48bc 0.133±0.058b 果 糖 4.84±0.57c 0.150±0.180b 菌 落 生 长 最 适 宜 的 氮 源 为 酵 母 膏 蛋 白 胨 和 牛 肉 膏 等 有 机 氮 源, 菌 落 直 径 大 于 6cm, 最 不 适 宜 的 是 硫 酸 铵 和 氯 化 铵 ; 较 适 宜 产 孢 的 氮 源 为 蛋 白 胨 和 牛 肉 膏, 产 孢 量 分 别 为 8.767 10 7 个? 皿 和 5.150 10 7 个? 皿 ( 表 6) 表 6 氮 源 对 菌 落 生 长 和 产 孢 量 的 影 响 Table6 EfectsofnitrogensourcesoncolonygrowthandsporeproductionofC.gloeosporioides 菌 落 直 径?cm 产 孢 量?10 7 酵 母 膏 6.21±0.15a 0.070±0.020c 蛋 白 胨 6.17±0.08a 8.767±1.518a 牛 肉 膏 6.15±0.03a 5.150±0.650b 硝 酸 钾 5.55±0.05c 0.583±0.202c 尿 素 4.86±0.19d 0.003±0.006c 硫 酸 铵 3.92±0.09e 0.543±0.456c 氯 化 铵 3.77±0.06e 0.667±0.144c 2.7 杀 菌 剂 对 梨 炭 疽 病 菌 的 毒 力 测 定 14 种 杀 菌 剂 对 梨 炭 疽 病 菌 的 毒 力 存 在 明 显 差 异, 其 中 以 多 菌 灵 咪 鲜 胺 锰 盐 氟 啶 胺 苯 醚 甲 环 唑 和 吡 唑 醚 菌 酯 的 毒 力 较 高,EC 50 小 于 1mg?L; 咪 鲜 胺 丁 子 香 酚 醚 菌 酯 和 腈 菌 唑,EC 50 小 于 10mg?L; 二 氰 蒽 醌 的 EC 50 为 35.1509mg?L; 克 菌 丹 代 森 联 代 森 锰 锌 和 丙 森 锌 的 毒 力 较 低 ( 表 7) 表 7 14 种 杀 菌 剂 对 梨 炭 疽 病 菌 的 毒 力 Table7 Toxicitiesof14fungicidestoC.gloeosporioides 回 归 方 程 相 关 系 数 r EC 50?mg L 多 菌 灵 Y=11.6196+361.4229x 0.8847 0.1062 咪 鲜 胺 锰 盐 Y=36.8883+115.5763x 0.9967 0.1134 氟 啶 胺 Y=40.2760+62.3768x 0.9592 0.1559 苯 醚 甲 环 唑 Y=46.9887+10.3424x 0.9306 0.2912 吡 唑 醚 菌 酯 Y=28.8528+33.9752x 0.9637 0.6224 咪 鲜 胺 Y=48.7080+0.8837x 0.8068 1.4620 丁 子 香 酚 Y=26.8507+11.3282x 0.9603 2.0435 醚 菌 酯 Y=43.3581+1.3190x 0.8388 5.0356 腈 菌 唑 Y=41.0916+1.2959x 0.9858 6.8743 二 氰 蒽 醌 Y=44.6184+0.1531x 0.9283 35.1509 克 菌 丹 Y=33.5497+0.1252x 0.8402 131.3922 代 森 联 Y=27.3526+0.0592x 0.9956 382.5574 代 森 锰 锌 Y=33.8666+0.0306x 0.9389 527.2353 丙 森 锌 Y=46.1575+0.0038x 0.8785 1011.1842 3 结 论 与 讨 论 梨 炭 疽 病 菌 在 梨 叶 梨 枝 和 梨 果 煎 汁 培 养 基 上 能 正 常 生 长, 其 中 以 梨 果 和 梨 枝 培 养 基 生 长 较 好, 以 梨 果 培 养 基 分 生 孢 子 产 量 较 高, 可 能 梨 果 中 含 有 的 糖 类 有 利 于 菌 丝 生 长 和 产 孢 不 同 培 养 基 中, 以 PDA 最 适 宜 菌 落 生 长, 但 以 葡 萄 糖 蛋 白 胨 琼 脂 培 养 基 产 孢 量 最 多
上 海 农 业 学 报 109 病 原 菌 无 论 单 糖 或 多 糖 都 可 以 利 用, 但 菌 落 生 长 最 适 宜 的 碳 源 为 麦 芽 糖 乳 糖 和 葡 萄 糖, 产 孢 最 适 宜 的 碳 源 为 蔗 糖 病 原 菌 能 利 用 有 机 和 无 机 氮, 但 菌 落 生 长 最 适 宜 有 机 氮, 产 孢 较 适 宜 的 氮 源 为 蛋 白 胨 病 原 菌 在 5 30 下 均 能 生 长, 最 适 25,pH=3 10 的 条 件 下 能 产 生 孢 子, 最 适 宜 ph 为 3; 菌 丝 块 的 致 死 温 度 为 56 ; 菌 落 生 长 对 光 照 的 要 求 不 严 格, 但 产 孢 量 以 全 暗 条 件 下 最 大 [11] 刘 邮 洲 等 研 究 了 梨 炭 疽 病 菌 部 分 特 性, 在 菌 丝 生 长 温 度 和 ph 方 面 与 本 研 究 结 果 相 似 ; 而 适 宜 的 碳 源 和 氮 源 与 本 研 究 结 果 有 一 定 差 异, 这 可 能 与 病 菌 长 期 生 存 的 环 境 有 关 有 机 肥 ( 有 机 氮 ) 用 量 过 大 过 剩, 速 效 肥 偏 少, 会 削 弱 梨 树 生 长 势, 有 利 于 炭 疽 病 的 发 生 选 择 高 地 建 园, 沟 系 畅 通, 科 学 施 肥, 合 理 修 剪, 改 善 梨 园 土 壤 环 境, 能 有 效 控 制 发 病, 说 明 改 变 环 境 和 科 学 种 植 是 控 制 病 害 的 重 要 途 径 之 一 目 前, 蜜 梨 等 果 品 产 业 正 在 向 规 模 化 省 工 化 保 护 地 的 方 向 发 展, 为 梨 炭 疽 病 的 标 准 化 防 控 提 供 了 条 件 本 试 验 表 明, 多 菌 灵 咪 鲜 胺 锰 盐 氟 啶 胺 苯 醚 甲 环 唑 和 吡 唑 醚 菌 酯 的 毒 力 较 高, 其 中 苯 醚 甲 环 唑 用 于 防 治 果 树 多 种 病 害, 取 得 了 良 好 效 果 传 统 农 药 多 菌 灵 不 仅 对 梨 炭 疽 病 菌 具 有 较 高 的 毒 力, 研 究 发 现, 其 对 甜 瓜 枯 萎 病 菌 [9] 黄 瓜 菌 核 病 菌 [10] 葡 萄 灰 霉 病 菌 [12] [13] [14] 桃 褐 腐 病 菌 和 水 稻 恶 苗 病 病 菌 等 多 种 病 菌 也 有 很 高 的 毒 力, 在 当 前 普 遍 追 求 新 农 药 的 形 势 下, 传 统 农 药 仍 值 得 继 续 合 理 利 用 参 考 文 献 [1] 吕 佩 珂, 苏 慧 兰, 庞 震, 等. 中 国 现 代 果 树 病 虫 原 色 图 签 [M]. 北 京 : 化 学 工 业 出 版 社,2013:97 98,164 165,322 323,471 472. [2] 岳 兰 菊. 安 徽 砀 山 梨 炭 疽 病 的 发 生 规 律 及 防 治 措 施 [J]. 中 国 果 树,2011(3):54 56. [3] 付 余 波, 钱 国 良, 胡 白 石, 等.21 种 杀 菌 剂 对 梨 炭 疽 病 菌 轮 纹 病 菌 黑 斑 病 菌 的 室 内 毒 力 测 定 [J]. 江 苏 农 业 科 学,2011,39(2):178 180. [4] 吴 良 庆, 朱 立 武, 衡 伟, 等. 砀 山 梨 炭 疽 病 病 原 鉴 定 及 其 抑 菌 药 剂 筛 选 [J]. 中 国 农 业 科 学,2010,43(18):3750 3758. [5] 周 增 强, 侯 珲, 王 丽. 九 种 杀 菌 剂 对 梨 炭 疽 病 菌 的 抑 制 效 果 [J]. 北 方 园 艺,2012(10):157 158. [6] 方 中 达. 植 病 研 究 方 法 [M]. 北 京 : 农 业 出 版 社,1979:116. [7] 杨 焕 青, 王 开 运, 范 昆, 等. 草 莓 枯 萎 病 菌 的 生 物 学 特 性 及 7 种 杀 菌 剂 对 其 抑 制 作 用 [J]. 植 物 保 护 学 报,2008,35(2):169 174. [8] 顾 振 芳, 叶 黎 红, 代 光 辉, 等. 芦 笋 茎 枯 病 菌 的 生 物 学 特 性 及 其 药 剂 评 估 [J]. 上 海 交 通 大 学 学 报 ( 农 业 科 学 版 ),2003,21( 增 刊 ):23 28. [9] 赵 杰, 庄 隽 怡, 唐 亚 芹, 等. 甜 瓜 枯 萎 病 菌 的 生 物 学 特 性 及 防 治 药 剂 的 室 内 筛 选 [J]. 上 海 农 业 学 报,2010,26(1):129 132. [10] 赵 杰, 周 超 英, 顾 振 芳. 腐 霉 利 和 多 菌 灵 及 其 复 配 剂 对 黄 瓜 菌 核 病 菌 的 毒 力 测 定 [J]. 上 海 交 通 大 学 学 报 ( 农 业 科 学 版 ),2008,26(4): 223 325. [11] 刘 邮 洲, 陈 志 谊, 钱 国 良, 等. 梨 胶 胞 炭 疽 病 菌 的 分 离 鉴 定 及 其 生 物 学 特 性 [J]. 江 苏 农 业 学 报,2013,29(1):60 64. [12] 赵 杰, 徐 心, 周 超 英.7 种 杀 菌 剂 对 葡 萄 灰 霉 病 的 抑 菌 试 验 [J]. 上 海 农 业 科 技,2014(4):145. [13] 赵 杰, 徐 心, 曹 忠. 五 种 杀 菌 剂 对 桃 褐 腐 病 菌 的 抑 菌 作 用 初 探 [J]. 上 海 农 业 科 技,2014(5):151. [14] 李 斌, 赵 杰, 黄 玉 人.5 种 杀 菌 剂 对 水 稻 恶 苗 病 病 菌 的 毒 力 测 定 [J]. 上 海 农 业 科 技,2015(1):122. ( 责 任 编 辑 : 程 智 强 )