林 业 科 学 研 究 2016,29(4):529 535 ForestResearch 文 章 编 号 :1001 1498(2016)04 0529 07 不 同 种 质 杜 仲 叶 中 多 酚 和 黄 酮 含 量 差 异 性 分 析 魏 艳 秀, 刘 攀 峰, 杜 庆 鑫, 杜 红 岩 ( 中 国 林 业 科 学 研 究 院 经 济 林 研 究 开 发 中 心, 国 家 林 业 局 杜 仲 工 程 技 术 研 究 中 心, 河 南 郑 州 450003) 摘 要 :[ 目 的 ] 比 较 不 同 种 质 杜 仲 叶 中 多 酚 及 黄 酮 含 量 的 差 异 性, 合 理 评 价 与 利 用 杜 仲 种 质 资 源 [ 方 法 ] 利 用 高 效 液 相 色 谱 法 和 紫 外 分 光 光 度 计 法 对 105 份 杜 仲 种 质 叶 中 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 及 槲 皮 素 的 含 量 进 行 测 定 [ 结 果 ] 表 明 : 种 质 叶 中 槲 皮 素 含 量 平 均 为 0.33mg g -1, 变 异 系 数 最 大, 为 42.42%; 总 黄 酮 含 量 平 均 为 15.92mg g -1, 变 异 系 数 最 小, 为 19.35%; 异 槲 皮 苷 多 酚 含 量 平 均 值 分 别 为 3.37 42.74mg g -1, 变 异 系 数 分 别 为 34.42% 23.72% 杜 仲 雌 株 和 雄 株 叶 中 的 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 及 槲 皮 素 含 量 差 异 不 著 性 多 酚 及 黄 酮 类 物 质 在 不 同 来 源 间 均 差 异 极 显 著 (P<0.01), 其 中, 河 北 地 区 杜 仲 叶 片 中 的 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 和 槲 皮 素 平 均 含 量 均 最 高 相 关 性 分 析 发 现 : 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 含 量 彼 此 间 均 呈 显 著 或 极 显 著 正 相 关, 而 槲 皮 素 含 量 与 多 酚 含 量 间 无 显 著 相 关 性 综 合 评 价 4 种 成 分 含 量 高 低, 可 将 杜 仲 种 质 资 源 分 为 4 大 类 群, 其 中, 类 群 Ⅲ( 包 括 13 份 材 料 ) 的 多 酚 和 黄 酮 类 活 性 成 分 含 量 均 高 于 其 他 类 群 [ 结 论 ] 杜 仲 种 质 叶 片 中 多 酚 和 总 黄 酮 含 量 较 高, 且 表 现 出 丰 富 的 多 样 性, 有 很 大 的 选 择 和 改 良 潜 力, 可 为 叶 用 杜 仲 资 源 的 选 育 提 供 基 础 原 材 料 关 键 词 : 杜 仲 叶 ; 活 性 成 分 ; 多 酚 ; 黄 酮 ; 差 异 分 析 中 图 分 类 号 :S794 文 献 标 识 码 :A ComparisoninContentsofPolyphenolandFlavonoidinLeavesof EucommiaulmoidesGermplasm WEIYan xiu,liupan feng,duqing xin,duhong yan (Non timberforestresearchanddevelopmentcenterofchineseacademyofforestry,theeucommiaengineeringresearchcenterof StateForestryAdministration,Zhengzhou 450003,He nan,china) Abstract:[Objective]TocomparethecontentdiferenceofpolyphenolandflavonoidinEucommiaulmoidesleav es,soastoevaluateandutilizee.ulmoidesgermplasmreasonably.[method]hplcandspectrophotometricmeth odswereusedtomeasurethecontentsofpolyphenol,totalflavonoid,isoquercitrinandquercetinof105e.ulmoides germplasm.[result]themeancontentofquercetinwas0.33mg g -1 withthehighestvariationcoeficientof 42.42%,whilethemeancontentoftotalflavonoidwas15.92mg g -1 withthelowestvariationcoeficientof 19.35%;themeancontentofisoquercitrin,totalpolyphenolwas3.37mg g -1 and42.74mg g -1,respectively, withthevariationcoeficientof34.42% and23.72%.nosignificantcorelationwasfoundinthecontentsofthese fourcomponentsbetweenmaleandfemaleplantleaves.therewashighlysignificantdiferenceinthefourcompo nentsamongdiferentregions(p<0.01).hebeiwastheregionwherethemeancontentsofisoquercitrin,totalfla vonoid,totalpolyphenolwerethehighestcontrastwiththeotherregions.theresultsofcorelationanalysisshowed thatthereexistedsignificantpositivecorelationamongtheisoquercitrin,totalflavonoidandtotalpolyphenolwhereas nosignificantcorelationbetweenquercetinandtotalpolyphenol.e.ulmoidesgermplasmresourcescouldbedivided 收 稿 日 期 :2015 12 08 基 金 项 目 : 国 家 十 二 五 农 村 领 域 科 技 计 划 课 题 研 究 任 务 合 约 (2012BAD21B0502) 作 者 简 介 : 魏 艳 秀 (1988 ), 女, 山 东 菏 泽 人, 硕 士 研 究 生. 研 究 方 向 : 经 济 林 育 种 栽 培.Email:yanxiu1225@163.com 通 讯 作 者 : 杜 红 岩 (1963 ), 男, 河 南 中 牟 人, 研 究 员, 博 士 生 导 师. 研 究 方 向 : 杜 仲 育 种 栽 培 与 综 合 利 用.E mail:dhy515@126.com
530 林 业 科 学 研 究 第 29 卷 intofourgroupsaccordingtothecontentdiferenceofthefourcomponents,inwhichthecontentsofflavonoidcom poundsandpolyphenolingroupⅢ including13materialswerehigherthanthatoftheothergroups.[conclusion] ThecontentsofpolyphenolandflavonoidinleavesofE.ulmoideswerehighandabundantdiversityandvariation werefoundindiferentgermplasms,whichshowedgreatpotentialforselectionandimprovement.thus,itcould providebasismaterialsforbreedingeucommiaulmoidesgermplasm. Keywords:Eucommiaulmoidesleaves;activeingredients;polyphenol;flavonoid;comparison 杜 仲 (EucommiaulmoidesOliver.) 又 名 思 仙 思 仲 木 棉 玉 丝 皮 扯 丝 皮 等, 是 地 质 史 上 第 四 纪 冰 川 后 仅 留 存 于 我 国 的 孑 遗 植 物, 目 前 是 国 内 重 要 的 木 本 药 用 树 种 和 木 本 油 料 树 种 [1-3] 作 为 传 统 中 药 材, 杜 仲 在 我 国 经 典 药 学 巨 著 神 农 本 草 经 本 草 纲 目 及 其 它 典 籍 中 均 有 记 载 现 代 研 究 表 明, 杜 仲 叶 皮 和 枝 条 中 含 有 类 似 的 化 学 组 分 [4], 以 杜 仲 叶 为 生 产 原 料 的 开 发 利 用 日 益 受 到 重 视, 相 继 在 食 品 保 健 品 饲 料 添 加 剂 及 化 妆 品 等 领 域 开 发 出 系 列 产 品 [5-7] 杜 仲 叶 内 含 有 多 种 活 性 物 质, 主 要 包 括 酚 类 木 脂 素 类 环 烯 醚 萜 类 氨 基 酸 及 微 量 元 素 等 [8] 多 酚 指 以 苯 环 结 构 为 母 体, 其 不 同 位 置 被 多 个 羟 基 取 代 而 形 成 的 酚 类 化 合 物 总 称 [9] 多 酚 是 杜 仲 叶 中 的 重 要 活 性 成 分 之 一, 来 源 于 莽 草 酸 途 径 和 苯 丙 氨 酸 代 谢 途 径, 具 有 降 血 压 抗 肿 瘤 抗 动 脉 粥 样 硬 化 抑 制 蛇 毒 及 除 臭 等 多 种 功 能, 广 泛 应 用 在 食 品 化 妆 品 医 药 及 保 健 品 等 领 域 [10] 黄 酮 泛 指 2 个 苯 环 与 环 之 间 通 过 中 央 三 碳 链 相 互 连 接 而 成 的 一 系 列 化 合 物 [9], 具 有 降 血 脂 抗 肿 瘤 及 免 疫 调 节 等 药 理 作 用 [12] 杜 仲 黄 酮 类 物 质 主 要 包 括 槲 皮 素 异 槲 皮 苷 山 奈 酚 紫 云 英 苷 芦 丁 等 [13], 其 中, 槲 皮 素 是 一 种 多 羟 基 黄 酮 类 化 合 物, 具 有 清 除 自 由 基 抗 癌 抗 炎 抗 菌 抗 病 毒 免 疫 调 节 及 心 血 管 保 护 等 作 用 [14] 异 槲 皮 苷 基 本 结 构 为 槲 皮 素 3 O 葡 萄 糖 苷, 具 有 降 糖 降 压 降 脂 降 酶 抗 诱 变 抗 病 毒 等 功 效, 在 治 疗 心 肌 缺 氧 脑 缺 氧 缺 血 疾 病 及 抗 血 栓 药 物 的 制 备 中 具 有 重 要 作 用 [15] 目 前, 有 关 杜 仲 叶 活 性 成 分 的 研 究 多 集 中 在 提 [16] 取 方 法 与 药 理 分 析 方 面, 张 琳 杰 等 采 用 响 应 面 法 优 化 了 杜 仲 叶 中 总 多 酚 超 声 波 辅 助 提 取 工 艺 ;Kwan [17] 等 研 究 发 现, 杜 仲 叶 的 水 提 物 具 有 良 好 的 降 压 功 [18] 效 ;Kim 等 从 杜 仲 叶 中 分 离 出 3 种 黄 酮 类 化 合 物, 发 现 其 能 抑 制 糖 基 化 终 产 物 的 产 生, 降 低 血 糖 浓 度, 效 果 可 与 氨 基 胍 类 相 媲 美 ; 但 对 不 同 种 质 杜 仲 叶 黄 酮 类 与 多 酚 化 合 物 含 量 的 差 异 未 进 行 系 统 分 析 本 研 究 通 过 测 定 分 析 105 份 杜 仲 种 质 叶 中 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 槲 皮 素 等 3 种 黄 酮 类 化 合 物 和 多 酚 的 含 量 差 异, 以 期 为 杜 仲 叶 用 资 源 评 价 良 种 选 育 及 产 业 开 发 提 供 理 论 参 考 1 材 料 与 方 法 1.1 试 验 材 料 供 试 材 料 均 采 于 中 国 林 业 科 学 研 究 院 经 济 林 研 究 开 发 中 心 ( 国 家 林 业 局 杜 仲 工 程 技 术 研 究 开 发 中 心 ) 杜 仲 基 因 库 基 因 库 采 用 6 株 小 区, 定 植 行 间 距 为 3m 3m 2015 年 7 月 利 用 混 合 取 样 法 采 集 105 份 杜 仲 种 质 材 料 的 成 熟 叶 片, 雌 株 58 份, 雄 株 47 份, 来 源 及 种 质 份 数 见 表 1 样 株 要 求 长 势 旺 盛 无 病 虫 害, 每 份 种 质 采 摘 20 片 杜 仲 叶, 摘 后 低 温 保 存 至 实 验 室 备 用 表 1 种 质 来 源 与 数 量 来 源 总 份 数 / 份 雌 株 份 数 / 份 雄 株 份 数 / 份 湖 南 株 洲 10 5 5 广 西 桂 林 10 9 1 河 北 安 国 9 4 5 浙 江 杭 州 7 3 4 北 京 市 10 5 5 贵 州 遵 义 10 5 5 河 南 洛 阳 20 12 8 江 苏 响 水 10 4 6 四 川 广 元 10 6 4 山 西 运 城 9 5 4 合 计 105 58 47 1.2 主 要 试 剂 与 仪 器 1.2.1 试 剂 槲 皮 素 标 品 (HPLC 98%, 成 都 曼 思 特 生 物 科 技 有 限 公 司 ); 异 槲 皮 苷 标 品 (HPLC 98%, 成 都 曼 思 特 生 物 科 技 有 限 公 司 ); 没 食 子 酸 标 准 品 (HPLC 98%, 上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司 ); 芦 丁 标 准 品 (HPLC 98%, 上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司 );Folin ciocalteu 试 剂 ( 美 国 sigma 公 司 ); 甲 醇 为 色 谱 纯 ; 水 为 超 纯 水 ; 其 他 试 剂 均 为 国 产 分 析 纯 1.2.2 仪 器 相 液 相 色 谱 仪 ( 配 water1525 泵 2998PDA 检 测 器 2707Autosampler); 紫 外 可 见 分 光
第 4 期 魏 艳 秀, 等 : 不 同 种 质 杜 仲 叶 中 多 酚 和 黄 酮 含 量 差 异 性 分 析 531 光 度 计 (AgilentCARY300);HT 300BQ 型 数 控 超 声 波 清 洗 器 ( 济 宁 恒 通 超 声 电 子 设 备 有 限 公 司 ); AL204 电 子 天 平 ( 梅 特 勒 托 利 多 仪 器 上 海 有 限 公 司 ) 1.3 测 定 方 法 1.3.1 杜 仲 叶 多 酚 与 总 黄 酮 含 量 的 测 定 样 品 60 干 燥 至 恒 质 量, 粉 碎 后 过 4 目 筛, 精 密 称 取 2 000g 用 50mL60% 乙 醇 超 声 波 萃 取 30min, 减 压 抽 滤 后 定 容 至 100mL,4 冰 箱 保 存 备 用 [19] 多 酚 含 量 采 用 Folin Ciocalteu 法 测 定, 以 没 [20] 食 子 酸 为 标 准 品 总 黄 酮 含 量 采 用 AlCl 3 显 色 法 测 定, 以 芦 丁 为 标 准 品 1.3.2 杜 仲 叶 异 槲 皮 苷 和 槲 皮 素 含 量 的 测 定 样 品 60 干 燥 至 恒 质 量, 粉 碎 后 过 4 目 筛, 精 密 称 取 1.000g, 置 50mL 锥 形 瓶 中, 加 25mL50% 甲 醇 溶 液, 准 确 称 定 锥 形 瓶 质 量, 超 声 提 取 40min 后 放 至 室 温, 再 次 称 质 量, 用 50% 甲 醇 溶 液 补 足 失 重 后 摇 匀, 过 滤 取 滤 液, 用 0.22μm 微 孔 滤 膜 过 滤, 即 得 供 试 品 溶 液 [21] 异 槲 皮 苷 和 槲 皮 素 采 用 改 进 HPLC 法 测 定 以 BDShypersilC18(250mm 4.6mm,5μm) 为 色 谱 柱, 甲 醇 (B)-0.5% 磷 酸 水 溶 液 (A) 为 流 动 相, 进 行 梯 度 洗 脱 ; 检 测 波 长 255; 流 速 1.0mL min -1, 柱 温 30, 进 样 量 7μL 分 别 配 制 0.08 0.16mg ml -1 槲 皮 素 和 异 槲 皮 苷 标 准 品 溶 液, 依 次 进 样 1.0 3.0 5.0 7.0 9.0 11.0 和 15.0μL, 计 算 峰 面 积 以 对 照 品 进 样 质 量 为 横 坐 标 (X), 其 峰 面 积 为 纵 坐 标 (Y), 进 行 线 性 回 归, 槲 皮 素 的 回 归 方 程 为 : Y=2.3 10 6 X-12276 (R 2 =0.9998) 异 槲 皮 苷 的 回 归 方 程 为 : Y=1.9 10 6 X-16773 (R 2 =0.9997) 1.4 数 据 统 计 与 分 析 采 用 SPSS20.0 Excel 软 件 计 算 指 标 平 均 值 标 准 差 变 异 系 数 Shannon wiener 指 数, 并 绘 制 等 级 数 量 分 布 图 对 不 同 来 源 杜 仲 种 质 进 行 单 因 素 方 差 分 析 和 Duncan 多 重 比 较 ; 利 用 Pearson 相 关 系 数 分 析 各 指 标 间 的 相 关 性 ; 采 用 组 内 欧 式 平 方 距 离 法 进 行 聚 类 分 析 2 结 果 与 分 析 2.1 不 同 种 质 杜 仲 叶 中 多 酚 及 黄 酮 含 量 的 变 化 表 2 表 明 : 槲 皮 素 含 量 均 值 为 0.33mg g -1, 极 小 值 为 0.19mg g -1, 极 大 值 为 0.96mg g -1, 变 异 系 数 最 大, 为 42.42%; 异 槲 皮 苷 含 量 均 值 为 3.37 mg g -1, 极 小 值 为 1.16mg g -1, 极 大 值 为 6.92 mg g -1, 其 变 异 系 数 为 34.42%; 多 酚 含 量 均 值 为 42.74mg g -1, 变 异 系 数 为 23.72%; 总 黄 酮 含 量 均 值 为 15.92mg g -1, 变 异 系 数 最 小, 为 19.35%, 极 小 值 为 6.70mg g -1, 极 大 值 为 22.53mg g -1 从 多 样 性 指 数 可 以 看 出, 杜 仲 种 质 叶 中 多 酚 和 黄 酮 类 活 性 成 分 的 多 样 性 指 数 较 高, 除 槲 皮 素 为 1.57 外, 其 它 成 分 均 大 于 2.0 表 2 杜 仲 种 质 叶 多 酚 和 黄 酮 类 活 性 成 分 的 含 量 及 变 异 系 数 和 多 样 性 指 数 名 称 均 值 标 准 差 极 小 值 极 大 值 极 差 变 异 系 数 /% 多 样 性 指 数 (mg g -1 ) 多 酚 42.74 10.14 20.71 62.48 41.77 23.72 2.03 总 黄 酮 15.92 3.08 6.70 22.53 15.83 19.35 2.02 异 槲 皮 苷 3.37 1.16 1.16 6.92 5.76 34.42 2.04 槲 皮 素 0.33 0.14 0.19 0.96 0.77 42.42 1.57 以 遗 传 多 样 性 测 算 的 分 级 标 准, 分 析 了 105 份 杜 仲 种 质 叶 中 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 和 槲 皮 素 含 量 的 分 布 状 况 ( 图 1) 图 1 表 明 : 总 黄 酮 含 量 分 布 范 围 最 广, 在 1 10 级 均 有 分 布, 主 要 集 中 在 4 7 级, 占 杜 仲 种 质 资 源 的 73.33%; 多 酚 和 异 槲 皮 苷 的 分 布 范 围 仅 次 于 总 黄 酮, 其 含 量 分 布 主 要 集 中 在 4 7 级, 分 别 占 杜 仲 种 质 资 源 的 66.67% 和 68.57%; 槲 皮 素 含 量 分 布 较 集 中, 仅 在 4 10 级 有 分 布, 而 且 4 6 级 占 杜 仲 种 质 资 源 的 77.14% 综 合 比 较 发 现,4 种 成 分 在 不 同 种 质 间 差 异 较 大, 分 布 范 围 广 2.2 不 同 性 别 杜 仲 种 质 各 成 分 含 量 的 差 异 由 表 3 看 出 : 杜 仲 雌 株 和 雄 株 叶 中 的 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 及 槲 皮 素 含 量 差 异 不 显 著, 但 雄 株 叶 中 的 4 种 成 分 含 量 均 略 高 于 雌 株 ; 雄 株 叶 中 多 酚 含 量 为 43.24mg g -1, 仅 比 雌 株 叶 中 高 0.88mg g -1 ; 雄 株 叶 中 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 及 槲 皮 素 含 量 分 别 比 雌 株 叶 中 的 高 0.15 0.08 0.01mg g -1
532 林 业 科 学 研 究 第 29 卷 图 1 105 份 杜 仲 种 质 叶 中 多 酚 和 黄 酮 类 活 性 成 分 含 量 的 分 布 表 3 雌 雄 株 叶 中 各 成 分 含 量 及 差 异 性 分 析 成 分 雌 株 雄 株 F P 多 酚 /(mg g -1 ) 42.36±9.4243.24±11.090.132 0.717 总 黄 酮 /(mg g -1 ) 15.86±2.8516.01±3.38 0.106 0.746 异 槲 皮 苷 /(mg g -1 ) 3.34±1.10 3.42±1.25 0.061 0.806 槲 皮 素 /(mg g -1 ) 0.32±0.14 0.33±0.14 0.193 0.662 2.3 不 同 来 源 杜 仲 叶 中 各 成 分 的 差 异 性 比 较 由 不 同 来 源 间 各 指 标 单 因 素 方 差 分 析 及 多 重 比 较 ( 表 4) 可 看 出 :10 个 不 同 来 源 的 杜 仲 种 质 叶 中 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 及 槲 皮 素 含 量 存 在 极 显 著 差 异 (P<0.01); 其 中, 湖 南 与 贵 州 地 区 杜 仲 叶 中 多 酚 含 量 均 值 分 别 为 49.16 48.76mg g -1, 显 著 高 于 河 南 河 北 广 西 四 川 山 西 地 区, 而 与 江 苏 浙 江 北 京 地 区 的 差 异 不 显 著 河 北 地 区 杜 仲 叶 总 黄 酮 含 量 最 高, 均 值 达 18.65mg g -1, 显 著 高 于 广 西 贵 州 山 西 浙 江 等 地 区, 而 与 北 京 地 区 的 差 异 不 显 著 ; 广 西 地 区 的 总 黄 酮 含 量 最 低, 均 值 为 13.91mg g -1 河 北 北 京 地 区 杜 仲 叶 中 异 槲 皮 苷 含 量 均 值 分 别 为 4.02 3.91mg g -1, 显 著 高 于 山 西 河 南 浙 江 地 区, 而 与 江 苏 四 川 等 地 的 差 异 不 显 著 河 北 地 区 杜 仲 叶 槲 皮 素 含 量 最 高, 均 值 达 0.46mg g -1, 除 与 山 西 资 源 差 异 不 显 著 外, 显 著 高 于 其 它 地 区, 而 河 南 地 区 的 槲 皮 素 含 量 最 低, 均 值 为 0.26mg g -1, 仅 为 河 北 地 区 的 56.52% 综 合 比 较 分 析 发 现, 杜 仲 种 质 来 源 不 同, 其 叶 中 各 成 分 含 量 差 异 程 度 不 同, 其 中, 河 北 地 区 的 杜 仲 种 质 叶 中 的 槲 皮 素 异 槲 皮 苷 和 总 黄 酮 平 均 含 量 均 最 高, 而 湖 南 地 区 的 多 酚 平 均 含 量 最 高, 河 南 地 区 的 多 酚 平 均 含 量 最 低 上 述 结 果 一 定 程 度 上 反 映 了 杜 仲 种 质 叶 中 成 分 含 量 具 有 较 高 的 多 样 性, 可 根 据 不 同 用 途 有 针 对 性 的 进 行 资 源 开 发 利 用 表 4 不 同 来 源 杜 仲 种 质 间 多 酚 和 黄 酮 类 化 合 物 含 量 差 异 性 分 析 mg g -1 来 源 地 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 槲 皮 素 湖 南 49.16±11.27c 16.21±3.58bc 3.30±0.99abc 0.36±0.16ab 广 西 41.04±10.57ab 13.91±3.67a 3.32±1.59abc 0.31±0.13ab 河 北 40.49±7.37ab 18.65±2.65d 4.02±1.20c 0.46±0.21c 浙 江 44.62±7.38bc 15.55±3.10ab 3.03±1.06ab 0.35±0.21ab 北 京 45.59±9.49bc 17.31±3.00cd 3.91±1.22c 0.35±0.13ab 贵 州 48.76±12.85c 15.24±2.36ab 3.27±1.70abc 0.27±0.11ab 河 南 37.31±12.53a 15.33±3.44ab 2.85±0.94a 0.26±0.09a 江 苏 43.92±8.55bc 16.31±2.82bc 3.76±1.19bc 0.32±0.13ab 四 川 41.05±6.89ab 16.18±2.09bc 3.71±0.71bc 0.32±0.10ab 山 西 41.10±9.64ab 15.32±1.77ab 2.79±0.79a 0.37±0.24bc F 5.093 5.520 3.665 3.519 P 0.003 0.003 0.009 0.009 注 : 表 中 字 母 表 示 在 5% 水 平 上 多 重 比 较 结 果, 同 列 数 据 后 不 同 字 母 表 示 差 异 显 著, 代 表 在 0.01 水 平 差 异 极 显 著 2.4 杜 仲 叶 中 各 成 分 含 量 的 相 关 性 分 析 各 指 标 相 关 系 数 显 著 性 检 验 结 果 ( 表 5) 表 明 : 杜 仲 种 质 叶 中 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 含 量 两 两 间 均 呈 显 著 或 极 显 著 正 相 关, 其 中, 异 槲 皮 苷 含 量 和 总 黄 酮 多 酚 含 量 的 相 关 系 数 分 别 为 0.543 和 0.239, 多 酚 含 量 和 总 黄 酮 含 量 的 相 关 系 数 为 0.398, 三 者 变 化 趋 势 一 致, 说 明 根 据 某 一 成 分 含 量 的 高 低, 可 以 在 一 定 程 度 上 预 测 另 外 2 种 成 分 的 情 况 ; 除 多 酚 含 量 外, 槲 皮 素 含 量 与 总 黄 酮 含 量 异 槲 皮 苷 含 量 均 呈 极 显 著 正 相 关 关 系, 其 中, 槲 皮 素 含 量 与 总 黄 酮 含 量 异 槲 皮 苷 含 量 相 关 系 数 分 别 为 0.318 和 0.414
第 ４期 魏艳秀 等 不同种质杜仲叶中多酚和黄酮含量差异性分析 表 ５ 杜仲种质叶中各成分含量间相关分析 指标 槲皮素 异槲皮苷 多酚 ０７ ９ 总黄酮 ８ 异槲皮苷 ４ ４ ５ ４ 槲皮素 总黄酮 ９ ８ 多酚 注 表 示 极 显 著 差 异 Ｐ ０ 表 示 显 著 差 异 Ｐ ０５ ５ 杜仲种质叶中多酚和黄酮含量的聚类分析 利用 ＳＰＳＳ ０对参试的 ０５份杜仲种质的 ４ 个经济性状进行聚类 以欧氏距离为遗传距离 采用 Ｗａ ｄ聚类法 在遗传距离 ８ ５处将参试材料分为 ４ 类 图 第Ⅰ类群包括 份材料 占总种质的 ４ 该类群 ４种成分含量均较高 其中 多酚 总黄酮 异 槲皮苷及槲皮素含量的均值分别为 ４５ ０４ ７ ４７ ８ ８ ｍｇ ｇ 变 异 系 数 分 别 为 ７ ５ ４５ ６ 和 ７ ７ 表 ６ 第Ⅱ类群包括 ４０份材料 占总种质的 ８ ０ 是 ４类中种质资源 数目最多的一个类群 但多酚及黄酮类活性成分的 含量集中分布在中等水平 其多酚 总黄酮 异槲皮 苷及槲皮素的均值分别为 ９ ６ ９ ８ ７ ｍｇ ｇ 表 ６ 第 Ⅲ 类群包括 份材料 占总种 质的 ８ 多酚 总黄酮 异槲皮苷 槲皮素含量 均值分别为 ５ ９ ８ ６ ４ ９６ ５８ｍｇ ｇ 此 类群资源的 ４种成分含量综合最高 表 ６ 第Ⅳ 类 群 包 括 ９ 份 材 料 仅 占 总 种 质 的 ８ ０ 其 ４种成分含量均最低 综合比较发现 ４ 大类群的成分含量优劣顺序为 类群 Ⅲ 类群 Ⅰ 类群Ⅱ 类群Ⅳ 讨论 杜仲种质资源叶中多酚 总黄酮 异槲皮苷及槲 皮素含量变异程度均较高 变异幅度较大 具有丰富 的多样 性 ４种 成 分 的 均 值 分 别 为 ４ ７ ４ ５ ９ ７ ｍｇ ｇ Ｚｈａ ｇ等 对中国传统草药 中 多 酚 含 量 的 研 究 发 现 槐 花 Ｓ ｐ ｈ ａｊ ａ ｐ ｃ ａ Ｌ 多 酚 含 量 最 高 为 ９ ｍｇ ｇ 半 夏 Ｐ ｌ ｌ ａｔ ａｔ ａ Ｔｈｕ ｂ Ｂ ｔ 中 含 量 最 低 为 ０ ９ｍｇ ｇ 欧阳玉祝等 对几种药用植物总多 酚含量及其抗氧化活性比较发现 金银花 Ｌ ｃ ａ ｊ ａｐ ｃ ａｔｈｕ ｂ 的多酚含量为 ８ ５８ｍｇ ｇ 连翘 ｓ ｙ ｔ ｈ ａｓ ｕ ｓ ｐ ｓ ａ Ｔｈｕ ｂ Ｖａ ｈ ｌ 为 ７ ９ ４ｍｇ Ｆ ｇ 比较可见 杜仲种质资源叶中多酚含量与传统 图 杜仲种质资源多酚及黄酮含量聚类分析 ５
534 林 业 科 学 研 究 第 29 卷 表 6 杜 仲 种 质 各 类 群 性 状 特 征 成 分 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 槲 皮 素 性 状 类 群 类 群 Ⅰ 类 群 Ⅱ 类 群 Ⅲ 类 群 Ⅳ 均 值 ± 标 准 差 /(mg g -1 ) 45.04±7.89 39.23±6.97 51.93±7.11 32.61±7.95 变 异 系 数 /% 17.52 17.77 13.69 24.38 极 小 值 /(mg g -1 ) 33.92 23.19 36.8 20.71 极 大 值 /(mg g -1 ) 62.48 54.58 62.31 46.38 均 值 ± 标 准 差 /(mg g -1 ) 17.47±2.00 16.22±1.51 18.16±2.90 11.08±1.99 变 异 系 数 /% 11.45 9.31 15.97 17.96 极 小 值 /(mg g -1 ) 13.55 12.85 13.55 6.7 极 大 值 /(mg g -1 ) 22.38 19.91 22.53 14 均 值 ± 标 准 差 /(mg g -1 ) 3.88±0.80 2.98±0.76 4.96±1.27 2.23±0.57 变 异 系 数 /% 20.62 25.5 25.6 25.56 极 小 值 /(mg g -1 ) 2.48 1.55 3.06 1.16 极 大 值 /(mg g -1 ) 5.34 4.42 6.92 3.22 均 值 ± 标 准 差 /(mg g -1 ) 0.33±0.09 0.27±0.07 0.58±0.19 0.25±0.07 变 异 系 数 /% 27.27 25.93 32.76 28 极 小 值 /(mg g -1 ) 0.21 0.19 0.29 0.19 极 大 值 /(mg g -1 ) 0.52 0.46 0.96 0.43 中 药 材 含 量 相 当, 甚 至 显 著 高 于 金 银 花 连 翘 等 一 些 常 用 药 材 黄 酮 类 化 合 物 是 杜 仲 叶 中 的 重 要 活 性 成 分, 本 研 究 发 现, 杜 仲 叶 中 总 黄 酮 含 量 与 枸 杞 (Lyci um chinense Mil.) 和 党 参 (Codonopsis pilosula (Franch) Nannf.) 中 的 含 量 相 近, 是 白 术 (Atrac tylodesmacrocephalakoidz.) 的 2 倍, 银 杏 (Ginkgobi lobalinn.) 的 4 倍 左 右 [24] 杜 仲 叶 中 异 槲 皮 苷 与 桑 叶 和 罗 布 麻 (Apocynum venetum Linn.) 的 含 量 相 近, 是 川 楝 子 (MeliatoosendanSieb.) 的 2 倍 左 右 [25-27] 说 明 杜 仲 叶 具 有 较 高 的 药 用 价 值, 其 开 发 利 用 潜 力 巨 大 同 时, 不 同 有 效 成 分 在 不 同 种 质 杜 仲 叶 具 有 较 高 的 遗 传 多 样 性, 进 而 为 优 良 种 质 选 育 提 供 了 可 能 对 黄 连 木 雌 雄 株 叶 片 几 种 保 护 酶 活 性 及 主 要 内 含 物 含 量 进 行 研 究 发 现, 丙 二 醛 含 量 和 可 溶 性 蛋 白 含 量 在 雌 雄 株 叶 片 中 无 显 著 差 异 [28] 本 研 究 也 得 到 相 似 的 结 论, 即 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 及 槲 皮 素 在 杜 仲 雌 雄 株 叶 中 的 含 量 差 异 不 显 著 据 文 献 报 道 [29], 在 相 关 性 极 强 的 性 状 间 进 行 选 择 时, 对 其 中 一 个 性 状 进 行 改 良, 可 以 同 时 影 响 其 他 性 状 本 研 究 通 过 4 种 成 分 间 相 关 性 分 析 发 现, 异 槲 皮 苷 总 黄 酮 和 多 酚 之 间 呈 显 著 或 极 显 著 的 正 相 关 关 系 本 研 究 采 用 欧 氏 平 方 距 离 法 将 105 份 杜 仲 种 质 资 源 分 为 4 大 类 群, 聚 类 结 果 显 示, 杜 仲 种 质 资 源 叶 中 黄 酮 类 化 合 物 和 多 酚 含 量 与 种 质 来 源 无 明 显 的 规 [30] 律 性 孙 建 等 对 芝 麻 种 质 叶 中 叶 绿 素 含 量 进 行 多 样 性 分 析, 发 现 聚 类 结 果 与 种 质 来 源 种 质 类 型 间 无 明 显 的 规 律 性, 这 与 本 研 究 结 果 一 致 4 结 论 杜 仲 种 质 资 源 叶 中 多 酚 总 黄 酮 异 槲 皮 苷 及 槲 皮 素 含 量 具 有 丰 富 的 多 样 性, 且 不 同 种 质 间 4 种 成 分 含 量 存 在 明 显 的 差 异, 这 为 优 良 种 质 资 源 的 选 择 提 供 了 可 能 综 合 评 价 4 种 成 分 含 量 高 低, 可 将 杜 仲 种 质 资 源 分 为 4 大 类 群, 其 中, 类 群 Ⅲ 为 高 含 量 类 群, 共 有 13 份 种 质, 不 仅 为 后 期 优 良 叶 用 品 种 的 开 发 利 用 提 供 基 础 原 材 料, 也 为 杜 仲 活 性 成 分 的 遗 传 改 良 提 供 了 可 能 参 考 文 献 : [1] 杜 红 岩, 胡 文 臻, 俞 锐. 杜 仲 产 业 绿 皮 书 [M]. 北 京 : 社 会 科 学 文 献 出 版 社,2013. [2] 杜 红 岩, 赵 戈. 论 我 国 杜 仲 产 业 化 与 培 育 技 术 的 发 展 [J]. 林 业 科 学 研 究,2000,13(5):554-561 [3] 黄 海 燕, 杜 红 岩, 乌 云 塔 娜, 等. 基 于 SSR 分 子 标 记 的 杜 仲 遗 传 多 样 性 体 系 建 立 [J]. 林 业 科 学 研 究,2013,26(6):795-799. [4] 杜 红 岩. 杜 仲 活 性 成 分 与 药 理 研 究 的 新 进 展 [J]. 经 济 林 研 究, 2004,21(2):58-61. [5] 王 璐, 杜 兰 英, 杜 红 岩. 杜 仲 饲 料 添 加 剂 的 研 究 进 展 [J]. 饲 料 研 究,2014(19):29-31. [6] 艾 伦 强, 李 婷 婷, 何 银 生, 等. 杜 仲 的 应 用 研 究 进 展 [J]. 亚 太 传 统 医 药,2010(10):163-165. [7] 董 尚 胜, 翁 蔚, 查 森 俊, 等. 杜 仲 茶 风 味 化 学 的 研 究 Ⅲ. 复 火 对 杜 仲 红 茶 品 质 成 分 的 影 响 [J]. 林 业 科 学 研 究,2001,14(1): 93-96. [8] 冯 晗, 周 宏 灏, 欧 阳 冬 生. 杜 仲 的 化 学 成 分 及 药 理 作 用 研 究 进 展 [J]. 中 国 临 床 药 理 学 和 治 疗 学,2015,20(6):713-720.
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