迟 缓 爱 德 华 氏 菌 对 牙 鲆 免 疫 器 官 的 影 响 刘 云 姜 明 姜 国 良 杨 栋 张 士 璀 青 岛 海 洋 大 学 提 要 当 经 口 腔 灌 注 大 量 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 后 牙 鲆 的 头 肾 和 脾 脏 内 的 免 疫 细 胞 活 性 增 强 表 现 为 单 核 细 胞 数 量 增 加 颗 粒 细 胞 内 产 生 大 量 的 颗 粒 以 及 颗 粒 吞 噬 作 用 的 增 强 研 究 结 果 还 表 明 病 菌 也 会 对 免 疫 器 官 产 生 损 害 可 造 成 细 胞 水 肿 膜 性 结 构 破 坏 及 细 胞 坏 死 本 文 详 细 观 察 了 牙 鲆 肾! 脾! 肝! 肠 及 血 液 的 显 微 结 构 和 肾! 脾! 肝 的 超 微 结 构 的 变 化 研 究 结 果 对 疫 苗 的 应 用 提 供 了 良 好 的 细 胞 学 基 础 关 键 词 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 牙 鲆 免 疫 器 官 随 着 鱼 类 人 工 养 殖 规 模 的 不 断 扩 大 鱼 类 病 害 也 逐 渐 增 多 据 年 报 道 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 病 Εδ ωαρδσιελλα ταρδα 是 流 行 于 淡 水 和 海 水 鱼 类 的 一 种 常 见 细 菌 病 有 关 鳗 鲡 的 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 病 病 原 学 和 组 织 病 理 学 研 究 已 见 郭 琼 林 等 年 韩 先 朴 等 年 的 报 道 而 海 水 鱼 类 牙 鲆 的 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 病 是 由 等 于 年 首 次 报 道 主 要 表 现 为 腹 水 肝! 肾 出 血! 肥 大 现 在 这 种 病 已 经 成 为 海 水 人 工 养 殖 牙 鲆 的 危 害 较 重 的 三 大 疾 病 之 一 据 李 亚 南 等 年 报 道 由 于 鱼 病 的 产 生 是 鱼 体 本 身 免 疫 机 能 受 抑 制 的 结 果 因 此 研 究 病 菌 与 鱼 体 免 疫 之 间 的 关 系! 疫 苗 与 鱼 体 免 疫 之 间 的 关 系 极 具 理 论 和 应 用 价 国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 规 划 项 目 课 题 号 国 家 海 洋 项 目 22 号 收 稿 日 期 22 修 回 日 期 22
值 然 而 这 方 面 的 报 道 尚 不 多 作 者 利 用 光 学 显 微 与 电 子 显 微 镜 技 术 研 究 了 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 对 牙 鲆 Παραλιχητηψσ ολιϖαχε υσ 免 疫 器 官 的 影 响 和 病 理 学 变 化 并 将 研 究 结 果 报 告 如 下 材 料 和 方 法 试 验 鱼 牙 鲆 幼 鱼 购 于 山 东 威 海 海 珍 品 养 殖 公 司 平 均 体 长 每 次 购 得 的 幼 鱼 都 置 于 水 族 箱 暂 养 周 左 右 换 水 水 温 控 制 在? ε 充 氧 并 用 颗 粒 饵 料 饲 喂 正 式 实 验 时 停 止 饲 喂 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 来 自 天 津 动 植 物 所 将 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 活 化! 复 壮! 分 离 转 接 淡 水 的 斜 面 ε 培 养 后 用 无 颗 粒 生 理 盐 水 洗 下 菌 苔 配 成 ƒ 悬 液 口 灌 后 取 材 同 时 设 置 对 照 组 从 腹 水 明 显 的 病 鱼 中 分 离 病 菌 进 行 特 征 鉴 定 检 验 同 时 在 ε 冷 冻 干 燥 保 存 光 镜 样 品 取 材 包 括 肾! 肝! 脾 和 肠 等 器 官 组 织 用 氏 液 固 定! 脱 水! 石 蜡 包 埋 切 片 Λ 苏 木 精 2 曙 红 染 色 同 时 取 血 液 样 品 空 气 干 燥 瑞 氏 染 色 欧 林 巴 斯 显 微 镜 观 察 摄 影 电 镜 样 品 取 头 肾! 脾 和 肝 切 成 小 块 用 戊 二 醛 预 固 定 和 锇 酸 后 固 定 梯 度 乙 醇 脱 水 包 埋 超 薄 切 片 机 切 片 醋 酸 铀 2 柠 檬 酸 铅 双 重 染 色 日 立 型 透 射 电 镜 观 察 及 摄 影 结 果 病 原 菌 的 特 征 革 兰 氏 阴 性 杆 菌 菌 体 直! 单 个 ε 培 养 菌 体 Λ Λ 多 数 为 Λ Λ 随 培 养 时 间 延 长 菌 体 缩 短 长 时 间 培 养 菌 体 会 有 很 多 呈 球 形 具 有 周 鞭 毛 可 运 动 无 荚 膜 无 芽 孢 在 普 通 培 养 基 上 ε 培 养 菌 落 直 径 为 左 右 正 圆 形 灰 白 色 透 明 隆 起 周 缘 光 滑 能 在 培 养 基 上 生 长 主 要 免 疫 器 官 及 组 织 的 显 微 结 构 的 变 化 肾 牙 鲆 的 肾 由 头 肾 和 中 肾 组 成 头 肾 为 淋 巴 样 组 织 中 肾 为 泌 尿 组 织 感 染 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 后 肾 间 质 内 的 造 血 组 织 明 显 增 多 肾 间 质 呈 现 条 索 状 图 2 肾 小 体 血 管 球 充 血! 变 形 甚 至 解 体 血 球 囊 增 宽 肾 小 管 特 别 是 近 曲 小 管 上 皮 细 胞 坏 死 细 胞 间 隙 不 清 细 胞 质 内 出 现 空 泡 肾 小 管 与 周 围 间 质 组 织 分 离 有 的 已 经 完 全 解 体 成 碎 片 夹 杂 于 间 质 组 织 之 中 图 2 脾 脾 的 脾 索 呈 现 萎 缩 的 条 索 状 脾 髓 内 充 满 了 红 细 胞 白 髓 萎 缩 图 2 肝 牙 鲆 的 肝 实 质 组 织 变 化 明 显 正 常 的 肝 组 织 肝 板 清 晰 肝 细 胞 多 角 形 排 列 紧 密 图 2 感 染 后 肝 组 织 以 中 央 静 脉 为 中 心 呈 灶 性 病 变 细 胞 索 间 隙 增 大 肝 窦 中 枯 否 氏 细 胞 增 多 图 2 血 管 亦 发 生 扩 张 和 空 泡 化 肠 肠 的 变 化 不 大 只 是 表 现 在 肠 黏 膜 上 的 黏 液 细 胞 膨 胀 图 2 除 此 之 外 未 见 异 常 血 液 感 染 后 血 液 中 的 白 细 胞 数 量 上 变 化 较 大 淋 巴 细 胞 由 降 低 到 而 单 核 细 胞 的 数 量 却 从 增 加 到 Τ 检 验 差 异 显 著 Π 颗 粒 细 胞 的 数 量 变 化 不 显 著 23 主 要 免 疫 器 官 的 超 微 结 构 变 化 头 肾 头 肾 内 细 胞 变 化 主 要 表 现 为 单 核 细 胞 的 细 胞 质 空 泡 化 图 2 颗 粒 细 胞 的 小 型 颗 粒 异 常 增 多 大 型 颗 粒 由 单 位 膜 包 围 内 质 不 均 匀 有 的 有 内 含 物 有 的 已 经 空 泡 化 图 2!2 颗 粒 细 胞 的 细 胞 核 异 质 化 降 低 核 膜 部 分 溶 解 图 2!2 髓 样 体 颗 粒 增 多 图 2 脾 红 细 胞 的 核 膜 肿 胀 颗 粒 细 胞 溶 解 大 量 颗 粒 散 在 间 质 之 中 图 2 巨 噬 细 胞 细 胞 质 内 空 泡 化 并 有 吞 噬 红 细 胞 的 现 象 图 2 部 分 颗 粒 细 胞 的 细 胞 核 的 染 色 质 在 核 浆 内 散 乱 分 布 核 膜 部 分 溶 解 有 的 整 个 核 裂 解 图 2 线 粒 体 数 量 减 少 内 嵴 肿 大 局 部 断 裂! 空 泡 化 内 质 网 变 形 膜 上 颗 粒 脱 落 严 重 时 会 膨 胀 成 泡 状 颗 粒 细 胞 的 颗 粒 变 化 更 加 多 样 化 有 包 裹 细 胞 碎 片 的 电 子 密 度 极 高 的 大 型 颗 粒 图 22 有 在 均 质 颗 粒 内 具 有 较 高 电 子 密 度 芯 的 中 型 颗 粒 有 无 单 位 膜 包 围 的 低 密 度 小 型 颗 粒 图 2 大 量 细 小 颗 粒 图 2 以 及 空 泡 化 的 颗 粒 图 2 肝 肝 细 胞 间 分 界 不 清 晰 只 在 肝 细 胞 与 肝 细 胞 间 接 近 血 窦 处 可 见 到 桥 粒 结 构 肝 细 胞 的 细 胞 核 多 数 表 现 为 染 色 质 散 乱 有 空 泡 核 仁 消 失 部 分 核 膜 溶 解! 变 形 肝 细 胞 质 内 有 多 个 灶 性 坏 死 病 灶 大 量 线 粒 体 肿 胀 成 圆 形 内 嵴 变 形! 溶 解 以 至 消 失 严 重 者 整 个 线 粒 体 呈 空 泡 化 图 2 脂 滴 较 多 部 分 内
图 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 对 牙 鲆 免 疫 器 官 的 影 响 2 感 染 后 牙 鲆 的 头 肾 2 感 染 后 牙 鲆 的 中 肾 示 血 管 球 变 形 血 球 囊 增 宽 近 曲 小 管 解 体 2 感 染 后 牙 鲆 的 脾 示 红 髓 和 白 髓 2 正 常 牙 鲆 的 肝 2 感 染 后 牙 鲆 的 肝 示 静 脉 扩 张 肝 细 胞 索 状 分 布 2 感 染 后 牙 鲆 的 肠 示 膨 胀 的 黏 液 细 胞 2 感 染 后 的 头 肾 内 的 单 核 细 胞 示 空 泡 2 感 染 后 的 头 肾 内 的 颗 粒 细 胞 示 细 胞 核 部 分 溶 解 小 型 颗 粒 增 多 大 型 颗 粒 空 泡 化 2 感 染 后 头 肾 内 的 颗 粒 细 胞 示 细 胞 核 膜 溶 解 颗 粒 不 均 匀 2 感 染 后 的 头 肾 内 的 颗 粒 细 胞 示 髓 样 颗 粒 ƒ Εδ ωαρδσιελλα ταρδα Παραλιχητηψσολιϖαχε υσ 2 Παραλιχητηψσολιϖαχε υσ 2 Παραλιχητηψσολιϖαχε υσ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 Π.ολιϖαχε υσ 2 Π.ολιϖαχε υσ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 2 Π. ολιϖαχε υσ χ 2 Π.ολιϖαχε υσ χ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 海 洋 科 学 年 第 卷 第 期
图 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 对 牙 鲆 免 疫 器 官 的 影 响 2 感 染 后 的 脾 示 红 细 胞 和 颗 粒 细 胞 2 感 染 后 的 脾 示 巨 噬 细 胞 吞 噬 红 细 胞 2 感 染 后 牙 鲆 的 脾 示 细 胞 核 溶 解 线 粒 体 肿 大 2 感 染 后 牙 鲆 的 脾 示 空 泡 化 颗 粒 及 密 度 较 高 颗 粒 2 感 染 后 牙 鲆 的 肝 2 感 染 后 牙 鲆 的 肝 示 包 含 絮 状 物 的 次 级 溶 酶 体 2 感 染 后 牙 鲆 的 肝 血 窦 示 断 裂 的 指 状 微 绒 毛! 髓 样 小 体 及 桥 粒 2 感 染 后 牙 鲆 的 肝 血 窦 内 的 免 疫 细 胞 示 淋 巴 细 胞 和 颗 粒 细 胞 ƒ Εδ ωαρδσιελλα ταρδα Παραλιχητηψσολιϖαχε υσ 2 Παραλιχητηψσολιϖαχε υσ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 2 Π. ολιϖαχε υσ 2 2 2 Π. ολιϖαχε υσ
质 网 扩 张 膨 胀 成 小 的 空 泡 溶 酶 体 极 度 膨 胀 成 大 圆 形 包 含 颗 粒 内 含 物 或 絮 状 物 次 级 溶 酶 体 增 多 图 2 肝 脏 中 肝 细 胞 的 基 浆 电 子 密 度 变 淡 肝 血 窦 的 内 皮 细 胞 消 失 肝 细 胞 指 状 微 绒 毛 缩 短! 断 裂 部 分 溶 解 有 的 血 窦 中 还 可 以 见 到 髓 样 小 体 图 2 肝 血 窦 内 的 免 疫 细 胞 也 有 变 化 淋 巴 细 胞! 单 核 细 胞 的 内 嵴 断 裂 线 粒 体 肿 胀 成 圆 形 严 重 者 已 经 空 泡 化 颗 粒 细 胞 内 的 线 粒 体 嵴 断 裂! 膨 胀 内 质 网 溶 解 核 糖 体 脱 落 且 部 分 游 离 核 糖 体 消 失 颗 粒 细 胞 均 质 有 少 数 颗 粒 内 有 极 细 颗 粒 内 含 物 图 2 讨 论 鱼 类 在 抵 抗 病 原 菌 的 侵 袭 时 机 体 自 身 存 在 着 非 特 异 性 防 御 系 统 和 特 异 性 防 御 系 统 据 安 得 森 年 报 道 一 旦 病 原 菌 侵 入 鱼 体 就 会 出 现 种 结 果 一 是 病 原 菌 不 断 增 殖 鱼 死 亡 二 是 鱼 体 的 防 御 机 能 消 除 了 病 原 菌 三 是 病 原 菌 和 鱼 体 之 间 保 持 平 衡 成 为 带 菌 状 态 据 等 年 报 道 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 细 胞 外 产 物 及 菌 体 成 分 均 含 有 毒 素 牙 鲆 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 的 靶 器 官 主 要 是 肝 脏 和 肾 脏 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 侵 入 后 释 放 其 胞 外 和 胞 内 毒 素 刺 激 肠 黏 膜 分 泌 大 量 黏 液 黏 液 中 的 蛋 白 水 解 酶 等 物 质 可 以 杀 灭 病 菌 病 菌 进 入 血 液 循 环 后 血 液 中 的 单 核 细 胞 剧 增 可 在 病 灶 处 迅 速 发 挥 吞 噬 作 用 免 疫 器 官 如 脾 脏 和 肾 脏 的 造 血 组 织 增 生 特 别 是 颗 粒 细 胞 的 变 化 较 大 一 方 面 有 大 量 的 小 型 颗 粒 产 生 另 一 方 面 大 型 颗 粒 细 胞 的 吞 噬 功 能 增 强 常 出 现 吞 噬 小 体 和 自 噬 小 体 但 是 病 原 菌 在 刺 激 鱼 体 防 御 机 能 功 能 增 强 的 同 时 免 疫 功 能 受 到 了 抑 制 如 血 液 中 的 淋 巴 细 胞 数 量 急 剧 下 降 免 疫 器 官 实 质 结 构 也 在 改 变 主 要 表 现 为 肾 间 质 及 脾 索 呈 现 条 索 状 细 胞 间 隙 扩 大 和 部 分 细 胞 解 体 等 同 时 超 微 结 构 研 究 的 结 果 也 显 示 头 肾! 脾 脏 和 肝 脏 内 的 单 核 细 胞 的 细 胞 质 空 泡 化 颗 粒 细 胞 的 核 膜 部 分 溶 解 所 有 免 疫 细 胞 内 大 量 线 粒 体 已 经 肿 胀 内 嵴 变 形 或 溶 解 等 部 分 内 质 网 扩 张 膨 胀 成 小 的 空 泡 溶 酶 体 极 度 膨 胀 成 大 圆 形 内 质 网! 溶 酶 体 和 指 状 微 绒 毛 等 断 裂! 水 肿 或 溶 解 等 因 而 许 多 正 常 的 生 化 反 应 不 能 进 行 血 液 病 理 学 研 究 的 结 果 如 血 清 总 蛋 白! 胆 固 醇 含 量 降 低 以 及 谷 丙 转 氨 酶! 谷 草 转 氨 酶 活 力 的 增 强 等 也 证 明 了 这 一 点 另 文 所 以 当 口 灌 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 后 病 原 菌 在 鱼 体 内 不 断 增 殖 并 侵 入 鱼 体 肾 和 肝 等 部 位 从 而 影 响 肝! 肾 行 使 正 常 功 能 最 终 导 致 鱼 病 的 发 生 本 项 研 究 结 果 与 等 所 做 病 原 入 侵 的 组 织 定 位 结 果 相 印 证 根 据 以 上 结 果 作 者 进 一 步 推 测 迟 缓 爱 德 华 氏 菌 的 致 病 原 将 导 致 对 鱼 类 免 疫 器 官 的 损 害 而 其 免 疫 原 可 以 促 进 免 疫 细 胞 的 活 性 增 加 关 于 这 一 点 作 者 还 将 在 研 究 疫 苗 免 疫 的 过 程 中 进 一 步 进 行 验 证 参 考 文 献 池 上 裕 治 养 殖 33 ετ αλ.. Φιση Σχι., 63 ΕΦΦΕΧΤ ΟΦ ΙΝϑΕΧΤΙΟΝ ΟΦ Εδωαρδσιελλα ταρδα ΟΝ ΤΗΕ ΙΜΜΥΝΕ ΟΡΓΑΝ ΟΦ ΒΑΣΤΑΡ ΗΑΛΙΒΥΤ (Παραλιχητηψσο2 λιϖαχευσ) 2 2 (Οχεαν Υνιϖερσιτψ οφ Θινγδαο, Ρεχειϖεδ : Κεψ Ωορδσ: Εδ ωαρδσιελλα ταρδα, Παραλιχητηψσολιϖαχε υσ), Αβστραχτ Παραλιχητηψσολιϖαχε υσ Εδ ωαρδσιελλα ταρδα 2 本 文 编 辑 刘 珊 珊 海 洋 科 学 年 第 卷 第 期