小 青 龙 汤 对 肺 源 性 心 脏 病 大 鼠 血 浆 Ang Ⅱ ALD Na + -K + -ATP 酶 含 量 和 血 浆 中 AT 1 * 和 AT 2 mrna 的 表 达 影 响 1 2 3 3 1 (1. 安 徽 中 医 药 大 学 第 一 附 属 医 院 合 肥 230031;2. 滁 州 市 中 西 结 合 医 院 滁 州 239000; 3. 安 徽 中 医 药 大 学 中 医 临 床 学 院 合 肥 230038) 摘 要 Ang ALD Na + -K + -ATP AT 1 AT 2 mrna Wistar 60 20 ELISA Ang ALD Na + -K + -ATP PCR AT 1 AT 2 mrna Ang ALD Na + -K + -ATP P<0.05 P<0.01 Ang ALD Na + -K + -ATP P<0.05 AT 1 mrna AT 2 mrna P<0.05 P<0.01 AT 1 mrna AT 2 mrna P<0.01 AT 1 AT 2 mrna ALD 关 键 词 doi 10.11842/wst.2015.08.027 R285.5 A Cor Pulmonale CP Ang 2 mrna 1 材 料 与 方 法, 1.1 动 物 Wistar 60 - - Renin- 250-300 g Angiotensin-Aldosterone System RAAS SCXK 2011-002 Angio- 3 20 tensin Ang Aldosterone ALD 1.2 主 要 试 剂 与 仪 器 Na + -K + -ATP Ang 1 Sigma H102017 2014-10-26 2014-04-01 Ang- Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay ELISA ALD ELISA 81001520 2104
Na + -K + -ATP ELISA 14 Sigma YY40004 43273 2.5 ml 0.9% 43138 RNAiso Plus Total RNA 1.3.3 Ang Ⅱ ALD 及 Na + -K + -ATP 酶 指 标 检 测 TaKaRa D9108A ReverTra qpcr RT TOYOBO FSQ-101 SYBR Premix Ex Taq II Perfect Real Time TaKaRa 2 h 20 min 3 000 r min -1 DRR081A 1.3.4 荧 光 定 量 PCR 检 测 大 鼠 血 浆 中 AT 1 型 和 AT 2 型 受 体 mrna 的 表 达 DNX-9620 400 μl WD-2102A Ethylene Diamine Tetraacetic Acid EDTA ABI7500 PCR RNAiso Plus RNA 1.3 方 法 1.3.1 模 型 建 立 [1] Brown L [2] Diethylpyrocarbonate DEPC 1-2 10 μl 37 50 min 98 5 min 査 0 5 35 cm 30 min NCBI Genebank primer premier 1 m 3 0 5 6.0 1 h 20 13 1 mg 1.1 mg Ct 6 7 1.3.5 大 鼠 肺 动 脉 压 的 测 定 3 4 8 2 Monocrotaline MCT 2% 10 ml kg -1 1% 50 mg kg -1 1 2 1.5 cm 1.3.2 药 物 干 预 9 g 6 g 9 g 3 g 9 g 3 g 3 g 6 g 1.3.6 右 心 肥 厚 指 标 测 定 Ang ALD Na + -K + -ATP ELISA 10 μl 5 RT Buffer 2 μl RT Enzyme Mix 0.5 μl PrimerMix 0.5 μl RNA 2 μl 1 cm 0.9 mm 0.6 mm 0.056 g ml -1 1 ml/100 g d -1 R 表 1 引 物 名 称 及 序 列 引 物 /primer 序 列 /Sequence(5 3 ) 引 物 - R- AT 1 -F 5 -GGTCCCCCACCAAATATTCA-3 103 bp R- AT 1 -R 5 -GGTTATGGGCATGGCAGTGT-3 引 物 - R- AT 2 -F 5 -TTTCCGGGATGTCAGAACCA-3 104 bp R- AT 2 -R 5 -TCATTAAGGCAATCCCAGCAG-3 引 物 - R-GAPDH -F 5 -TGGTCTACATGTTCCAGTATGACT-3 134 bp R-GAPDH -R 5 -CCATTTGATGTTAGCGGGATCTC-3 2105
1.4 统 计 学 处 理 L+S R/ L+S SPSS 17.0 AT 2 mrna P<0.05 P>0.05 3 Least-significant 2.3 各 组 大 鼠 肺 动 脉 压 和 右 心 室 肥 厚 指 标 的 比 较 Difference LSD Games-Howell P<0.05 P<0.01 2 结 果 2.1 各 组 大 鼠 血 浆 中 Ang Ⅱ ALD 及 Na + -K + - ATP 酶 含 量 变 化 的 比 较 Ang P<0.01 4 ALD Na + -K + -ATP P<0.01 3 讨 论 Ang ALD Na + - K + -ATP P<0.05 MCT P 450 P>0.05 2 2.2 宣 肺 利 水 法 对 CP 大 鼠 血 浆 中 AT 1 型 和 AT 2 型 受 体 mrna 表 达 的 比 较 mrna AT 2 mrna P<0.05 P<0.01 AT 1 mrna P<0.01 P<0.01 P>0.05 [4] MCT AT 1 [5] 表 2 各 组 大 鼠 肺 组 织 中 Ang Ⅱ ALDNa + -K + -ATP 酶 含 量 的 比 较 ( Ang,n=10) ALD Na + -K + -ATP 169.80 7.98 135.33 14.78 4.94 1.62 221.27 32.62 ** 169.92 13.75 ** 7.52 0.51 ** 185.49 11.83 # 141.58 22.68 # 4.82 1.11 # [6] P<0.01 P>0.05 ** P<0.01 # P<0.05 P<0.01 P<0.01 10 [3] n 10 表 3 各 组 大 鼠 血 浆 中 AT 1 mrna 和 AT 2 mrna 含 量 表 达 的 比 较 (,n=6) AT 1 mrna AT 2 mrna 1.88E-04 6.67E-05 2.67E-03 1.15E-03 1.04E-02 3.81E-03 ** 2.53E-05 9.14E-07 * 1.21E-03 9.29E-04 # 2.40E-03 7.14E-04 # Ang 1 AT 1 Ang 2 AT 2 Ang 3 4 AT 1 AT 2 30% Ang 2 Ang AT 1 [7] * P<0.05 ** P<0.01 Ang AT 2 [8] # P<0.05 n 6 AT 1 mrna [3] 2106
AT 2 mrna Ang 表 4 各 组 大 鼠 肺 动 脉 压 和 右 心 肥 厚 指 标 [R/(L+S)] 的 测 定 AT 1 mrna AT 2 mrna 的 比 较 (,n=10) [9] AT 1 AT mph/mmhg R/ L+S 2 [10] 13.57 0.97 0.284 0.031 Ang 42.32 1.16 ** 0.539 0.032 ** 14.39 0.52 ## 0.307 0.036 ## ** ## P<0.01 Ang [11] [13,14] Ang P<0.01 RAAS Ang [15] ALD Na + -K + -ATP Na + Na + [12] [16] RAAS AT 2 mrna P<0.05 AT 1 Ang P<0.01 Ang AT 1 ALD Na + - Ang K + -ATP P<0.01 Na + 参 考 文 献 1 李 泽 庚, 王 传 博, 彭 波, 等. 慢 性 阻 塞 性 肺 疾 病 痰 瘀 阻 肺 证 大 鼠 模 43-45. ( 27(1, 2010, 药 型 的 建 立. 天 津 中 医 2 Brown L, Miller J, Dagger A, et al. Cardiac and vascular responses after monocrotaline- induced hypertrophy in rats. J Cardiovasc Pharmacol, 108-115. ( 31(1 1998, 3 王 浩, 李 达, 徐 彬, 等. 宣 肺 利 水 法 对 肺 源 性 心 脏 病 大 鼠 心 肺 相 关 760-763. ( 15(4, 2013, 化 指 标 的 改 变. 世 界 科 学 技 术 - 中 医 药 现 代 4 陈 瑞 芬, 周 光 德, 曹 文 军, 等. 野 百 合 碱 诱 导 实 验 性 肺 动 脉 高 压 病 1-4. ( 21(1, 2002, 报 理 形 态 观 察. 电 子 显 微 学 5 王 俊 东, 杨 达 宽, 李 治 纲, 等. 野 百 合 碱 诱 导 大 鼠 肺 动 脉 高 压 模 型 5237-5240. ( 15(28, 2011, 复 的 建 立. 中 国 组 织 工 程 研 究 与 临 床 康 2008, 社 6 彭 成. 中 医 药 动 物 试 验 方 法 学. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 279-280. 7 de Gasparo M, Catt K J, Inagami T, et al. International union of pharmacology. XXIII. The angiotensin II receptors. Pharmacol Rev, 415-472. ( 52(3 2000, 8 Jöhren O, Dendorfer A, Dominiak P. Cardiovascular and renal function of 460-467. ( 62(3 Res, 2004, angiotensin Ⅱ type-2 receptors. Cardiovasc 9 Yayama K, Horii M, Hiyoshi H, et al. Up-regulation of angiotensin Ⅱ type2 receptor in rat thoracic aorta by pressure-overload. J 736-743. ( 308(2 Ther, 2004, Pharmacol Exp 10 石 海 莲, 马 春 来, 刘 燕, 等. 黄 芪 皂 苷 甲 抑 制 压 力 过 载 型 心 肌 肥 厚 ( 34(24, 2009, 志 大 鼠 肾 素 - 血 管 紧 张 素 的 过 度 激 活. 中 国 中 药 杂 3242-3246. 11 祝 美 珍, 胡 国 恒, 肖 艳 芬, 等. 淤 痰 热 毒 并 治 抗 急 性 脑 缺 血 损 伤 的 392-393. ( 20(2, 2009, 药 策 略 探 讨. 时 珍 国 医 国 12 高 振, 刘 莹 莹, 哈 木 拉 提 吾 甫 尔, 等. 小 青 龙 汤 联 合 西 药 内 服 治 疗 慢 性 阻 塞 性 肺 疾 病 发 作 期 临 床 疗 效 的 系 统 评 价. 世 界 科 学 技 术 - 2107
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