医学研究杂志 2016 年 3 月第 45 卷第 3 期 论著 Wnt/β-cateninsignaling[J].MolCancerTher,2013,12(9): 1848-1859 5 魏铭, 温伟红, 秦卫军. 肾细胞癌相关信号通路的研究进展 [J]. 中华泌尿外科杂志,2014,35(12):941-944 6 HirataH,HinodaY,MajidS,etal.DICKKOPF-4activatesthe noncanonicalc-jun-nh2kinasesignalingpathwaywhileinhibiting thewnt-canonicalpathwayinhumanrenalcelcarcinoma[j]. Cancer,2011,117(8):1649-1660 7 KumazoeM,SugiharaK,TsukamotoS,etal.67-kDalamininre ceptorincreasescgmptoinducecancer-selectiveapoptosis[j].j ClinInvest,2013,123(2):787-799 8 WhitJD,LiN,TinsleyHN,etal.Anovelsulindacderivativethat potentlysuppressescolontumorcelgrowthbyinhibitingcgmpphos phodiesteraseandβ-catenintranscriptionalactivity[j].cancerprev Res,2012,5(6):822-833 9 ZhuB,VemavarapuL,ThompsonWJ,etal.Suppressionofcyclic GMP-specificphosphodiesterase5promotesapoptosisandinhibits growthinht29cels[j].jcelbiochem,2005,94(2):336-350 10 LiQ,ShuY.Pharmacologicalmodulationofcytotoxicityandcelular uptakeofanti-cancerdrugsbypde5inhibitorsinlungcancercels [J].Pharm Res,2014,31(1):86-96 11 TinsleyHN,GaryBD,KeetonAB,etal.InhibitionofPDE5bysu lindacsulfideselectivelyinducesapoptosisandatenuatesoncogenic Wnt/β-catenin-mediatedtranscriptioninhumanbreasttumorcels [J].CancerPrevRes,2011,4(8):1275-1284 12 PiazzaGA,ThompsonWJ,PamukcuR,etal.Exisulind,anovel proapoptoticdrug,inhibitsraturinary bladdertumorigenesis[j]. CancerRes,2001,61(10):3961-3968 13 Lim JTE,PiazaGA,PamukcuR,etal.Exisulindandrelatedcom poundsinhibitexpressionandfunctionoftheandrogenreceptorinhu manprostatecancercels[j].clincancerres,2003,9(13):4972-4982 14 KumazoeM,Kim Y,BaeJ,etal.Phosphodiesterase5inhibitoracts asapotentagentsensitizingacutemyeloidleukemiacelsto67- kdalamininreceptor-dependentapoptosis[j].febslet,2013,578 (18):3052-3057 ( 收稿日期 :2015-08-30) ( 修回日期 :2015-09-18) 二烯丙基二硫对口腔鳞癌 CAL-27 细胞增殖及凋亡的研究 刘鲁亮李国林顾博宇迟惠熔孙金环郭福林 摘要目的探讨二烯丙基二硫 (dialyldisulfide,dads) 对口腔鳞癌 CAL-27 细胞的增殖抑制及促进凋亡的作用 方法体外培养口腔鳞癌 CAL-27 细胞, 采用不同浓度二烯丙基二硫对 CAL-27 细胞进行干预, 并设立对照组, 采用倒置显微镜观察细胞的形态学改变,MTT 法检测细胞的增殖情况,Hoechst33342 染色法检测细胞凋亡, 用比色法检测 caspase-3 活性的改变 结果倒置相差显微镜下观察对照组的细胞贴壁, 形态呈多边形, 生长活跃 ; 实验组细胞形态改变, 细胞脱壁, 变小 变圆, 细胞膜皱缩 MTT 结果显示, 随着浓度的增加, 时间的延长, 二烯丙基二硫对 CAL-27 细胞的生长及增殖有显著的抑制作用, 并且各实验组相比及实验组与对照组相比, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 荧光显微镜下观察到经 Hoechst33342 染色的凋亡细胞 实验组 caspase-3 活性较正常对照组明显增高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 结论二烯丙基二硫体外能抑制 CAL-27 的细胞增殖, 呈一定的时间及剂量依赖性, 并且诱导细胞凋亡,caspase-3 可能参与了细胞凋亡的调控 关键词口腔癌 CAL-27 细胞二烯丙基二硫细胞增殖细胞凋亡中图分类号 R78 文献标识码 A DOI 10.11969/j.issn.1673 548X.2016.03.030 ResearchontheProliferationandApoptosisofCAL-27InducedbyDialylDisulfide. LiuLuliang,LiGuolin,GuBoyu,etal.Depart mentoforalandmaxilofacialsurgery,afiliatedstomatologicalhospital,harbinmedicaluniversity,heilongjiang150001,china Abstract Objective ToinvestigatetheefectsonCAL-27celsproliferationandapoptosisinducedbyDADS.Methods CAL- 27celswereculturedinvitro.TheoralsquamouscelcarcinomaCAL-27celsculturedinmediumweredeltwithdiferentconcentration ofdadsatdiferenttime(24h,48h,72h).morphologicalchangeofcelswasobservedbylightmicroscope.theinfluenceonthecel proliferationwasinvestigatedbymttmethod.thecelapoptosiswasdetectedbyhoechst33342fluorescentstaining.moreover,thechan 基金项目 : 哈尔滨医科大学附属第一医院基金资助项目 (2012B011) 作者单位 :150001 哈尔滨医科大学附属口腔医院口腔颌面外科通讯作者 : 郭福林, 副教授, 电子信箱 :flguo1967@126.com 115
gesofcaspase-3activititywasevaluatedbycolorimetericassay.results Underlightmicroscope,morphologyofcelshasnotchanged inthecontrol,celgrowadherent,polygonalandactively.however,morphologyofcelstreatedbydadshaschanged.thecelsbecame smalerandround,andshrankcelsincreased.comparedwiththecontrol,thecelsoftheexperimentgroupwereobviouslyinhibited. Andtherewassignificantdiferenceofproliferationinhibitionbetweenthem(P<0.05).Atimeanddose-dependentwasdetectedbythe MTTmethod.Thesignificantcelapoptosischangecouldbeobservedwithfluorescentmicroscopy.Thelevelofcaspase-3activitywere higherintheexperimentgroupthancontrolgroup(p<0.05).conclusion DADSinhibitsthegrowthandproliferationofCAL-27cels andinduceapoptosis.furthermore,caspase-3maybeinvolvedintheprocessofapoptosis. Keywords Oralcancer;CAL-27cel;DialylDisulfide;Celproliferation;Celapoptosis 口腔癌是一种很常见的恶性癌症, 在所有常见的癌症中占第 6 位, 具有很高的发生率和病死率 [1~3] 许多研究发现, 人体对大蒜摄入量的增加与多种癌症的发生率下降有密切的关系 [4] 大蒜作为一种抗癌食物, 在肿瘤防治方面的研究受到国内外研究者的广泛关注 二烯丙基二硫 (dialyldisulfide,dads), 是大蒜中的一种脂溶性有效成分, 能够抑制肿瘤细胞的生长, 对多种肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用 [5,6] 近年来, 许多研究表明 DADS 对许多肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用, 能够促进肿瘤细胞的凋亡, 然而对口腔鳞癌细胞鲜有研究 本实验通过应用不同浓度的 DADS 对体外培养的 CAL-27 细胞进行干预, 初步探讨 DADS 对 CAL-27 细胞的凋亡作用, 为临床治疗口腔鳞癌提供一定的参考 材料与方法 1. 材料 : 人舌鳞癌 CAL-27 细胞系 ( 上海交通大学惠赠 ) DADS( 美国 Sigma 公司 ), 纯度 80%, 与 Tween80 以 1 2 的比例充分溶解, 加入 0.9% 生理盐水稀释 1000 倍于 -20 保存, 使用时以细胞培养液稀释成工作浓度 DMEM( 美国 Hyclone 公司 ); 胎牛血清 ( 美国 Biowest 公司 );0 4% TrypanBlue,MTT, DMSO( 美国 Sigma 公司 );Hoechst33342( 碧云天生物试剂公司 );caspase3colorimetricasaykit caspase8 ColorimetricAssayKit( 南方凯基生物 ) 酶标仪为美国 Biotek 公司产品 ; 超净工作台为上海博迅实业有限公司 ; 倒置相差显微镜 荧光显微镜均购自日本 O lympus 公司 2. 方法 :(1) 细胞培养和实验分组 : 将口腔鳞癌 CAL-27 细胞常规培养于含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养液, 且含 1% 双抗 (100U/ml 青霉素 100mg/L 链霉素 ), 于 5%CO 2 37 培养箱中培养 每日观察细胞生长情况,2~3 天传代 1 次, 取对数生长期细胞用于实验 随机分成对照组和实验组 (DADS 药物浓度为 25 50 100 200mg/L) 用于实验 (2) 细胞形态学观察 : 将对数生长期的 CAL-27 细胞, 以每孔 5000 116 个接种于 3 块 96 孔培养板, 于培养箱内培养 24h 后更换培养液, 加入上述不同浓度的 DADS 溶液, 并设空白对照孔 分别培养 24 48 72h 后用倒置显微镜观察细胞形态变化 (3)MTT 实验 : 取对数生长期的 CAL-27 细胞, 用含有胎牛血清 双抗的 DMEM 培养液调整细胞数为 1.0 10 5 /ml 细胞的单细胞悬液, 并接种于 3 块 96 孔培养板中, 每孔 100μl, 放入培养箱中培养 24h 后更换为 DMEM 培养液 设置对照组, 对照组为接种细胞, 不加药物, 且每组设 6 个复孔 再继续培养 24 48 72h 后取出培养板, 每孔加入 MTT 试剂 (5g/L)20μl, 再继续培养 4h 后, 吸去上清液, 每孔加入 150μlDMSO, 震荡摇匀, 充分溶解结晶 在酶标仪上测定 570nm 处的吸光度值, 计算细胞增殖抑制率 细胞抑制率 =( 对照组吸光度值 - 实验组吸光度值 )/ 对照组吸光度值 100%, 实验重复 3 次 (4)Hoechst33342 染色检测细胞凋亡 : 将生长良好的 CAL-27 细胞, 以 2.0 10 5 / 孔接种于 96 孔培养板, 于培养箱内培养 24h 后更换培养液, 加入上述不同浓度的 DADS 溶液, 并设空白对照孔 分别培养 24 48 72h 后, 用 PBS 轻洗两遍后, 用胰蛋白酶消化, 用 PBS 调整细胞数为 2.0 10 5 个 /ml, 每孔 100μl 然后加入 10mg/L,20μlHoechst33342, 用荧光倒置显微镜观察肿瘤细胞核的变化情况 (5)caspase-3 活性测定检测细胞凋亡 : 根据提供的 caspase-3 活性检测试剂盒进行 收集各组的 CAL-27 细胞, 用细胞裂解液将细胞打散, 置于冰上裂解 10min,12000r/min 离心 1min 取 5μl 上清进行蛋白定量, 于酶标仪内测定样本在 595nm 下的吸光度值 (A 595 ); 另取 45μl 加 50μl2 反应缓冲液及 5μlcaspase-3 反应底物, 混匀, 于 37 孵育 1h, 酶标仪内测定光密度值 (A 405 ) 计算 caspase-3 活性, 活性 =A 405 /A 595 3. 统计学方法 : 采用 SPSS13.0 进行统计学分析, 计量资料采用均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 采用单因素方差分析, 组间两两比较采用 t 检验, 以 P<0.05 为差异有统计学意义
医学研究杂志 2016年 3月 结 第 45卷 论 第 3期 果 著 的 DADS 胞形态 变 化 不 明 显 图 1B 经 1 细胞形态 学 观 察 通 过 倒 置 显 微 镜 观 察 正 常 作用 48h后 细胞变形 固 缩 细 胞 膜 不 完 整 图 1C 培养的细胞呈梭形或多边形 胞体大 折光率高 生 长 经 的 DADS作用 72h后 大 量 的 细 胞 变 小 活跃 图 1A 经 的 DADS作 用 24h后 细 变圆 漂浮于培养液中 图 1D 图 1 倒置显微镜下观察 DADS对 CA 27细胞系的影响 100 A 对照组 B 作用 24h C 作用 48h D 作用 72h 2 MTT实 验 结 果 MTT法 对 DADS处 理 的 CA 对 CA 27细胞处理 48h时 c a pa e 3活 性 明 显 增 27细 胞 生 长 情 况 进 行 检 测 结 果 显 示 在 25 高 图 3 各实验组相比及实验组与 对照组 相比 差 200mg 浓度范围内 DADS对 CA 27细胞 的 生长 异均具有统计学意义 P 0 05 有明显的抑制作 用 并 且 呈 时 间 及 浓 度 依 赖 性 如 表 1 在各时间点 各 实 验 组 与 对 照 组 相 比 差 异 有 统 计 05 学意义 P 0 表 1 不同浓度的 DADS对 CA 27细胞系的增殖抑制作用 浓度 25mg 抑制率 100 24h 48h 72h 9 50±3 02 29 27±4 73 54 89±3 05 50mg 21 01±5 63 39 04±6 13 68 65±2 69 28 94±3 56 53 70±3 35 80 43±1 77 200mg 39 43±7 89 65 87±3 77 89 20±2 46 图 3 DADS对 CA 27细胞系作用 48h后 3 Ho e c h t 33342染 色 结 果 荧 光 显 微 镜 下 观 察 c a pa e 3的活性 发现对照组细胞 核 呈 圆 形 实 验 组 细 胞 膜 皱 缩 细 胞 核浓缩聚集 甚至 出 现 了 细 胞 核 碎 裂 形 成 大 小 不 一 的核碎片 提示凋亡细胞的出现 图 2 随着 浓 度增 加 时间延长 凋亡细胞的数目增多 讨 论 口腔鳞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤 之一 目前以综合治疗 为 主 尤 其 对 于 晚 期 患 者 常 发 生 远 处转移 更需要化疗药物进行治疗 传统的化疗 药物 对 人 体 伤 害 较 大 且 常 伴 耐 药 的 发 生 因 而 有 必 要 开发和研究天然的抗肿瘤药物来提高疗效 减少 不 良 反应 DADS是 从 大 蒜 中 分 离 提 取 的 一 种 低 分 子 脂 溶性化合物 研 究 表 明 它 对 白 血 病 前 列 腺 癌 乳 腺 癌 食管癌 胶质瘤等多种肿瘤均有明显的抑制 作用 是一种有很大开 发 潜 力 的 抗 肿 瘤 药 物 7 11 植 物 来 图 2 荧光显微镜下观察 DADS对 CA 27 源药物的抗肿瘤机制通常包括直接杀伤肿瘤细 胞 抑 细胞系凋亡的影响 制肿瘤细胞的增 殖 诱 导 肿 瘤 细 胞 的 分 化 或 者 凋 亡 A 正常组 B 用药组 激活免疫系统包括 细 胞 免 疫 及 体 液 免 疫 从 而 消 除 体 内的肿瘤细胞 12 本研究以 DADS作 用 于 体 外 培 养 4 c a pa e 3活 性 测 定 结 果 不 同 浓 度 的 DADS 的口腔鳞癌 CA 27结果表明 DADS通过抑制口腔 117
鳞癌 CAL-27 细胞的增殖, 促进细胞的凋亡来抗肿瘤 本实验通过倒置显微镜可以观察到, 随着药物浓度的增加, 在 72h 内, 随着时间的延长, 细胞变形固缩, 最后细胞变圆 变小, 漂浮于培养液中, 抑制了细胞的生长 MTT 方法是通过测定活细胞的代谢能力来间接测定活细胞的数目, 本研究应用 MTT 方法检测结果表明,DADS 对口腔鳞癌的增殖具有抑制作用, 且存在时间 - 剂量依赖性 在细胞凋亡方面,Hoechst33342 作为一种细胞核荧光染色剂,DADS 作用后的细胞经 Hoechst33342 染色后, 在荧光倒置显微镜下可观察到细胞核的碎裂, 表明凋亡细胞的出现, 说明 DADS 诱导了口腔鳞癌 CAL-27 细胞的凋亡 [13] 分光光度法检测 caspase-3 活性, 是近年用于细胞凋亡检测的新型方法 本研究结果显示, 不同浓度的 DADS 作用于 CAL-27 细胞后,CAL-27 细胞的 caspase -3 的活性发生了变化,DADS 作用 48h 时, caspase-3 活性升高较明显, 同时各实验组与对照组相比均差异有统计学意义 因而,DADS 促进 CAL-27 细胞的凋亡可能与 caspase-3 通路中 caspase-3 的活化相关 细胞凋亡的过程是细胞在各种死亡信号刺激后发生的一系列受细胞内源性基因 酶类和信号转导等途径调控的一个瀑布式激活过程 在外源性的细胞凋亡激活途径中, 通过引发 caspase 蛋白酶解级联反应, 进而激活 caspase-3 从而发生相应的生物学效应,caspase-3 被认为是 caspase 家族中诱导细胞凋亡的关键酶 [14~16] 许多研究发现,DADS 促进多种癌细胞的凋亡与 caspase-3 信号通路的激活 [17] 有关 Pratheeshkumar 等在对黑色素瘤的研究中发现,DADS 能够促进黑色素瘤细胞的凋亡, 同时激活了线粒体内在凋亡通路, 证实促进了 caspase-3 [18] 的表达增加 另外,Lee 等研究发现,DADS 可以促进胃癌细胞的凋亡, 并且通过 Westernblot 法发现 caspase-3 的表达增加 目前, 已知的 caspase 家族有 10 余种,caspase-3 为该家族的重要成员, caspase-3 活化后可以裂解 DNA 修复相关分子 凋亡抑制蛋白 骨架蛋白等相关因子从而促进细胞凋亡 [19] 本研究在口腔癌中发现 DADS 正是激活了 caspase-3 的表达, 促进了癌细胞的凋亡, 这一发现可能与线粒体通路的激活, 从而促进凋亡蛋白的表达密切相关 118 综上所述, 本研究表明 DADS 在体外可以抑制口腔鳞癌细胞的增殖, 并诱导口腔鳞癌细胞的凋亡, 其机制可能与 caspase-3 活性有关 这为以后的动物实验及临床应用提供了一定的理论基础及参考, 然而 DADS 诱导口腔鳞癌的具体凋亡信号通路, 仍然有待于进一步研究 参考文献 1 JemalA,BrayF,CenterMM,etal.Globalcancerstatistics[J].CA CancerJClin,2011,61(2):69-90 2 ZiniA,CzerninskiR,Sgan-CohenHD.Oralcanceroverfourdec ades:epidemiology, trends, histology, and survivalbyanatomical sites[j].joralpatholmed,2010,39(4):299-305 3 HanS,ChenY,GeX,etal.Epidemiologyandcostanalysisforpa tientswithoralcancerinauniversityhospitalinchina[j].bmc PublicHealth,2010,10:196 4 MansonMM.Cancerprevention-thepotentialfordiettomodulate molecularsignaling[j].trendsmolmed,2003,9(1):11-18 5 Herman-AntosiewiczA,SinghSV.Signaltransductionpathways leadingtocelcyclearestandapoptosisinductionincancercelsby Alium vegetable-derivedorganosulfurcompounds:areview[j]. MutatRes,2004,555(1-2):121-131 6 PowolnyAA,SinghSV.Multitargetedpreventionandtherapyofcanc erbydialyltrisulfideandrelatedalium vegetable-derivedorgano sulfurcompounds[j].cancerlet,2008,269(2):305-314 7 YiL,JiXX,TanH,etal.InvolvementofMcl1indialyldisulfde- inducedg 2 /M celcyclearestinhl-60cels[j].oncolrep, 2012,17(6):1911-1917 8 ArunkumarR,SharmilaG,ElumalaiP,etal.Efectofdialyldisul fideoninsulin-likegrowthfactorsignalingmoleculesinvolvedincel survivalandproliferationofhumanprostatecancercelsinvitroandin silicoapproachthroughdockinganalysis[j].phytomedicine,2012, 19(10):912-923 9 XiaoX,ChenB,LiuX,etal.DialyldisulfidesuppressesSRC/ Ras/ERKsignaling-mediatedproliferationandmetastasisinhuman breastcancerbyup-regulatingmir-34a[j].plosone,2014,9 (11):e112720 10 YinX,ZhangJ,LiX,etal.DADSsuppreseshumanesophageal xenografttumorsthrough RAF/MEK/ERK and mitochondria-de pendentpathways[j].intjmolsci,2014,15(7):12422-12441 11 汪雪菁, 向姝霖, 唐海林, 等. 二烯丙基二硫对人胶质瘤 U251 细胞增殖及细胞周期的影响 [J]. 实用肿瘤杂志,2014,29(2): 126-132 12 阮敏, 杨雯君, 周晓健, 等. 紫草素对口腔鳞癌 Tca8113 细胞增殖与凋亡的作用 [J]. 中国口腔颌面外科杂志,2010,8(1):66-72 13 陈红应, 郭福林, 王大力, 等. 阿伦膦酸钠抑制 2 种口腔鳞癌细胞系的初步研究 [J]. 口腔医学研究,2013,29(3):213-216 14 JacobsonMD,WeilM,RafMC.Programmedceldeathinanimal development[j].cel,1997,88(3):347-354 ( 下转第 130 页 )
物, 从而保护细胞不受过氧化物干扰及损害 [5] ;T- AOC 能够代表生物体内酶性和非酶性抗氧化物的总体水平 ;MAD 是自由基与脂质发生过氧化反应的最终产物, 其含量可间接反映出细胞损伤程度, 以上均是衡量细胞氧化应激水平的重要指标 [7] 本研究发现, 姜黄素干预的高脂饮食大鼠血清 SOD GSH-Px T-AOC 均显著高于高脂饮食对照组, 而 MAD 明显降低, 这表明, 姜黄素能够通过增强肝细胞内抗氧化物质的活力并抑制自由基产生, 从而改善 NAFLD 大鼠肝脏氧化应激水平 此外, 既往研究也发现,TNF-α 和 IL-6 在 NAFLD 大鼠中表达明显升高, 能够激活炎性细胞产生炎性反应, 加重肝细胞损伤, 并且参与胰岛素抵抗过程及诱导肝细胞凋亡 [8] NF-κB 是一种能够调控多种炎性因子表达的核转录因子, 在肝脏中,NFκB 激活后通过提高 TNF-α IL-6 IL-1 等炎性因子表达水平参与肝脏炎性反应 肝纤维化, 肝细胞再生与凋亡过程, 且 NF-κB 信号通路亦参与氧化应激与胰岛素抵抗, 因此是 NAFLD 的重要机制之一 [9] 本实验结果表明, 经姜黄素治疗后的大鼠血清 TNFα IL-6 水平较高脂饮食组显著降低, 且肝组织 NF -κb 表达水平也显著低于高脂组, 提示姜黄素也可能通过抑制 NF-κB 的激活从而抑制 NF-κB 介导的炎性因子的释放, 改善肝脏炎性反应程度 本实验研究还发现, 姜黄素治疗组较高脂饮食组肝组织 Bcl-2 表达水平增高,Bax 表达水平显著降低,Bcl-2/Bax 比值增高, 这表明姜黄素能够激活 Bcl-2 并抑制 Bax 表达, 从而降低 NAFLD 大鼠肝细胞凋亡水平 NAFLD 时, 肝脏中的饱和脂肪酸和游离胆固醇等脂毒性物质, 可通过激活特殊信号调节通路引起细胞凋亡发生, 而肝细胞过度凋亡可进一步导致肝纤维化及肝硬化的发生 发展 [10] Bcl-2 是一类高度保守的蛋白家族, 在细胞凋亡调控中起到关键作用, 分为以 Bcl-2 为代表的抗凋亡蛋白和以 Bax 为代表的促凋亡蛋白两大类, 而细胞凋亡水平主要取决于两大类蛋白表达水平的比率, 即 Bcl-2/Bax, 组织中细胞凋亡水平越高, 该比值越低 [11] 综上所述, 姜黄素能够减轻 NAFLD 大鼠脂代谢紊乱和胰岛素抵抗水平, 改善肝功能及脂肪变性程度, 尤其对发病关键环节的氧化应激 炎性反应及细胞凋亡具有明显的改善作用, 因此, 姜黄素可能成为非酒精性脂肪肝病的有效防治药物, 然而其确切机制仍需进一步探索 参考文献 1 MonjurA.Non-alcoholicfatyliverdiseasein2015[J].WorldJ Hepatol,2015,7(11):1450-1459 2 DowmanJK,TomlinsonJW,NewsomePN.Pathogenesisofnon-al coholicfatyliverdisease[j].qjmed,2010,103(2):71-83 3 GalalySR,AhmedOM,MahmoudMA.Thymoquinoneandcurcumin preventgentamicin-induced liverinjurybyatenuatingoxidative stress,inflammationandapoptosis[j].jphysiolpharmacol,2014, 65(6):823-832 4 Sigrid,A,RajasekaranK.Therapeuticpotentialofcurcuminingastro intestinaldiseases[j].worldjgastrointestpathophysiol,2011,2 (1):1-14 5 TakakiA,KawaiD,YamamotoK.Multiplehits,includingoxidative stress,aspathogenesisandtreatmenttargetinnon-alcoholicsteato hepatitis(nash)[j].intjmolsci,2013,14(10):20704-20728 6 PolimeniL,BenMD,BarataF.Oxidativestres:Newinsightson theassociationofnonalcoholicfatyliverdiseaseandatherosclerosis [J].WorldJHepatol,2015,7(10):1325-1336 7 GaoHT,XuLS,LiDF,et,al.Efectsofglucagon- likepeptide- 1onliveroxidativestres,TNF-αandTGF-β1inratswithnon- alcoholicfatyliverdisease[j].jsouthmeduniv,2013,33(11): 1661-1664 8 BraunersreutherV,VivianiGL,MachF,etal.Roleofcytokinesand chemokinesinnon-alcoholicfaty[j].worldjgastroenterol,2012, 18(8):727-735 9 LuZ,WaiJT,JinJY,etal.Signaltransductionsandnonalcoholic fatyliver:amini-review[j].intjclinexpmed,2014,7(7): 1624-1631 10 AlkhouriN,Carter-KentC,FeldsteinAE.Apoptosisinnonalcoholic fatyliverdisease:diagnosticandtherapeuticimplications[j].ex pertrevgastroenterolhepatol,2011,5(2):201-212 11 FengM,LiJ,WangJ,etal.HighglucoseincreasesLPS-induced DCapoptosisthroughmodulationofERK1/2,AKTandBax/Bcl-2 [J].BMCGastroenterol,2014,14(98):1-8 ( 收稿日期 :2015-09-25) ( 修回日期 :2015-09-25) ( 上接第 118 页 ) 15 MatsushitaK,WuY,QiuJ,etal.Fasreceptorandneuronalcel deathafterspinalcordischemia[j].jneurosci,2000,20(18): 6879-6887 16 李晓玲, 岳磊, 贾志宇, 等.Caspase 在莱菔硫烷诱导人腺样囊性癌细胞系 ACC-M 凋亡中的作用 [J]. 现代口腔医学杂志,2015, 29(1):20-22 17 PratheeshkumarP,ThejasP,KutanG.Dialyldisulfideinduces caspase-dependentapoptosisviamitochondria-mediatedintrinsic pathwayinb16f-10melanomacelsbyup-regulatingp53,caspase- 3anddown-regulatingpro-inflammatorycytokinesandnuclearfac tor-κβ-mediatedbcl-2activation[j].jenvironpatholtoxicol Oncol,2010,29(2):113-125 18 LeeJE,LeeRA,Kim KH,etal.Inductionofapoptosiswithdialyl disulfideinagsgastriccancercelline[j].jkoreansurgsoc, 2011,81(2):85-95 19 李明, 谭诗云. 阿司匹林对大肠癌 LoVo 细胞增殖 凋亡的影响及机制 [J]. 医学研究杂志,2014,43(6):72-76 ( 收稿日期 :2015-07-22) ( 修回日期 :2015-08-26) 130