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1 理 CNIC94-01 料 () 行 94 年 年 林 玲 95 年 2 28 理

2 CNIC 行 94 年 年 年

3 老 行 不 利 酪 力 DPPH TEAC 利 MPA580 料 行 類 參 年 量 利 領 歷 理 來 易 度 易 理 來 更 力 了 歷 數 更 年 更 爲 便 更 2

4 老 留 識 流 列 流 識 來 來 陸 Hu, G. (Chrysanthemum ramat) (Crocus sativus L) 精 (2-hydroxy-4-methoxybenzophenone-5-sulfonic acid) 力 不 力 論 令 例 蘆 金 金縷 例 料 蘆 A. barbadensis MilleAloe vera extract 金 Calendula officinal Calendula extract 刺 狀 L. Matricaria chamomilla. L. Chamomile fluid extract Zingiber officinale Ginger root extract 金縷 Hamamelis virginiana L. Hamaelis extract Rosmarinus Rosemary extract or oil 3

5 officinalis L. 茶 Melaleuca alternifolia Ch. Tea tree oil 狀 Triticum sp. Wheat germ oil 1. 力 DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 375ul sample 20mg/l DPPH 750ul nm ABTS free radical 1.5ml 離 ABTS(1000uM) 0.25ml H 2 O 2 (500uM)0.25mlPeroxidase (44units/ml)0.25ml ml nm Liposome system 1cc Liposome(10mg/1cc NaH 2 PO 4 -Na 2 HPO 4 )1cc FeCl 3 (400uM)1cc 1cc Ascorbic Acid(400uM) cc TBHQ(10mg/1cc )2cc TCA-TBA-HCL

6 2000rpm 離 nm 2. 酪 量 精 70 units mushroom tyrosinase 0.5 ml L-tyrosine (0.1 mg/ml) 利 度 量 475 nm 100 酪 酪 3. 2 ml 0.01 % (0.123 mg/ 5 ml 12.5 g methylene chloride, 37.5 g cyclohexane, 50 g isopropanol) 250~400 nm 行 數 5

7 (2 mg/cm 2 ) (Transpore TM tape) In vitro SPF ( UV1000S) 量 280~400 nm 率 率 SPF 4. 老 不 度 extracts 3IIII 行 力 老 力 例 丹 30 (Glycyrrhiza glabra) (twig of Morus alba)(root-bark of Morus alba) 丹 (Paeonia suffruticosa ANDREWS)(Chaenomeles speciosa) 酪 力 30 (Glycyrrhiza glabra L.)(Citrus reticulate Blanco)(Scutellaria baricalensis GEORGI) 金 (Lonicera japonica Thunb) 連 (Coptis chinensis Franch) 丹參 (Salvia 6

8 miltiorrhiza Bge)(Phellodendron chinense schneid) 力 連 老 力 論 流 ; 來 更 流 力 列 療 六 參 1. Bernard, P. and Berthon, J. Y Resveratrol: an original mechanism on tyrosinase inhibition. International journal of Cosmetic Science. 22, Boots the chemist Ltd. The guide to practical measurement of UVA/UVB ratios. The Boots Chemist, PLC, Nottingham, England. 3. Cabanes, J. et al Kojic acid, a cosmetic skin whitening agent, is a slow-binding inhibitor of catecholase activity of tyrosinase. J. Pharm. Pharmacol. 46, Cosmetics & toiletries Natural and Botanical products formulary. Vol 111, Easton, A. Women have deadly desire for paler skin in the 7

9 Philippines. The Lancet 352, Fitzpartrick, T. B Pathophysiology of hypermelanoses. Clin. Drug. Invest. 10 (suppl. 2) 7. Goihman-Yahr, M Skin aging and photoaging: an outlook. Clinics in Dermatology. 14, Lee, K. T. et al., Biological screening of 100 plant extracts for cosmetic use (I): inhibitory activities of tyrosinase and DOPA auto-oxidation. International Journal of Cosmetic Science. 19, Lin, C.-G., Kao, Y.-T., Liu, W.-T., Huang, H.-H., Chen, K.-C. and Lin, H.-C Cytotoxic effects of Bacillus anthracis lethal toxin on macrophage-like cell line. Current Microbiology 33, Luckewicz, W Determination of ascorbly dipalmitate in cosmetic whitening powders by differential scanning calorimetry. J. Soc. Cosmet. Chem Maeda K. et al In vitro effectiveness of several whitening cosmetic components in human melanocytes. J. Soc. Cosm. Chem. 42, Masuda, M. et al Skin lighteners. Cosmet. Toil. 111, Melo, P. S., Duran, N., and Haun, M. Cytotoxicity of prodigisin and benznidazole on V79 cells Toxicology letters 116, Merot, F., Seniuta, R., Benita, G. and Masson, Ph Method for quantifying cutaneous pigmentation in animals and preliminary study in humans. International Journal of Cosmetic Science. 14, Motoyoshi, K., Ota, Y., Takuma, Y. and Takenouchi, M Wrinkles from UVA exposure. 113, Phillips, B. J Development of cell culture techniques for assessment of the toxicity of plant products. Toxicology in vitro 10, Schallreuter, K. U. et al Regulation of melanin biosynthesis in the human epidermis by tetrahydrobiopterin. Science Shin, N. H. et al Oxyresveratrol as the potent inhibitor on dopa oxidase activity of mushroom tyrosinase. Biochememical And Biophysical Research Communications. 243, Shirota, S. et al Tyrosinase inhibitors from crude drugs. Biol. Pharm. Bull. 17,

10 20. Smith, J State of the industry: the Asia-Pacific cosmetics and toiletries sector, DCI Stern, M. Klausner, M., Alvarado, R., Renskers, K., and Dickens, M Evaluation of the EpiOcular tissue model as an alternative to the Draize eye irritation test. Toxicology in vitro 12,

11 理 2 利 易 類 類 CNIC (2) 行 94 年 年 參 林 行 95 年 02 28

12 利 易 列 ()-() 行 酪 力 C ()-() 酪 Abstract In this study we aim to originally synthesize a series of highly productive (polyhydroxy-benzylidene)-(hydroxy-phenyl)amines and observe their In vitro efficacy test for skin-whitening by the tyrosinase inhibition test. Key words (polyhydroxy-benzylidene)-(hydroxy-phenyl)amines, skin-whitening, tyrosinase. 2 年 7% 度 GDP 率 兩 來 (1) 力 類 來 (2) 力量 行 略 (3) 理 行 來 老 烈 量 力 金 力 料 1998 年 N.-H. Shin oxyresveratrol Dopa oxidase IC 50 1µM 降 Oxyresveratrol 不 不易 2002 年 S. Y. Kim (3-methoxy-benzylidene)-(4 -methoxy-phenyl)amine Dopa oxidase 論 (polyhydroxy-benzylidene)-(hydroxy-phenyl) amines 列 利 酪 力

13 論 ()-() 利 oxybenzaldehyde)(aminophenol) 行 1 H 13 C NMR (imine) (compound 1~15) HO O H + H 2 N OH PhH / Ethanol Reflux, 1~2 days HO N OH Compound 1~14 R 3 R' 1 R' 2 R 4 R 5 N R' 3 R 2 R 1 R 1 R 2 R 3 R 4 R 5 R 1 R 2 R 3 1 OH H H H H H OH H 2 H H OH H H H OH H 3 H OH H H H H H OH 4 OH H H OH H H OH H 5 H OH H OH H OH H H 6 H OH H OH H H OH H 7 H OH H OH H H H OH 8 OH H OH H H H OH H 9 OH OH H H H H OH H 10 H OH OH H H H H OH 11 OH OH OH H H OH H H 12 OH OH OH H H H OH H 13 OH OH OH H H H H OH 14 OH H OH OH H OH H H

14 酪 參 利 酪 酪 不 度 類 度 540 nm 酪 料 a. 酪 (Tyrosine Buffer Solution) : (PBS) 0.5 % 酪 (L-Tyrosine) b. 酪 (Tyrosinase Solution): 酪 (Tyrosinase) (15 units/µl) -20 a. 不 度 (S) 量酪 5µl (75 unit) mushroom 酪 1 ml 度 (NT) 不 酪 5µl (75 unit) mushroom 酪 1 ml 1ml 酪 5µl 酪 (PC) 1ml 酪 (NC) 37(water bath) 1 b. 100µl 96 well ELISA reader plate 利 Anthos 2010 ELISA reader 540 nm c. 酪 率 利 列 率 1. Tyrosinase inhibition(%)=(pc-nc)-(s-nt)/(pc-nc)*100% 酪 14 不 數量 不 度 DMSO ( 度 mg/ml) 酪 利 Anthos 2010 ELISA reader 540 nm IC 50 度 0.1 mg/ml 率 (%) IC 50 (mg/ml) 0.1 mg/ml 率 (%) IC 50 (mg/ml) > Vit.C K.A () ()-() 酪 力 1. Vit.C( C)(Kojic acid K.A.)

15 論 ()-() 酪 力 C 數量 連 律 更 行 行 度 ()-() 10 mmol Oxybenzaldehyde 10 mmol aminophenol 20 ml benzene 20 ml ethyl alcohol 流 1~2 利 1 H 13 C NMR (2- )-(3 - ) (2-Hydroxy-benzylidene)- (3 -hydroxyl-phenyl) amine 2 : mp.176~180 o C 1 H NMR(200 MHz, DMSO) H6.78~6.87(3 H, m)6.94~6.99(2h, m) 7.25(1H, t, J = 8Hz)7.42(1H, ddd, J = 8, 8, 1.5Hz)7.66(1H, dd, J = 8,15Hz) 8.89(1H, s)9.74(1h, brs, OH) 13.16(1H, brs, OH) ; 13 C NMR(50 MHz, DMSO) (d) (d)114.14(d)116.61(d)119.13(d)119.26(s)130.23(d)132.63(d) (d)149.29(s)158.39(s) (s)163.25(d). 酪 料 列 料 度 b. 酪 (Tyrosine Buffer Solution) : (PBS) 0.5 % 酪 (L-Tyrosine) b. 酪 (Tyrosinase Solution): 酪 (Tyrosinase) (15 units/µl) -20 a. 不 度 (S) 量酪 5µl (75 unit) mushroom 酪 1 ml 度 mg/ml 度 (NT) 不 酪 5µl (75 unit) mushroom 酪 1 ml 1ml 酪 5µl 酪 (PC) 1ml 酪 (NC) 37 (water bath) 1 b. 100µl 96 well ELISA reader plate 利 Anthos 2010 ELISA reader 540 nm c. 酪 率 利 列 率

16 Tyrosinase inhibition(%)=(pc-nc)-(s-nt)/(pc-nc)*100% 理 林 老 老 酪 參 1. 林 奈 利 行 料 2004, 6 2. N.-H. Shin; S. Y. Ryu; E. J. Choi; S.-H. Kang; I.-M. Chang; K. R. Min; Y. Kim. Biochem. and Biophy. Research Commun. 1998, 243, N. Baurin; E. Arnoult; T. Scior; Q.T. Do; P. Bernard; J. Ethnopharmacology, 2002, 82, J. P. Ley; H. J. Bertram; Bioorg.& Med. Chem. 2001, 9, L. Startor; E. Pezzato; I. Dell; R. Caiato; Biochem. Pharm. 2002, 64, I. Kubo; K.-I. Nihei; K. Tsujimoto; Bioorg. & Med. Chem I. Kubo; P. Xiao; K.-I, Fujita; Bioorg. & Med. Chem. Lett S. H. Lee; S. Y. Chio; H. Kim. J. S. Hwang; B. G. Lee; Biol. Pharm. Bull. 2002, 25, S. Rudra; A. V. Eliseev; J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, I. Kubo; P. Xiao; K.-I. Nichi, K.-I. Fujita; J. Agric. Food Chem. 2002, 50, S. Y. Choi; S. Kim; J. S. Hwang; B. G. Lee; H. Kim; S. Y. Kim; Biochem. Pharm. 2004, 67, S. Y. Chio; S. Kim. H. Kim; K. Suk; J. S. Hwang; B. G. Lee; A.-J. Kim; S. Y. Kim; Chem. Pharm. Bull. 2002, 50, 450.

17 理 CNIC94-01 利 行 94 年 年 年 2 27

18 離 不 例 老 若 老 度 量 列都 度 度 離

19 力 老 了 類 蘿 類 類 力 不 離 不 狀 狀 不 若 度 連 量 離,(O2-)

20 狀 力 力 離 金 都 力 離 輻

21 蘿 尿 類 類 類 不 不 類 類 量 降 類 行 金 類 利 利 量

22 行 綠 裂 離 不 沈 來 沈 沈 離 來 錄 連 µµµµ µ 錄 錄

23 行 連 連 µ 行 µ 理 列 行 µ 精 µ 離 µ

24 µ 量 µ µ µ µµ µ µ µ µ 度 度 度 度 見 量 列都 度 度 見 葉 拉

25 度 葉 度 度 度 類 度 度 見 列 連 離 The full length of cdna sequence of FeSOD gene from C. pyrenoidosa. Accession number is DQ The two codons in block represent the start and stop position of the open reading frame, respectively. The codons underlined are 5 and 3-untranslated regions, and boldface of amino acid letters are the predictive positions for iron binding sites at the enzyme active center., a specific primer of 5-RACE system ;, a specific primer of 3-RACE system. M P F Q L P P L P Y A I N A L E P H M S Q K S L E F H Y G K H H Q T Y L D N M N K R I A G S N L E S K T L E E V I K E S W N N G S P T A V F N N A A Q V W N H T F F W E S M K P N G G G A P S G K L A E A I N A A

26 S G S L D D F K A Q F K N A G A T Q F G S G W A W L V T D K S G K L S I E K T P N A V T P L V E E S K T P I L T M D V W E H A Y Y L D V Q N R R P D Y M T T F V D S L I D W D N V G A comparison of FeSOD cdna sequences of C. pyrenoidosa (Cp-nt) with that of Chlamydomonas reinhardtii (Cr-nt). 73.5% identity in 596 nt overlap.

27

28 A comparison of FeSOD amino acid sequences of C. pyrenoidosa (Cp-aa) with that of Chlamydomonas reinhardtii (Cr-aa). 70.5% identity in 200 aa overlap.

29 A comparison of FeSOD sequence of Chlorella pyrenoidosa with those of other species. Species FeSOD cdna length (bps) Identity (%) Accession No (NCBI) Chlorophyceae Chlorella pyrenoidosa Chlamydomonas reinhardtii DQ U22416 Dicotyledon Arabidopsis thaliana (type I) M55910 Arabidopsis thaliana (type III) AF Nicotiana plumbaginifolia A09032 (curled-leaved tobacco ) Cinnamomum camphora (camphor AF tree) Bacteria Thermosynechococcus elongatus NP_ Nostoc commune (Cyanobacteria) AF Legionella pneumophila BAA02306 Synechocystis sp. PCC NC_ (Cyanobacteria) Bacteroides fragilis M96560 Propionibacterium shermanii Y09012 Sulfolobus solfataricus AAK40652 Monocotyledon Oryza sativa AB Insect Babesia bovis U70131 Plasmodium ovale AF Fungi Rhodotorula glutinis AF434197

30 參 Chen, H. Y. and Yen, G. C Free Radicals, Antioxidant Defenses and Human Health. Nutrition Sciences Jourmal. 23: Halliwell, B., Gutteridge, J. M. C., and Cross, C. E Free radicals, antioxidants, and human disease: Where are we now? The journal of laboratory and clinical Medicine. 119: Halliwell, B. and Gutteridge, J. M. C Free Radicals in Biology and Medical. Oxford University Press. Mittler, R. (2002) Oxidative stress, antioxidants and stress tolerance. Trends Plant Sci. 7: Sies, H Natürliche und syntetische antioxidanten. Atemw Lunngenkrkh 17 Suppl 1: 16. Wojtaszek, P. (1997) Oxidative burst: an early plant response to pathogen infection. Biochem. J. 322: 錄 (a) Interrelationships between molecular oxygen and ROS generated in reactions likely to occur in living plant cells and (b) chemical equations depicting major reactions determining the fate and possible interconversions of reactive oxygen species in plants. (Wojtaszek, 1997)

31

32 錄 錄

33 理 CNIC 料 行 94 年 年 林 95 年 02 27

34 類 力 了 類 老 行 DPPH TEACNO SOD 利 不 老 老 年 理 療 料 料 療 濾 不 臨 chlorogenic acidflavonoidspentacyclictriterpenes (12) 力 - 1 -

35 領 力 力 療 力 糖尿 療 領 理 2004 年 Renu Khanna-Chopra 力 SOD 金 不 葉綠 Cu/Zn SOD Fe SOD 葉綠 Mn SOD 粒 年 Y. Z. Zhu 更 論 類 SODRhizoma ligustici 類 SOD 2000 units 益 Herba leomuri 類 SOD 1800 units 料 不 不 力 葉連 Hypericum - 2 -

36 perforatum L. DPPH 離 粒 蓮 葉 Nelumbo nucifera Gertn. 降 金 離 力 Lycium barbarum 離 Scutellaria baicalensis 離 80 % Cratoxylum cochinchinense TEAC Trolox 力 離 Hedyotis diffusa 龍 Hedyotis corymbosa 離 力 Mollugo pentaphylla 若 力 > 龍 > Terminalia catappa 老 類 SOD unit 金 連 Anoectochilus formosanus 離 度 老 Geranium macrorrhizum 金露 Potentilla fruticosa - 3 -

37 DPPH TEAC DPPH ABTS + 力 類 Crataegus pinnatifidacuscuta chinensis Cynomorium songaricum 葉 Epimedium sagittatum Rubus chingii 力 Vitamin E 不 類 flavonoidsphenolic acid 類 alkaloidschlorophyll derivativesamino acidsamines 類 蘿 1. 切 ml 3 3. refluxing 濾 extracts 力 DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) - 4 -

38 375ul sample 20mg/l DPPH 750ul nm ABTS free radical 1.5ml 離 ABTS(1000uM) 0.25ml H 2 O 2 (500uM)0.25mlPeroxidase (44units/ml)0.25ml ml nm Liposome system 1cc Liposome(10mg/1cc NaH 2 PO 4 -Na 2 HPO 4 )1cc FeCl 3 (400uM)1cc 1cc Ascorbic Acid(400uM) cc TBHQ(10mg/1cc )2cc TCA-TBA-HCL rpm 離 nm TCE 不 ABTS 離 力 SC mg/ml DPPH SC mg/ml Nitric oxide SC mg/ml - 5 -

39 SC mg/ml TCE 離 力 類 SOD TCE 類 SOD U/mg GCE SC mg/ml 力 類 SOD U/mg 量 (data not shown) PME Nitric oxide 力 SC mg/ml 0.69 mg/ml CFE SC mg/ml 力 Comparison of SC 50 values. ( mg / ml ) Scavenging activity of assay methods ABTS DPPH Nitric oxide Hydroxyl Radical Samples ( ABTS + ) ( DPPH ) ( NO ) ( HO ) Sample Sample Sample Sample Trolox 1.24 ND ND ND Vitamin E ND 1.06 ND ND Vitamin C ND ND ND 0.56 ND, not done - 6 -

40 論 年來 流行 良 若 量 力 金 略 量 力 金流量 力 易 切 不 行 益 勵 力 度 度 更 老 - 7 -

41 六 參 1. W. L.Li, et al.natural medicines used ih the traditional Chinese medical system for therapy of diabetes mellitus, Journal of Ethnopharmacology 92, 1-21, Yeong-Deug Yi, et al.an Overview of Traditional Chinese Herbal Formulae and a Proposal of a New Code System for Expressing the Formula Titles, Advance Access Publication 4, , Andrew P. Winterstein, et al. Herbal Supplements : Considerations for the Athletic Trainer, Journal of Athletic Training 36 (4), , Nobutaka Suzuki, et al.complementary and Alternative Medicine : a Japanese Perspective, Advance Access Publication 21, , Talal Aburjai, et al. Plants Used in Cosmetics,Phytotherapy research 17, , Hu Fenglin, et al.free radical scavenging activity of extract prepared from fresh leaves of selected Chinese medicinal plants, Fitoterapia 75, 14-23, Rachel W. Li, et al.anti-inflammatory activity of Chinese - 8 -

42 medicinal vine plants,journal of Ethnopharmacology 85, 61-67, Pavel Dra sar, et al.recent advances in analysis of Chinese medical plants and traditional medicines,journal of Chromatography B 812, 3-21,

43 理 CNIC94-01( 5) 不 行 94 年 年 玲

44 流 度 度 度 粒 量 例 量 度 度 粒 頪 量 例 都 降 度 不 料 不 Alpha-hydroxy acids, AHA) (glycolic acid)(lactic acid)(citric acid)(tartaric acid)[1](desquamation) 降 (transepidermal water loss TEWL)[2-5] 來 理 老 (photoaging)[6-8] 狀 (Rough)(Wrinkles)Spots or freckles 沈 (pigmentation)[9~11] 不 (lotion)(cream)(gel) 精 (essense)[12] 臨 療 不 降, 不 異 度 13 不 粒 不 不 諸 粒 不 了 粒 不 行 雷 粒 老 立 列 粒

45 參 論 類 類 冷 度 老 數 度 度

46 不 度 不 量 數 數 老 秥 量

47 數 老 度 度 度 度 粒 數 度 度 粒 數 老

48 異 利 離 來 不 度 粒 老 參 1.Shinomiya,Tatsuroh; Hikima, Toshio; Sakamaki, Taekishi. FRAGRANED JOURNAL(1997), 25(9),

49 2. Barel, Andre O.; Paye, Marc; Maibach,Howard I. Handbood of Cosmitic Science and Techlogy (2001), Fulton,James E.,Jr.(Vivant Phamaceuticals, USA).U.S.(2001), 6pp. 4.Koyama, Junichi; Nakanishi,Jotaro; Sato,Junko; Nomura, Junko; Suzuki,Yumiko; Masuda,Yoshiko; Nakayama, Yasuhisa. Life Science Center, Shiseido CO.,Ltd.,Japan. Nippon Keshohin Gijutsusha Kaishi (1999), 33(1), Boisnic, Sylvie; Branchit-Gumila, Marie-Christine; Benslama, Lotfi; Li Charpentier, Yves; Amaud-Battandier, Janick. EUROPEAN JOURNAL of DERMATOLOGY (1997), 7(4), Griffiths,C.E.M., SKIN PHARMACOLOGY 10(1997), pp Kligman,L.H., Crosby,M.J., Kligman,A.M., JOURNAL OF DERTOLOGICAL TREATMENT 10(1996), pp Appa,Y., SKIN PHARMACOLOGY AND APPLY SKIN PHARMACOLOGY 12(1999) pp Paihak,M.A., Wick,M., Sober,A.J., Farinelli,W.A., Fitzpatrick,T.B., Ciganek,E.R., DERMATOLOGY 63(1998), pp Onsun,N., Atilganoglu,U., Nisanci,P., Beycan,I., Uras,A.R., JOURNAL OF DERTOLOGICAL TREATMENT 7(1996), pp Kligman,A.M., CUTIS 56(1995), pp Yazan,Yasemin. Eczacilik Fakultesi,Famasotik Teknoloji Anabilim Dali,Kozmitoloji Bilim Dali, Anadolu Universitesi,Eskisehir, Turk. FABAD Farmasotik Bilimler Dergisi (1998), 23(1), De Luca, M., Grossiord, J.L., Medard, J. M., and Vaution,C.,COSMETICS&TOILETRIES (1990), 105(11), Christine Prybilski, C., Luca, M. de, and Grossiord,J. L., COSMETICS&TOILETRIES (1991), 106(11), C. Scrofani, C., Liporati, R., and Rigano,L., COSMETICS&TOILETRIES (1993), 108(7), Chandler,J. M., COSMETICS&TOILETRIES (1993), 108(11), Ertan, Gokhan; Ozer,Ozgen; Sarcin, Zeynep B. ACTA Pharmaceutica turcica (1999), 41(2), Williams, Lorraine. (Chesebrough-Ponds USA Co., USA). U.S. (1995), 5pp.

50 理 CNIC 料 (I) 行 94 年 年 年

51 年度 行 見 離 行 立 酪 了 數 不 料 Keywords : 酪 葉 益

52 年來 老 類 老 益 () 說 了 療 見 來 益 類 了 女 累 量 論 行 見 行 ( 見 ) 理 殺 見 力 理 料 立 見 理 來 力 立

53 見 1 Humulus scandens (Lour.)Merr. Moraceae 2 葉 Otanthera scaberrima 丹 3 Hemiboea bicornuta Gesneriaceae 4 Sloanea formosana Li. Elaeocarpaceae. 5 梨 Ananas comosus MERR 梨 Bromeliaceae 6 度 Pterocarpus indicus Willd. Fabaceae 7 Engelhardtia roxburgiana. Juglandaceae 8 刺 Bridelia balansae Tutcher Euphorbiaceae 9 Evodia meliaefolia (Hance) Benth Rutaceae 10 葉 Sterculia foetida L. Sterculiaceae 11 Platycodon grandiflorumjacq.a. DC. Campanulaceae 12 益 Leonurus heterophyllus Sweet Labiatae 13 Lxeris chinensis Compositae 14 Hydrocotyle batrachium Hance Umbelliferae 15 Ajuga bracteosa Labiatae (Humulus scandens (Lour.) Merr.) 龍 ( 龍 勒 拉 年 年 4m 葉 刺 綠 葉 5~20cm 葉 狀 7~10cm 狀 5 裂 3 7 裂 裂 卵 卵狀 葉兩 異 ( 異 ) 15~25cm 綠 5 5 狀 10 狀 葉狀 2 葉 2 葉

54 葉卵 1 鱗狀 綠 類 狀 類 利尿 痢 便不利 泌尿 淋 利尿 葉 (Otanthera scaberrima (Hayata) Ohwi 丹 Melastomataceae 葉卵 cm cm 略 兩 葉 2 mm 路 (Hemiboea bicornuta 玲 ~ 狀 1 (Sloanea sinensis 綠 12m 葉 葉 葉 卵狀 狀 5-12cm 2-5cm (Engelhardia roxburghiana Wall 葉 來 茶 理 不 I 療 IV

55 療 刺 (Bridelia balansae 綠 葉 不 葉林 見 來 琉 葉 (Sterculia foetida L.(Sterculiaceae) 落葉 25 狀 葉 葉 7 ~9 裂 烈異 落葉 裂 露 (Platycodon grandiflorum (Jacq.) A.DC. 利 盧 年 葉 輪 葉 卵 卵狀 2.5~6cm 1~2.5cm 不 狀 5 裂 狀 5 裂 藍 藍 5 卵 5 裂 7~9 8~10 類 利咽 不 咽 便不利 便 痢 便 益 (Leonurus heterophyllus Sweet(Labiatae)

56 益 益 益 類 行 利尿 惡露 力 尿 女 不 不 (Lxeris chinensis 年 流 來 狀 葉 葉 葉 狀 狀 省 (Hydrocotyle batrachium Hance) (Umbelliferae) 葉 金 年 滑 葉 葉 裂 3-5 綠 老 老葉 料 利 (Ajuga bracteose wall) 年

57 降 咽 痢 淋 流 葉 爛 度 (Ptercarpus indicus Willd. 落葉 10 葉 羽狀 葉 葉 羽狀 狀 落葉 綠 綠 理 龍 數量 行 度 龍 度 (Evodia fargesii Dode)(Rutaceae) 落葉 羽狀 葉 葉 5-11 狀卵 狀 兩 不 綠 葉 不 綠 5 數 裂 林

58 列 行 離 (fractions) 理 利 立 料 ( ) 行 離 行 () 流 立 A. 料 來 ( ) 立 立 料 B. 料 (n-hexane) (ethyl acetate) (n-butanol) 理 行 (bioassay) 若 行 立 HPLC

59 離 利 離 : 1. (gravity column chromatography) 2. (MPLC chromatography) 3. (HPLC chromatography) 4. (preparative thin layer chromatography) 5. (others) 理 量 行 離流 量 料

60 立 離 行 離 行 殺 葉 度 類 vitamin C (5µg/µl) 酪 力 度 益 類 酪 略 vitamin C (5µg/µl) 行 理 落 94 年 年 行

61 酪 度 VIT C 100 CCL-HSM 100 CCL-OS CCL-HB 0 CCL-SF 0 CCL-PI-W 0 CCL-ER 0 CCL-BB CCL-SSFL 100 CCL-SSFS 100 CCL-SSFST 7.85 CCL-SSFP 0 CCL-PG 0 CCL-LHS CCL-LC 100 CCL-HBH CCL-AB-III 14.3 CCL-AB-II CCL-AB-I 100 CCL-AC-II CCL-EF-I 0 CCL-EF-II 4.61

62 行 離 精 fractions 利 離流 更 理 理

63 嘉南藥理科技大學專題研究計畫成果報告 計畫編號 :CNIC94-01 計畫名稱 : 化粧品原料之研發與應用 ( 一 ) 精油於改善頭皮屑化粧品之應用 執行期間 :94 年 1 月 1 日至 94 年 12 月 31 日 整合型計畫 個別型計畫 計畫總主持人 : 陳榮秀教授計畫主持人 : 子計畫主持人 : 蔡玫琳助理教授 中華民國 95 年 02 月 28 日

64 一 摘要 : 皮屑芽胞菌 (Pityrosporum ovale) 繁殖過多時, 會引起頭皮屑 甚至皮膚炎等問題 本研究測試不同種類的精油對皮屑芽胞菌的抑制活性 結果顯示白千層葉與樟樹葉精油不具抑菌能力, 而尤加利精油的抑菌效果優於檜木與茶樹精油 進一步分析不同來源之尤加利精油, 發現其存在抑菌活性差異 因此, 在研發抗頭皮屑化粧品時, 須考慮精油之來源 此外, 亦測試無患子萃取物洗髮精對皮屑芽胞菌的抑菌能力, 但結果並無效果 二 前言 : 頭部的表皮細胞也和身體其他的皮膚一樣, 有一定的代謝過程, 從基底層細胞分裂增生後, 逐漸往外進展, 最後會演變成無生命的角質層而脫落 正常的掉落過程是溫和 個別的變化, 所以幾乎看不到什麼頭皮屑 但是當身體或頭髮出現某些問題, 使得頭皮的表皮細胞代謝加速 細胞成熟過程不完全 角質過度增生 而呈現大塊片狀的剝落, 頭皮屑因而產生 舉凡像脂漏性皮膚炎 細菌或黴菌感染 乾癬等問題, 都會造成頭皮屑的大量出現 1987 年世界皮膚科醫學會證實頭皮的成因之一, 是由一種學名稱為皮屑芽胞菌 (Pityrosporum ovale) 的真菌過度增生所引致 皮屑芽胞菌是一種與人體共生的真菌, 通常黏附於髮根等皮脂線分泌較多的部份, 當其繁殖過多時, 會令髮根周圍及毛囊受到感染, 出現紅腫 頭痕及油份分泌過多等情況, 而新陳代謝亦隨之加快, 直接引起頭皮 頭痕 甚至皮膚炎等問題 去頭皮洗髮水成份, 如 ZPT selenium sulphide 等, 是透過調節新陳代謝的方式, 改善頭皮狀況 ; 水楊酸可打斷角質層中細胞之間的連結, 使其不會緊黏在一起形成皮屑 ; 抗黴菌成分 (Ketoconazole) 的洗髮精可抗發炎及抑制黴菌細胞壁之合成, 進而抑制其增生 目前的研究顯示, 以抗黴菌成分的洗髮精處理後, 頭皮屑復發的比率是最低的 因此, 本計畫將篩選具有抗皮屑芽胞菌能力之天然精油, 作為研發抗頭皮屑化粧品之參考 三 材料與方法 : ( 一 ) 菌種培養 : 皮屑芽胞菌 (Pityrosporum ovale, BCRC22243) 購自生物資源保存及研究中心 ( 新竹 ) 培養基為 Malt extract, 60g/L, Ox-bile, 20g/L, Tween 40, 10g/L, Glycerol monooleate, 2.5g/L 培養溫度為 30 ( 二 ) 精油 : 茶樹 檜木與尤加利精油 A B C 共五種樣品由廠商提供 白千層與樟樹精油則由實驗室萃取 將其葉子清洗後, 置於陰涼處 15 天後, 以水蒸氣蒸餾法萃取精油 另有廠商提供之無患子萃取物洗髮精作測試

65 ( 三 ) 精油乳液製備 : 吸取適量精油與 Tween 80(1%) 混合均勻, 再將其加入足量的蒸餾水內, 以 vortex 混合均勻, 製備成不同濃度的精油乳液 ( 四 ) 圓盤擴散法 : 抗菌試驗初步篩選 將測試菌株需活化後, 以 /ml 菌量進行平盤塗抹 之後, 將濾紙盤 ( 直徑 8mm) 放入於已接種菌體之固體培養基內, 再加入不同濃度的精油乳液, 培養一定時間後, 測定抑制環之大小, 檢定其抗菌能力 ( 五 ) 肉羹培養基稀釋法 : 由圓盤擴散法篩選出抗菌效果強之精油進一步進行肉羹培養基稀釋法, 測試抑菌濃度 先配製 5 %精油濃度之培養液, 再將其稀釋成 % 精油的培養, 接種菌體 ( /ml 菌量 ), 置於培養箱中培養至一定時間後, 吸取菌液, 進行平盤塗抹培養, 觀察菌的生長狀況 四 結果 圓盤擴散法實驗, 若抑菌圈大於 10mm, 表示有抑菌活性 10mm 抑菌圈為輕度活性,11~15mm 為中度活性,16~20mm 為高度活性 由實驗結果得知, 白千層葉與樟樹葉精油對皮屑芽胞菌不具抑制效果 ( 表一和表二 ) 檜木及茶樹精油在高濃度時, 具輕度抑制能力 尤加利精油 B 在 5 %時即具有抑菌活性, 在 10 %時具有中度抑菌活性 此外, 無患子萃取物洗髮精對皮屑芽胞菌不具抑菌作用 ( 表六 ) 由圓盤擴散法實驗初步篩選結果, 得知尤加利精油 B 對皮屑芽胞菌的抑菌效果優於檜木及茶樹精油, 而二者又優於白千層葉與樟樹葉精油 因此, 選擇尤加利精油 B 進一步以肉羹培養基稀釋法探討其抑菌能力, 並且增加不同來源的尤加利精油 A 與 C, 分析抑菌效果差異 實驗結果顯示, 不同來源之尤加利精油抑菌效果不同, 尤加利精油 A 的菌活性最強, 在 0.25 %精油濃度時仍具抑菌效果, 而尤加利精油 B 與 C 在 0.25 %精油濃度時以無法抑制菌的生長 ( 表七 ) 表一 白千層葉精油對皮屑芽胞菌的抑菌圈大小 Concentration Day 3 Day 4 Day 5 1 % % % 9 9 9

66 表二 樟樹葉精油對皮屑芽胞菌的抑菌圈大小 Concentration Day 3 Day 4 Day 5 1 % % % 表三 檜木精油對皮屑芽胞菌的抑菌圈大小 Concentration Day 3 Day 4 Day 5 1 % % % 表四茶樹精油對痤瘡桿菌的抑菌圈大小 Concentration Day 3 Day 4 Day 5 1 % % % 表五 尤加利精油 B 對皮屑芽胞菌的抑菌圈大小 Concentration Day 3 Day4 Day 5 1 % % % 表六 無患子萃取物洗髮精對皮屑芽胞菌的抑菌圈大小 Concentration Day 3 Day 4 Day 5 80 % % 表七 肉羹培養基稀釋法測定不同尤加利精油對皮屑芽胞菌的抑菌能力 Concentration Day 3 Day5 Day 7 尤加利精油 A 1 % % % 尤加利精油 B

67 1 % % % 尤加利精油 C 1 % % % 註 : + : 有抑菌效果 ; - : 無抑菌效果 五 討論 : 許多文獻指出精油具有抗菌作用 本實驗所測試之精油對皮屑芽胞菌的抑菌效果不一 白千層葉與樟樹葉精油不具抑制效果, 尤加利精油的抑菌效果優於檜木及茶樹精油, 但不同來源之尤加利精油抑菌能力存在差異 實驗所用的尤加利精油均來自廠商, 因此無法判斷是否品種 產地差異, 或是已被廠商稀釋了 但仍建議在研發抗頭皮屑化粧品時, 須考慮精油之來源 本草綱目記載無患子對皮膚病有明顯的治療效果 無患子萃取物含有皂素, 為天然的界面活性劑, 早期民間利用無患子來洗頭 但實驗結果顯示無患子萃取物洗髮精對皮屑芽胞菌並不具抑制能力 但因商品的無患子萃取物濃度無法確定, 無法判斷是否高濃度的無患子萃取物或其他配方產品也有相同的結果 六 參考文獻 : Gustafon, J. E., Liew, Y. C., Chew, S., Markham, J., Bell, H. C., Wyllie, S. G. and Warmington, J. R Effects of tea tree oil on Escherichia coli. Letters in Applied Microbiology. 26, 194. Maccioni A. M.; Anchisi; Sanna A; Sardu C, and Dessi S Preservative systems containging essential oils in cosmetic products. International Journal of Cosmetic Science, 24, 53. Squiquera, L., Plotkin, L., Mathov, I., Galimberti, R., and Leoni, J Analysis of the antifungal activity of ketoconazole, zinc pyrithione and ciclopirox olamine against Pityrosporum ovale. A diffusion assay for cultures in solid media. Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology, 7, 26. Sacchetti, G., Maietti, S., Muzzoli, M., Scaglianti, M., Manfredini, S., Radice, M. and Bruni, R Comparative evaluation of 11 essential oils of different origin as functional antioxidants, antiradicals and antimicrobials in foods. Food Chemistry,

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