医学2016.2

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武温
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1 第卷第期 0 年月 JOURNAL OF DALI UNIVERSITY Vol. No. Feb. 0 DOI / j. issn 邵维在段治尚万德生刘必辞阙玉玲云南腾药制药股份有限公司研发部云南腾冲 7900 摘要目的修订提高参苓白术颗粒的质量标准方法采用 TLC 法对制剂中的甘草人参白术进行定性鉴别采用 HPLC 法对其人参中的人参皂苷 Rg Re 进行定量分析结果用 HPLC 法测定人参皂苷 Rg Re 的含量 Rg 在 0.~.74 μg 范围内 Re 在 0.44~.0 μg 范围内峰面积与进样量有良好的线性关系 r= 和 r= 平均加样回收率分别为 98.%和 97.4% RSD%=.8% n= 和 RSD%=.0% n= 结论所建立的方法重现性好专属性强可控制该制剂的质量关键词参苓白术颗粒薄层高效液相色甘草白术人参皂苷中图分类号 R84. 文献标志码 A 文章编号参苓白术颗粒为云南腾药制药股份有限公司的普药品种处方源于宋代太平惠民和剂局方由人参茯苓白术山药白扁豆莲子薏苡仁砂仁桔梗和甘草共 0 味药组成具有益气健脾之功效现行版标准载于部颁标准第二十册但质量标准偏低为了控制其产品质量笔者采用薄层批号人参对照药材批号上述对照品均购于中国食品药品检定研究院参苓白术颗粒批号由云南腾药制药股份有限公司生产 HPLC 用乙腈为色谱纯水为娃哈哈饮用纯净水大理娃哈哈食品有限公司生产其他试剂均为鉴别对方中甘草人参白术进行定性鉴别采用分析纯高效液相色谱 HPLC 法对人参所含成分人参皂苷 Rg 和 Re 进行定量测定现报告如下.. 仪器与试药仪器三用紫外仪 ZF- 型上海市安亭电子仪器厂美国 Agilent-00 液相色谱仪安捷伦科技有限公司 UV700 紫外分光光度计岛津苏州有限公司用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 Agi lent TC- C8 0 mm 4. mm μm 色谱柱 SK00H 型超声仪上海科导超声仪器有限公司方法与结果甘草的薄层鉴别取本品适量于乳钵中研细称取 g 置 0 ml 平底烧瓶中加乙醇 0 ml 超声处理 0 min 滤过滤液置蒸发皿中蒸干残渣加水 0 ml 使溶解转移至分液漏斗中用二氯甲烷提取次每次 0 ml 收集水层再用水饱和正丁醇振摇提取次每次 0 ml 合并正丁醇液正丁醇液蒸干残渣加甲醇 ml 使溶解作为供试品溶液另取不含甘草的阴性对照品同法制备阴性对电子分析天平 AE40 梅特勒托利多仪器上海有限照品溶液再取甘草对照药材 0. g 加乙醇 0 ml 设备有限公司层色谱法实验吸取上述种溶液各 μl 分别点于公司数显恒温水浴锅 DRHH-S4 上海双捷实验. 试药甘草对照药材批号白术对照药材批号人参皂苷 Rg 对照品批号人参皂苷 Re 对照品批号人参皂苷 Rb 对照品收稿日期 0-0- 加热回流 h 滤过同法制成对照药材溶液照薄同一 % 氢氧化钠硅胶 G 板薄层板上以二氯甲烷甲醇甲酸 0 0. 为展开剂展开取出晾干喷以 0 硫酸乙醇溶液 0 加热 min 置紫外光灯 nm 下检视 -4 供试品色谱中在与修回日期作者简介邵维在工程师主要从事新产品研发产品工艺优化及中药质量标准研究.

文献标志码 A 文章编号 7-4 0 0-000-0 参苓白术颗粒为云南腾药制药股份有限公司的普药品种处方源于宋代太平惠民和剂局方由人参茯苓白术山药白扁豆莲子薏苡仁砂仁桔梗和甘草共 0 味药组成具有益气健脾之功效现行版标准载于部颁标准第二十册但质量标准偏低为了控制其产品质量笔者采用薄层批号 0704-0 人参对照药材批号

2 总第期医学对照药材色谱相应的位置上应显相同颜色的荧光斑点阴性对照品无干扰具有专属性见图注 ~. 供试品 4. 人参皂苷 Rb Re Rg 对照品. 阴性供试品注 ~. 供试品 4. 甘草对照药材. 阴性供试品图甘草紫外光灯 nm TLC. 人参的薄层鉴别取本品适量于乳钵中研细称取 4 g 置 0 ml 三角烧瓶中加三氯甲烷 40 ml 加热回流 h 弃去三氯甲烷液药渣挥干溶剂加水 ml 搅拌使充分湿润加水饱和正丁醇 0 ml 超声处理 0 min 吸取上清液加氨试液 0 ml 摇匀放置分层取上层液蒸干残渣加甲醇 ml 使溶解作为供试品溶液另取不含人参阴性对照品同法制备阴性对照品溶液再取人参皂苷 Rb 对照品图人参 TLC 同法制备阴性对照品溶液再取白术对照药材.0 g 加水饱和的正丁醇 0 ml 超声处理 0 min 滤过滤液用水洗涤次每次 0 ml 弃除水液正丁醇液蒸干残渣加丙酮 ml 使溶解作为对照药材溶液照薄层色谱法试验吸取上述种溶液各 0 μl 分别点于同一硅胶 G 薄层板上以三氯甲烷丙酮 9 为展开剂展开取出晾干置紫外光灯 nm 下检视供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上现相同的蓝色斑点阴性对照品无干扰具有专属性见图人参皂苷 Re 对照品及人参皂苷 Rg 对照品加甲醇制成每 ml 各含 mg 的混合溶液作为对照品溶液照薄层色谱法实验吸取上述种溶液各 μl 分别点于同一硅胶 G 板薄层板上以三氯甲烷甲醇水 7 0 以下放置的下层溶液为展开剂展开取出晾干喷以 0 硫酸乙醇溶液在 0 加热至斑点显色清晰供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上分别显相同颜色的斑点阴性对照品无干扰具有专属性见图. 白术的薄层鉴别取本品适量于乳钵中研细称取 0 g 置 0 ml 平底烧瓶中加水饱和的正丁醇 0 ml 超声处理 0 min 滤过滤液用水洗涤次每次 0 ml 正丁醇液蒸干残渣加丙酮 ml 使注 ~. 供试品 4. 白术对照药材. 阴性供试品图白术紫外光灯 nm TLC 溶解作为供试品溶液另取不含白术对照品

3 总第期.4.4. 邵维在段治尚万德生等人参皂苷 Rg Re 的含量测定方法与结果第卷色谱条件选择取人参皂苷 Rg 人参皂苷 Re 色谱柱 Agilent 对照品溶液在 90~0 nm 范围内做紫外扫描磷酸溶液 9 8 为流动相流速.0 ml/min 检测 Rg 和人参皂苷 Re 有较大吸收值见图 4A 4B 色谱条件及系统适应性 TC-C8 0 mm 4. mm μm 以乙腈 0.0% 波长 0 nm 柱温 0 进样量 0 μl 理论板数按人参皂苷 Re 峰计算应不低于 000 吸光度/ABs 7 从紫外光谱图可以看出在 0 nm 处人参皂苷参照中国药典人参项下的条件故选择检测波长为 0 nm 波长/mm 波长/mm 注 A. 人参皂苷 Rg 对照品 B. 人参皂苷 Re 对照品.4. 图 4 人参皂苷 Rg 对照品紫外光谱图对照品溶液的制备精密称取人参皂苷 Rg 对照品人参皂苷 Re 对照品适量加甲醇制成每 ml 中人参皂苷 Rg 含 90 μg 人参皂苷 Re 含 0 μg 的混合溶液摇匀即得.4. 供试品溶液的制备取本品 g 研细精密称定置具塞锥形瓶中精密加入甲醇 00 ml 密塞称定重量加热回流提取 h 放置至室温再精密称定重量用甲醇补足减失的重量摇匀滤过精与人参皂苷 Rg Re 对照品色谱图中相同的保留时间处无吸收峰表明阴性对照品无干扰见图.4. 标准曲线的制备及线性关系考察取人参皂苷 Rg 对照品贮备液每 ml 中人参皂苷 Rg 含量 0.44 mg 人参皂苷 Re 对照品贮备液每 ml 中人参皂苷 Re 含量 0.0 mg 精密量取上述两种溶液各与.0 ml 分别置 ml 量瓶中加甲醇至刻度摇匀即得分别精密吸取密吸取续滤液 0 ml 蒸干残渣加 0%氢氧化钠溶 0 μl 测定以进样量为横坐标峰面积为纵坐用水饱和正丁醇提取 4 次每次 0 ml 合并正丁醇归方程为 Y= X+.700 r= 液 ml 使溶解加水 ml 并转移至分液漏斗中提取液用水洗涤次每次 0 ml 弃去水液正丁醇液蒸干残渣加水 ml 使溶解通过 D0 型大孔吸附树脂柱内径. cm 长 0 cm 上先以水 00 ml 洗脱弃去水液再以 70%乙醇 00 ml 洗脱收集洗脱液蒸干残渣用甲醇溶解并转移至 0 ml 量瓶中加甲醇稀释至刻度摇匀用微孔滤标绘制标准曲线回归方程人参皂苷 Rg 的回结果表明人参皂苷 Rg 在 0.~.74 μg 范围内线性关系良好人参皂苷 Re 的回归方程为 Y= X r= 结果表明人参皂苷 Re 在 0.44~.0 μg 范围内线性关系良好.4. 精密度试验取人参皂苷 Rg 人参皂苷 Re 对照品混合溶液连续重复进样次每次 0 μl 按膜 0.4 μm 滤过即得同法制备人参药材溶液.4. 项下色谱条件进样分别测得人参皂苷 Rg 除人参外的其余药材制备缺人参阴性对照品按峰面积的 RSD%=0.77% n= 人参皂苷 Re 峰面积.4.4 缺人参阴性样品的制备按处方比例称取.4. 项下方法制成缺人参的阴性对照溶液在 7 Re 的峰面积考察其精密度结果人参皂苷 Rg 的 RSD%=0.% n= 表明进样精密度良好

人参皂苷 Rg 对照品 B. 人参皂苷 Re 对照品.4. 图 4 人参皂苷 Rg 对照品紫外光谱图对照品溶液的制备精密称取人参皂苷 Rg 对照品人参皂苷 Re 对照品适量加甲醇制成每 ml 中人参皂苷 Rg 含 90 μg 人参皂苷 Re 含 0 μg 的混合溶液摇匀即得.4. 供试品溶液的制备取本品 g 研细精密称定置具塞锥形瓶中精密加入甲醇 00 ml 密塞称定重量加热回流提取 h 放置至室温再精密称定重量用甲醇补足减失的重量摇匀滤过精与人参皂苷 Rg Re 对照品色谱图中相同的保留时间处无吸收峰表明阴性对照品无干扰见图.

4 总第期医学注 A. 人参皂苷 Rg 人参皂苷 Re 混合对照品 B. 人参药材 C. 参苓白术颗粒样品 D. 参苓白术颗粒阴性样品图高效液相色谱图.4.7 稳定性试验取同一供试品溶液批号 00 分别于 h 按.4. 项下色谱条件进样次测定峰面积结果人参皂苷 Rg 峰面积的 RSD% =0.% 人参皂苷 Re 峰面积的 RSD%=0.4% 表明供试品溶液在 4 h 内峰面积基本稳定.4.8 重复性试验取同一批样品批号 00 9 份每份约 7. g 精密称定精密加入人参皂苷 Rg 对照品溶液.9 ml 每 ml 中人参皂苷 Rg 含量 0.44 mg 人参皂苷 Re 对照品溶液.0 ml 每 ml 中人参皂 Re 含量 0.7 mg 按.4. 项下方法制成供试品溶液并按.4. 项下色谱条件进行测定计算加样回收率见表表人参皂苷 Rg 回收率试验结果适量研细取份每份约 g 精密称定置具塞编号按.4. 项下色谱条件进样测定其人参皂苷 Rg 锥形瓶中按.4. 项下方法制成供试品溶液并 Re 的含量结果人参皂苷 Rg 含量的 RSD% =.% n= 人参皂苷 Re 含量的 RSD% =0.74% n= 结果表明本方法重复性较好.4.9 加样回收率试验取已测定含量的同一批样品批号 00 已测定含人参皂苷 Rg 的含量为 mg/g 人参皂苷 Re 的含量为 mg/g 样品称样品含量/g 加入测得平均回 RSD/ 收率/% % 回收率/%

4. 项下色谱条件进行测定计算加样回收率见表表人参皂苷 Rg 回收率试验结果适量研细取份每份约 g 精密称定置具塞编号按.4. 项下色谱条件进样测定其人参皂苷 Rg 7.0 8 0.7 0.87 9.9 8.90 7 0.908 0.87 9.7 0. 锥形瓶中按.4. 项下方法制成供试品溶液并 Re 的含量结果人参皂苷 Rg 含量的 RSD% =.

5 总第期邵维在段治尚万德生等表人参皂苷 Re 回收率试验结果编号样品称样品含量/g 加入测得回收率/% 均为臣药砂仁芳香渗湿醒脾和胃行气化滞是平均回 RSD/ 收率/% % 规格 g/袋按.4. 项下方法制成供试品溶液并按.4. 项下色谱条件依法测定见表样品/ mg/袋批号 00 批号 0 批号 0 人参皂苷Rg含量人参皂苷Re含量总量批总量平均值总量平均值性鉴别在含量测定方面对君药人参的成分 Rg Re 进行定量控制经过严格的方法学考察实验定性定量质控方法成熟专属性强纳入标准 97.9 表样品测定结果胃调和诸药为使药 8 结合该药品组方的君臣佐定性鉴别并进行优化增加人参白术两味君药定取参苓白术颗粒三批样品样品含量测定为佐药桔梗宣肺利气通调水道炙甘草健脾和使全面的控制其质量我们保留原标准中甘草的第卷.0 参考文献中华人民共和国卫生部. 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第二十册 S 曲婷丽邓亚宁郝丽宏等. 参苓白术颗粒的薄层色谱鉴别方法研究 J. 中成药国家药典委员会. 中华人民共和国药典一部 S. 北京中国医药科技出版社刘敬赵斌王琼等. 克刻胶囊中甘草薄层鉴别方法的改进 J. 中国民族民间医药肖霞曹俊凯. 人参当归颗粒的薄层鉴别 J. 中国实用医药讨论参苓白术颗粒是我企业常年生产的品种原质量标准较低仅有一个甘草定性鉴别项没有其他定性或定量项方中人参白术茯苓为君药人参益气白术健脾茯苓渗湿配伍山药莲子白扁豆薏苡仁健脾益气渗湿止泻内助君药增强药效付丽芳付丽萍. 健脾口服液中党参白术的薄层鉴别 J. 时针国医国药周芳. HPLC 法测定参苓白术颗粒中人参皂苷的含量 J. 中国试验方剂学杂志黄道金李瑞云. 参苓白术散临床运用拾遗 J. 海南医药 Study on the Quality Standards of Shenglingbaizhu Granule Shao Weizai, Duan Zhishang, Wan Desheng, Liu Bici, Que Yuling Research and Development Department of Tengyao Pharmaceutical Company, Tengchong, Yunnan 7900, China Abstract Objective: To develop a method for revising and improving the quality standards of Shenlingbaizhu Granule. Methods: Glycyrrhiza, ginseng and atractylodes were identified by Thin- layer chromatography TLC method, Ginsenoside Rg and Re in ginseng were quantitatively analyzed by high performance liquid chromatography HPLC methed. Results: HPLC assay results showed good linear relationships of range 0.~.74 μg r= for Rg and range 0.44~. μg r= for Re, respectively. The average recoveries n= was 98.% RSD:.8% for Rg and 97.4% RSD:.0% for Re. Conclusion: The established method has good reproducibility and specificity, which could be used as the quality control strandard of Shenlingbaizhu Granule. Key words Shenlingbaizhu Granule; thin-layer; HPLC; glycyrrhiza; atractylodes; ginsenoside 责任编辑 9 毛本勇

9 表样品测定结果胃调和诸药为使药 8 结合该药品组方的君臣佐定性鉴别并进行优化增加人参白术两味君药定取参苓白术颗粒三批样品样品含量测定为佐药桔梗宣肺利气通调水道炙甘草健脾和使全面的控制其质量我们保留原标准中甘草的 98.09 97.4 第卷.0 参考文献中华人民共和国卫生部. 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第二十册 S. 998 84.

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不同基源石斛属植物不同来源商品石斛徐蓓杨莉陈崇崇王峥涛徐珞珊建立黄草类石斛的薄层色谱定性鉴别方法采用薄层色谱法考察不同基源石斛及商品药材中专属性成分联苄类化合物毛兰素石斛酚杓唇石斛素和三羟基甲氧基联苄的薄层色谱行为对石斛药材进行定性鉴别通过种不同基源的石斛及批商品石斛的薄层色谱鉴别证明此方法专属性强操作简单重复性好为石斛的鉴别提供了一种准确有效的新方法本方法可用于黄草类石斛的鉴别为中药石斛的质量标准研究提供科学依据