畜 牧 兽 医 学 报! 卷 408;6 + ( 4$#=$- - ; (-4( - 2 ;:(-6 ( + 3-( 4 7 4* 4*(7:* =(1 8 : 6 94* -6 ( + 3-( 4 7 4* 4*(7 * 62 4-(4 4*( %+ "! ;6 + ( 4 -

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1 畜牧兽医学报 11 牛源犬新孢子虫对 0!07+ 孕鼠胎盘激素和细胞因子调节功能的影响 贾立军 马 莉 张守发 李男礼 赵 鹏 李积旭 延边大学农学院动物医学系 延吉 辽宁省凌海市动物疫病预防控制中心 凌海 摘 要 旨在探讨牛源犬新孢子虫对孕鼠胎盘激素和细胞因子调节功能的影响 以牛源犬新孢子虫 $#$=- 孕鼠感染模型为研究对象 同时设置正常对照组孕鼠 在攻虫第 天分批处死孕鼠 采集孕鼠血清 制备孕鼠胎盘细胞悬液 采用 = "# 方法对牛源犬新孢子虫感染孕鼠血清中 &'/&1 '= 及 等胎盘激素水平 以及孕鼠胎盘细胞悬液中 0 = 及 1 等细胞因子水平进行检测 结果显示 与正常对照组孕鼠比较 牛源犬新孢子虫感染孕鼠模型随攻虫时间的增加 在孕鼠血清中 &'/ 水平在第 天时显著升高 在第 天时显著下降 &1 水平在第 天时显著下降 在第 天时显著升高 '= 水平在第 天时显著下降 水平在第 天时显著升高 第 天时显著下降 在孕鼠胎盘细胞悬液中 0 水平在第 天时显著升高 = 水平在第 天时显著升高 1 水平在第 天时显著升高 结果表明牛源犬新孢子虫感染导致孕鼠胎盘激素和细胞因子的调节功能失衡 严重影响胎盘血流 胎盘物质转运及胎儿生长发育 将导致不良妊娠的发生 关键词 犬新孢子虫 $#$=- 孕鼠 胎盘 激素 细胞因子中图分类号 "! 文献标志码 # 文章编号! "#+&- # +& #<- "- &$'. - &$6& # - & 0!70++&&+ &' 0- &'# "$*$ #= 2 #= /#01"*23( = 0( /#> + =,2 1+! & ("" * #$%&*4!(%%+$ ()! $ + 844* ( ( ;6 + ( 4$#=$- - ; (-4( *6 ( (29798%+ "! ;64 427: 4(9* 4* ;6 + ( 4$#=$ :4*98%+ "!( ;6 + ( 4$#=$ ( +( ; (-*+62;: 6(-63-4* 4*4* 4*4*(7( * ; (-4( *6&'/&1 '=( 62 ( =(1; (-4( - 2 ;36 ;6 + ( 4 - : = "# 4*& ;(6 :4* ;4* 62 4*: 4*(4&'/8 ;6 + ( 4$#=$ :(+ 3-( ( 4* 4*(7( -6 ( + 3-( 4 7 4* 4*(7( :*1&8 :(-6 ( + 3-( 4 7 4* 4*(7(-6 ( + 3-( 4 7 4*4*(7 '= 8 :(-6 ( + 3-( 4 7 4* 4*(78 :(+ 3-( ( 4* 4*(7(-6 ( + 3-( 4 7 4*4*(7#44*( 收稿日期 资金项目 国家自然科学基金 吉林省重点科技攻关项目!0 吉林省教育厅重点项目 吉教科合字 第 号 吉林省自然科学基金 & 作者简介 贾立军! 男 吉林镇赉人 副教授 博士 主要从事分子免疫学研究 ( (792 2-

2 畜 牧 兽 医 学 报! 卷 408;6 + ( 4$#=$- - ; (-4( - 2 ;:(-6 ( + 3-( 4 7 4* 4*(7:* =(1 8 : 6 94* -6 ( + 3-( 4 7 4* 4*(7 * 62 4-(4 4*( %+ "! ;6 + ( 4 - :2 (4 9( ( - 3; (-4( *6( ( ( 627(3-4; (-4( 9 3 :; (-4( (46(;643 4( +6:4*(8; 4# 4* : (4(8 6;6 + ( -724-,& - '$98%+ "!;6 + ( 4$#=$- - ; (-4(*6-745 犬新孢子虫 %+ "! 是寄生于牛 羊 犬等多种哺乳动物细胞内的一种原虫 犬新孢子虫主要引起母畜流产 死胎或新生儿运动障碍和 神经系统疾病 新孢子虫病可垂直传播 对牛的危害极为严重 已成为危害养牛业健康发展的主要! 因素之一 ' -* 等统计显示 全球每年因犬新孢子虫感染或流产所造成的经济损失最高达 亿美元 目前 国内外对犬新孢子虫的研究虽然取得了一定进展 但犬新孢子虫引起孕畜流产 死胎的致病作用还不明确 尤其是犬新孢子虫对胎盘的损伤作用尚不清楚 胎盘是母体妊娠期的多功能器官 在母体与胎儿之间起着非常重要的作用 承担着母胎之间的气体交换 营养供应 新陈代谢及疾 病防御等功能 胎盘分泌的激素和细胞因子在妊娠期中的作用极其重要 胎盘分泌多种激素类物质 以此维持母体的正常妊娠 胎盘和胎儿生长发育 及母胎之间物质转运等 胎盘分泌的细胞因子一方面可以促进胎盘生长 另一方面又可以抑制胎 盘生长 胎盘功能失调必将影响胎儿的正常发育和健康生长 因此 作者以牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型为研究对象 对影响胎盘物质转运 胎盘血流及胎儿生长发育的激素和细胞因子等水平进行检测 以期为犬新孢子虫致病作用的研究奠定基础 实验动物分组与处理 $#=$- 小鼠购自延边大学实验动物中心 随机选取 周龄 雌性 体重 + 左右 $#=$- 小鼠 只 分为牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型组 同时设立正常孕鼠对照组 每组 只 于攻虫第 天分批处死孕鼠 每批 只 采集孕鼠血液 分离血清 同时分离胎鼠胎盘 制备胎盘组织细胞悬液 孕鼠血清中胎盘激素水平检测按不同时间将模型组和对照组收集的孕鼠血清样本 分别按照 &'/&1 '= 及 试剂盒说明进行检测 根据标准品的浓度及对应的 >% 值 绘制标准曲线的直线回归方程 再根据检测样品的 >% 值计算对应样品的浓度 孕鼠胎盘细胞悬液中细胞因子水平检测按不同天数将模型组和对照组制备的孕鼠胎盘细胞悬液 分别按照 0 = 及 1 试剂盒说明进行检测 根据标准品的浓度及对应的 >% 值 绘制标准曲线的直线回归方程 再根据检测样品的 >% 值计算对应样品的浓度 数据统计应用 " "" 软件进行统计分析 数据以平均值 A 标准差 3 A% 表示 为差异显著 为差异极显著 材料与方法 主要试剂和虫株组织 %0# 提取试剂盒 凝胶回收试剂盒 %0# (65 6, (. 酶等均购自宝生物工程大连有限公司 &'/&1 '= 等胎盘激素检测试剂盒 0 = 1 等细胞因子检测试剂盒均购自美国 #% 公司 其他常规试剂为进口或国产分析纯产品 牛源犬新孢子虫延边株由延边大学预防兽医 学实验室分离 6 细胞由延边大学预防兽医学实验室培养 保存 结 果 牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型胎盘中虫体 :! 检测 $#=$- 小鼠接种牛源犬新孢子虫速殖子后 孕鼠先后出现被毛逆立 共济失调等临床症状 接种虫体第 天时 在胎盘组织中均检测到了犬新孢子虫 基因 9; 目的条带 图 经测序与 1$( 5 中 # 相似性为 经对染虫孕鼠的整体评估 确定孕鼠感染模型符合试验标准

3 期 贾立军等 牛源犬新孢子虫对 $#$=- 孕鼠胎盘激素和细胞因子调节功能的影响 %=%0# 相对分子质量标准 基因阳性对照 接种虫体第 天 接种虫体第 天 接种虫体第 天 接种虫体第 天 &' 水对照 %= %0# -2 (6: +*4 ( * 4*(7( * 4*(7( *4*(7( * 4*(7( (48-46 图 接种虫体不同天数孕鼠胎盘 '* 基因检测结果 %'* & &$"& $&' # +& -&" +&& ' +&'' $& &+- 影响胎盘血流指标.6< 的检测影响胎盘血流指标的 &'/ 检测结果表明 随孕期或攻虫时间的增加 对照组孕鼠 &'/ 浓度持续上调 而模型组孕鼠 &'/ 浓度持续下调 二者变化方向相反 模型组与对照组比较 在第 天时 孕鼠血清中 &'/ 水平差异显著 在第 天时 &'/ 水平差异极显著 表 影响胎盘物质转运指标.9 67* 的检测影响胎盘物质转运指标 &1 检测结果表明 随孕期或攻虫时间的增加 对照组孕鼠 &1 浓度先下调再上调 而模型组孕鼠 &1 浓度持续上调 模型组与对照组比较 在第 天时孕鼠血清中 &1 水平差异极显著 在第 天时孕鼠血清中 &1 水平差异显著 表 表 孕鼠血清中.6< 浓度变化, 3 /#&/)&+- +&- +)&-.6< )&$&"-&" +&, 3 + = 攻虫后不同时间 &'/ 浓度 &'/- -46(4 (43 644; 第 天 * 4*(7 第 天 * 4*(7 第 天 *4*(7 第 天 * 4*(7 对照组 & ; A A! A A 模型组 +62; A!A A! A 与对照组相比较 表示差异显著 差异极显著 下表同 & ;(6 :4*- 46 "+ 3-( "+ 3-( 43 6-*(( 9: 表 孕鼠血清中.9 浓度变化, 3 /#&/)&+- +&- +)&-.9 )&$&"-&" +&, 3 + = 攻虫后不同时间 &1 浓度 &1- -46(4 (43 644; 第 天 * 4*(7 第 天 * 4*(7 第 天 *4*(7 第 天 * 4*(7 对照组 & ; A! A! A A 模型组 +62; A A A! A! 影响胎盘物质转运指标 '= 检测结果表明 随孕期或攻虫时间的增加 对照组和模型组孕鼠 '= 水平均出现先下调后上调现象 但模型组 '= 整体 水平较对照组低 模型组与对照组比较 在第 天时孕鼠血清中 '= 水平差异显著 表

4 畜 牧 兽 医 学 报! 卷 表 孕鼠血清中 67 浓度变化, 3 /#&/)&+- +&- +)&- 67 )&$&"-&" +&, 3 + = 攻虫后不同时间 '= 浓度 '=- -46(4 (43 644; 第 天 * 4*(7 第 天 * 4*(7 第 天 *4*(7 第 天 * 4*(7 对照组 & ; A!A A A 模型组 +62; A A! A! A 影响胎盘物质转运指标 检测结果表明 随孕期或攻虫时间的增加 对照组和模型组孕鼠 水平均呈现上下波动变化 但模型组孕鼠 水平 波动变化明显 模型组与对照组比较 在第 天时孕鼠血清中 水平差异显著 表 表 孕鼠血清中 * 浓度变化, 3 /#&/)&+- +&- +)&-* )&$&"-&" +&, 3 ;+= 攻虫后不同时间 浓度 - -46(4 (43 644; 第 天 * 4*(7 第 天 * 4*(7 第 天 *4*(7 第 天 * 4*(7 对照组 & ;! A!!A A A! 模型组 +62;! A A A! A 孕鼠胎盘细胞悬液中 % 浓度变化通过对 0 检测结果显示 随孕期或攻虫时间的增加 对照组和模型组孕鼠 0 水平均出现先上调后下调现象 但模型组孕鼠 0 整体水平 高于对照组 模型组与对照组比较 在第 天时孕鼠胎盘细胞悬液中 0 水平差异显著 表 表 孕鼠胎盘细胞悬液中 % 浓度变化, 3 /#&/)&+- +&- +)&- % # +& #+&#$$ $ & $ - -&" +&, 3 += 攻虫后不同时间 0 浓度 (4 (43 644; 第 天 * 4*(7 第 天 * 4*(7 第 天 *4*(7 第 天 * 4*(7 对照组 & ;!A! A A A 模型组 +62; A A!!A!A 孕鼠胎盘细胞悬液中 7 浓度变化通过对 = 检测结果显示 随孕期或攻虫时间的增加 对照组孕鼠 = 水平处于平衡状态 而模型组孕鼠 = 浓度先下调后上调 且模型组孕鼠 = 整体水平高于对照组 模型组与对照组比较 在第 天时孕鼠胎盘细胞悬液中 = 水平差异显著 表 表 孕鼠胎盘细胞悬液中 7 浓度变化, 3 /#&/)&+- +&- +)&- 7# +& #+&#$$ $ & $ - -&" +&, 3 ;+ = 攻虫后不同时间 = 浓度 =- -46(4 (43 644; 第 天 * 4*(7 第 天 * 4*(7 第 天 *4*(7 第 天 * 4*(7 对照组 & ;!A!!A! A! A 模型组 +62; A A A!A

5 期 贾立军等 牛源犬新孢子虫对 $#$=- 孕鼠胎盘激素和细胞因子调节功能的影响 孕鼠胎盘细胞悬液中 /9% 浓度变化 通过对 1 检测结果显示 随孕期或攻虫时间的增加 对照组孕鼠 1 水平先上调后下调 而模型组孕鼠 1 水平持续上调 模型组与对照组比较 在第 天时孕鼠胎盘细胞悬液中 1 水平差异显著 表! 表 孕鼠胎盘细胞悬液中 /9% 浓度变化, 3 /#&/)&+- +&- +)&-/9%# +& #+&#$$ $ & $ - -&" +&, 3 ;+ = 攻虫后不同时间 1 浓度 (4 (43 644; 第 天 * 4*(7 第 天 * 4*(7 第 天 *4*(7 第 天 * 4*(7 对照组 & ; A A A!A 模型组 +62;!A!!A!A!A 讨 论 胎盘是妊娠期一个暂时的多功能器官 在妊娠期间胎盘分泌激素的作用极为重要 &'/&1 '= 等均为胎盘分泌的激素 胎盘激素的合成与释放 直接影响着母体妊娠 胎儿生长发育 母胎之间的物质转运 胎盘细胞的增殖分化等 促肾上腺皮质激素释放激素 &'/ 是肽类激素 妊娠期间胎盘合成 &'/ 可作用于妊娠期子宫 产生重要的旁分泌和自分泌功能 有利于妊娠期的免疫耐受和保护胚泡植入 &'/ 重要的生理功能是扩张胎盘血管 对保障母体与胎儿之间的血流灌注 胎儿新陈代谢 缓解胎儿缺氧应激等方面具有生理性代偿的保护作用 本试验结果显示 随攻虫时间的增加模型组孕鼠 &'/ 浓度持续下调 与对照组变化方向相反 在第 天时 &'/ 水平与对照组差异极显著 可能是由于牛源犬新孢子虫入侵胎盘细胞后 随着虫体入侵时间的延长 造成胎盘细胞损伤愈加严重 提示胎儿在此阶段可能出现缺血缺氧状态 期间可能损伤血管细胞和胎盘细胞 绒毛膜促性腺激素 &1 是由胎盘滋养层细胞分泌的糖蛋白类激素 妊娠期间在血浆和尿液中含量较高 &1 可调节类前列腺素和固醇激素的合成 &1 还具有免疫抑制作用 血浆中 &1 含量变化可预测和诊断妊娠高血压综合征 流产 胎儿缺氧 胎儿! 宫内发育迟缓等多种妊娠不良结局 胎盘催乳素 '= 是由胎盘合体滋养细胞合成释放的蛋白激素 '= 可促进胎盘细胞的分化增殖 胎儿的营养物质代谢和能量代谢等 若胎盘催乳素分泌异常 可导致不良妊娠 妊娠期血清中雌三醇 主要由胎盘合成 妊娠期间 雌三醇在母体血浆中的含量变化能反应胎儿与胎盘功能 雌三醇含量减少 可导致 胎儿畸形或胎儿宫内发育迟缓等症状 &1 '= 均是影响胎盘物质转运功能的重要激素 本试验中模型组孕鼠随攻虫时间的增加 与对照组比较 模型组孕鼠 &1 浓度持续上调 在第 天时 &1 水平差异极显著 在第 天时 &1 水平差异显著 提示 &1 浓度的持续上调 极可能导致孕鼠发生流产 死胎 胎儿宫内发育迟缓现象的发生 模型组孕鼠 '= 水平先下调后上调 与对照组比较 整体水平显著降低 在第 天时 '= 水平差异显著 提示虫体入侵造成胎盘病理性损伤 导致胎盘功能减退 严重影响胎儿的能量代谢和对营养物质的摄取 可能导致胎儿在宫内出现营养不良或发育迟缓等现象 模型组孕鼠 水平波动变化明显 与对照组比较 在第 天时 水平差异显著 提示产前 含量显著变化 可导致胎儿畸形或胎儿宫内发育迟缓等现象 细胞因子与妊娠之间有着密切的关系 正常妊娠情况下 胎盘分泌 0 = 及 1 等多种细胞因子 #' 94 等研究表明 细胞因子在犬新孢子虫感染过程中具有一定作用 可能与胎儿 的死亡有关 &=N; )6 ) 等研究表明 在犬新孢子虫感染的孕鼠脾中 0 = 的增加和孕鼠胎盘中 = 的表达 可能提高犬新孢子虫经胎盘 传播给胎儿的概率 "# 6M( 等研究证实 在犬新孢子虫感染母畜的胎盘组织中 细胞因子 0 表达上调和 1 的表达下调有利于胎儿存活 表明细胞因子对犬新孢子虫的胎盘传播具有重要作 用 本试验中模型组孕鼠随攻虫时间的增加 在孕鼠胎盘细胞悬液中 0 和 = 整体水平均显著高于对照组 这可能是导致犬新孢子虫垂直传播的主要因素 而模型组 1 水平持续上调 将不

6 畜 牧 兽 医 学 报! 卷 利于胎儿存活 可能是导致流产 死胎的重要因素 结 论牛源犬新孢子虫感染孕鼠后 胎盘激素 &'/ 水平的持续下调 将影响母体与胎儿之间的血流灌注 导致胎儿出现缺血缺氧状态 胎盘激素 &1 '= 及 调解功能失衡 是胎盘组织病理损伤和滋养层细胞凋亡增加的病理生理基础 将导致不良妊娠的发生 细胞因子 0 = 及 1 水平上调 将提高虫体垂直传播的概率 严重影响胎儿正常生长发育 参考文献 6&& & +&$ % $&#'0' =" ' & # 4( 0 : ) 3( ( ;64)( (3+,! (%?=# #&/#%> 1 #0# > ' 4( '(4 9 4: 0;6(-(2 ( (964 (67-: ' 53(-46 ( ;(4*+ 3( < =">0 % >'" =?<#%% 01 >0 4( 0;6(-(24* ( +-( ( $64 * & 2 9(&( ((% 贾立军 于龙政 张守发 表达牛源犬新孢子虫 0. 基因重组腺病毒的构建及免疫原性分析 畜牧兽医学报 #= =/#01" & (6-9 ( 4(862,;6+ 0-"'";643 98%+ "! ( ( ( 7 34* ;64 &* 邹世颖 何倩妮 王小蕾 等 我国北方六省市牛新孢子虫病血清学调查 中国兽医杂志 > " / B 0<#01 = 4( " 6 +-( 84+(4 30;6,;68-64* 6 &* ( %, " & ( &* 李 坤 高建峰 韩照清 等 西藏部分地区黄牛新孢子虫流行病学调查 中国奶牛! =?1#>/#0 B 4( " ;6 8( - 3 ;6(-(23-4-( &! &*! /#> #01 0& 4(6 4(4 3 0;6(-( ( (426( (2 4(67-: $ +&* (, % '&/ = #=#0%'# # #0 1 #=& '' &# 1>0% = 4( <*(4 4* + 9(-- ;(-430;6(-(2-(4 4 * 9 (6.24/, % 饶华祥 侯玉英 刚地弓形虫感染致胎盘损伤作用的研究进展 中国病原生物学杂志 '#> / /> * 6 (6-*;6+6 ; (-4( %! ( 3-4, " & &* 赵晋英 侯玉英 李艳伟 等 孕中期弓形虫感染对孕鼠血清孕酮及雌三醇含量的影响 中国病原生物学杂志! /#>/> = < 4(*-6 (3 4* ;6+4 6( 46 3;6 + ( :4*- 3 +%! (, " &! &* '>"$>> #1 $0 /1&" 4(; 6 +2 ( * ; (-4( 3 -(4 3-4 :4* 0;6(-(2 ( 6 (65(6 7 +4(4 :*3 4((4* 968 / /!!"! 岳慧萍 饶华祥 侯玉英 等 弓形虫感染对妊娠中期孕鼠血清中胎盘激素含量的影响 中国病原生物学杂志!! / '#> / /> 4( ; (-4( *6 $#=$ :4*- 3 +%! (26 +4* , " &!! &* 张慧芳 侯玉英 岳慧萍 等 孕鼠弓形虫感染对胎盘激素水平的影响 中国病原生物学杂志! /#01 / /> / 4( %! ( 3-4; (-4(*6 ;6 + ( 4$#=$- -, " 0 &! &* 郭保平 徐明龙 胡 进 等 %/ # 诱导雌性大鼠 &>" 模型早期性器官及其相关激素变化的研究 畜牧兽医学报 1 >$ =/ 4( "42 -*( +3,2( 6+(( 4* 66(4 *626 +4*

7 期 贾立军等 牛源犬新孢子虫对 $#$=- 孕鼠胎盘激素和细胞因子调节功能的影响 (6 7;*(*76 ;( ( 6(4; (6(7 60 &* #=/#01" = 4((4 43-(4 ( ;(4*+-473 ;6(-(2 &* ( ( 9(46(/, % "' #0 #0=# /%#0& " * 3-43*7;,( ;*9 ( 4*67 4* ( 6 (!!! #="#<=>" #=#"" 0D # 4( /7 ;,( ;(6-32( 3 64(4 ;6- *2 ( -7446;*9 ( 4$, &% = D' &&>==#0"'0 0% '> > >0 >" 4(3-4 30;6(-( 23-4 (4 +4(4; (-4( (;6 + ( 4 2, %! #='K# "#'#> ' 0%#'< &/ = 4( &745+,;6(44*( (4 6 3(- (34 6,; 6 4( 0;6(-( * 3 6 (4(7 3+4(4 %/!!"0! 编辑 白永平

高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白

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