212 暨南大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 thedecline.thereisasignificantdiferenceintheexpresionofhsp70andil 1βbeforeandaftertreat mentininterventiongroup(p<0 05).Ther

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绰广
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1 第 34 卷第 2 期暨南大学学报 ( 医学版 ) Vol.34 No 年 4 月 JournalofJinanUniversity(MedicineEdition) Apr 三仁汤干预脾胃湿热型慢性糜烂性胃炎后 HSP 70 及 IL 1β 的变化张伦 1, 黄紫锋 2, 刘友章 3, 戈焰 1, 罗露露 4 3, 林传权 (1. 广东省第二中医院脾胃病科, 广东广州 ;2. 龙川县中医院内科, 广东河源 ; 3. 广州中医药大学内科教研室, 广东广州 ;4. 广东省中医院内科, 广东广州 ) [ 摘要 ] 目的 : 基于治疗前后热休克蛋白 70(HSP 70) 白细胞介素 1β(IL 1β) 以及中医证侯变化, 主客观指标合参, 评价三仁汤干预脾胃湿热型慢性糜烂性胃炎 (CEG) 的临床疗效及可能机制方法 :140 例符合诊断标准纳入标准的 CEG 患者按 1 1 随机分为治疗组和对照组, 治疗组予三仁汤干预 4 周, 对照组予安慰剂干预 4 周详细记录治疗前治疗后中医证侯变化 ; 应用实时免疫酶链反应 (Real timepcr) 技术检测胃黏膜 HSP 70 IL 1β 变化结果 : 三仁汤治疗脾胃湿热型慢性糜烂性胃炎总有效率为 84 28%, 对照组总有效率为 30%, 治疗前两组患者 HSP70mRNA 表达呈下降趋势,IL 1βmRNA 表达呈上升趋势 ; 治疗后, 治疗组血清 HSP70mRNA 表达呈上升趋势, 与治疗前比较有统计学差异 (P<0 05);IL 1βmRNA 变化较治疗前比较, 变化明显下降, 有统计学差异 (P<0 05); 对照组血清 HSP70 及 IL 1βmRNA 较治疗前比较, 无统计学差异 (P>0 05) 结论: 三仁汤可能通过诱导 HSP 70 表达, 抑制 IL 1β 分泌从而发挥治疗慢性糜烂性胃炎作用 [ 关键词 ] 热休克蛋白 70; 白细胞介素 1β; 三仁汤 ; 脾胃湿热 ; 慢性糜烂性胃炎 [ 中图分类号 ] R259 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2013) EfectofSanRendecoctiontreatingchronicerosivegastritis basedonthechangesofhsp70andil 1β ZHANGLun 1, HUANGZifeng 2, LIUYouzhang 3, GEYan 1, LUOLulu 4, LINChuanquan 3 (1.DeparmentofthePiweiDisease,theSecondGuangdongHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou,510095,China; 2.DepartmentofInternalMedicine,LongchuanCountyHospitalofTraditionalChineseMedicine,GuangdongHeyuan517300,China; 3.StafRoomofInternalMedicine,TraditionalChineseMedicineUniversityofGuangzhou,Guangzhou,510000,China; 4.DepartmentofInternalMedicine,GuangdongHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou,510000,China) [Abstract] Aim:ThemechanismsofSanRendecoctioninterferingwithchronicerosivegastritiswere discusedbyobservingthetcmsyndromeandthechangesofhsp70andil 1β.Methods:Onehundred andfortycegpatientsweredividedintotwogroupsrandomly.eachgroupwasadministratedwithsan Rendecoctionandplacebofor4weeksrespectively.Thechangesofclinicalmanifestationsweredocu mentedbeforeandaftertreatment.theexpresionofhsp70andil 1βwereasayedbyReal timepcr. Results:ThetotalefectrateofSanRendecoctionintreatingCEGis84 28%.Thetotalefectratein Controlgroupis30%.Beforetreatment,theexpresionofHSP70mRNAisonthedecline,whereasthe expresionofil 1βmRNAisontheincrement.Aftertreatment,theexpresionofHSP70mRNAinin terventiongroupisontheincrement.howevertheexpresionofil 1βmRNAininterventiongroupison [ 收稿日期 ] [ 基金项目 ] 广东省中医药局基金项目 ( [ 作者简介 ] 张伦 (1976-), 女, 副主任中医师, 博士. 研究方向 : 中西医结合辩证诊疗消化内科疾病.

2 212 暨南大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 thedecline.thereisasignificantdiferenceintheexpresionofhsp70andil 1βbeforeandaftertreat mentininterventiongroup(p<0 05).ThereisnosignificantdiferenceintheexpresionofHSP70and IL 1βmRNAincontrolgroupbeforeandaftertreatment(P>0 05).Conclusion:SanRendecoctionex ertsanexactefectonaleviatingchronicerosivegastritisbyregulatingtheexpresionofhsp70andil 1β. [Keywords] Heatshockprotein 70; Interleukin 1beta; SanRendecoction; dampnes heatof spleenandstomach; chronicerosivegastritis 慢性糜烂性胃炎 (chronicerosivegastritis,ceg) 是指不同病因引起的胃黏膜破损未达肌层的慢性炎症, 临床上十分常见, 男性多于女性, 随年龄增长发病率逐渐增高 [1] 据流行病学调查 CEG 发病以胃窦为主要部位, 约 20% 有并发十二指肠球部溃疡风险 ; 以胃体为主患者与健康人群相比, 存在 2% 有并发腺瘤风险, 严重影响患者生存质量 [2] 现阶段, 西药治疗 CEG 主要以对症治疗为主, 如胃黏膜保护剂杀灭幽门螺杆菌 (Hp) 促胃肠动力及抑制胃酸分泌等西药因其价格昂贵, 病人往往难以承受 [3] 大量的临床实践证实,CEG 属于中医药治疗优势病种, 本研究采用随机双盲对照, 探讨三仁汤干预 CEG 临床疗效及其可能机制 1 材料与方法 1.1 材料病例来源全部病例均源自于 2009 年 2 月至 2010 年 12 月广东省第二中医院及龙川县中医院消化内科门诊及住院患者其中男 68 例, 女 72 例, 平均年龄 (43 01±7 45) 岁, 平均病程 (3 46± 1 20) 年诊断标准 ( 西医诊断标准参照 2003 年中华消化内镜学分会大连会议 CEG 内镜分型分级标准及中华医学会消化病分会上海会议 CEG 研讨会共识意见 [4] 糜烂性胃炎内镜诊断标准: 糜烂 ( 平坦 / 隆起疣状 ), 黏膜破损浅, 周围黏膜平坦或隆起分级标准 :Ⅰ 级 : 单发 ;Ⅱ 级 : 多发局部 5;Ⅲ 级 : 多发广泛 6 (2) 中医诊断标准 2008 年中华中医药学会发布中医内科常见疾病诊疗指南西医疾病部分关于 CEG 辨证分型标准 [5] 脾胃湿热型主症 1 胃脘胀痛拒按或脘腹痞闷不舒 ;2 舌质红, 苔黄厚或腻 ;3 渴不欲饮 ; 次症 1 口苦口粘 ;2 小便短黄或大便不爽 ;3 脉滑或濡数具备主症 2 项 (2 为必备 ) 加次症 1 项 (3) 纳入标准 1 胃镜提示胃黏膜糜烂者 ;2 中医辨证属于脾胃湿热型者 ; 3 年龄 18~65 岁 ;4 病程 <5 年者 (4) 排除标准 1 不符合纳入标准 ;2 合并胃腺体萎缩胃黏膜肠上皮化生或异型增生胃癌食管癌胃出血者以及胆道胰腺等器质性病变 ;3 合并有心血管肝肾和造血系统等严重原发性疾病, 精神病患者 ;4 妊娠期或哺乳期妇女 ;5 过敏体质或已知对本品及对照药的成分过敏者 ;6 需同时应用可能影响药品疗效和安全性评价药物者 ;7 研究中认为有任何不适宜入选的情况 1.2 研究方法研究设计及重复原则本项目采用优效设计, 依据文献报道及前期研究, 预设三仁汤治疗 CEG 总有效率为 75%, 预设效差为 0 1, 参照刘玉秀教授样本量计算公式 N=2 π(1-π)δ -2 (Z (1-α) +Z (1-β) ) 2 ;( 检验效能 )1-β=φ[δ{π(1- π) (2/n)} -1/2 -Z (1-α) ]; 计算样本量为 112 例, 结合样本量脱失 20% 计算, 得 140 例 [6] ( 随机化采用区组随机化的方法借助 SAS9 1 3 统计分析系统 PROCPIAN 过程语句, 给定种子数 ; 分别产生 140 例受试者所接受处理 ( 治疗组和对照组 ) 的随机安排, 即分别列出流水号为所对应的治疗分配 (2) 对照 140 例患者按 1 1 随机分为两组, 具体如下 :1 治疗组 : 予三仁汤颗粒剂 ( 杏仁 8g 豆蔻仁 8g 薏苡仁 12g 法夏 6g 厚朴 12g 淡竹叶 8g 白通草 8g 滑石 12g), 每次予 200mL 水冲服, 分 2 次服, 连续 4 周中药颗粒剂由广东一方制药厂提供 2 对照组 : 予安慰剂 ( 三仁汤颗粒模拟剂 ), 委托广东一方制药厂生产, 每次予 200mL 水冲服, 分 2 次服, 连续 4 周两组药物在颜色外观及气味上无明显差异观察终点流行病学研究表明 [7-8],CEG 临床症状缺乏特异性, 消化不良症状及其严重程度与内镜所见和组织学分级无明显相关性而缓解临床症状又是 CEG 的治疗目的之一因此, 症候学观察是评价 CEG 治疗方法的重要手段之一本研究确定以上腹痛或上腹不适为观察终点, 结合自然病程, 考虑观察周期为 4 周

3 第 2 期张伦, 等 : 三仁汤干预脾胃湿热型慢性糜烂性胃炎后 HSP 70 及 IL 1β 的变化观察指标 ( 基线资料 : 性别年龄病程等 (2) 主要效应指标 : 中医证候积分变化即餐后上腹痛或餐后上腹不适渴不欲饮嗳气嘈杂泛酸等症状积分变化, 舌脉不予统计, 见表 1 (3) 次要效应指标应用实时荧光定量 PCR 术检测治疗前后血清 HSP 70 IL 1βmRNA 表达变化 ( 表 2) 表 1 中医证候积分半定量标准 Table1 TCM syndromeintegralsemiquantitativestandard 症状无轻中重上腹疼痛隐痛, 持续时间每天 <4 小时不需服药 6 分 : 疼痛时间较长, 每天 4 小时偶需服药 9 分 : 反复发作, 疼痛剧烈需服药才能缓解腹胀腹胀可忍受, 不影响工作日常生活 6 分 : 腹胀明显, 影响工作日常生活, 9 分 : 腹胀甚, 坐卧不宁, 严重影响工尚可忍受作日常生活渴不欲饮偶觉口渴有时觉口渴, 但不思饮水整日口渴明显, 但不思饮水嗳气每日 4~6 次每日 7~9 次每日 10 次以上吐酸偶有吐酸饮食不慎即吐酸吐酸频嘈杂时觉嘈杂午后嘈杂每日达 4 次表 2 HSP 70 IL 1β 及 GAPDH 引物 Table2 HSP 70,IL 1βandGAPDH primer 引物正向引物 (ForwardPrimer) 反向引物 (ReversePrimer) 扩增片段 (AmplifiedFragment) 热休克蛋白 70(HSP 70) 5 TGACGGGATCCGGGTGGTAA 3 5 GCCGAGGCAAGAACAAAGAA 3 147bp 白介素 1β(IL 1β) 5 ACTTGAATGCAGTGCGCCTC 3 5 GGGCCCGGTTATCAAAAATC 3 118bp 甘油醛 3 磷酸脱氢酶 (GAPDH) 5 CGTGTTCCTACCCCCAATGT 3 5 TGTCATCATACTTGGCAGGTTTCT 3 73bp GenBank 序列数据库上查找目的基因 mrna 序列, 在 CDS 区设计特异性引物, 利用 Primerexpres2 0 软件观测时点分别于治疗前治疗后记录中医证侯变化及 HSP 70 IL 1β 表达变化疗效评价采用单一指标疗效判定标准, 参照 2008 年中华中医药学会发布中医内科常见疾病诊疗指南西医疾病部分 [5] 及 2002 年国家食品药品监督管理局编著中药新药临床指导原则中关于 CEG 疗效评价标准基于治疗前后症状积分变化判定疗效 :1 完全缓解 : 临床主要症状消失, 次症消失或基本消失 ;2 显效 : 临床主要症状基本消失, 次症改善程度达二级以上 ;3 好转 : 临床主要症状改善达一级以上 ;4 无效 : 临床症状无改善 1.3 统计学分析采用 SPSS11 5FORWindows 软件分析包基线资料 ( 性别年龄病程 ) 的均衡性分析 : 采用 t 检验, 或列联表卡方检验比较 2 组基线水平和衡量均衡性计数指标 ( 如主要症状积分 ) 用频数和构成比描述,2 组疗效比较采用列联表卡方检验或秩和检验, 等级资料秩和检验检验 ; 计量指标用均数 ± 标准差 ( ±s) 进行描述, 采用 t 检验或秩和检验 2 结果研究过程中完成全部病例观察, 无 1 例患者退出临床观察或中止试验, 未见腹痛腹泻恶心呕吐头晕皮疹等不良反应, 无肝肾功能损害报道 ( 基线资料分析两组患者在病程性别年龄上无明显差异, 具有可比性 (P>0 05, 表 3) 表 3 两组患者基线资料比较 Table3 Baselinedataoftwogroups ±s 组别 n 病程 / 年男女年龄 / 岁治疗组 ± ±7.33 对照组 ± ±7.57 两组患者基线资料比较,P>0 05. (2) 总体疗效判定基于治疗前后中医证候变化分析, 治疗组临床完全缓解 22 例, 显效 14 例, 好转 23 例, 无效 11 例, 总有效率为 84 28%; 对照组临床完全缓解 2 例, 显效 4 例, 好转 15 例, 无效 49 例, 总有效率为 30% 表 4

4 214 暨南大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷表 4 两组患者总体疗效比较 Table4 Totalcurativeefectcomparisonoftwogroups 组别 n 临床完全缓解显效好转无效治疗组对照组 R=0 658,P<0 05. (3) 两组患者主要症状积分比较治疗前, 两组患者中医证侯积分无统计学差异 (P>0 05), 具有可比性 ; 治疗后, 治疗组中医主要证侯积分较治疗前有明显改善, 具有统计学差异 (P<0 05), 对照组中医证侯积分较治疗前虽有所改善, 但无统计学差异 (P<0 05) 治疗后, 治疗组与对照组比较, 有统计学差异 (P<0 05), 表 5~6 表 5 治疗前两组的中医证候积分比较 Table5 ComparisonofTCM syndromesbeforetreatmentintwogroups ±s 组别 n 胃脘痛腹胀渴不欲饮嗳气反酸治疗组 ± ± ± ± ±0.25 对照组 ± ± ± ± ±0.17 治疗前两组比较 P>0 05. 表 6 治疗后的两组中医证候积分比较 Table6 ComparisonofTCM syndromescoreaftertreatmentoftwogroups ±s 组别 n 胃脘痛腹胀渴不欲饮嗳气反酸治疗组 ± ± ± ± ±0.14 对照组 ± ± ± ± ±0.17 治疗后两组比较, 治疗组明显优于对照组 P< 两组患者 HSP70 及 IL 1βmRNA 表达变化治疗前, 患者血清 HSP70mRNA 表达呈下降趋势,IL 1βmRNA 表达呈上升趋势 ; 治疗后, 治疗组患者血清 HSP70mRNA 呈高表达变化,IL 1βmRNA 表达呈下降趋势, 与治疗前比较有统计学差异 (P< 0 05); 对照组患者血清 HSP70 及 IL 1βmRNA 表达较治疗前比较, 无统计学差异 (P>0 05) 治疗后, 治疗组与对照组比较,HSP70 及 IL 1βmRNA 表达有统计学意义 (P<0 05) 这表明三仁汤可能通过诱导 HSP70 高表达, 抑制 IL 1β, 发挥缓解慢性炎症的效应, 见表 7 表 7 治疗前后 HSP70 IL 1βmRNA 表达 ( ±s) Table7 ExpresionofHSP70,IL 1βmRNA beforeand aftertreatment HSP70mRNA IL 1βmRNA 组别 n 治疗前治疗后治疗前治疗后治疗组 ± ±1.32 3) 3.58± ±0.54 3) 对照组 ± ±0.57 2) 3.49± ±1.13 2) 治疗前后比较,P<0 05,2)P>0 05;3) 治疗后, 治疗组与对照组比较,P< 讨论慢性糜烂性胃炎 (CEG) 临床上十分常见, 西药治疗 CEG 主要以对症治疗为主, 如胃黏膜保护剂杀灭幽门螺杆菌 (Hp) 促胃肠动力抑制胃酸分泌等但往往病情容易反复发作, 迁延难愈大量的临床实践证实,CEG 属于中医药治疗优势病种, 结合多年临床实践以及岭南多湿的地域特点, 应用聚类分析发现 CEG 其临床证候分布以脾胃湿热型多见, 约占 CEG 患者的 70% 以上, 运用三仁汤治疗 CEG 患者临床疗效满意本研究采用随机双盲对照, 探讨三仁汤干预 CEG 的临床疗效及其可能机制, 为研究其作用机制提供分子生物学依据三仁汤出自温病条辨, 方中以杏仁白寇仁生薏苡仁为君, 杏仁苦辛, 宣利上焦肺气, 气化则湿化 ; 白蔻仁芳香化湿, 行气, 调中 ; 生薏仁甘淡, 渗利下焦湿热, 健脾 ; 三仁合用, 能宣上畅中渗下而具清利湿热, 宣畅三焦气机之功半夏厚朴辛开苦降, 化湿行气, 散满消痞为臣佐以滑石竹叶通草甘寒淡渗, 利湿清热全方共奏清利湿热, 宣畅气机之功效 CEG 是机体胃黏膜受细菌病毒感染或其他理化刺激因素时将导致炎症反应该炎症反应启动天然免疫应答, 免疫应答细胞能够释放炎症细胞因子 : 白细胞介素 1,2(IL1,IL2) 肿瘤坏死因子 (TNF α) 诱导型一氧化氮合酶 (inos) 等 [9] 这些促炎因子的转录依赖于核转录因子 κb(nf κb) 的激活而放大炎症, 损伤靶组织而 HSP70 能抑制 NF κb 活化, 进而阻断促炎因子表达 [10] 本项目采用随机双盲对照设计, 观察治疗前后主要症状及血清

5 第 2 期张伦, 等 : 三仁汤干预脾胃湿热型慢性糜烂性胃炎后 HSP 70 及 IL 1β 的变化 215 HSP70 IL 1β 变化, 初步发现三仁汤干预 CEG 总有效率在 81 67% 左右 HSP 是指所有生物细胞在应激原诱导下所产生的高度保守的一组蛋白质, 根据其分子量大小可将 HSP 分为 HSP110 HSP90 HSP70 HSP60 和 shsp 等 5 个家族 HSP70 是其中最重要的家族成员, 在正常生理状态下 HSP70 表达水平很低, 而理化刺激 ( 热重金属辐射和药物等 ) 病理刺激 ( 感染氧化应激等 ) 和生理刺激 ( 细胞分裂生长分化等应激原均能显著诱导其表达, 提高细胞应激能力, 保护细胞不被刺激损伤 [11-12] 本研究发现治疗后患者血清 HSP70 水平较治疗前明显上升, 三仁汤可能通过诱导 HSP70 表达, 抑制 NF κb 活化, 减少 IL 1β 分泌, 达到缓解 CEG 的效用观察过程中未见任何不良反应发生, 因此认为三仁汤治疗 CEG 疗效确切, 毒副作用较少, 可在临床推广应用 [ 参考文献 ] [1] ARAUJOFI,BRANDAONJ,PINHEIROLA,etal. PrevalenceofHelicobacterpyloriinfectioninadvanced gastriccarcinoma[j].arqgastroenterol,2006,43(4): [2] CHITAPANARUXT,PRAISONTARANGKULOA,LE RTPRASERTSUKEN.Anopen labeledstudyofrebam ipidetreatmentinchronicgastritispatientswithdyspeptic symptomsrefractorytoprotonpumpinhibitors[j].dig DisSci,2008,53(1: [3] BOoRNSCHEIN J,SELGRAD M,WARNECKE M,et al.h.pyloriinfectionisakeyriskfactorforproximal gastriccancer[j].digdissci,2010,55(1: [4] 中华医学会消化病学分会. 中国慢性胃炎共识意见 [J]. 胃肠病学,2006,11(1: [5] 中华中医药学会. 中医内科常见疾病诊疗指南西医疾病部分 [M]. 北京 : 中国中医药出版社,2008: [6] 刘玉秀, 姚晨, 陈峰, 等. 临床非劣效性 / 等效性评价的统计学方法 [J]. 中药临床药理与治疗,2000,5 (4): [7] DUY,LIZ,ZHANX,etal.Anti inflammatoryefectsof rebamipideaccordingtohelicobacterpyloristatusinpa tientswithchronicerosivegastritis:arandomizedsucral fate controledmulticentertrialin China STARS study [J].DigDisSci,2008,53(1: [8] PAZZIP,GAMBERINIS,SCAGLIARINIR,etal.Mi soprostolforthetreatmentofchronicerosivegastritis:a double blindplacebo controledtrial[j].amjgastroen terol,1994,89(7): [9] TAHARAT,SHIBATAT,ARISAWAT,etal.TheBB genotypeofheat shockprotein(hsp)70-2geneisas sociatedwithgastricpre malignantconditioninh.pylori infectedolderpatients[j].anticancerres,2009,29 (8): [10] PARTIDARO,TORRESJ,FLORESLL,etal.Poly morphismsintnfandhsp 70showasignificantasoci ationwithgastriccancerandduodenalulcer[j].intj Cancer,2010,126(8): [11]CANOZO,BELENLIO,PATIROGLUTE.Generalfea turesofgastriccarcinomasandcomparisonofhsp70and NK celimmunoreactivitywithprognosticfactors[j]. PatholOncolRes,2002,8(4): [12] LERIO,TEICHNERA,SINOPOLIM T,etal.Heat shock proteins antibodiesin patientswith Helicobacter pyloriasociatedchronicgastritis[j].riveurscimed Farmacol,1996,18(2): [ 责任编辑 : 陈咏梅 ]

女中医七 11 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 中医内科神经系统疾病临床研究女中西七 111 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 中医内科脾胃病临床研究女中医七 11 第一临床医学院 ( 江

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