第 3 卷第 5 期 202 年 0 月 华中农业大学学报 JounaofHuazhongAgcuuaUnvsy Vo.3 No.5 Oc.202,634~640 4 个暗纹东方鲀群体的遗传多样性分析 程长洪,2 张敏莹 徐东坡 刘凯 段金荣 周彦锋 施炜纲,2. 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 / 农业部长江下游渔业资源环境科学观测实验站 / 中国水产科学研究院内陆渔业生态环境和资源重点开放实验室, 无锡 2408; 2. 南京农业大学无锡渔业学院, 无锡 2408 摘要采用 0 对暗纹东方鲀 (Takfuguobscuus) 和 6 对红鳍东方鲀 (Takfuguubps) 微卫星引物对 4 个暗纹东方鲀群体 ( 个长江常熟江段捕捞群体, 个江苏扬中放流群体和 2 个养殖群体 ) 的遗传多样性进行分析 结果显示,20 个微卫星位点能成功扩增出片段并且具有一定的多态性, 在 4 个群体中共检测到 3 个等位基因 每个群体的平均等位基因数为 4.95~5.50, 平均观测杂合度为 0.6867~0.767, 平均期望杂合度为 0.6530~0.7000, 平均多态信息含量为 0.603~0.6384 各个群体都有一些微卫星位点偏离 Hay-Wṉ bg 平衡 (<0.05), 主要表现为杂合子不足 群体间遗传分化系数为 0.0406, 基因流值为 5.9056, 群体间遗传分化程度较小, 群体间基因流水平较高 4 个群体间的遗传相似系数为 0.8590~0.958, 遗传距离为 0.0880~0.59, 采用 UGMA 法对 4 个群体进行聚类, 可分 2 类 : 上海养殖群体单独为一类, 扬中放流群体 常熟江段捕捞群体和南通养殖群体为另一类 关键词暗纹东方鲀 ; 群体 ; 微卫星标记 ; 遗传多样性 ; 遗传变异中图分类号 S97 文献标识码 A 文章编号 000-242(202)05-0634-07 暗纹东方鲀 (Takfuguobscuus) 是江海洄游性鱼类, 性成熟的亲鱼春末夏初由东海进入长江中下游产卵, 幼鱼在淡水中育肥, 第 2 年春天回归海 [] 中 暗纹东方鲀肉质细嫩, 营养丰富, 有 鱼中之王 美誉, 从其内脏提取的河鲀毒素更是一种致命的生物毒素, 同时也是一种强效的麻醉药和戒毒良 [2] 药 近年来, 由于过度捕捞 水环境恶化等原因, 暗纹东方鲀自然资源量急剧下降, 种质资源面临枯 [3] 竭 重复序列, 其位点数目巨大且广泛分布于真核生物的整个基因组中 它具有多态性高 操作简单 共显性遗传和重复性好等特点, 已广泛应用于动植物的群体遗传多样性分析 遗传图谱构建 种质资源鉴定 [4] 及亲缘关系分析等方面 本研究利用微卫星分子标记对 4 个暗纹东方鲀群体进行了遗传多样性分析, 探讨其种群遗传多样性及遗传分化, 旨在为暗纹东方鲀的人工增殖放流和苗种选育提供理论基础 从 2002 年起, 人们开始对其进行人工放流, 但是大规模的增殖放流是否会导致其自然种群遗传多 材料与方法 样性下降, 人工养殖种群的种质资源现状如何, 这些都未见报道 因此, 开展暗纹东方鲀种群遗传多样. 材料来源和基因组 DNA 的提取试验所分析的暗纹东方鲀群体为 4 个, 分别是 性研究对于指导其人工增殖放流和恢复其自然种群数量具有重要意义 微卫星 DNA(mcosaDNA) 又称短串联 200 年 5 月采自长江常熟江段捕捞群体 (CS) 200 年 6 月扬中现场采集的增殖放流群体 (YZ, 来源于镇江市绿色农业科技公司, 其亲本均来自长江野生 收稿日期 :20--2 基金项目 : 公益性行业 ( 农业 ) 科研专项 / 长江下游水生生物增殖放流研究及数字化平台开发 (200903048-03) 和中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金 ( 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 ) 资助项目 (20JBFA05,20JBFA06) 程长洪, 硕士. 研究方向 : 渔业种质资源研究与保护.E-ma:chngchanghong09@63.com 通讯作者 : 施炜纲, 研究员. 研究方向 : 大水面增养殖和渔业资源.E-ma:shwg@fc.cn
第 5 期程长洪等 :4 个暗纹东方鲀群体的遗传多样性分析 635 群体 ) 南通养殖场群体 (NT, 其母本来自长江野生群体, 父本为养殖场自留的野生群体 F2 代 ) 和上海养殖场群体 (SH, 其母本来自长江野生群体, 父本为养殖场自留的野生群体 F2 代 ) 每个群体随机挑选 30 尾, 采用常规苯酚 - 氯仿抽提法从肌肉组织中提取基因组 DNA.2 微卫星引物合成 使用 0 对暗纹东方鲀和 6 对红鳍东方鲀微卫 星引物对暗纹东方鲀群体进行 CR 扩增, 经筛选发 现有 20 个位点能扩增出产物, 其引物序列参照 Ma [5] [6] 等和郝君等的文献, 引物均由上海生工生物工 程技术服务有限公司合成, 引物信息见表 表 经筛选的 20 对暗纹东方鲀微卫星引物 Tab TwnySSRpmsavaaboCRampfcaonnTakfuguobscuus 位点 Locus 引物序列 (5-3 ) msquncs(5-3 ) 退火温度 / Annangmpau 产物长度范围 /bp oucsz Tob0 Tob Tob3 Tob25 Tob53 Tob55 Tob6 Tob9 Tob07 Tob08 F000 F0002 F0003 F0005 F0006 F002 F003 F005 F009 F0020 ACCCACTCCGTCCTTCCT TCAACCGCCCTTCCAACT GCCATATTGACCACTCACC ACCACAGAATGTCCTGCTT AGTAGAACGCTCGGTCAG GTTTGTAATCATCAAAAGG ACTCTTTCTCCAGCTCTTC TGCTTCCTTTGATTTGTAT CCTACATCTCACCCAGTG AGGAAGCAAGACAAATAAG GCGCAGCTTGCACTGTAT TAGCCTCTTTAGTCTTGATGG AGAGGCTCCTGGGGAATT CAGCCCTGTCTCACACAT ATTACATCGACCAGAGCCT CACCTATACATCTTAGAATACCC GACCAGTCTCACTCCCTCC TGTGGTAACGGCCATTTCT TCCATTACCACAGAATGTCCTG GTGCCATATTGACCACTCACCTA ACCCAATCTCACCTCCTG AACCCAAAGTTTGACCCT AAACACCAAAGAAAGCCACT ATTACCGCACTCCCTACC CCTTGCCCTGTCCTTTAC AGCCACCTACATCCTTCAC TCTCCCTTACACCAAACG TTCCCACTGCTGAAGACC TTTCCATCGTGGCTTTGT CGTTGCTCATTTCCTGCT GAAGGGCTGGCAGAACAC CCCGCTTAGAATCCTGTT CACTCGGCATAGCAGACC TATCAGGCACCGCAAGAA CCCGCCTGTGGTTTGTTC TGTGGGTATGATGTGATGC CCATCTAACTGCGGGTAA TGAGACTCTGCCTTCGTG ACAATGAGGCGTGGAAGT GTGAATGGATGTGGAGCA 6 30~380 57 9~296 59 309~344 55 242~276 55 222~280 56 90~205 58 23~90 59 25~250 58 232~286 59 68~270 58 27~268 56 30~85 56 20~266 54 220~238 55 98~246 58 23~80 56 6~246 56 230~238 52 2~55 56 30~62
636 华 中 农 业 大 学 学 报.3 CR 扩增及产物电泳检测 CR 反 应 体 系 为 0 μl,包 括 0 bu f f (含 第 3 卷 等位基因数( A) 有效等位基因数( N) 观测杂合度 ( Ho) 期望杂合度( H) Ha y nb g 平衡检验 -W /L NT 0.5 μl 0 概率值( Mg2+ ) μl 2.5 mmo ) 遗 传 偏 离 指 数 ( ) 遗 传 相 似 系 数 ( I) /L上下游引物各 0. 35μL 5 U TaqDNA 聚 合 遗传距离( D) 基 因 分 化 系 数 ( Fs) 基 因 流 (Nm ) μmo [] 酶 0. μl 50ng/μL 的 DNA 模板 μl,用 超 纯 水 多 态 信 息 含 量 ( IC)参 照 Bo s n等 7 的 方 法 计 补足 0 μl CR 反 应 在 ABI2720CR 仪 中 进 算 根 据 种 群 间 遗 传 距 离 使 用 MEGA4. 软 件, 行,反应程序为: 94 预变性4m n; 94 变性30s, 采用 UGMA 方 法 构 建 4 个 群 体 的 UGMA 聚 类 52~6 (根 据 引 物 的 不 同 选 择 温 度 )复 性 45s, 图 72 延伸 45s, 30 个循 环; 72 终 延 伸 8 m n, 4 保存 CR 产物采用 8% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电 泳,快速银染检测,拍照保存.4 数据处理和分析 利用 G oana 4. 5软件对电泳图片进 yz - 行分析,用 OGENE. 3 软 件 统 计 每 个 位 点 的 2 结果与分析 2. 微卫星 CR 结果 经筛 选 共 有 20 个 位 点 能 在 暗 纹 东 方 鲀 群 体 中 扩增出清 晰 稳 定 的 片 段,并 且 具 有 一 定 的 多 态 性 图 为 Tob55 位点在 4 个群体中扩增的结果 图 微卫星 Tob55 位点在 4 个群体中的扩增电泳图 F Th c opho s spa namp f p ou c onby oc u stob55 g. 2.2 遗传多样性分析 中度多态( 0. 25<IC<0. 50),由 此 说 明 本 试 验 所 选用的 20 个微卫星位点具有丰富的多态性,可以作 20 个微卫星 位 点 在 4 个 群 体 中 扩 增 出 的 等 位 基因数 有效等位基因数 观测杂合度 期望杂合度 为暗纹东方鲀群体遗传多样性分析 多态信息含量见表 2 20 个微卫星位点总共扩增出 3 个等位基因,平均等位基因数为 5. 65,平均有效 等位基因数为 3. 9607 每 个 位 点 的 观 测 杂 合 度 为 4 个群体的 遗 传 多 样 性 参 数 如 表 3 所 示,各 群 体平均等位基因数为 4. 95~5. 50,有 效 等 位 基 因 数 为 3. 42~3. 7435,观 测 杂 合 度 为 0. 6867~ 0. 097~0. 9250,平 均 值 为 0. 722,期 望 杂 合 度 0. 767,期望 杂 合 度 为 0. 6530~0. 7000,多 态 信 为 0. 464~0. 8875,平 均 值 为 0. 6957,多 态 信 息 息含量为 0. 6026~0. 6384,由 此 可 知, 4个暗纹东 含 量为0. 3736~0. 8724,平均值为0. 6443 5 个 位点表现为高度多态( IC>0. 50), 5 个位点表现为 方鲀群体遗传多样 性 比 较 丰 富,同 时 长 江 捕 捞 群 体 遗传多样性指数均高于放流和养殖群体
第 5 期程长洪等 :4 个暗纹东方鲀群体的遗传多样性分析 637 表 2 暗纹东方鲀在 20 个微卫星位点遗传多样性指数 Tab2 Gncvsypaamsof20mcosaocofTakfuguobscuus 位点 Locus A N Ho H IC Fs Nm Tob0 7 3.9360 0.8250 0.749 0.7045 0.082 3.4859 Tob 9 6.702 0.8667 0.8545 0.834 0.0238 0.244 Tob3 3.8735 0.5000 0.4682 0.3947 0.034 2.686 Tob25 3 2.90 0.097 0.5303 0.4290 0.202 0.9393 Tob53 6 3.9566 0.7250 0.7504 0.7063 0.077 3.874 Tob55 3.9408 0.6500 0.4868 0.4294 0.026.3455 Tob6 8 4.2384 0.8083 0.7673 0.7385 0.047 5.7492 Tob9 6 3.042 0.7000 0.6740 0.67 0.035 6.8776 Tob07 6 4.8064 0.7750 0.7953 0.7597 0.064 3.8229 Tob08 0 8.6073 0.8583 0.8875 0.8724 0.0460 5.889 F000 6 3.6236 0.797 0.727 0.6885 0.086 3.856 F0002 6 4.058 0.7250 0.7567 0.753 0.038 7.8963 F0003 4 2.8067 0.7083 0.6464 0.5945 0.074 4.099 F0005 4 3.2025 0.7250 0.6906 0.6325 0.075 4.0202 F0006 4 3.4753 0.8000 0.752 0.6584 0.0268 9.09 F002 0 7.0244 0.867 0.862 0.842 0.048 5.7335 F003 8 5.8956 0.8250 0.8339 0.8076 0.0200 2.237 F005 2.9888 0.9250 0.4993 0.3736 0.0086 28.8537 F009 5 4.050 0.6750 0.7562 0.7069 0.0428 5.5867 F0020 3.8594 0.6500 0.464 0.3805 0.000 2.2502 平均值 Mans 5.65 3.9607 0.722 0.6957 0.6443 0.0406 5.9056 表 3 4 个群体遗传多样性参数 Tab3 Gncvsypaamsofhfoupopuaons 群体 opuaon A N Ho H IC YZ 5.2500 3.5488 0.6867 0.6530 0.603 CS 5.5000 3.7435 0.767 0.7000 0.6384 NT 5.0500 3.42 0.7050 0.6672 0.6026 SH 4.9500 3.585 0.7350 0.6835 0.622 2.3 Hay-Wnbg 平衡分析 对 80 个群体位点组合中 (4 群体 20 位点 ) 进 位点 Locus 行 Hay-Wnbg 平衡检验, 其概率值 () 结果如 表 4, 每个群体均有不同位点发生了偏离 Hay- Wnbg 平衡, 共有 39 个位点偏离 Hay-Wṉ bg 平衡, 占总位点数的 48.8% 进一步计算遗传 偏离指数 值 ( 表 4),YZ CS NT 和 SH 4 个群体 中分别有 4 5 0 和 3 个位点表现为杂合子缺失 (<0), 因此可见,4 个群体在这些位点均表现出一 定程度的杂合子缺失 表 4 HaȳWnbg 平衡检验概率值 () 与遗传偏离指数 () Tab4 vauofch-squasfohaȳwnbgqubumanvauofhozygofcncyoxcs YZ CS Tob0 0.0368 * -0.0934 0.0000 ** -0.0588 0.074 * -0.356 0.0082 ** -0.0462 Tob 0.6295-0.328 0.0000 ** -0.0836 0.505 0.229 0.0005 ** -0.084 Tob3 0.584-0. 0.006 ** 0.38 0.039 * -0.4634 0.0232 * -0.4286 Tob25 0.0000 ** 0.7577 0.0000 ** 0.6923 0.0000 **.0000 0.0000 ** 0.792 Tob53 0.0655 0.07 0.00 0.869 0.4834 0.0008 0.5844-0.728 Tob55 0.0022 ** -0.4634 0.093-0.4022 0.4664-0.22 0.0699-0.3575 Tob6 0.02 * -0.774 0.5262-0.3299 0.382 0.0863 0.30-0.0323 Tob9 0.0003 ** -0.25 0.387-0.262 0.974 0.0977 0.8033-0.045 Tob07 0.065 0.608 0.040 * -0.262 0.6770-0.500 0.068-0.0835 Tob08 0.0235 * -0.0438 0.320 0.074 0.585 0.0033 0.0639-0.444 F000 0.2032-0.792 0.0067 ** -0.009 0.2393-0.209 0.0073 ** 0.033 F0002 0.0404 * -0.03 0.0343 * -0.2682 0.083 0.302 0.0024 ** 0.822 F0003 0.695-0.0373 0.0024 ** -0.492 0.0879-0.3569 0.289 0.0380 F0005 0.0600-0.94 0.2834-0.0224 0.0039 ** 0.045 0.2756-0.823 F0006 0.0003 ** -0.774 0.059-0.2968 0.0000 ** -0.0443 0.0024 ** -0.040 F002 0.065 0.566 0.98-0.0035 0.354-0.554 0.0006 ** 0.0222 F003 0.0235 * 0.0695 0.0907 0.0336 0.2439 0.0289 0.0206 * -0.877 F005 0.0009 ** -0.626 0.0000 ** -.0000 0.0000 ** -0.9355 0.0000 ** -0.9355 F009 0.66 0.0252 0.447-0.2027 0.0820 0.630 0.0303 * 0.2800 F0020 0.6586-0.0909 0.0232 * -0.4286 0.0000 ** -0.8258 0.002 ** -0.5430 *:<0.05;**:<0.0. NT SH
638 华中农业大学学报第 3 卷 2.4 群体遗传结构分析 4 个群体在各位点的基因分化数和基因流见表 2 有 6 个位点存在着轻度分化 (0.00<Fs < 0.05),3 个位点存在着中度分化 (0.05<Fs < 0.5), 个位点有较大遗传分化 (0.5<Fs < 0.25), 总基因分化系数为 0.0406, 这说明 4.06% 的遗传变异由种群分化引起, 而有 95.94% 的遗传 差异主要来自群体内 基因流是影响群体内部和群 体之间遗传变异程度的重要因素 4 个群体间的平 均基因流为 5.9056, 说明群体之间存在着一定的 基因流动 [8] 本研究根据 N 的方法计算了 4 个群体的遗 传距离和遗传相似指数 ( 表 5) 利用遗传距离采用 UGMA 方法对 4 个群体进行聚类分析 ( 图 2), 从 图 2 可以看出 4 个暗纹东方鲀群体可以分为两大 类 扬中 常熟 南通群体聚为一类, 上海群体单独 聚为另一类 表 5 暗纹东方鲀群体间遗传相似系数 I ( 对角线以上 ) 和遗传距离 D( 对角线以下 ) Tab5 Gncny(abovagona)angnc sanc(bowagona)amongfou popuaonsoftakfuguobscuus 群体 opuaon YZ CS NT SH YZ **** 0.958 0.9022 0.8590 CS 0.0880 **** 0.8892 0.8878 NT 0.029 0.75 **** 0.8796 SH 0.59 0.9 0.282 **** 图 2 基于 N s 无偏遗传距离构建的 暗纹东方鲀 4 个群体的 UGMA 聚类图 Fg.2 UGMAnogambasonN s unbasgncsancsoffoupopuaons 3 讨论 3. 引物适用性 oftakfuguobscuus 微卫星位点由于其侧翼序列具有相当高的保守 性, 所以一个物种的微卫星引物可应用于相近的物 种 [9] 在鱼类研究中, 常见利用近源物种微卫星标 [0] 记进行种群遗传多样性研究的报道 陈建武等 用 6 对圆口铜鱼微卫星引物对长江 4 个江段铜鱼进 行遗传多样性分析, 结果表明 6 对圆口铜鱼引物都 能够在铜鱼群体中扩增出产物, 其产物都具有多态 性 本研究从 6 对红鳍东方鲀微卫星位点中筛选 出 0 对, 占总比例的 62.5%, 可见红鳍东方鲀微卫 星引物在暗纹东方鲀中具有较好的适用性, 可以用 于暗纹东方鲀群体的遗传多样性分析 3.2 群体遗传多样性分析 本研究 4 个群体的平均等位基因数由大到小依 次为常熟捕捞群体 (5.50) 扬中放流群体 (5.25) 南 通养殖群体 (5.05) 和上海养殖群体 (4.95), 可以看 出 4 个暗纹东方鲀群体对环境有较强的适应能力 然而放流和养殖群体的等位基因数明显低于长江捕 捞群体, 这主要是因为在人工养殖条件下一个封闭 的群体比自然群体更容易产生近交, 进而造成了一 [] 些稀有等位基因的消失 L 等用 6 个微卫星标 记对鲍 3 个养殖群体和 2 个野生群体进行分析, 结 果表明所有养殖群体等位基因减少了 76%, 他推断 是因为繁殖的亲本量太少导致了遗传漂变 张志伟 [2] 等运用微卫星标记对 个野生草鱼群体和 2 个 养殖草鱼群体进行分析, 结果表明 2 个养殖群体的 等位基因显著低于野生群体, 他认为引起养殖群体 等位基因丢失的主要原因在于建群者效应 近些年 来由于长江野生暗纹东方鲀资源急剧下降, 野生亲 本数量极少, 价格昂贵 一些养殖场自繁后代留作 亲本, 加上养殖规模小, 群体数量不大, 这样很容易 发生瓶颈效应和近交衰退现象, 造成了养殖群体等 位基因的缺失 杂合度能反映各群体在多个位点上的遗传变 异, 是度量群体遗传变异的一个最适参数 [3] 本研 究 4 个群体平均观测杂合度为 0.6867~0.7350, [4] 高于 Wooy 等基于 3 种淡水鱼微卫星标记统 计得到的平均观测杂合度 ( 约为 0.46) 的结论 廖 [5] 小林等利用 6 对多态微卫星引物研究了长江水 系的 4 个草鱼群体的遗传结构, 结果显示每个群体 平均观测杂合度在 0.4000 与 0.574 之间 ; 姬长虹 [6] 等采用 34 个微卫星分子标记对长江湘江 监利 和枞阳的 3 个鲢群体进行了分子标记, 得到 3 个群 体平均观测杂合度分别为 0.469~0.469, 相比 长江流域其他野生鱼类, 可见 4 个暗纹东方鲀群体 遗传多样性是较为丰富的 3.3 群体 Hay-Wnbg 平衡检测 在 80 组群体位点组合中 (4 群体 20 位点 ), 有
第 5 期程长洪等 :4 个暗纹东方鲀群体的遗传多样性分析 639 48.9% 的位点显著偏离 Hay-Wnbg 平衡 (<0.05), 而且 4 个群体大多数位点表现为杂合 [7] 子缺失, 纯合子过剩 傅洪拓等利用 20 个微卫 星分子标记对长江 6 个江段的青虾群体进行遗传多 样性分析, 发现 82.5% 的位点偏离了 Hay-Wṉ bg 平衡, 认为主要原因是杂合子缺失导致 许多 原因可能导致 Hay-Wnbg 平衡指数的偏离, 比如环境压力 人为因素 亲缘近交 种群退化等 在本研究中,4 个群体在这些位点处于不平衡可能 与以下原因有关 :() 从 20 世纪 90 年代至今, 暗纹 东方鲀捕捞强度不断加大, 造成其野生群体数量急 剧下降, 不可避免地导致其子代群体近交的机会增 加, 从而使纯合子过剩 ;(2) 长江中下游水域生态环 境恶化, 破坏了暗纹东方鲀产卵场, 导致暗纹东方鲀 基因可能出现建立者效应 3.4 群体间遗传结构分析 基因分化系数 (Fs) 是衡量群体间遗传分化程 [8] 度的重要参数 Fancos 等认为 Fs 在 0~0.05 时, 群体间无分化 ; 在 0.05 ~0.5 时, 遗传分化中 等 ; 在 0.5~0.25 时, 高度遗传分化 ;Fs>0.25 时, 表示群体间分化极大 本研究中遗传分化系数平均 值为 0.0406, 即有 4.06% 的变异来自群体间, 而超 过 95% 的遗传差异来自于群体内, 这说明 4 个群体 间遗传分化微弱 Wgh [9] 认为 Nm < 时, 基因流不足以抵制 群体间的遗传漂变 ;Nm >, 基因流起主要作用, 足 以抵制群体间的遗传漂变 本研究中 4 个群体各个 基因座的平均 Nm 大于, 说明 4 个群体存在着广泛 的基因交流, 这可能是因为暗纹东方鲀是江海洄游 性鱼类, 迁移活动范围较大, 再加上近些年来长江中 下游沿江一些地区对暗纹东方鲀进行了人工增殖放 流, 而养殖群体的亲本特别是母本主要来自长江捕 捞的野生亲本, 这些都加大了各个群体间的基因 交流 3.5 暗纹东方鲀资源的保护与利用策略 本研究采用微卫星标记对 4 个暗纹东方鲀群体 ( 个长江捕捞群体 个放流群体和 2 个养殖群体 ) 的遗传多样性进行了研究, 结果表明, 暗纹东方鲀群 体遗传多样性处于较高水平, 但也普遍出现了杂合 子缺失现象 为了保护和恢复暗纹东方鲀资源, 在 保护其产卵场和改善水域环境条件的同时, 应该严 格控制其亲鱼捕捞 ; 在加大实施暗纹东方鲀人工增 殖放流时, 应该严格控制放流种群的种质质量, 重点 对放流群体遗传背景进行评估, 确保天然种群遗传结构的稳定 ; 应该选择等位基因数多 杂合度较高的苗种进行放流, 否则暗纹东方鲀苗种遗传多样性的减少会加速暗纹东方鲀种质资源的衰退 参考文献 [] 成庆泰, 王存信, 田明诚, 等. 中国东方鲀属鱼类分类研究 [J]. 动物学报,975,2(4):359-377. [2] 谷江稳, 徐善良, 颜付云, 等. 河豚毒素及其发酵生产的研究进展 [J]. 食品科学,200,3():298-302. [3] 施永海, 张根玉, 朱雅珠, 等. 菊黄东方鲀河口区海水全人工繁育技术研究 [J]. 水产科技情报,2007,34(3):99-02. [4] 杜长斌, 孙孝文, 楼允东, 等. 微卫星在水产动物种质资源研究方面的应用 [J]. 水产学杂志,2000,3():68-73. [5] MA H Y,CHENSL,LIAOXL.Isoaonanchaaczaonof poymophcmcosaocfomanuco-nchgnomcbayofobscupuf(takfuguobscuus)ancoss-spcs ampfcaon[j].consvgn,2009,0:955-957. [6] 郝君, 孙效文, 孟雪松. 红鳍东方鲀微卫星 DNA 多态性初步分析 [J]. 上海水产大学学报,2006,5():2-24. [7] BOSTSTEIND,WHITERL,SKOLNICK M,a.Consuconofagncnkagmapnmanusngsconfagmn nghpoymophsms [J].AmcanJounaofHuman Gncs,980,32(3):3-34. [8] NEIM.Esmaonofavaghozygosyangncsancfomasmanumbofnvuas[J].Gncs,978, 89:583-590. [9] 林能锋, 苏永全, 丁少雄, 等. 大黄鱼微卫星标记引物在石首鱼科几个近缘种中的通用性研究 [J]. 中国水产科学,2008,5 (2):237-243. [0] 陈建武, 汪登强, 张燕, 等. 长江铜鱼种群遗传结构的微卫星分析 [J]. 长江流域资源与环境,200,9(Z):38-42. []LIQ,ARKC,ENDOT,a.Lossofgncvaaonamcosaocn hachy sans ofh acfc abaon (Haosscushanna)[J].Aquacuu,2004,235:207-222. [2] 张志伟, 曹哲明, 杨弘, 等. 草鱼野生和养殖群体间遗传变异的微卫星分析 [J]. 动物学研究,2006,27(2):89-96. [3] 刘海金, 朱晓琛, 孙效文, 等. 牙鲆 5 个养殖群体的遗传多样性分析 [J]. 中国水产科学,2008,5():30-37. [4] WOODYJA,AVISEJC.Mcosavaaonn man fshwaananaomousfshscompa whohanmas[j].jounaoffshboogy,2000,56(3):46-473. [5] 廖小林, 俞小牧, 谭德清, 等. 长江水系草鱼遗传多样性的微卫星 DNA 分析 [J]. 水生生物学报,2005,29(2):3-8. [6] 姬长虹, 谷晶晶, 毛瑞鑫, 等. 长江 珠江 黑龙江水系野生鲢遗传多样性的微卫星分析 [J]. 水产学报,2009,33(3):364-37. [7] 傅洪拓, 乔慧, 李法君, 等. 长江不同江段青虾的遗传多样性 [J]. 水产学报,200,34(2):204-22. [8]FRANCOISB,NICOLASL.Thsmaonofpopuaonf-
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