澎 湖 縣 家 畜 疾 病 防 治 所 病 例 報 告... 正 番 鴨 感 染 鵝 小 病 毒 症 名 第 三 名 澎 湖 縣 家 畜 疾 病 防 治 所 病 例 報 告 正 番 鴨 感 染 鵝 小 病 毒 症 (Muscovy duck infection with Goose parvovirus) 李 佳 霖 白 又 文 郭 仁 政 前 言 水 禽 小 病 毒 感 染 症 (waterfowl parvovirus infection) 為 一 高 度 傳 染 性 與 致 死 性 疾 病, 引 起 纖 維 素 性 與 壞 死 性 腸 炎, 在 許 多 國 家 都 曾 發 生 並 造 成 經 濟 上 的 嚴 重 損 失 本 病 首 先 被 描 述 於 1956 年 發 生 在 中 國 的 鵝 隻,1981 年 由 Fang 和 Wang 發 表, 之 後 並 經 Zheng 等 確 認 為 鵝 小 病 毒 (goose parvovirus, GPV) 感 染 在 1960 年 代 歐 洲 地 區 許 多 國 家 先 後 發 生 鴨 鵝 高 死 亡 率 之 疾 病, 直 至 1971 年 才 由 Schettler 證 實 為 小 病 毒 (parvovirus) 感 染,1978 年 再 確 認 並 稱 之 為 鵝 小 病 毒 在 臺 灣, 首 例 鵝 小 病 毒 感 染 症 病 例 於 1983 年 被 報 告 ; 此 外, 於 1989 年 由 正 番 鴨 分 離 到 類 似 鵝 小 病 毒 感 染 症 之 另 一 型 病 毒, 稱 為 正 番 鴨 小 病 毒 (Muscovy duck parvovirus;mdpv), MDPV 在 宿 主 性 抗 原 性 及 核 酸 序 列 上 均 異 於 前 者 GPV 對 鵝 及 正 番 鴨 均 有 高 病 原 性, 主 要 病 徵 為 腸 炎, 感 染 率 及 死 亡 率 甚 高 ;MDPV 對 鵝 隻 並 無 病 原 性, 然 所 有 鴨 品 系 對 MDPV 均 有 感 受 性, 其 特 徵 為 病 鴨 軟 腳 及 癒 後 發 育 不 良 及 短 嘴, 死 亡 率 也 高 達 70 % 以 上 病 歷 本 病 歷 發 生 於 澎 湖 縣 鄉 某 養 鴨 場, 該 場 管 理 人 員 於 99 年 6 月 24 日 通 報 本 所, 本 所 隨 即 派 員 前 往 進 行 疫 情 調 查, 全 場 鴨 隻 總 數 約 1,600 隻, 發 現 死 亡 仔 鴨 平 均 約 20 日 齡, 每 日 死 亡 數 量 約 10-20 隻, 死 亡 總 數 近 300 隻, 死 亡 率 達 18 %, 現 場 可 見 鴨 隻 群 聚 在 角 落, 下 肢 癱 軟 下 痢 及 活 力 不 佳 等 症 狀, 現 場 進 行 解 剖 2 隻 小 鴨 其 中 1 隻 無 可 見 病 變, 另 1 隻 胸 腹 腔 表 面 可 見 纖 維 素 性 包 覆 及 腸 管 變 薄 次 日 再 次 前 往 該 場 採 集 3 隻 發 病 仔 鴨 後 送 至 家 畜 衛 生 試 驗 所 確 診 臨 床 症 狀 病 禽 精 神 沈 鬱 食 慾 減 退 站 立 不 穩 ( 軟 腳 ) 及 下 痢 等 症 狀 ( 圖 1.) 肉 眼 病 變 解 剖 病 鴨 於 心 包 膜 有 混 濁 及 心 藏 外 觀 呈 現 充 血 樣 ( 圖 2.), 腸 腔 內 含 大 量 稀 薄 液 體, 腸 管 呈 間 斷 性 膨 大 ( 圖 3.), 卵 黃 囊 未 完 全 吸 收 ( 圖 4.) 組 織 病 理 在 腸 管 內 有 纖 維 素 團 塊 阻 塞, 上 皮 細 胞 壞 死 脫 落 ( 圖 5.), 且 絨 毛 有 萎 縮 脫 落 消 失 ( 圖 6.), 腸 管 內 有 單 核 炎 症 細 胞 浸 潤, 腺 窩 內 有 嗜 酸 性 核 內 包 涵 體 初 步 診 斷 初 步 的 鑑 別 診 斷 : 病 毒 性 疾 病 : 鵝 小 病 毒 感 染 症 (goose parvovirus infection) 鴨 病 毒 性 腸 炎 (duck viral enteritis) 細 菌 性 疾 病 : 家 禽 霍 亂 (fowl cholera) 傳 染 性 漿 膜 炎 (infectious serositis) 其 它 細 菌 感 染 依 據 疫 情 調 查 臨 床 症 狀 及 解 剖 肉 眼 病 變, 於 幼 齡 鴨 有 高 死 亡 率, 且 呈 現 下 痢 症 狀, 可 將 家 禽 霍 亂 做 排 除, 初 步 診 斷 為 小 病 毒 感 染 19
類 症 鑑 別 表 列 如 下 : 疾 病 病 原 臨 床 症 狀 病 變 鴨 病 毒 性 肝 炎 (DVH) Picornaviridae Enterovirus 潛 伏 期 1-3 天, 一 週 齡 死 亡 率 有 95 % 四 週 齡 不 常 造 成 死 亡 肝 腫 大 瀰 漫 性 出 血 肝 組 織 壞 死 灶, 膽 管 上 皮 增 生 肝 細 胞 質 嗜 酸 性 染 色 性 增 加, 內 含 空 泡 及 核 濃 縮 鵝 小 病 毒 (GPV) Parvovirus 45 日 齡 以 下 之 幼 鴨 有 脫 毛 結 膜 炎 下 痢 軟 腳 及 沉 鬱, 上 述 症 狀 出 現 後 常 於 4-8 小 時 死 亡 迴 盲 部 的 腸 腔, 有 特 徵 性 之 纖 維 素 圓 柱 團 塊 有 時 可 見 心 外 膜 炎 肝 脾 腫 大, 漿 液 纖 維 素 肝 包 炎 和 腹 膜 炎 家 禽 霍 亂 (Fowl cholera) Pasteurella multocida 急 性 : 下 痢 發 紺 慢 性 : 關 節 肉 垂 眼 窩 下 竇 等 有 乾 酪 樣 物 存 在 心 表 面 肌 胃 和 腹 部 脂 肪 有 針 點 樣 出 血 及 心 包 炎 及 氣 囊 炎 傳 染 性 漿 膜 炎 (Infectious Serositis) Riemerella anatipestifer 8 週 以 下 鴨 鵝 可 經 呼 吸 道 及 腳 部 皮 膚 感 染 但 不 經 口 傳 染 5 週 以 下 常 為 急 性 致 死 型, 病 鴨 常 於 出 現 症 狀 1-2 天 後 死 亡 有 流 鼻 涕 綠 色 下 痢 便 昏 睡 和 運 動 失 調 等 症 狀 病 鴨 有 纖 維 素 性 炎 症, 纖 維 性 心 外 膜 炎 包 含 有 單 核 和 異 嗜 細 胞 為 主 的 炎 症 細 胞 實 驗 室 檢 查 1. 細 菌 分 離 培 養 : 臟 器 釣 菌 培 養, 挑 選 可 疑 菌 落 進 行 生 化 試 驗 結 果 未 分 離 出 有 意 義 之 病 原 菌 2. 分 子 生 物 學 診 斷 : 2.1 病 毒 核 酸 之 萃 取 取 培 養 的 細 胞 病 毒 液 ( 觀 察 具 有 CPE 現 象 者 ), 或 者 欲 偵 測 病 毒 核 酸 之 臟 器 乳 劑 200µL 加 上 DNAZOL 100µL, 震 盪 30 秒, 靜 置 5 分 鐘 加 Chlorfon 200µL 震 盪 30 秒 靜 置 3 分 鐘 離 心 13,000 r.p.m 10 分 鐘 抽 700µL 上 清 液 加 700µL Isopropanol 後 靜 置 可 overnight( 若 馬 上 使 用, 則 靜 置 15 分 鐘 -20 ) 離 心 13,000 r.p.m 10 分 鐘 然 後 液 體 倒 掉, 然 後 加 75 % 酒 精 200µL ( 加 在 microcentrifige tube 管 壁 上, 以 免 DNA 被 沖 掉 ), 離 心 microcentrifige tube 頭 尖 端 朝 上,13,000 r.p.m 1-2 分 鐘, 之 後 把 液 體 抽 掉 之 後 用 50 µl 二 次 滅 菌 水 充 分 混 合, 儲 存 於 -80 備 用 2.2 聚 合 鏈 鎖 反 應 及 條 件 依 據 Limn(1996) 所 發 表, 針 對 GPV 序 列 設 計 之 引 子 對 (AL18F2 及 AL18R2) 加 以 改 良 20
澎 湖 縣 家 畜 疾 病 防 治 所 病 例 報 告... 正 番 鴨 感 染 鵝 小 病 毒 症 之 引 子 如 下 : AL18F2N(sense):5'- CCGGGTTGCAGGAGGTTG -3' AL18R2N(antisense):5'- AGCTACAACAACCACATC -3' 上 述 引 子 可 增 幅 出 GPV 部 分 序 列, 共 806 個 鹼 基 對 進 行 PCR 詳 細 溫 度 及 時 間 為 94 3 分 鐘, 接 著 以 94 60 秒,48 90 秒,72 90 秒, 進 行 30 個 循 環, 最 後 以 72 10 分 鐘 結 束 反 應 檢 測 結 果 可 得 預 期 的 492 bp 產 物 ( 圖 7.) 最 終 診 斷 正 番 鴨 感 染 鵝 小 病 毒 症 處 理 與 預 防 首 先 在 養 禽 場 進 行 更 完 善 的 消 毒, 並 加 強 進 出 人 員 衣 物 鞋 子 的 消 毒, 本 所 提 供 消 毒 劑 Virkon 以 1: 200 的 比 例 進 行 稀 釋, 每 週 消 毒 一 次, 並 經 過 空 舍 停 養 一 個 多 月 後, 才 再 飼 養 新 一 批 家 禽 鵝 小 病 毒 在 幼 鴨 的 疾 病 中 是 具 高 度 傳 染 性 的 病 原, 疫 苗 控 制 本 疾 病 為 最 佳 的 選 擇, 利 用 種 禽 接 種 疫 苗 產 生 移 行 抗 體, 保 護 幼 禽 避 免 感 染, 引 進 有 注 射 疫 苗 種 禽 所 產 的 幼 禽, 或 無 鵝 小 病 毒 的 孵 化 場 為 預 防 疾 病 發 生 的 重 點, 可 降 低 發 病 及 死 亡 率 在 飼 養 管 理 方 面, 若 遭 受 感 染 不 建 議 繼 續 做 種, 並 且 有 疫 情 傳 出 的 養 禽 場 應 全 面 性 做 血 清 學 的 檢 驗, 對 於 檢 測 陽 性 之 鴨 鵝, 為 避 免 成 為 潛 在 帶 原 者, 必 須 撲 殺 最 好 使 用 小 病 毒 清 淨 場 來 源 之 蛋 作 為 種 原 種 禽 免 疫 : 1. 母 鵝 以 活 毒 疫 苗 接 種 免 疫, 產 生 移 行 抗 體, 可 保 護 2-3 週 齡 內 幼 禽 2. 種 禽 接 種 不 活 化 疫 苗 1-2 ml 後, 再 隔 3-4 週 補 強 接 種 一 次, 免 疫 效 果 良 好 3. 注 射 高 度 免 疫 血 清, 亦 可 降 低 幼 禽 的 死 亡 率, 血 清 以 採 自 耐 過 本 病 4-6 週 後 之 成 禽 為 宜 疫 情 追 蹤 於 2010 年 6 月 24 日 及 7 月 30 日 拜 訪 該 場, 管 理 人 員 表 示 將 幼 鴨 隔 離 及 淘 汰, 並 依 照 本 所 建 議 處 理, 疫 情 已 獲 得 控 制 討 論 parvovirus 為 病 毒 中 最 小 的 病 毒, 完 整 病 毒 顆 粒 大 小 約 20-22 nm, 形 狀 為 球 狀 正 二 十 面 體, 不 具 封 套, 含 有 一 長 約 5-6 kb 的 線 狀 單 股 負 性 DNA 鴨 鵝 之 小 病 毒 是 屬 於 小 病 毒 科 (parvoviridae) 中 之 自 發 性 小 病 毒 屬 (autonomous parvovirus) 乃 是 導 致 水 禽 類 致 死 性 病 毒 性 腸 炎 之 元 兇 鵝 小 病 毒 感 染 症 在 禽 類 除 了 鴨 鵝, 在 種 雞 及 火 雞 呈 現 無 症 狀 感 染,GPV 主 要 感 染 鵝 與 正 番 鴨, 在 野 外 野 生 鵝 種 Canada geese (Branta canadensis) 與 Snow geese (Chenhypoborea atlantica) 均 可 檢 測 出 病 毒 感 染 GPV 對 鵝 雞 鴨 兔 子 及 天 竺 鼠 的 紅 血 球 並 不 具 血 球 凝 集 作 用 鵝 小 病 毒 (GPV) 感 染 主 要 發 生 在 三 週 齡 以 下 的 幼 鵝 和 幼 鴨, 傳 播 速 度 快, 死 亡 率 高, 由 於 不 具 封 套, 所 以 對 於 環 境 抵 抗 力 強 不 易 消 除 但 是 在 0.5 % 福 馬 林 15 分 鐘 內 即 可 破 壞 感 染 力, 與 一 般 哺 乳 類 動 物 之 小 病 毒 有 所 不 同 感 受 年 齡 對 此 疾 病 很 重 要, 多 發 生 在 三 週 齡 以 下, 在 孵 化 室 一 週 齡 以 下 幼 禽 死 亡 率 可 達 100 % 三 週 齡 以 上 感 染 率 依 然 很 高, 但 死 亡 率 可 降 至 10 % 鵝 小 病 毒 症 在 鴨 或 鵝 傳 播 方 式 主 要 藉 由 糞 口 途 徑 感 受 性 高 之 幼 禽 感 染 途 徑, 主 要 為 母 禽 耐 過 之 後, 介 蛋 垂 直 感 染 耐 過 之 水 禽, 仍 潛 伏 帶 毒, 在 孵 化 舍 及 幼 禽 之 間 傳 播 疾 病 感 染 此 病 毒 之 鴨 或 鵝 會 產 生 流 鼻 水 食 慾 下 降 軟 腳 白 色 下 痢 等, 眼 瞼 紅 腫, 在 此 階 段 的 鴨 鵝, 有 些 會 觀 察 到 由 舌 到 口 腔 會 覆 蓋 一 層 纖 維 性 偽 膜 耐 過 動 物 會 生 長 遲 緩 全 身 或 局 部 脫 毛, 脫 毛 區 集 中 在 頸 之 背 後 以 下, 露 出 的 皮 膚 明 顯 變 紅, 之 後 會 慢 慢 長 出 腹 腔 內 有 腹 水 的 蓄 積, 使 病 鴨 病 鵝 形 成 企 鵝 狀 的 走 路 姿 勢 臺 灣 的 病 例 中, 小 病 毒 感 染 後, 曾 觀 察 到 鴨 喙 變 短 的 情 形 死 後 剖 檢 可 觀 察 到 的 肉 眼 病 21
變方面 急性死亡的病鵝常出現心尖鈍圓 肝臟 脾臟 胰臟鬱血腫脹的變化 隨著病程的 拉長 所顯現出的臟器病變會更多變 可能會見到肝包炎及心包炎 肺水腫以及卡他性的腸 炎 組織病理方面 主要出現的病灶位於心臟 平滑肌細胞 腸道以及肝臟 可見嗜酸性的 包含體分布 並出現細胞壞死及脂肪浸潤的現象 通常GPV 以10-15 日之鵝或正番鴨胚胎蛋中 培養 由尿囊腔接毒 也可在鵝或正番鴨之纖維芽母細胞 鵝胚胎肝臟或者正番鴨腎臟細胞 中生長 接毒後約3-5 日開始產生病變 圖1. 下痢症狀 圖2. 心臟外觀呈現充血樣 圖3. 腸管膨大 腸管壁變薄 圖4. 腸管潮紅 卵黃囊未完全吸收 圖5. 腸管上皮細胞壞死脫落 纖維素物質蓄積 22 圖6. 絨毛有萎縮脫落
澎 湖 縣 家 畜 疾 病 防 治 所 病 例 報 告... 正 番 鴨 感 染 鵝 小 病 毒 症 M + 2 3 4 - M 圖 7. Lane M:marker Lane + :Positive control Lane 2 :Kidney Lane 3 :Heart Lane 4 :Liver Lane - :Negative control 參 考 文 獻 1. 朱 純 燕 水 禽 類 小 病 毒 蛋 白 基 因 之 分 子 選 殖 及 抗 原 性 分 析 中 山 大 學 博 士 論 文 高 雄 臺 灣 2001 2. 呂 榮 修 禽 病 診 斷 彩 色 圖 譜 中 華 民 國 養 雞 協 會 台 北,1995 3. 林 茂 勇 宋 華 聰 鵝 病 毒 性 腸 炎 禽 病 診 治 2006 4. 許 靜 侖 台 灣 地 區 鴨 小 病 毒 與 鵝 小 病 毒 之 抗 體 力 價 調 查 與 病 毒 在 病 禽 體 內 之 分 佈 研 究 中 興 大 學 碩 士 論 文 2001 5. 許 媺 宜 正 番 鴨 小 病 毒 之 宿 主 範 圍 分 析 及 水 禽 小 病 毒 在 野 外 發 生 情 形 台 灣 大 學 碩 士 論 文 2005 6. 張 照 夫 蔡 信 雄 尤 碧 豔 肆 虐 本 省 之 鵝 病 毒 性 腸 炎 台 灣 畜 牧 獸 醫 學 會 會 報 42: 37-46,1983. 7. Gough RE. Goose parvovirus infection. In:B.W.Calnek, H.J. Barnes, C. W. Beard, W. M. Reidand H.W. Yoder, Jr. eds. Diseases of poutry, 10th ed. Iowa State University Press. Ames, Iowa. 777-783 1997. 8. Kisary J. Some growth characteristics of goose parvovirus strain B".Acta Vet Acad Sci Hung 24: 329-333, 1974. 9. Limn CK, Yamada T, Nakamura M, Takehara K. Detection of Goose parvovirus genome by polymerase chain reaction: distribution of Goose parvovirus in Muscovy ducklings. Virus Res 42: 167-172, 1996. 10. Lu YS, Lin DF, Lee YL, Liao YK, Tsai HJ. Infectious bill atrophy syndrome caused by parvovirus in a co-outbreak with duck viral hepatitis in ducklings in Taiwan. Avian Dis 37: 591-596, 1993. 11. Schettler CH. Virus hepatitis of geese. II. Host range of goose hepatitis virus. Avian Dis 15: 809-823, 1971. 23