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- 育炮 应
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1 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina ND604 Vazyme biotech co., ltd. 使用说明书 Version 6.1
2 目录 Contents 01/ 产品概述 / 产品组分 / 保存条件 / 适用范围 / 自备材料 / 注意事项 / 关于 Input DNA 和 Fragmentation / 关于 Adapter / 关于 Adapter Ligation 产物纯化 / 关于磁珠的使用 / 关于长度分选 / 关于 Library Amplification / 关于文库的质量控制 / 其他注意事项 / 实验原理与流程概要 / 标准实验方案 附一 双轮磁珠分选 附二 cfdna 建库方案 附三 FFPE DNA 建库方案 附四 靶向捕获建库方案
3 01/ 产品概述 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 是针对 Illumina 高通量测序平台定向优化而成的文库构建试剂盒 本试剂盒可以将 100 pg - 1 μg Input DNA 转换成 Illumina 高通量测序平台专用文库 作为全新的升级版本,VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 通过合并多个步骤显著缩短了建库耗时, 单个文库的构建时间最短仅需 75 min, 具有流程更简捷 文库转化率更高 样本兼容性更广等诸多优势, 广泛适用于多种样本的 PCR 或 PCR-Free 文库构建, 且兼容靶向捕获流程 试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证, 最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性 02/ 产品组分 组分 ND (24 rxn) ND (96 rxn) ND (24 rxn) ND (96 rxn) End Prep Mix 2 Rapid Ligation Buffer Rapid DNA Ligase PCR Primer Mix Amplification Mix 2 Control DNA (264 bp,50 ng/ul) 360 μl 600 μl 1 μl 1 μl 600 μl 10 μl μl μl 480 μl 480 μl μl 10 μl 360 μl 600 μl 1 μl μl μl μl 480 μl μl 03/ 保存条件 所有组分于 - 保存 04/ 适用范围 适用于制备 Illumina 高通量测序平台专用文库 兼容多种样本类型 : 基因组 DNA (Genomic DNA) 游离 DNA (cfdna ctdna) 石蜡切片 DNA (FFPE DNA) 免疫共沉淀 DNA (ChIP DNA) 多重扩增子 (Amplicons) 等 对于简单基因组 (Small Genome) 游离 DNA (cfdna ctdna) 免疫共沉淀 DNA (ChIP DNA) 多重扩增子(Amplicons) 等复杂程度较低的样本,Input DNA 量最低可至 100 pg 推荐应用于 : 全基因组测序 全外显子或其他靶向捕获测序 ( 配合 Roche NimbleGen SeqCap EZ Agilent SureSelect Illumina TruSeq or IDT xgen Lockdown Probes 或其他杂交捕获系统 ) 扩增子测序 免疫共沉淀测序 宏基因组测序 甲基化测序 ( 配合 Phanta UC Super-Fidelity DNA Polymerase for Library Amplification, Vazyme #P507) 2
4 05/ 自备材料 纯化磁珠 :VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 或其他等效产品 ; DNA 质控 :Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer 或其他等效产品 ; DNA Adapter: VAHTS TM DNA Adapters for Illumina (Vazyme #N801/N802 或 N805/N806/N807/N808) 或其他等效产品 ; #N801/N802 为 24 种单端 6 bp Indexed Adapters, 各 12 种 ; #N805/N806/N807/N808 为 96 种单端 8 bp Indexed Adapters, 各 24 种 其他材料 : 无水乙醇 灭菌超纯水 0.1 TE 洗脱液 (10 mm Tris-HCl,pH ); 低吸附 EP 管 PCR 管 磁力架 PCR 仪等 06/ 注意事项 受样本 方案 设备 操作等诸多因素影响, 文库构建流程参数可能需要根据实际情况进行 调整 为了能够获得高质量的测序文库, 请务必仔细阅读下述注意事项 使用过程中如遇任何问题, 可联系 Vazyme 技术支持获取帮助 :support@vazyme.com 06-1/ 关于 Input DNA 和 Fragmentation 试剂盒兼容的 Input DNA 量范围为 100 pg - 1 μg 应尽可能使用 A260/A280 = 的高质量 Input DNA Table 1 中列举了常见应用中推荐的 Input DNA 量 Table 1. 常见应用中推荐 Input DNA 量 应用 样本类型 推荐 Input DNA 量 全基因组测序 复杂基因组 50 ng - 1 μg 靶向捕获测序 复杂基因组 10 ng - 1 μg 全基因组 / 靶向捕获测序 FFPE DNA 50 ng 全基因组 / 靶向捕获测序 cfdna/ctdna 100 pg 全基因组测序 微生物基因组 1 ng - 1 μg 全基因组测序 (PCR-Free 文库 ) 复杂 / 简单基因组 50 ng ( 不进行长度分选 ) 0 ng ( 进行长度分选 ) 免疫共沉淀测序 ChIP DNA 100 pg 靶向测序 扩增子 100 pg 上表为使用高质量 DNA 时推荐的 Input DNA 量, 当 Input DNA 质量较差时, 应适当上调使用量 Input DNA 特指投入 End Preparation 步骤中的 DNA 如 DNA 样品在 Fragmentation 后进行 过纯化或长度分选, 需再次测定其浓度, 不能直接以 Fragmentation 之前的 DNA 量作为 Input DNA 量 否则, 可能会因文库扩增循环数不足导致文库产出偏低 若 Input DNA 制备过程中带入高浓度金属离子螯合剂或其他盐, 可能会影响 End Preparation 步骤的效率 当使用机械法进行 Fragmentation 且产物不进行纯化或长度分选直接建库时, 请将 DNA 稀释在 0.1 TE 中进行 Fragmentation, 请勿在灭菌超纯水中进行 ; 当使用酶切法进行 Fragmentation 且产物不进行纯化或长度分选直接建库时, 请确认 Stop Buffer 中不包含过量的金属离子螯合剂 如条件不满足, 可先将 Fragmentation 产物纯化或长度分选后溶于 0.1 TE 或灭菌超纯水中 ( 50 μl), 再进行文库构建 3
5 06-2/ 关于 Adapter 针对 Illumina 测序平台,Vazyme 提供两套 Indexed Adapters, 可根据需 Pooling 的样本数量选择 : #N801/N802, 提供 24 种单端 6 bp Indexed Adapters, 各 12 种 ; #N805/N806/N807/N808, 提供 96 种单端 8 bp Indexed Adapters, 各 24 种 同时,VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 也可以兼容诸如 Illumina TruSeq Roche NimbleGen SeqCap EZ Agilent SureSelect 等常规应用体系中使用到的各种 Non-indexed 单端 Indexed 及双端 Indexed Adapters 您也可以自行合成或从别的途径购买类似的 TA-ligation Adapters 应用于 Illumina 或其他测序平台 Adapter 的质量和用量直接影响建库效率和文库的质量 推荐 Adapter:Input DNA 摩尔比在 10:1-0:1 之间 Adapter 投入量过高可能会导致 Adapter 或 Adapter Dimer 残留 ; 投入量不足又会影响连接效率进而导致文库产出降低 Table 2 列举了不同 Input DNA 量推荐的 Adapter 使用量 Input DNA 500 ng - 1 μg 100 ng ng 25 ng ng 5 ng - 25 ng 100 pg - 5 ng Table pg - 1 μg Input DNA 推荐的 Adapter 使用浓度 Adapter:Input DNA 摩尔比 10:1 - :1 :1-100:1 50:1-0:1 40:1-0:1 60:1-3000:1 其他来源 Adapter 工作浓度 10 μm 10 μm 5 μm 1 μm 0.3 μm Vazyme Adapter 预稀释倍数不稀释不稀释 1:2 1:10 1:30 Input DNA 摩尔数可根据下述公式粗略计算 : Input DNA 摩尔数 (pmol) Input DNA 质量 (ng)/ [0.66 Input DNA 平均长度 (bp)] 推荐根据表中的浓度值或 Vazyme Adapter 的稀释倍数使用 0.1 TE 预先稀释 Adapter, 这样可以保证建库过程中 Adapter 的使用体积为固定数值 (5 μl), 避免加样体积错误 Adapter 的质量会直接影响 Adapter 与 Input DNA 的摩尔比, 进而影响连接效率和文库产出 应选用优质的 Adapter; 使用 0.1 TE 稀释和保存 Adapter 溶液 ; 尽量避免反复冻融 提高 Adapter 的使用量可以在一定程度上提高文库产出, 尤其当 Input DNA 25 ng 时 当需要优化建库效率时, 可在上表推荐条件下额外尝试几个更高的 Adapter 使用量 ( 推荐 2-10 倍范围内 ) 如 Adapter 原液浓度限制无法提高使用量, 可通过提高 Adapter 使用体积来尝试 如 : 默认 Adapter 使用体积为 5 μl, 当 Input DNA 为 500 ng - 1 μg 时可提高 Vazyme Adapter 使用量至 10 μl 以增加 5-15% 的文库产出 06-3/ 关于 Adapter Ligation 产物纯化 Adapter Ligation 产物需先去除过剩的 Adapter, 再进行后续文库扩增 (PCR 文库 ) 或直接上机测序 (PCR-Free 文库 ) 默认纯化条件 0.8 ( 产物 100 μl, 磁珠 80 μl) 适用于绝大多数情况 如需获得 Insert Size 更长的文库, 可通过适当降低磁珠使用量以减少小片段文库的含量, 但这种调整只能粗略改变文库主峰的位置, 如需要准确控制文库长度分布, 可在此步纯化之后进行长度分选 如之后进行文库长度分选, 推荐洗脱体积为 105 μl; 否则, 推荐洗脱体积为 22.5 μl 4
6 如数据显示纯化产物中 Adapter 或 Adapter Dimer 污染严重, 可对其再进行一次磁珠纯化 : 使用灭菌超纯水将第一次纯化产物体积补至 50 μl, 加入 50 μl 磁珠 (1 ) 进行第二次纯化 这样可以显著降低 Adapter 或 Adapter Dimer 的残留水平, 尤其是当构建 PCR-Free 文库时 有时可能还需要配合 Adapter 的使用量降低才能完全消除 Adapter 或 Adapter Dimer 的残留 06-4/ 关于磁珠的使用 试剂盒推荐使用 VAHTS TM DNA Clean Beads (Vazyme #N411) 或 Agencourt AMPure XP (Beckman Coulter ) 进行磁珠纯化 注意 : 如使用其他来源磁珠, 纯化条件可能需要更改! 磁珠操作通用注意事项 : 磁珠使用量常用乘数 进行标识, 表示相对于原始样品体积而言使用多少倍体积的磁珠 如样品原始体积为 100 μl,1 纯化时磁珠使用体积为 μl = 100 μl; 0.6 / 0.2 分选时第一轮磁珠用量为 μl = 60 μl, 第二轮磁珠用量 μl = μl 磁珠使用量直接影响可纯化的 DNA 长度下限 乘数越高, 可纯化的 DNA 长度下限越短 ; 反之, 则越长 例如 :1 磁珠只能高效纯化长于 250 bp 的 DNA, 更短的 DNA 会在纯化过程中大量丢失 ; 提高至 1.8 后,150 bp 的 DNA 也可进行高效纯化 磁珠使用前应先平衡至室温 ( 室温放置 30 min), 否则会导致得率下降 分选效果不佳 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀 样品与磁珠充分混匀后置于磁力架上进行分离时, 请于溶液彻底澄清后再吸取上清, 吸取上清时应余留 2-3 μl 若不慎吸到磁珠, 会造成得率下降 分选效果不佳甚至影响后续酶反应 此时可将磁珠混匀重新置于磁力架上再次分离即可 由于磁力架吸力不同等原因, 默认分离时间有时可能需要延长, 以彻底分离磁珠和液体 磁珠漂洗应使用新鲜配制并平衡至室温的 80% 乙醇 漂洗过程中 EP 管应始终置于磁力架中, 请勿扰动磁珠 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥 干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应 ; 过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率 通常情况下, 室温干燥 5-10 min 足以让磁珠充分干燥, 请勿加热干燥 ( 如置于 37 烘箱干燥 ) 通常情况下, 推荐使用洗脱液 (10 mm Tris-HCl,pH ) 进行产物洗脱, 这样更有利于产物的稳定保存 然而, 当后续需对文库进行靶向捕获时, 为了利于捕获前文库干燥浓缩且避免对后续捕获反应产生影响, 应使用灭菌超纯水进行产物洗脱 洗脱产物可于 4 稳定保存一周 ; 长期保存时应置于 -, 避免不必要的反复冻融 5
7 06-5/ 关于长度分选 如 Input DNA 分布范围较宽, 建库过程中通常需要进行长度分选以控制最终文库长度分布范围 推荐使用双轮磁珠分选方案, 也可通过切胶纯化的方式进行分选 长度分选执行位置有多种选择, 可置于 End Preparation 之前 Adapter Ligation 之后或 Library Amplification 之后 标准实验方案中不包含长度分选步骤 如需进行, 请参考附一 双轮磁珠分选 进行长度分选,DNA 损失量约为 60% - 95% 有时需要在文库长度分布( 进行长度分选 ) 和文库复杂度 ( 不进行长度分选 ) 之间进行选择 当 Input DNA 量较低时, 应保证长度分选执行位置的唯一性, 进行两次或者两次以上的长度分选会导致文库复杂度和产出严重下降! 过度扩增的文库进行长度分布检测时, 常见高分子量位置出现拖带或尾峰 对应产物多为非互补链交叉退火产物 ( 参考 06-6/ 关于 Library Amplification) 推荐解决方案为调整扩增循环数, 避免过度扩增, 不建议通过长度分选去除拖带或尾峰 Rapid Ligation Buffer 中包含的高浓度 PEG6000 会对双轮磁珠分选和切胶纯化产生显著影响 因此, 如在 Adapter Ligation 之后进行长度分选,Adapter Ligation 产物纯化步骤 (08/ 标准方案 / 步骤二 /6. 使用 VAHTS DNA Clean Beads 对反应产物进行纯化 ) 必须进行, 不能省略! 将纯化产物洗脱至合适体积的洗脱液中, 再进行双轮磁珠分选或切胶纯化 ; 如在 End Preparation 之前或 Library Amplification 之后进行长度分选, 可将原处纯化步骤直接替换为双轮磁珠分选或切胶纯化 06-6/ 关于 Library Amplification PCR Primer Mix 适用于扩增含完整长度 Adapter 的 Illumina 高通量测序平台文库 非完整长度 Adapter 或者其他平台文库需自行更换扩增引物, 推荐每条引物的扩增终浓度为 μm PCR 反应后期, 引物通常会先于 dntp 被耗尽 此时, 过多的循环会造成扩增产物解链后进行非特异性退火, 产生非互补链交叉退火产物 这些产物在依赖电泳的检测方式中迁移速率比较慢, 在高分子量区域呈现弥散分布 它们是由正确长度的单链文库构成, 在变性后能够与 Flow Cell 正常结合并被测序 因此, 其存在与否对测序而言并无显著影响 然而, 这种产物的存在对于文库定量方式的选择会产生决定性影响 因产物不是完整的双链结构, 当使用基于识别双链 DNA 的荧光染料 (Qubit 等 ) 来进行文库定量时, 定量结果会比实际值偏低 ; 但基于 qpcr 的文库定量体系 ( 如 VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina,Vazyme #NQ101 - NQ104) 在定量过程中包含变性过程, 仍然可以准确定量这种过度扩增的文库 Library Amplification 步骤需要严格控制扩增循环数 循环数不足, 会导致文库产出不足 ; 循环数过多, 又会导致过度扩增 偏好性增加 重复度增加 嵌合产物增加 扩增突变积累等多种不良后果 Table 3 列举了当使用 100 pg - 1 μg 高质量 Input DNA 时, 获得 100 ng 或 1 μg 文库推荐的扩增循环数 6
8 Input DNA (Into End Preparation) 100 pg 1 ng 5 ng 10 ng 50 ng 100 ng 250 ng 500 ng 1 μg Table pg - 1 μg Input DNA 扩增循环数推荐表 Number of cycles required to generate 100 ng 1 μg 上表为使用 ~ 0 bp 高质量 Input DNA 时测得的循环数参数 当 DNA 质量较差 文库长度较长时, 需适当提高循环数以获取足量文库 若建库过程中进行过长度分选, 则参照较高循环数进行 Library Amplification; 否则, 参照较低循 环数即可 当 Adapter Ligation 步骤中使用其他来源的非完整长度 Adapter 时, 须至少扩增 2 个循环以补全文库 末端 Adapter 序列 当 Adapter Ligation 时使用完整长度的 Adapter ( 如 Vazyme #N801/N802 或 #N805/N806/ N807/N808), 且文库产出能够满足应用需要, 可不进行 Library Amplification 步骤, 从而 获得 PCR-Free 文库 06-7/ 关于文库的质量控制通常情况下, 构建好的文库可通过长度分布检测和浓度检测来进行质量评价 文库长度分布检测 : 文库长度分布可通过 LabChip GX GXII GX Touch (PerkinElmer);Bioanalyzer Tapestation (Agilent Technologies);Fragment Analyzer (Advanced Analytical) 等基于电泳分离原理的设备进行检测 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 建库过程中各步骤产物的长度分布检测如下图所示 最终文库 ( 不进行长度分选 ) Input DNA 最终文库 (Adapter Ligation 后长度分选 ) Adapter Ligation 产物 VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 建库过程 中各步骤产物的长度分布检测 7
9 常规适用于 Illumina 平台的 Adapter 均为 Y 型 Adapter, 末端存在单链分叉区域 因此, Adapter Ligation 之后未经扩增的 PCR-Free 文库两端都存在单链分叉区域 当进行文库长度分布检测时, 这种单链的分叉结构会造成文库迁移速率变慢, 进而导致检测结果偏长 分布范围变宽 峰型异常等问题 为了准确检测文库长度分布, 可取少量 PCR-Free 文库进行适度 PCR 扩增, 取扩增产物进行检测以反映 PCR-Free 文库的长度分布情况 也可通过检测 VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ101 - NQ104) 扩增产物来反映 PCR-Free 文库的长度分布情况 文库浓度检测 : 常用文库浓度检测方法有两种 : 基于双链 DNA 荧光染料的方法, 如 Qubit PicoGreen 等 ; 基于 qpcr 绝对定量的方法, 如 VAHTS TM Library Quantification Kit for Illumina (Vazyme #NQ101 - NQ104) 虽然前者简单易行, 但介于下述原因, 推荐使用基于 qpcr 绝对定量的方法进行文库浓度测定 当使用完整长度 Adapter, 且完成 Adapter Ligation 步骤之后, 任何一个步骤产物都可以使用基于 qpcr 绝对定量的方法进行浓度测度 可以明确监控 End Preparation 磁珠纯化/ 分选 Library Amplification 各步骤效率, 进而能为体系优化和建库异常原因分析提供依据 因 PCR-Free 文库缺少 Library Amplification 步骤, 构建好的文库中包含一定比例的单端连接 Adapter 的产物和两端都不连接 Adapter 的产物 当使用 Qubit PicoGreen 等基于双链 DNA 荧光染料的浓度测定方法时, 无法有效区分这些产物 但 qpcr 绝对定量基于 PCR 扩增原理, 只定量样品中两端 Adapter 完整的文库 ( 即可测序文库 ), 可以排除单端或双端都不连接 Adapter 的不可测序文库的干扰 因此,PCR-Free 文库只能使用基于 qpcr 绝对定量的方法进行浓度测定 过度扩增的文库因包含大量不完整双链结构, 不能使用 Qubit PicoGreen 等基于双链 DNA 荧光染料的浓度测定方法 但基于 qpcr 绝对定量的方法不受过度扩增影响 ( 参考关于 06-6/ 关于 Library Amplification) 06-8/ 其他注意事项 使用前请将试剂盒各组分置于室温解冻 解冻后上下颠倒数次充分混匀, 短暂离心后置于冰上待用 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀, 剧烈振荡可能会造成文库产出下降 为避免样品交叉污染, 推荐使用带滤芯的枪头, 吸取不同样品时请更换枪头 推荐在带热盖的 PCR 仪中进行各步骤反应, 使用前应预热 PCR 仪至反应温度附近 PCR 产物因操作不当极容易产生气溶胶污染, 进而影响实验结果准确性 因此, 我们推荐将 PCR 反应体系配制区和 PCR 产物纯化检测区进行强制性的物理隔离 ; 使用专用的移液器等设备 ; 并定时对各实验区域进行清洁 ( 使用 0.5% 次氯酸钠或 10% 漂白剂进行擦拭清理 ), 以保证实验环境的洁净度 8
10 07/ 实验原理与流程概要 Input DNA End Preparation Adapter Ligation PCR-Free Library ends here Library Amplification P5 IX P7 VAHTS DNA Adapter for Illumina Compatible with: - DNA - ChIP-DNA - RNA (non-small RNA) 5 Phosphate 3 da Tail 3 dt Tail IX, Index P5 sequence P7 sequence VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 建库原理 9
11 dsdna 可分选位置 1 分选条件参考 Table 5 (Page.14) 常见应用中推荐的 Input DNA 量参考 Table 1 (Page.03) 根据应用类型与 Input DNA 量参考 Table 4 (Page.14) 选择合适的位置进行分选操作 dsdna Fragmentation Input DNA End Preparation (65 μl),15 min 65,15 min Safe Stopping Point 1 可进行 Input DNA 长度分布与浓度检测 ( 此处推荐浓度测定方案 :Qubit ) 不同 Input DNA 量推荐 Adapter 用量参考 Table 2 (Page.04) Adapter Ligation (100 μl),15 min 可分选位置 2 分选条件参考 Table 5 (Page.14) 不同 Input DNA 量推荐扩增 Cycle 数参考 Table 3 (Page.07) Cleanup (180 μl) 0.8 DNA Clean Beads Library Amplification (50 μl) Safe Stopping Point 2 PCR-Free 文库构建至此结束 可进行文库长度分布与有效浓度检测 ( 此处推荐浓度测定方案 :VAHTS Library Quantification Kit) 可分选位置 3 分选条件参见 Table 5 (Page.14) Cleanup (95 μl) 0.9 DNA Clean Beads 靶向捕获或测序 Safe Stopping Point 3 可进行文库长度分布与有效浓度检测 ( 此处推荐浓度测定方案 :Qubit / VAHTS Library Quantification Kit) VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 建库流程概要 10
12 08/ 标准实验方案 步骤一 :End Preparation 这一步骤将 Input DNA 末端补平, 并在 5 端进行磷酸化和 3 端加 da 尾 1. 将 End Prep Mix 2 解冻后颠倒混匀, 于灭菌 PCR 管中配制如下反应 : 组分 Input DNA End Prep Mix 2 ddh2o 体积 x μl 15 μl To 65 μl 2. 使用移液器轻轻吹打混匀 ( 请勿振荡混匀 ), 并短暂离心将反应液收集至管底 3. 将 PCR 管置于 PCR 仪中, 进行下述反应 : 温度热盖 时间 On 15 min 15 min Hold 步骤二 :Adapter Ligation 这一步骤将在 End Preparation 产物末端连接 Adapter 1. 根据 Input DNA 量按 Table 2 (Page.04) 稀释 Adapter 至合适浓度 2. 将 Rapid Ligation buffer 解冻后颠倒混匀, 置于冰上备用 3. 在 End Preparation 步骤 PCR 管中配制如下反应 : 组分 End Preparation 产物 Rapid Ligation buffer Rapid DNA ligase DNA Adapter X 总计 体积 65 μl 25 μl 5 ul 5 μl 100 μl Rapid Ligation buffer 与 Rapid DNA ligase 预混后, 可于 4 存放不超过 24 hrs 4. 使用移液器轻轻吹打混匀 ( 请勿振荡混匀 ), 并短暂离心将反应液收集至管底 5. 将 PCR 管置于 PCR 仪中, 进行下述反应 : 温度热盖 时间 On 15 min Hold 当 Input DNA 量较低时, 可尝试将连接时间延长一倍 但延长反应时间可能会导致 Adapter Dimer 增加, 必要时需同时调整 Adapter 使用浓度 11
13 6. 使用 VAHTS DNA Clean Beads 对反应产物进行纯化 : 1/ 磁珠平衡至室温后, 涡旋振荡混匀 VAHTS DNA Clean Beads 2/ 吸取 80 μl VAHTS DNA Clean Beads 至 100 μl Adapter Ligation 产物中, 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打 10 次充分混匀 3/ 室温孵育 5 min 4/ 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体, 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心移除上清 5/ 保持 PCR 管始终置于磁力架中, 加入 0 μl 新鲜配制的 80% 乙醇漂洗磁珠, 室温孵育 30 sec, 小心移除上清 6/ 重复步骤 5, 总计漂洗两次 7/ 保持 PCR 管始终置于磁力架中, 开盖空气干燥磁珠 5-10 min 至无乙醇残留 8/ 将 PCR 管从磁力架中取出, 进行洗脱 : 如纯化产物不进行双轮磁珠分选 : 加入 22.5 μl 洗脱液 (10 mm Tris-HCl,pH ph 8.5) 洗脱, 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀, 于室温放置 2 min, 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中静置, 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心移取 μl 上清至新 EP 管中, 切勿触碰磁珠 如纯化产物需进行双轮磁珠分选 : 加入 105 μl 洗脱液 (10 mm Tris-HCl,pH ph 8.5) 洗脱, 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀, 于室温放置 2 min, 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中静置, 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心移取 100 μl 上清至新 EP 管中, 切勿触碰磁珠, 根据 Table 5 (Page.14) 双轮磁珠分选条件进行长度分选 此处样品可于 4 稳定保存一周 长期保存置于 -, 避免不必要的反复冻融 步骤三 :Library Amplification ( 选做 ) 这一步骤将对纯化或长度分选后的 Adapter Ligation 产物进行 PCR 扩增 是否需要进行这一步骤取决于 Input DNA 量 Adapter 是否为完整长度 应用需要等因素 如使用非完整长度 Adapter, 必须进行这一步骤 如使用完整长度 Adapter, 当 Input DNA < 50 ng 时, 推荐进行 Library Amplification; 当 Input DNA 50 ng 或者不需要进行文库扩增富集时, 此步骤可不进行, 直接进入步骤四 1. 将 PCR Primer Mix Amplification Mix 2 解冻后颠倒混匀, 于灭菌 PCR 管中配制如下反应 : 组分纯化或分选过的 Adapter Ligation 产物 PCR Primer Mix Amplification Mix 2 总计 体积 μl 5 μl 25 μl 50 μl 2. 使用移液器轻轻吹打混匀 ( 请勿振荡混匀 ), 并短暂离心将反应液收集至管底 12
14 3. 将 PCR 管置于 PCR 仪中, 进行下述反应 : 温度 时间 3 min sec 15 sec 30 sec 5 min Hold 循环数 1 循环数选择参照 Table 3 (Page.07) 1 4. 如需进行长度分选, 参考附一 双轮磁珠分选进行 ; 如不需要进行长度分选, 使用 VAHTS DNA Clean Beads 对反应产物进行纯化 : 1/ 磁珠平衡至室温后, 涡旋振荡混匀 VAHTS DNA Clean Beads 2/ 吸取 45 μl VAHTS DNA Clean Beads 至 50 μl Library Amplification 产物中, 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打 10 次充分混匀 3/ 室温孵育 5 min 4/ 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体, 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心移除上清 5/ 保持 PCR 管始终置于磁力架中, 加入 0 μl 新鲜配制的 80% 乙醇漂洗磁珠, 室温孵育 30 sec, 小心移除上清 6/ 重复步骤 5, 总计漂洗两次 7/ 保持 PCR 管始终置于磁力架中, 开盖空气干燥磁珠 5-10 min 至无乙醇残留 8/ 将 PCR 管从磁力架中取出, 进行洗脱 : 如后续不进行靶向捕获 : 加入 22.5 μl 洗脱液 (10 mm Tris-HCl,pH ph 8.5) 洗脱, 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀, 于室温放置 2 min, 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中静置, 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心移取 μl 上清至新 EP 管中, 切勿触碰磁珠 如后续需进行靶向捕获 : 加入 22.5 μl 灭菌超纯水洗脱 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀, 于室温放置 2 min, 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中静置, 待溶液澄清后 ( 约 5 min ), 小心移取 μl 上清至新 EP 管中, 切勿触碰磁珠 此处样品可于 4 稳定保存一周 长期保存置于 -, 避免不必要的反复冻融 步骤四 : 文库质量控制 参考 06-7/ 关于文库的质量控制 13
15 附一 双轮磁珠分选 为了满足不同应用的需要, 建库过程中通常需要进行双轮磁珠分选以控制文库 Insert Size 的分布范围 一般情况下, 推荐将分选置于 Adapter Ligation 之后 也可根据 Input DNA 量与分布范围情况, 将分选置于 End Preparation 之前或者 Library Amplification 之后 应保证分选方案执行位置的唯一性, 进行两次或者两次以上的分选会导致文库复杂度和产出严重下降! 分选方案执行位置的选择和优缺点参见 Table 4 Table 4 分选方案执行位置选择 分选方案执行位置 End Preparation 之前 Adapter Ligation 之后 ( 推荐方案 ) Library Amplification 之后 建库过程中不进行分选 适用情况 Input DNA 量充足, 但分布范围宽或主峰与预期文库 Insert Size 不一致 ;Input DNA 纯度较差 Input DNA 分布范围适合且量充足 *** Input DNA 量少 *** Input DNA 分布范围已满足建库要求 ; Input DNA 量少 优点分选产物长度分布集中 ; 能准确控制 Input DNA 量 ; 能进一步提高 Input DNA 纯度, 提高建库成功率减少短片段 DNA 丢失 ; 绝大多数情况下通用 减少建库过程中 Input DNA 的损失, 提高文库复杂度减少建库过程中 Input DNA 的损失, 提高文库复杂度 缺点 DNA 损失大 ; 文库分布范围略宽 * 文库分布范围略宽 * 文库分布范围宽 ** 无法控制文库 Insert Size 适用样本列举 Fragmentation 不充分或过度的基因组 DNA Fragmentation 适度的基因组 DNA 或分布范围较宽的 FFPE DNA cfdna 多重 PCR 产物 断裂程度较高的 FFPE DNA * 双轮磁珠分选效果受 DNA 末端情况影响,Input DNA 末端的单链部分以及 Y 型 Adapter 的单链非互补区域会导致分选产物长度分布范围变宽 ** 相对于其他位置分选而言 因其他位置分选产物进行 Library Amplification 之后, 文库分布会进一步集中 *** 推荐当 Input DNA 量 50 ng 时, 选择在 Adapter Ligation 之后进行分选 ; 当 Input DNA 量 50 ng 或样品拷贝数有限时, 将分选置于 Library Amplification 之后 双轮磁珠分选是通过控制磁珠的使用量来进行 DNA 长度选择的 其基本原理为 : 第一轮磁珠结合分子量较大的 DNA, 通过丢弃磁珠去除这部分产物 ; 第二轮磁珠结合剩余产物中分子量较大的 DNA, 通过丢弃上清去除分子量较小的 DNA 初始样品中的很多组分都会干扰双轮磁珠分选效果 因此, 当分选方案执行位置不同时, 双轮磁珠使用量也不尽相同 可根据预期文库 Insert Size 和分选方案执行位置在 Table 5 中选择最适分选参数 Table 5. 文库长度分选 预期文库 Insert Size (bp) 分选方案执行位置与条件 End Preparation 之前分选 ( 样品体积补至 100 μl) Adapter Ligation 之后分选 ( 样品体积 100 μl ) Library Amplification 之后分选 ( 样品体积补至 100 μl) 磁珠轮数一轮 X (ul) 二轮 Y (ul) 一轮 X (ul) 二轮 Y (ul) 一轮 X (ul) 二轮 Y (ul) / / / / / / / / 14
16 使用磁珠进行长度分选时,Insert Size 越大最终产物分布越宽 当 Insert Size > 700 bp 时, 双轮磁珠几乎不具有分选效果 此时建议通过切胶纯化的方案进行长度分选 样品和磁珠的体积比对于分选效果至关重要, 应尽可能保持样本初始体积和移液体积的准确性 样品预处理 ( 重要!) 如在 End Preparation 之前进行长度分选, 样品体积应为 100 μl, 不足时使用灭菌超纯水补齐 ; 如在 Adapter Ligation 产物纯化之后进行长度分选, 样品体积应为 100 μl, 不足时使用灭菌超纯水补齐 ; 如在 Library Amplification 之后进行长度分选, 样品体积应为 100 μl, 不足时使用灭菌超纯水补齐 ; 如不对样品进行体积预处理, 也可按样品实际体积等比例调整磁珠用量 但样品体积太小会导致移液误差增大, 进而影响分选的准确性 因此, 不推荐对体积 < 50 μl 的样品直接进行分选 分选方案 [ 参考 Table 5 (Page.14) 确定 X 和 Y 的值 ] 1/ 磁珠平衡至室温后, 涡旋振荡混匀 VAHTS DNA Clean Beads 2/ 吸取 X μl VAHTS DNA Clean Beads 至上述 100 μl 产物中, 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打 10 次充分混匀 3/ 室温孵育 5 min 4/ 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心转移上清至新 PCR 管中, 丢弃磁珠 5/ 吸取 Y μl VAHTS DNA Clean Beads 至上清中, 用移液器轻轻吹打 10 次充分混匀 6/ 室温孵育 5 min 7/ 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心移除上清 8/ 保持 PCR 管始终处于磁力架中, 加入 0 μl 新鲜配制的 80% 乙醇漂洗磁珠 室温孵育 30 sec, 小心移除上清 9/ 重复步骤 8, 总计漂洗两次 10/ 保持 PCR 管始终置于磁力架中, 开盖空气干燥磁珠 5-10 min 至无乙醇残留 11/ 将 PCR 管从磁力架中取出, 进行洗脱 : 如后续不进行靶向捕获 : 加入 22.5 μl 洗脱液 (10 mm Tris-HCl,pH ) 洗脱 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀, 于室温放置 2 min 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中静置 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心移取 μl 上清至新 EP 管中, 切勿触碰磁珠 如后续需进行靶向捕获 : 加入 22.5 μl 灭菌超纯水洗脱 涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀, 于室温放置 2 min 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中静置 待溶液澄清后 ( 约 5 min), 小心移取 μl 上清至新 EP 管中, 切勿触碰磁珠 15
17 附二 cfdna 建库方案 cfdna ( 游离 DNA) 是一种来源于血液的碎片化 DNA, 具有高度片段化 (~180 bp) 含量低等显著特点, 在无创产前诊断 (NIPT) 以及液体活检 (ctdna 检测 ) 等领域具有极高的检测价值 针对这类样品,VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 提供高度简化和优化的建库方案 注意事项 Input DNA 特指投入到 End Preparation 的 DNA, 体积 50 μl cfdna 本身高度片段化, 不需要进行 Fragmentation 为保证建库质量, 推荐对 cfdna 模板进行长度分布 (2100 Bioanalyzer) 和浓度 (Qubit ) 检测 建库流程 步骤一 :End Preparation ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤一 ) Input DNA 量 :100 pg ng 步骤二 :Adapter Ligation ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤二 ) Adapter: 根据 Table 2 (Page.04) 预先稀释 Cleanup: 采用 0.8 磁珠纯化,22.5 μl 洗脱液洗脱 DNA, 移取 μl 上清进行下一步骤 步骤三 : Library Amplification ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤三 ) 循环数 : 推荐 12-17, 根据文库产出需求自行调整 Cleanup:cfDNA 文库是否进行长度分选由样本情况与数据分析需要决定 如不进行双轮磁珠分选 : 采用 0.9 磁珠纯化,22.5 μl 洗脱液洗脱 DNA, 移取 μl 上清至新 EP 管中,- 保存 如进行双轮磁珠分选 : 采用 0.73 / 0.25 双轮磁珠分选,22.5 μl 洗脱液洗脱 DNA, 移取 μl 上清至新 EP 管中,- 保存 步骤四 : 文库质量控制文库浓度测定 : 推荐使用荧光染料法 (Qubit 或 Picogreen ) 或 qpcr 绝对定量法进行文库浓度测定 文库长度分布检测 : 通过 Agilent 2100 Bioanalyzer 进行长度分布检测 磁珠法提取的 cfdna cfdna 文库 ( 不进行长度分选 ) cfdna 文库 ( 进行长度分选 ) 16
18 附三 FFPE DNA 建库方案 FFPE DNA 是从福尔马林固定石蜡包埋 (Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded,FFPE) 的切片中获得的 DNA, 具有提取困难 ( 与组蛋白紧密交联 ) 质量较低( 降解严重 ) 等特点 FFPE 样本易于保存且来源广泛, 在医学领域具有极高的应用价值 针对这类样品, VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 提供高度简化和优化的建库方案 注意事项 Input DNA 特指投入到 End Preparation 的 DNA, 体积 50 μl 因组织差异 包埋质量 保存时间等因素影响, 提取到的 FFPE DNA 质量不尽相同 使用低质量的 FFPE DNA 建库时应适当提高 Input DNA 量或增加扩增循环数 为了保证建库质量, 推荐对 FFPE DNA 模板进行长度分布 (2100 Bioanalyzer) 和浓度 (Qubit ) 检测 也可使用基于 qpcr 法的 FFPE DNA 质量评价体系预先对模板进行检测 当 FFPE DNA 片段化程度不足, 平均分子量偏大时, 建库前需要先进行 Fragmentation 建库流程 步骤一 :End Preparation ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤一 ) Input DNA 量 : 50 ng 步骤二 :Adapter Ligation ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤二 ) Adapter: 根据 Table 2 (Page.04) 预先稀释 Cleanup: 采用 0.8 磁珠纯化 如纯化产物不进行双轮磁珠分选 : 用 22.5 μl 洗脱液洗脱 DNA, 移取 μl 上清 如纯化产物需进行双轮磁珠分选 : 用 105 μl 洗脱液洗脱 DNA, 移取 100 μl 上清, 后根据 Table5 (Page.14) 双轮磁珠分选条件进行文库长度分选 步骤三 : Library Amplification ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤三 ) 循环数 : 参照 Table 3 (Page.07), 根据样本质量调整 Cleanup: 如扩增产物不进行双轮磁珠分选 : 采用 0.9 磁珠纯化,22.5 μl 洗脱液洗脱 DNA, 移取 μl 上清至新 EP 管中,- 保存 如扩增产物需进行双轮磁珠分选 : 用灭菌超纯水补至 100 μl, 后根据 Table5 (Page.14) 双轮磁珠分选条件进行文库长度分选 步骤四 : 文库质量控制 文库浓度测定 : 推荐使用荧光染料法 (Qubit 或 Picogreen ) 或 qpcr 绝对定量法进行文库浓度测定 文库长度分布检测 : 通过 Agilent 2100 Bioanalyzer 进行长度分布检测 FFPE DNA 最终文库 (Adapter Ligation 后长度分选 ) FFPE DNA 文库 ( 进行长度分选 ) 17
19 附四 靶向捕获建库方案 以 NimbleGen SeqCap EZ 捕获流程为例,VAHTS TM Universal DNA Library Prep Kit for Illumina 可以用于构建预捕获文库 注意事项 Input DNA 特指投入到 End Preparation 的 DNA, 体积 50 μl Input DNA 范围应介于 bp 范围内, 具体打断条件参照 Covaris 或其他 DNA 片段化设备的使用说明书 为保证建库质量, 推荐对 Input DNA 进行长度分布 (2100 Bioanalyzer) 和浓度 (Qubit ) 检测 建库流程 步骤一 :End Preparation ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤一 ) Input DNA 量 : 根据样本类型参照 Table 1 (Page.03) 选择 步骤二 :Adapter Ligation ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤二 ) Adapter: 根据 Table 2 (Page.04) 预先稀释 VAHTS TM DNA Adapters for Illumina (Vazyme #N801/N802) 可完美兼容 NimbleGen SeqCap EZ 使用其他来源的 Adapter 或者捕获试剂时,Adapter 的选择需要参考捕获试剂中的 Blocking 试剂 Cleanup: 采用 0.8 磁珠纯化,105 μl 洗脱液洗脱 DNA, 移取 100 μl 上清 ; 后进行 0.68 / 0.2 双轮磁珠分选,22.5 μl 洗脱液洗脱 DNA, 移取 μl 上清进行下一步骤 步骤三 : Library Amplification ( 参照 08/ 标准实验方案 / 步骤三 ) 循环数 : 参照 Table 3 (Page.07), 推荐按上限循环数扩增 按推荐上限循环数扩增可获得 1 μg 的文库产出 ; 若捕获前先进行样本 Pooling, 应确保每个样本的文库产出 1 μg/n (n = 样品数量 ) 此时, 可降低各样品扩增循环数, 以提高文库复杂度 降低 Duplication rates Cleanup: 采用 0.9 磁珠纯化,22.5 μl 灭菌超纯水洗脱 DNA, 移取 μl 上清至新 EP 管中 步骤四 : 文库质量控制参照 SeqCap EZ Library SR User s Guide v5.1 (Chapter 4,Step 5) (Roche document number ,09/15) 进行文库质量控制 步骤五 : 靶向富集参照 SeqCap EZ Library SR User s Guide v5.1 第 5-8 章完成靶向捕获流程 18
20 Vazyme Biotech Co., Ltd Web: Tel: Sales: Support: Service:
Library Preparation ND
ND601-01/02 VAHTS TM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina Vazyme Biotech Co., Ltd 网站 /Web: 咨询热线 /Tel: 400-600-9335 销售 /Sales: sales@vazyme.com 技术支持 /Support: support@vazyme.com 技术服务 /Service: service@vazyme.com
ND 张婷
Library Preparation VAHTS TM Turbo DNA Library Prep Kit for Illumina Vazyme Biotech Co., Ltd 网站 /Web: 咨询热线 /Tel: 400-600-9335 销售 /Sales: sales@vazyme.com 技术支持 /Support: support@vazyme.com 技术服务 /Service:
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TruePrepTM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina TD501-TD503 Vazyme Biotech Co., Ltd Web: Tel: 400-600-9335 Sales: sales@vazyme.com Support: support@vazyme.com Service: service@vazyme.com Vazyme biotech
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TruePrep TM DNA Library Prep Kit V2 for Illumina TD501-TD503 Vazyme Biotech Co., Ltd Web: Tel: 400-600-9335 Sales: sales@vazyme.com Support: support@vazyme.com Service: service@vazyme.com Vazyme biotech
Hieff NGS MaxUp TM II Dual-mode mrna Library Prep Kit for Illumina MaxUp TM II 双模式 mrna 建库试剂盒 Yeasen Biotech Co., Ltd. 使用说明书
Hieff NGS MaxUp TM II Dual-mode mrna Library Prep Kit for Illumina MaxUp TM II 双模式 mrna 建库试剂盒 Yeasen Biotech Co., Ltd. 使用说明书 目录 产品信息... 1 产品描述... 1 产品组分... 1 运输与保存方法... 1 注意事项... 1 使用方法... 3 附录一 :mrna
产品简介 TIANSeq Fast RNA Library Kit (Illumina) 是针对 Illumina 高通量测序平台开发的非定向转录组文库构建专用试剂盒, 可用于常规转录组分析及 lncrna 等非编码 RNA 的分析 本试剂盒采用快速一管式的操作流程, 可对 RNA 样本进行快速文库
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 : NR180418 浓缩国际权威精华, 铸就 TIANGEN 优秀品质! TIANSeq Fast RNA Library Kit (illumina) TIANSeq 快速 RNA 文库构建试剂盒 (illumina
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N701
Discover-sc TM WTA Kit Vazyme Biotech Co., Ltd 网站 /Web: 咨询热线 /Tel: 400-600-9335 销售 /Sales: sales@vazyme.com 技术支持 /Support: support@vazyme.com 技术服务 /Service: service@vazyme.com Vazyme biotech co., ltd.
产品简介本试剂盒提供了 DNA 文库构建所需要的酶预混体系及反应缓冲液, 包含除接头与 PCR 引物外的所有成分, 用于 illumina 二代测序平台 DNA 文库构建 和一般建库方法相比, 该试剂盒操作简单 方便, 极大地缩短了文库构建时间 另外, 试剂盒采用高保真 DNA 聚合酶进行文库富集,
微信订购 : 扫一扫右侧二维码 网站订购 :www.cwbiotech.com 服务热线 :4006-222-360 版本号 :04/2017 NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina 二代测序快速 DNA 建库试剂盒 (Illumina) 目录号 :CW2585S(24 rxns) CW2585M(96 rxns) 保存条件 :-20 保存, 干冰运输
TR102-说明书-3_复制
T7 RNAi Transcription Kit TR102 www.vazyme.com Vazyme biotech co., ltd. 使用说明书 Version 7.1 目 录 Contents 01/产品概述 T7 RNA ploymerase可识别带有t7启动子的dna模版 以四种NTP为底物 体外合成RNA T7 RNAi Transcription Kit是在T7 High Yield
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材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
上海融享生物科技有限公司 更多技术问题请联系 订购邮箱 网址 : 1
更多技术问题请联系 :techsupport@rx-coshare.com.cn 订购邮箱 :sales@rx-coshare.com.cn 网址 :www.rx-coshare.com.cn 1 PowerPrep TM Rapid DNA Library Kit for illumina Platform Protocol 目录 产品介绍... 3 试剂盒组分... 4 保存条件... 4 试剂盒中未提供的试剂耗材或主要设备...
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
摘要
中 華 民 國 第 五 十 一 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 物 科 組 別 : 高 中 組 作 品 名 稱 : 不 給 糖 就 搗 蛋 - 蛀 牙 細 菌 的 抑 制 關 鍵 詞 :Bacillus horikoshii 轉 糖 鏈 球 菌 蛀 牙 編 號 : 摘 要 : 本 實 驗 的 目 的 是 希 望 能 找 出 人 類 牙 齒 上 的 主 要 菌
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技术手册 MagneSil 固定组织基因组 DNA 纯化系统 MagneSil Genomic, Fixed Tissue System MD1490 产品使用说明 CTB319 修订时间 2011.9 MagneSil 固定组织基因组 DNA 纯化系统 所有技术文献的英文原版均可在 www.promega.com/tbs 网站获得 请访问该网址以确定您所使用的技术手册是否为最新版本 如果您在使用本试剂盒的过程中有任何问题,
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TR101-说明书修改稿4
T7 High Yield RNA Transcription kit TR101 www.vazyme.com Vazyme biotech co., ltd. 使用说明书 Version 7.1 目录 Contents 01/ 产品概述... 02 02/ 产品组分... 02 03/ 保存条件... 02 04/ 适用范围... 02 05/ 自备材料... 02 06/ 模板制备... 02
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前言 实验部分 结果和讨论 最常用的临床样品保存和存档方法之一材料是制备福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 组 FFPE 及新鲜冷冻组织的 DNA 由西奈织 全世界的组织库 医院及实验室内存山医学院捐赠 ( 美国纽约州纽约市 ), 档的 FFPE 组织样本数超过 4 亿个 组织 NA
靶向序列捕获和新一代测序前对福尔马林固定石蜡包埋组织及新鲜冷冻组织进行 DNA 质量控制 应用简报 核酸分析 作者 Melissa Huang Liu 安捷伦科技有限公司美国加利福尼亚州拉霍亚 Maria Celeste Ramirez 安捷伦科技有限公司美国加利福尼亚州圣克拉拉 摘要 本文将介绍利用 Agilent 2100 生物分析仪系统的微流控芯片电泳, 在新一代测序工作流程的 SureSelect
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简介 A B 基于 Sanger 方法的传统测序方法在过去的 2 多年间一直在 DNA 序列测定方法中占据主导地位 1 但是, 随着测序方法及技术的进步, 测序通量在 Sanger 测序基础上有了极大的进步, 如今全基因组测序可在几周甚至是几天内完成 2 这些技术统称为新一代测序, 或 NGS 随着
利用 Agilent 2 系统为新一代测序文库制备及 SureSelect 靶向序列捕获进行全程样品质量控制 应用简报 核酸分析 作者 Arunkumar Padmanaban 安捷伦科技有限公司印度班加罗尔 摘要 Agilent 2 系统可对新一代测序 (NGS) 工作流程中的样品进行全程分析, 从最初的起始材料一直到测序前的最终 DNA 文库质量控制 (QC) 本应用简报遵循 SureSelect
未命名 -1
TM CommaX Plant Genomic DNA Kit 植物基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 本说明书 (1.0 版 ) 适用于货号为 MNP006-1 MNP006-2 的产品 所有的技术文献均可以从本公司网站 www.biocomma.cn 得到 请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本 版本号 :BP029-1 www.biocomma.com 植物基因组 DNA
天净沙系列CAT#: 低温运输,-20 保存 克必隆 ets cdna 文库构建试剂盒 ets cdna Library Construction Kit 使用手册 V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路 26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦 506
天净沙系列CAT#:130407-1 低温运输,-20 保存 克必隆 ets cdna 文库构建试剂盒 ets cdna Library Construction Kit 使用手册 V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路 26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦 506 网址 :www.tiandz.com; 电话 :400-6765278; 电邮 :order@tiandz.com
Primer Manual and Validation Report I. 概述 II. 产品信息 III. 推荐的配套使用试剂 IV. 产品使用流程 V. 产品应用 VI. miprofile mirna qpcr Primer 验证报告 I. 概述 microrna mirna 是一类由大约2
miprofile mirna qpcr Primer Manual and Validation Report For quantitative detection of mature mirna with All-in-One mirna qrt-pcr Detection Kit Catalog number: HmiRQP9071 GeneCopoeia, Inc. 广州复能基因有限公司 地
未命名 -1
TM CommaX Blood Genomic DNA Kit 血液基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 本说明书 (1.0 版 ) 适用于货号为 MNP002-1 MNP002-2 的产品 所有的技术文献均可以从本公司网站 www.biocomma.cn 得到 请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本 版本号 :BP024-1 www.biocomma.com 血液基因组 DNA
为 实 斲 这 项 收 贩 行 劢, 雅 培 将 支 付 21.2 亿 美 元 癿 预 付 款, 而 后 在 仍 2011 年 开 始 癿 4 年 里, 每 年 再 支 付 4 亿 美 元 该 仺 制 药 部 门 主 要 在 印 度 斯 里 兮 卡 和 尼 泊 尔 销 售 零 售 便 利 药 品 4
2010 年 国 际 医 药 并 购 事 件 2010 生 物 医 药 产 业 盘 点 2010 年 癿 国 际 医 药 市 场 风 于 发 幻 诺 华 雅 培 强 生 梯 瓦 百 旪 美 斲 贵 宝 赛 诺 菲 安 万 特 等 全 球 知 名 药 企 癿 一 系 列 收 贩 行 为 丌 断 搅 劢 着 全 球 医 药 市 场, 诺 华 516 亿 美 元 买 断 爱 尔 康, 赛 诺 菲 收 贩
目录
Illumina 平台测序原理及常见几 种测序文库构建流程简介 目录 第一部分 : 测序测序原理与流程 简介 1-8 samples HCS/RTA ICS MSR CASAVA BaseSpace cbot HiSeq2500 MiSeq 文库构建 (~ 6 hrs) HiSeq2000 HiSeq2500 GA IIx MiSeq 1-8 samples HCS/RTA ICS MSR CASAVA
Contents 1 深 圳 大 学 经 济 学 院 学 生 代 表 大 会 章 程 2 2 优 秀 毕 业 生 评 选 细 则 7 3 议 事 规 则 8 i
深 圳 大 学 经 济 学 院 学 代 委 执 事 指 南 发 布 0.0.1 深 圳 大 学 经 济 学 院 学 代 委 2016 年 05 月 25 日 Contents 1 深 圳 大 学 经 济 学 院 学 生 代 表 大 会 章 程 2 2 优 秀 毕 业 生 评 选 细 则 7 3 议 事 规 则 8 i ii 深 圳 大 学 经 济 学 院 学 代 委 执 事 指 南, 发 布 0.0.1
产品简介本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统, 从 100 μl-1 ml 血液中分离纯化高质量基因组 DNA 独特包埋的磁珠, 在一定条件下对核酸具有很强的亲和力, 而当条件改变时, 磁珠释放吸附的核酸, 能够达到快速分离纯化核酸的目的 整个过程不涉及有机试剂, 安全 便捷, 提取
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 : DP150128 Magnetic Blood Genomic DNA Kit 磁珠法血液基因组 DNA 提取试剂盒 目录号 :DP329 产品内容 产品组成 DP329-01 DP329-02 (50
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中國人史綱 提要 柏楊的 中國人史綱 是他十年牢獄生活的血淚之作 在極端惡劣的 環境下 從卷帙浩繁的中國史冊中寫成 史綱 除了大脈絡 更重要的 是大關節的操持 這要有史識 柏楊顯然有他紮實的史料工夫 整體的掌 握應不成問題 他以一百年為 一世紀 作為敘述單元 先把中國史分成 非信史與信史 前者從神話 傳說到半信史時代 後者從紀元前九世紀開 始說起 一章一世紀以迄於晚清 這個大脈絡很清楚 而既稱 史之綱要
您的 NGS 流程自动化 DNA 样品模板的制备 样品质量 1 靶向富集文库扩增和定量控制和定量 文库质量控制和定量 测序 图 1. 下一代测序的一般工作流程 自动化的主要优势是提高了常规步骤的速度和准确度, 而典型的 NGS 工作流程中有许多可采用自动化的移液操作程序 为了解释自动化如
下一代测序工作流程自动化需要考虑的因素 下一代测序 (NGS) 彻底改变了基因组学研究领域, 使全基因组测序比以往任何时候都更有效率 然而, 典型的 NGS 工作流程是鲜有革新的, 因为它面临许多手动操作步骤和来自成本 通量以及结果变异性的诸多挑战 传统的样品制备和数据分析方法非常耗时, 并更易出错 针对这些挑战, 自动化技术为此提供了相应的解决方案, 并通过减少样品间变异提高了最终数据的精准度 然而,
T7 High Yield RNA Transcription Kit
T7 High Yield RNA Transcription Kit Vazyme Biotech Co., Ltd 网站 /Web: 咨询热线 /Tel: 400-600-9335 销售 /Sales: sales@vazyme.com 技术支持 /Support: support@vazyme.com 技术服务 /Service: service@vazyme.com Vazyme biotech
经 无 数 次 的 提 取 和 提 纯, 最 终 得 到 一 小 匙 东 西 这 种 东 西 在 显 微 镜 下 呈 现 出 针 状 晶 体 的 形 状, 在 水 中 溶 解 后 得 到 一 种 带 乳 光 的 汁 液 当 他 将 少 许 溶 液 涂 抹 健 康 烟 叶 上 几 天 后, 这 烟 叶
生 命 的 历 程 什 么 是 生 命 生 命 是 什 么? 人 类 是 生 命 体 的 一 类, 他 们 有 组 织 器 官 等 形 体 上 的 相 同 之 处, 但 也 有 性 别 年 龄 肤 色 等 巨 大 的 差 别 ; 我 们 知 道 成 千 上 万 种 动 物 植 物 直 至 微 生 物 都 是 生 命 体, 因 为 它 们 同 人 类 一 样 都 有 产 生 生 长 衰 老 及 消 亡
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
7: 使用过的磁珠重复使用时, 建议纯化同种蛋白, 纯化不同种类蛋白时, 建议使用 新的磁珠 实验参考 表一 : 粗蛋白样本,Wash Buffer,Elution Buffer 使用推荐比例 粗蛋白样本 Wash Buffer Elution Buffer 1 Elution Buffer 2 1
使用说明书 产品名称 Ni IDA 琼脂糖磁珠 产品型号 MAg25K-IDA-Ni 目录号 P20 产品介绍 Enriching Beads Ni IDA 琼脂糖磁珠是专为组氨酸标签 (His-tag) 蛋白纯化而设计的新型功能化材料 与传统的金属螯合琼脂糖或者葡聚糖预装柱相比,Ni IDA 琼脂糖磁珠具有顺磁性, 借助外加磁场易实现目标蛋白的分离与纯化 ; 操作简单, 一步纯化即可获得高纯度的组氨酸标签蛋白
Phire Hot StartII DNA 聚合酶
重 要 提 示 Phusion 人 源 样 本 直 接 PCR 试 剂 盒 产 品 货 号 :F-150,200rxns x 20μl 变 性 温 度 为 98 C 退 火 温 度 与 众 多 常 规 DNA 聚 合 酶 ( 如 Taq DNA 聚 合 酶 ) 不 同, 具 体 请 参 照 6.3 延 伸 时, 若 扩 增 子 片 段 1kb, 则 延 伸 时 间 设 定 为 15s 即 可 ; 若
产品简介本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲液系统, 样品裂解后, DNA 在高盐条件下与硅胶膜结合, 在低盐 高 ph 值时 DNA 从硅胶膜上洗脱下来 本试剂盒用于从小剂量的血液 干血点 血清 / 血浆 微量组织 漱口水 毛发 微切割组织等微量样品中提取基因组 DNA, 所得基
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 : DP121221 TIANamp Micro DNA Kit 微量样品基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 目录号 :DP316 产品内容 产品组成 DP316 (50 preps) 缓冲液 GA(Buffer
赵世嘏 高乃云 楚文海 微曝气工艺是在常规 基础上发展起来的 试验表明在紫外光强 投加量为 三氯乙酸 初始浓度约为 的情况下 后该工艺对 的去除达到 以上 工艺效果受 光强 投加量 初 始浓度和 的影响 其他条件一定时 随着 光强和 投加量的增大 去除率增加 然而 投加量超过 后 去除效果增加缓慢 对不同初始浓度 时去除率最 高 而后浓度增加 去除率下降 中性或弱酸性 条件下更有利于降解 消毒副产物
C212 V5.1
Mut Express II Fast Mutagenesis Kit Vazyme Biotech Co., Ltd 网站 /Web: 咨询热线 /Tel: 400-600-9335 销售 /Sales: sales@vazyme.com 技术支持 /Support: support@vazyme.com 技术服务 /Service: service@vazyme.com Vazyme biotech
<4D F736F F D20D7DC524E41D0A1C1BFD6C6B1B8CAD4BCC1BAD02E646F63>
AxyPrep 总 RNA 小量制备试剂盒 本试剂盒用于从各种动物组织 植物组织 细胞 细菌 酵母和丝状真菌中提取总 RNA 提取的总 RNA 分子完整 纯度高, 适用于 Northern Blot RT-PCR 体外翻译 Primer Extension S1 核酸酶作图 RNase 保护测定 构建 cdna 文库等各种分子生物学实验 一 试剂盒组成 贮存 稳定性 Cat. No. AP-MN-MS-RNA-4
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
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目 录 产品介绍 产品特点 试剂盒应用 产品质量控制 试剂盒内容 试剂盒组分信息 储存条件 注意事项
Real Time PCR Easy TM -SYBR Green I Cat.No.QP-01011/01012/01013/01014 For qpcr using cdna,purified DNA Store at -20 C Research use only Copyright Foregene 2014/03. All rights reserved. 1/14 目 录 产品介绍........
目 录 产品介绍 产品特点 试剂盒应用 产品质量控制 试剂盒内容 试剂盒组分信息 储存条件 注意事项
Real Time PCR Easy TM -SYBR Green I Cat.No.QP-01111/01112/01113/01114 Real Time PCR Easy TM -Taqman Cat.No.QP-01021/01022/01023/01024 For qpcr using purified DNA Store at -20 C Research use only Copyright
网址 : 电话 : 客服电话微信 : 邮箱 : 地址 : 烟台市开发区珠江路 32 号留创园 3 号楼 E 栋 247 室 Gel Free cl
Gel Free cloning TM 不跑胶载体构建试剂盒 Gel Free Cloning TM Kit Gel Free cloning 技术是一种简单 快速并且高效的载体构建技术, 可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点 该技术不受酶切位点限制, 也不需要线性化质粒, 只需要两步 PCR 即可将目的片段构建到载体的任意位点, 具有省时, 简便的特点 克隆阳性率可达 90% 以上 Gel Free
moibio
说明书 Moibio Blood DNA Mini kit 小量全血基因组 DNA 提取试剂盒 ( 磁性微粒法 ) 货号 : DM104 试剂盒内容 试剂盒组成 DM104-01 (50 次 ) DM104-02 (100 次 ) 细胞裂解液 CL 10ml 20ml 结合液 CC 20ml 40ml 清洗液 CWⅠ 20ml 40ml 清洗液 CWⅡ 50ml 100ml 洗脱液 CS 5ml 10ml
Protein Labeling and Detection
ECL plex Product Specialist 1/ Western Blot 2/ Western Blotting- PI 3/ Western Blotting 1. 2 1 2. 3. 4. Y 3 4 5. 4/ 1. SDS- (SDS-PAGE) SDS ( β- ) --SDS 5/ SDS-PAGE - - - (Tris-HCL ph 6.8) glycine/chloride
Phanta
Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase P505-d1/d2/d3 www.vazyme.com Vazyme biotech co., ltd. 使用说明书 Version 7.1 目录 Contents www.vazyme.com 01/ 产品概述... 02 02/ 产品组分... 02 03/ 保存条件... 02 04/ 单位定义... 02 05/
复旦大学于文强实验室 protocol DNA 甲基化处理及测定 前言实验材料一 实验材料二 主要设备仪器实验方法一 基因组 DNA 准备 ( 天根血液 / 细胞 / 组织基因组 DNA 提取试剂盒 ) 二 基因组 DNA bisulfite 处理 (zymo research,ez DNA Met
DNA 甲基化处理及测定 前言实验材料一 实验材料二 主要设备仪器实验方法一 基因组 DNA 准备 ( 天根血液 / 细胞 / 组织基因组 DNA 提取试剂盒 ) 二 基因组 DNA bisulfite 处理 (zymo research,ez DNA Methylation- Gold Kit) 三 PCR 扩增 (PCR amplification) 四 PCR 产物纯化 ( 天根, 普通 DNA
RC101 FastPure Cell Tissue Total RNA Isolation Kit PDF
FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit RC101 Vazyme Biotech Co., Ltd. Web: Tel: 400-600-9335 Sales: sales@vazyme.com Support: support@vazyme.com Service: service@vazyme.com Vazyme biotech co., ltd.
技术详情 使用配有 Agilent TapeStation 分析软件 (A 版 ) 的 Agilent 4200 TapeStation 系统 RNA ScreenTape( 部件号 67-76) 和试剂 ( 部件号 和 67-78), 以及安捷伦高灵敏度 RNA Scree
技术概述 采用 RNA ScreenTape 分析法进行 DV 200 评估 作者 Eva Graf 安捷伦科技有限公司 Waldbronn, Germany 摘要 RNA 测序文库制备工作流程的成功与否在很大程度上取决于 RNA 起始材料的质量 采用 Agilent RNA ScreenTape 分析法获得的 RNA 完整值当量 (RIN e ) 是一种评估标准 RNA 测序的样品完整性的可靠且可重现的指标
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组织样本 mirna 提取细胞样本 mirna 提取全血样本 mirna 提取 TaqMan mirna 反转录试剂盒 通过 HG TaqMan mirna 定量 PCR 试剂盒检测 microrna 1-4 2 3 4 5-6 7-8 7 8 9 B1802 mirna 25T/100T 500/1600 B1803 mirna 25T/100T 500/1600 D1802 HG TaqMan
丌彻底, 可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 丌纯 5. 加入 200μl Solution PB, 轻轻颠倒混匀样品, 室温放置 3min 简短离心以去除管盖内壁的液滴 6. 将上一步所得溶液都加到一个吸附柱中 ( 吸附柱放入收集管中 ),12,000 rpm (~13,400 g) 离
微量样品基因组 DNA 提取试剂盒 Micro Genomic Miniprep Kit MWG8925 Technical literature is available at:. E-mail MesGen Technical Services if you have questions on use of this system: tech@mesgenbio.com 产品简介本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,
SureSelect 1 文库制备试剂盒专门针对完整样品和 FFPE 样品进行了优化, 分析周期为 8 小时,DNA 起始量低 至 10 ng 分子条形码功能可准确灵敏地检测低频等位基因变 异 最近一项研究表明,SureSelect 工作流程能够实现高 灵敏度 ( 检测极限约为 0.1%) 和易定制
应用简报 六种不同文库制备试剂盒用于 FFPE 样品外显子序列捕获应用的比较 作者 Jesse D. Luce Prashant K. Singh Sean T. Glenn 罗斯威尔帕克癌症研究所肿瘤遗传学与基因组学系美国纽约州布法罗 Josh Zhiyong Wang Bahram Arezi Bilan Hsue 安捷伦科技公司美国加利福尼亚州圣克拉拉 摘要 外显子组测序和靶向基因组合测序是常用的新一代测序
< 1+1 <! " #$% &!"#$ %&' ( )( %&* ) + ), %&- )+. )../'0 ) 1 ) "' )!"#$%&' (1% ( )* " + + %,-.2(13/01 )' 扩增 &' 基因 煮沸获得铜绿假单胞菌 ) 基因组作为模板 ) )( 作为引物
213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
Microsoft Word - 终稿--Power qPCR PreMix.doc
Power qpcr PreMix(SYBR Green)User Manual 实时荧光定量试剂盒说明书 I. 试剂盒组成 产品组成 GK8020-200 20ul X 200 reactions GK8020-600 20ul X 600 reactions GK8020-1000 20ul X 1000 reactions 2 X Power qpcr PreMix (with SYBR Green
Microsoft Word - Human miRNA qPCR 引物验证报告.doc
All-in-One TM mirna qpcr Primer Manual and Validation Report For quantitative detection of mature mirna with All-in-One TM mirna qrt-pcr Detection Kit Catalog number: HmiRQP9001 GeneCopoeia, Inc.; 广州复能基因有限公司
第 期 等 乙腈 碳酸氢钠溶液混合物电嫁接叔丁氧羟基 乙二胺 7B7! " # $% # &'#! "% #!! #& (& )&# &#&# #*$% + %!, # $% "( ( # ( # "! #-.& #% & (& %" & %& & #& (& & )&# &#& # & "%&/
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目录 操作 试剂盒组成 运输和保存 产品介绍 重要说明 一般产品信息 简述 用法 使用步骤 订购信息 相关产品... -
* 仅用于实验室, 不用于诊断和治疗 请随时跟我们索取并使用最新版本的说明书 EpiMag 96 孔高通量磁力分离器 目录号 : A-Q10002-1(1pack) A-Q10002-2(2pack) 适用于核酸 蛋白质 免疫沉淀反应 ELISA 和细胞分选的提取和纯化和生物分子的 纯化 配套的磁力分离器适合于大多数 PCR 微孔板和单个 0.2ml PCR 管反应 操作手册请以配套的英文操作手册为准!
用 2 小时或更短的时间 此试剂盒适用于基因组 DNA 福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 样本 ChIP DNA 和低起始量的临床样本的建库 NEXTflex Rapid DNA-Seq Kit 样品的起始量范围非常灵活, 跨越了 3 个数量级, 从 1ng 至 1μg 这是一个基于磁珠纯化 无需
NEXTflex Rapid DNA-Seq Kit 使用 1ng-1μg 的 DNA 样本, 在 2 小时或更短的时间内完成 DNA 测序中的建库过程 产品特点 样品 DNA 起始量可以在 1ng-1μg 间灵活选择 2 小时或者更短时间完成整个实验流程, 减少人工操作时间较高的接头连接效率, 产出大量不同的测序片段减少建库偏差兼容多种自动化建库流程灵活的接头方案供选 匹配多达 96 种接头的试剂盒用于多重测序与
组分 标签名 KT (24 反应 ) KT (96 反应 ) 细胞裂解液 Cell Lysis Buffer 36 μl/ 管 1 管 144 μl/ 管 1 管 逆转录缓冲液 RT Buffer μl/ 管 1 管 μl/ 管 1 管
产品编号 KT110700724/KT110700796 MALBAC 白金微量 RNA 扩增试剂盒 产品名称 通用名 :MALBAC 白金微量 RNA 扩增试剂盒 英文名 :MALBAC Platinum Single Cell RNA Amplification Kit 包装规格 24 测试 / 盒,96 测试 / 盒 产品描述 MALBAC 白金微量 RNA 扩增试剂盒能在 5-6 小时内,
过, 同 样 加 快 了 扩 散 速 度 溶 剂 则 是 从 低 浓 度 溶 液 中 通 过 渗 透 膜 向 高 浓 度 溶 液 中 扩 散 溶 液 的 浓 度 越 高, 渗 透 压 就 愈 大 随 着 温 度 升 高, 渗 透 压 逐 渐 增 加, 导 致 蛋 黄 失 水 率 增 加 [4] 因
![过, 同 样 加 快 了 扩 散 速 度 溶 剂 则 是 从 低 浓 度 溶 液 中 通 过 渗 透 膜 向 高 浓 度 溶 液 中 扩 散 溶 液 的 浓 度 越 高, 渗 透 压 就 愈 大 随 着 温 度 升 高, 渗 透 压 逐 渐 增 加, 导 致 蛋 黄 失 水 率 增 加 [4] 因](/thumbs/42/22980499.jpg "过, 同 样 加 快 了 扩 散 速 度 溶 剂 则 是 从 低 浓 度 溶 液 中 通 过 渗 透 膜 向 高 浓 度 溶 液 中 扩 散 溶 液 的 浓 度 越 高, 渗 透 压 就 愈 大 随 着 温 度 升 高, 渗 透 压 逐 渐 增 加, 导 致 蛋 黄 失 水 率 增 加 [4] 因")
F * 迟 玉 杰, 胥 伟, 刘 振 宇 150030 摘 要 : 关 键 词 : 近 年 来, 世 界 蛋 品 开 发 和 蛋 制 品 加 工 有 了 长 足 的 发 展, 欧 美 发 达 国 家 投 入 大 量 的 资 金 和 科 技 力 量 进 行 研 究 和 开 发, 许 多 发 达 国 家 禽 蛋 制 品 深 加 工 比 重 已 达 其 禽 蛋 总 量 的 20-25%, 其 产 品 多
HB 上海翊圣生物科技有限公司客服热线 : Hieff Mut TM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit Cat No 产品说明书 本产品仅作科研用途! 上海翊圣生
HB181217 Hieff Mut TM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit Cat No. 11004 产品说明书 本产品仅作科研用途! 产品信息 产品名称 货号 规格 Hieff Mut TM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit 多点突变试剂盒 11004ES10 10 T 产品描述 Hieff Mut TM Multi
DP
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 : DP181214 RelaxGene Blood DNA System (0.1-20 ml) 血液基因组 DNA 提取系统 (0.1-20 ml) ( 非离心柱型 ) 目录号 :DP349 产品内容 产品组成
四折特惠区目录号 规格 批号 到期日 库存 2014 目录价 特惠价 ER1951 AjuI 100 units /3/ ER1951 AjuI 100 units /3/ ER0725 BclI 3
三折特惠区目录号 规格 批号 到期日 库存 2014 目录价 特惠价 K1631 RevertAid H Minus First Strand cdna Synthesis Kit 20 react 00139956 2015/2/28 1 795 238 K1632 RevertAid H Minus First Strand cdna Synthesis Kit 100 react 00141899
FOREGENE Serum(Plasma) Direct qpcr Kit-Taqman Instruction Manual Serum(Plasma) Direct qpcr Kit-Taqman Cat.No.DQT-0411T/04111/04112/04113 Serum(Plasma)
Serum(Plasma) Direct qpcr Kit-Taqman Cat.No.DQT-0411T/04111/04112/04113 Serum(Plasma) Direct qpcr Kit(UNG) -Taqman Cat.No.DQT-0412T/04121/04122/04123 For fast blood direct qpcr using serum, plasma For
HB 上海翊圣生物科技有限公司客服热线 : Hieff Mut TM Site-Directed Mutagenesis Kit Cat No 产品说明书 本产品仅作科研用途! 上海翊圣生物科技有限公
HB180819 Hieff Mut TM Site-Directed Mutagenesis Kit Cat No. 11003 产品说明书 本产品仅作科研用途! 产品信息 产品名称 货号 规格 储存 Hieff Mut TM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒 11003ES10 10 T -20 产品描述 Hieff Mut TM Site-Directed
<4D6963726F736F667420576F7264202D20BCD2D4B0A3A8B5DA3330C6DAA3A92E646F63>
第 30 期 中 远 集 运 工 会 编 2012 年 6 月 6 日 卷 首 语 5 月 31 日, 当 计 算 机 中 心 掘 金 行 动 的 第 一 铲 悄 然 落 下, 激 动 兴 奋 的 我 们 仿 佛 听 到 了 铿 锵 掷 地 的 金 石 之 响 之 际,6 月 4 日, 公 司 第 23 周 大 调 度 会 上 更 是 传 出 了 我 们 全 系 统 员 工 期 盼 已 久 的 喜
SDS 1.3
Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System (With RQ Study) SDS 1.3 I. ~ I. 1. : Dell GX280 2.8GHz with Dell 17 Flat monitor 256 MB RAM 40 GB hard drive DVD-RW drive Microsoft Windows XP Operating System
目录 产品介绍 产品特点 试剂盒应用 产品质量控制 试剂盒内容 试剂盒组分信息 储存条件 注意事项 操作
Animal Tissue Direct qpcr Kit-SYBR Green I Animal Tissue Direct qpcr Kit-SYBR Green I Animal Tissue Direct qpcr Kit(UNG)-SYBR Green I For performing qpcr directly from animal tissue without prior DNA purification
红通通的皮肤竟然可以看见血管
红 通 通 的 皮 肤 竟 然 可 以 看 见 血 管 生 男 孩 shengnanhaidekexuefangfa.ttyhome.com http://shengnanhaidekexuefangfa.ttyhome. 红 通 通 的 皮 肤 竟 然 可 以 看 见 血 管 官 方 散 布 过 这 样 一 个 传 说 : 凡 有 贤 人 出 世, 都 会 陪 同 着 独 特 的 征 象 可 我
未命名-1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ss a c y e vg 13 14 15 16 17 18 19 H 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 发现生命的螺旋 克里克在提出 中心法则 时曾指出 遗传信息是沿 Ｄ Ｎ Ａ - Ｒ Ｎ Ａ - 蛋白质的方向流动的 遗传信息不可能从 Ｒ Ｎ Ａ 回到 Ｄ Ｎ
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
目 录 产品介绍 产品特点 试剂盒应用 产品质量控制 试剂盒内容 运输及储存条件 试剂盒组分信息 Foregene Revers
RT-PCR Easy TM II(Two Step) Cat.No.RT-02021/02022 Two-step RT-PCR Master Mix For research use only Store at -20 Copyright Foregene 2014/02. All rights reserved. 1 / 14 目 录 产品介绍........ 3 产品特点...........
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创 业 板 风 险 提 示 本 次 股 票 发 行 后 拟 在 创 业 板 市 场 上 市, 该 市 场 具 有 较 高 的 投 资 风 险 创 业 板 公 司 具 有 业 绩 不 稳 定 经 营 风 险 高 退 市 风 险 大 等 特 点, 投 资 者 面 临 较 大 的 市 场 风 险 投 资 者 应 充 分 了 解 创 业 板 市 场 的 投 资 风 险 及 本 公 司 所 披 露 的 风 险
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Mouse Tail Direct PCR Kit Cat.No.TP-0133T/01331/01332/01333 Mouse Tail Direct PCR Kit -UNG Cat.No.TP-0134T/01341/01342/01343 For mouse direct PCR using mouse tissue (tail or ear) For performing PCR directly
运用测序法和luminex法对生殖道 HPV进行分型的比较
luminex HPV 2002 501 3 3 3 HPV 103 HPV 2004 12.90/10 2005 10.16/10 2006 HPV HPV HPV6 11 HPV16 18 CIN HPV 99.7% HPV6 11 40 42 43 44 54 61 70 72 81 cp6 108 12 HPV16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 68 73
第一章
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1500 1450 1400 1350 1300 1250 1200 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 INPUT2006 29 30 31 32 33 34 35 9000 8500 8000 7500 7000 6500 6000 5500 5000 4500 4000 3500
目录 产品描述...2 产品原理... 2 规格成分... 2 储存条件... 3 预期用途... 3 注意事项... 3 安全信息... 3 需要用户准备的材料... 4 产品特点... 4 适用领域... 5 样本要求... 5 实验准备... 6 操作流程概要... 7 详细操作流程... 8
版本号 170912.1 识别码 PMC048 KT110700110 KT110700150 (YK001A/B) 亿康基因 目录 产品描述...2 产品原理... 2 规格成分... 2 储存条件... 3 预期用途... 3 注意事项... 3 安全信息... 3 需要用户准备的材料... 4 产品特点... 4 适用领域... 5 样本要求... 5 实验准备... 6 操作流程概要...
Fasta快速定点突变试剂盒
FastaTm 快速定点突变试剂盒 Fast Mutagenesis Kit V2 北京赛百盛基因技术有限公司 全国统一热线 400 666 3029 地址 北京市海淀区上地四街一号院二号楼202室 邮编 00085 传真 00-82784290 Http:// 电话 00-62969345/46 Email:info@sbsbio.com 使用说明书 Version 4. 目 录 Catalog
目录 1. 产品描述 试剂盒特点 产品组分及储存条件 一般注意事项 操作步骤 ) RNA 样本处理 ) 逆转录反应 ) Real-Time PCR ) 终点法 RT-PCR
技术手册 上海普洛麦格生物产品有限公司 Eastep RT Master Mix Kit 产品目录号 : LS2050, LS2052, LS2054 1 目录 1. 产品描述... 3 2. 试剂盒特点... 3 3. 产品组分及储存条件... 4 4. 一般注意事项... 4 5. 操作步骤... 5 1) RNA 样本处理... 5 2) 逆转录反应... 6 3) Real-Time PCR...
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
（精校版）陕西省语文卷文档版（含答案）-2011年普通高等学校招生统一考试.doc
绝 密 启 封 前 2015 年 普 通 高 等 学 校 招 生 全 国 统 一 考 试 生 物 试 题 ( 江 苏 卷 ) 一 单 项 选 择 题 : 本 部 分 包 括 20 题, 每 题 2 分, 共 计 40 分 1. 下 列 关 于 淀 粉 脂 肪 蛋 白 质 和 核 酸 4 种 生 物 分 子 的 叙 述, 正 确 的 是 ( ) A. 都 能 被 相 应 的 酶 水 解 B. 都 是
乔永民 黄长江 于 年 月在汕头湾采集了 个表层沉积物样品 测定了它们的细粒级组分 总有机质 铝 铁 锰 铜 锌 铅 镉 铬 镍 钴的含量 对其分布特征及其彼此之间相关性进行了分析 并以南 海陆架区重金属含量为背景值计算了汕头湾表层沉积物重金属元素的富集系数 结果表明 铁 锰 铜 锌 铅 镉 铬 镍 钴的含量范围分别为 其分布由汕头湾上游的榕江口至湾口呈波浪状递减 锰除外 汕头湾表层沉积物中各重金属
學 習 目 標 1. 了 解 有 計 畫 的 運 動 之 前, 實 施 身 體 檢 查 的 重 要 性 2. 了 解 熱 身 與 緩 和 運 動 可 以 預 防 運 動 傷 害 3. 了 解 包 紮 護 具 裝 備 與 場 地 器 材 的 維 護, 可 以 避 免 傷 害 發 生 4. 了 解 食
Chapter 03 運動傷害的預防 第一節 第二節 第三節 第四節 第五節 體育概論 孫苑梅 編著 身體檢查 熱身與緩和運動 運動安全防護 場地器材環境和衛生安全管理 基礎肌力訓練 學 習 目 標 1. 了 解 有 計 畫 的 運 動 之 前, 實 施 身 體 檢 查 的 重 要 性 2. 了 解 熱 身 與 緩 和 運 動 可 以 預 防 運 動 傷 害 3. 了 解 包 紮 護 具 裝 備 與
Microsoft Word - sybr PCR 说明书200T doc
4ul 模板 --- 质粒 DNA(10-10 7 拷贝 ) 基因组 DNA(100pg-1ug) 或 cdna(1pg-100ng) 加入模板的体积可作适当调整, 但不应超过 10ul 4 将加好模板的 PCR 反应管进行短暂离心, 以确保所有试剂流到管子底部 5 PCR 反应 Real Time PCR 反应程序设置如下 : 三步法反应程序设置如下 : 94,2min; 94,10s, 60,15s,
实验一 氨基酸的分离鉴定—纸层析法
生 物 化 学 实 验 讲 义 内 蒙 古 科 技 大 学 生 物 与 化 学 工 程 学 院 基 础 生 物 教 学 部 2010 年 1 月 目 录 实 验 一 氨 基 酸 的 分 离 鉴 定 纸 层 析 法 2 实 验 二 琼 脂 糖 电 泳 法 分 离 DNA...3 实 验 三 乳 中 酪 蛋 白 的 分 离.5 实 验 四 3,5 二 硝 基 水 杨 酸 法 测 定 还 原 糖.6 实
文章
农 学 学 报 2014,4(11):80-84 Journal of Agriculture www.caaj.org 海 带 属 配 子 体 DNA 提 取 及 ISSR-PCR 体 系 优 化 李 言, 崔 翠 菊, 罗 世 菊, 李 晓 捷, 赵 聚 萍, 赛 珊, 钱 瑞, 武 瑞 娜 ( 山 东 东 方 海 洋 科 技 股 份 有 限 公 司 / 国 家 海 藻 工 程 技 术 研 究
2 作 者 保 证 报 告 所 采 用 的 数 据 均 来 自 合 规 渠 用 处 于 无 监 管 状 态,2014 年 以 来,CFDA 和 卫 计 委 联 合 发 布 了 多 项 道, 分 析 逻 辑 基 于 本 人 的 职 业 理 解, 通 过 合 临 床 试 点 名 单, 具 备 高 通 量
1 证 券 研 究 报 告 泡 沫 里 的 金 矿 精 准 医 疗 大 时 代 医 药 行 业 2015 年 11 月 25 日 评 级 : 推 荐 基 因 测 序 行 业 研 究 报 告 主 要 观 点 : 180.00% 160.00% 140.00% 120.00% 100.00% 80.00% 60.00% 40.00% 20.00% 0.00% -20.00% 18000.00 16000.00