研究论文 www 类产品中已检出退出市场的降糖药物盐酸丁二胍 该制假行为极具隐蔽性和欺骗性严重危及了群众 UPLC条件 色 谱 柱 W BEH m 柱 mm 健康安全 目前双胍类口服降糖药物主要为盐酸二 mm μm 流 动 相 甲 酸 甲 醇 溶 液 甲双胍 盐酸苯乙双胍因疗效确切价格低廉得到 流速

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1 年第 卷第 期 C P m V N 快速筛查检测中成药及保健 品 中 添 加 的 种 双 胍 类 化 学 降 糖 药物 欧贝丽 盛静 屠婕红 程爱平 薛磊冰 傅应华 嘉兴市食品药品检验所 浙江嘉兴 嘉兴 学院医学院 摘 要 目的 建立 HPLC DAD法快速筛查检测中成药及保健品中违法添加的盐酸二甲双胍 盐酸丁二胍和盐酸苯乙双胍等 种化学降糖药物 方法 采用高效液相色谱 二极管阵列检测器光谱法以 Z E C mm mm μm 为色 谱柱 甲醇 乙酸溶液 含 mm L 辛烷磺酸钠 为流动相通过保留时间 DAD紫外吸收光谱以及质谱的分 子离子峰和二级碎片信息对降糖类中成药及保健品中非法添加的 种双胍类降糖药物成分进行鉴定通过测定 m处紫 外吸收的峰面积代入线性方程准确计算出添加物的含量 结果 批降糖类样品中 批检出盐酸二甲双胍 批检出盐酸 丁二胍 批检出盐酸苯乙双胍 结论 本方法简单高效 灵敏度高 结果准确可靠可同时快速筛查检测中成药及保健品中 非法添加的 种双胍类化学降糖药物 关键词 高效液相色谱 二极管阵列检测器光谱法 双胍类化学降糖药物 中成药 保健品 快速筛查 中图分类号 R 文献标识码 A 文章编号 X R S D B A T C M H P HPLC DAD OB S J TJ C A X L FY J I F D C Z j J C M C J U ABSTRACT Oj T HPLC DADm m m m C m M T HPLC DADm m Z E C mm mm μm mw m mm L m m T m DAD mm m w m w T w m m m m q R M m m w m C m Am mm m w w m w w C T m m I m C m KEYWORDS HPLC DAD B T C m H R 目前糖尿病以化学药物治疗为主中成药治疗 了谋取暴利不法分子在中成药及保健品中随意添 为辅助需要终身服药 由于中药制剂作用缓慢为 加化学药物以达到夸大疗效的目的 在一些降糖 基金项目 浙江省科技厅公益性技术应用研究计划资助项目 编号 C 通讯作者 傅应华 T E m j m 櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊 I w HT YK S I CYPA S D M D 尹志华孙剑丁仲鹃等蜂胶中总黄酮和总多酚的最佳提取工 艺 昆明医学院学报 周梦遥徐瑞晗黄微等世界主要蜂胶的植物源及多酚类化合 物的研究进展 中国蜂业 HO R I K m YI m mp A C F C m T MYC J SE CYPA P LCL P m M m KDM B RFM EE M T A C m S I N I PXR M CYPAI D M D Q FZ RS J I m mp m m m m D M D 氧化酶的 欧阳冬生帅放文周宏灏药用辅料对细胞色素 P 作用研究进展 中国临床药理学与治疗学 收稿 修回

2 研究论文 www 类产品中已检出退出市场的降糖药物盐酸丁二胍 该制假行为极具隐蔽性和欺骗性严重危及了群众 UPLC条件 色 谱 柱 W BEH m 柱 mm 健康安全 目前双胍类口服降糖药物主要为盐酸二 mm μm 流 动 相 甲 酸 甲 醇 溶 液 甲双胍 盐酸苯乙双胍因疗效确切价格低廉得到 流速 m m 进样 甲酸溶液 广泛使用 对降糖类中药制剂及保健品中非法添加 量 μ 柱温 双胍类降糖药的研究主要采用液质联用仪检测盐酸 MS MS MS条件 二甲双胍和盐酸苯乙双胍 对盐酸丁二胍的检 离子化方式 电喷雾离子源 ES I 毛细管电 测方法未见有文献报道 液质联用方法虽专属 高 V 二级锥孔电压 E V 离子源温 压 效但基层药检部门受限于仪器设备而难于开展此 度 脱溶剂气温度 D T m 类添加物的检测工作 因此建立一个简单易控更 脱溶剂气流量 L 锥孔反吹气流量 L 常规 更易普及 应用范围更广的高效液相色谱法 采用全扫描一级质谱 质荷比范围 以 对于满足基层药监部门有效打击此类制假行为意义 及选择离子二级全扫描质谱检测方式 重大 本文建立的方法能快速准确地筛选降糖类中 溶液的制备 成药及保健品中非法添加的盐酸二甲双胍 盐酸丁 对照品溶液 二胍和盐酸苯乙双胍在日常检测工作中获得满意 丁二胍和盐酸苯乙双胍对照品各适量分别加甲醇 效果 的溶液作为对照 溶解并稀释至浓度为 m m 仪器与试药 品贮备液 精密量取上述对照品贮备液各适量用甲 A 高 效 液 相 色 谱 仪 配 DAD 检 测 精密称取盐酸二甲双胍盐酸 醇稀释至浓度均为 μ m 的混合溶液作为对 器 W A q 超高效液相色谱仪 配 Q 照品溶液 供液相色谱测定用 用甲醇 水 P m 串联四级杆质 谱 仪 S BP D电 稀释至浓度均为 μ m 的混合溶液作为对 子天平 照品溶液 供质谱测定用 盐酸二甲双胍对照品 m m 供试品溶液 取本品片剂或胶囊剂的内容 批号 购自中国食品药品检定 物研细精密称取适量 约相当于 次服用量 置 m 研究院 盐酸苯乙双胍对照品 m量瓶中加甲醇适量超声 m 放冷至室 PH批号 C 和盐酸丁二胍对照品 温用甲醇稀释至刻度滤过取续滤液作为供试品 批号 RLJ 均购 贮备液 精密量取上述贮备液 m 置 m量瓶 自加拿大 TRC公司 甲醇 德国 M 公司 甲酸 中 加甲醇稀释至刻度作为供试品溶液 供检 公司 和辛烷磺酸钠均为色谱纯冰乙 美国 T 测盐酸丁二胍和盐酸苯乙双胍用 再精密量取供 酸为分析纯水为超纯水 试品溶液 m 置 m量瓶中加甲醇稀释至 批 阳 光 一 佰 牌 山 芪 参 胶 囊批 号 刻度作为供试品溶液 供检测盐酸二甲双胍 试 用 装 用 另精密量取供试品贮备液用甲醇 水 杞黄降糖胶囊 无批号 郑科牌山药葛 逐级稀释至与对照品溶液 相同浓度的溶液作 根片 批 号 基 因 口 服 胰 岛 素 批 号 为供试品溶液 供质谱测定用 苗特 R葛灵胶囊 批号 金胰 对照品溶液的色谱 光谱及质谱行为 唐 批号 平糖受体胶囊 批号 取 项对照品溶液 按 项所述方 仁合胰宝胶囊 批号 由嘉兴 法分析获得三种对照品的液相色谱图 图 A 盐 市及各县市食品药品监督管理局市场抽样提供或于 酸二甲双胍 盐酸丁二胍和盐酸苯乙双胍保留时间 网上邮购样品 分别为 m m 和 m 三者分离 方法与结果 度均大于 以 m为参比波长在 HPLC条件 m范围进行波长扫描获得三者的紫外光谱图 图 色谱柱 A Z E C柱 mm A B C mm L 辛烷磺酸钠 检测波长 项对照品溶液 μ注入液质联 取 用仪按 和 项下条件进行分析 由一级 m参比波长 m波长扫描范围 m 质谱全扫描获得盐酸二甲双胍 盐酸丁二胍和盐酸 μm 流动相 甲醇 乙酸溶液 含 mm 流速 m m 进样量 μ 柱温 分 别 为 苯乙 双 胍 的 准 分 子 离 子 峰 m

3 年第 卷第 期 C P m V N 和 由二级质谱全扫描获得三种成分的 可疑峰 S S S 图 B C D 再对可疑峰在 碎片离子图 图 得主要碎片离子峰 m 盐酸 m进行波长扫描获得 DAD紫外光谱图 图 二甲双胍为 盐酸丁二胍为 D E F 结果批典型样品中检出的物质与对 盐 酸 苯 乙 双 胍 为 照品的色谱保留时间以及 DAD紫外光谱图均完全 一致 为了保证检测结果的准确无误采用 UPLC 供试品溶液的定性测定 MS方法进一步确认 取供试品溶液 μ注 取 供试品溶液 和 各 μ注入 项下条件分析获得 批典型 液相色谱仪按 入液质联用仪按 和 项条件进行一级 样品的液相色谱图 图 B C D 根据样品中检出 与对照品溶液完全一致的分子离子峰和碎片离子峰 峰的保留时间与对照品比较找出保留时间一致的 图 进一步确证了 DAD检测结果的准确可靠 A对照品 B金胰唐 C 二级质谱全扫描分析 结果显示供试品溶液产生 D郑科牌山药葛根片 PH S S S 均为可疑峰 图 对照品和典型样品的 HPLC色谱图 A B CPH D金胰唐 E F郑科牌山药葛根片 S S S 均为可疑峰 图 对照品及典型样品的 DAD紫外光谱图

4 研究论文 www A B CPH D金胰唐 E F郑科牌山药葛根片 图 对照品和典型样品的二级全扫描质谱图 标准曲线 回收率 检测限 精密度和稳定性试 m m m 用甲醇定容 分 验 别进样测定记录色谱图计算回收率得低 中 高 标准曲线 精密量取 对照品贮备 个 浓 度 的 加 样 回 收 率 分 别 为 液各 m 置 m量瓶中加甲醇至刻度再精密 RSD分别为 量取 m 置 m量瓶 检测限 中加甲醇至刻度分别进样测定 以峰面积 Y 为 品溶液适量按 项方法提取后按 项 纵座标对照品浓度 Xμ m 为横座标绘制 方法测定 结果盐酸二甲双胍 盐酸丁二胍和盐酸 标准曲线 得到盐酸二甲双胍 盐酸丁二胍和盐酸 苯乙双胍的最低检测限 S N 分别为 苯 乙 双 胍 的 标 准 曲 线 分 别 为 Y X μ m Y X Y X 精 密 度 试 验 均 按 项色谱条件连续重复进样 次得峰 回收率试验 面积的 RSD盐酸二甲双胍为 盐酸丁二胍为 精密称取阴性供试品 次服 取阴性样品 次服用量加入对照 取 项 对 照 品 溶 液 用量置 m量瓶中加甲醇溶解并定容滤过取 和盐酸苯乙双胍为 滤液作为空白贮备液 再分别精密量取空白贮备液 稳定性试验 m 共 份分别置于 m量瓶中分三组每 室温放置 精密量取 μ进样 组平行 份各精密加入混合对照品溶液 内含盐 测定计算盐酸二甲双胍 盐酸丁二胍 盐酸苯乙双 酸二甲双胍 盐酸丁二胍和盐酸苯乙双胍浓度均为 胍峰面积的 RSD分别为 和 取 项下对照品溶液

5 年第 卷第 期 C P m V N 表明溶液在 内稳定 和 和乙酸以乙酸为好分别对 供试品的定量检测 个不同浓度进行了比较表明浓度影响不明显故选 取 批样品按 项下方法制备供试品 择 μ注入液相色谱仪按 溶液 和 分别取 本方法检测的盐酸二甲双胍 盐酸丁二胍和盐 项方法测定将测得的峰面积代入 项 酸苯乙双胍同属于双胍类降糖药物其中盐酸二甲 各标准曲线中计算出各样品中添加药物的百分含 双胍和盐酸苯乙双胍价格便宜降糖效果好因而被 量结果见表 不法分子 广泛 添加 而盐酸丁二胍早已禁用于 表 样品检测结果 临床保健品及中药制剂中添加盐酸丁二胍后不易 被发现存在极大的危害性 样品名称 批号 检出成分 检出量 种双胍类化学降糖物质的盐酸盐在甲醇中 均有很好的溶解性故选择甲醇作溶剂超声处理 杞黄降糖胶囊 无批号 PH 的前提下采用较低的样品浓度进行检测 盐酸二 郑科牌山药葛根片 PH 甲双胍服用剂量较大添加量也较多故样品浓度 基因口服胰岛素 高则加大了稀释倍数其基质干扰也因此进一步消 由于保健食品及中药制剂的基质较复杂为了最大 程度消除基质干扰本文在保证检测有足够准确性 苗特 R葛灵胶囊 除 从 批样品的色谱图显示各样品的基质吸收 金胰唐 峰均较小且保留时间较短不影响定性和定量检 平糖受体胶囊 测 仁合胰宝胶囊 参 讨论 盐酸二甲双胍 盐酸丁二胍和盐酸苯乙双胍分 子结构相近化学性质相似均具有较强的极性若 使用常规流动相冲洗在反相 C柱上几乎不保留 无法获得 者的基线分离 此外者均为含氮化 合物在色谱柱上易产生二次保留从而发生色谱峰 的拖尾现象 为了解决这些问题本方法在流动相 中添加了离子对试剂并对离子对试剂的种类和浓 度流动相的 H等均进行了考察 比较了不同碳 链长度的辛烷磺酸钠和癸烷磺酸钠结果表明癸烷 磺酸钠虽对延长盐酸丁二胍和盐酸苯乙双胍保留时 考 文 献 杨钊陈安珍吴爱英等UPLC MS测定降糖类中药制剂及 保健品中 种化学药的研究 中国药学杂志 张建丽王占良张亦农LC MS法定性检测保健品中非法 添加的降糖药 质谱学报 MS法快速测定中成药与保健 孙夏荣李丹文红梅等LC 种化学 成 分 研究 中 国 药师 食品中非法添加 张翠英徐金玲李振国等超高效液相色谱 串联质谱法检测中 成药中添加格列 本 脲 格列 吡 嗪 药 物分 析 杂志 张翠英李振国徐金玲中药制剂及保健品中违禁添加 种降 间的作用更明显但会造成盐酸丁二胍色谱峰的严 糖药物 的 LC MS定 性 检 测 中 国 药 学 杂 志 重拖尾故选用辛烷磺酸钠作为离子对试剂浓度以 檵檵檵殝 mm L 最佳 比较了调节流动相 H的磷酸 收稿 修回 檵檵檵殝 檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵殝 欢 迎 订 阅 药 物 流 行 病 学 杂 志 檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵殝

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