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1 第七章 基因工程和基因组学 第一节 基因工程原理 转基因烟草来自荧火虫的荧光素酶 果蝇转基因 β 半乳糖苷酶 浙江大学第七章基因工程和基因组学 1 浙江大学第七章基因工程和基因组学 2 一 基因工程概述 1. 概念 基因工程 : 在分子水平上, 采取工程建设方式 按照 预先设计的蓝图 借助于实验室技术将某种生物的基因或 基因组转移到另一生物中去 使后者定向获得新遗传性状 的一门技术 基因工程技术 ( 重组 DNA 技术 ) 的建立, 使实验生物学领 域产生巨大变革 浙江大学第七章基因工程和基因组学 3 2. 发展 1971 年史密斯 (Smith H. O.) 等人从细菌中分离出的一种限制性酶 酶切病毒 DNA 分子, 标志着 DNA 重组时代的开始 1972 年伯格 (Berg P.) 等用限制性酶分别酶切猿猴病毒和 λ 噬菌体 DNA, 将两种 DNA 分子用连接酶连接起来 得到新的 DNA 分子 1973 年科恩 (Cohen S.) 等进一步将酶切 DNA 分子与质粒 DNA 连接起来, 并将重组质粒转入 E. cloi 细胞中 浙江大学第七章基因工程和基因组学 年, 美国食品卫生和医药管理局批准, 用基因工程在细菌中生产人的胰岛素投放市场 1985 年, 转基因植物获得成功 1986 年,Mullis 发明了 PCR 技术, 专利转让达 3 亿美元 1994 年, 延熟保鲜的转基因番茄商品生产 1997 年,Wilmut 研究小组报道用胎儿细胞为核供体, 获得了表达治疗人血友病的凝血因子 IX 转基因克隆羊 波莉 3. 基因工程主要步骤 1. 分离和鉴定目的基因 ; 2. 构建的重组 DNA 分子 基因的体外重构 ; 3. 转基因技术 把重组 DNA 分子引入宿主受体细胞 ; 4. 筛选重组子 具有重组 DNA 的无性繁殖系或个体 ; 5. 外源基因在受体细胞中正常表达, 翻译成蛋白质等基 因产物 回收 ; 或筛选出获得定向性状变异的个体 浙江大学第七章基因工程和基因组学 6
2 二 基因的分离与鉴定一般而言, 一个基因 是编码一条多肽链的一个 DNA 片段, 包括启动子 终止子及内含子等 分离基因的方法和策略有很多 : 主要有从基因文库中分离 PCR 同源扩增等方法 浙江大学第七章基因工程和基因组学 7 1. 从基因库中分离基因 (1). 基因库 (library) 是一组 DNA 和 cdna 序列克隆的集合体 从基因库中分离基因, 首先要构建基因库 根据克隆核酸序列 来源, 基因库可分为 : 核基因库 染色体库 cdna 库 线粒体库等 散弹枪法构建基因文库 浙江大学第七章基因工程和基因组学 8 (2). 筛选基因库根据待选基因相关信息 确定筛选方法和条件 从基因库中筛选 分离基因 筛库过程 : 利用一段核苷酸序列 (DNA cdna 或寡聚核苷酸 ) 或抗体作探针 (Probe) 用放射性同位素 ( 或非放射性荧光素 ) 标记探针 探针与印影在硝酸纤维膜上噬菌体 DNA 变性进行杂交 放射性自显影 ( 荧光显色 ) 杂交信号 ( 黑点 ) 对应的噬菌斑即为阳 探针 DNA 片断从何而来? 方法较多 : 如果已分离出蛋白质, 则根据目的蛋白的氨基酸序列, 只要其中 N- 端 个氨基酸序列, 按三联密码转为 核苷酸序列, 人工合成, 即为探针 DNA 片断 如果有紧密连锁的分子标记, 则可用分子标记的部分序列用作探针 性克隆 浙江大学第七章基因工程和基因组学 10 (3). 阳性克隆的分析与鉴定从基因库中筛选出阳性克隆 分析 鉴定 测序 确定目的基因 ⑴. 限制性酶图谱构建阳性克隆的限制性酶图谱 根据同源性分析, 了解阳性克隆片段的酶切位点及相对位置 用于进一步亚克隆或同已知的其它序列比较 图 : 一个 15kb DNA 片段的限制性酶图谱构建方法 不同 DNA 用限制性酶酶切, 根据其产生的多型性, 即限制性酶片段长度的多型性 来分析 DNA 水平的变异程度, 以 RFLP 作为分子标记进行基因组图谱分析 CK Not I Sal I Not I + Sal I 浙江大学第七章基因工程和基因组学 11 浙江大学第七章基因工程和基因组学 12
3 ⑵. 核酸分子杂交 Southern 杂交分析 : 由英国 Southern (1975) 发明, 将琼脂糖中的 DNA 转移到尼龙膜 进行 ⑶. 核酸序列测定测定克隆后的 DNA 片段核酸序列 一般采用桑格 ( Sanger F. ) 于 1977 年发明的双脱氧核糖核酸终止法测定核酸序列 因其开创的测序研究工作, 于 1980 年, 获诺贝尔化学奖 DNA 分子杂交分析的方法 筛选基因库得到阳性克隆 将限制性酶酶切与 Southern 杂交结合 绘制限制性酶图谱 浙江大学第七章基因工程和基因组学 13 浙江大学第七章基因工程和基因组学 PCR 扩增基因聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction,pcr) 可以体外快速扩增 DNA 该技术由美国穆利斯 (Mullis K.,1986) 发明, 对分子遗传学研究产生重大影响, 是现代生物学发展史上的里程碑 1985 年 12 月 20 日, 科学 上发表第一篇有关 PCR 论文 ; 1987 年 6 月, 批准了 PCR 的专利, 西特斯公司专利转让获利 3 亿美元 ; 1988 年,Taq 酶试剂和自动 PCR 仪上市 ; 1993 年, 穆利斯因发明 PCR 技术而获诺贝尔化学奖 但是他的许多同事, 在 PCR 的理论至实践过程中起到关键作用 浙江大学第七章基因工程和基因组学 15 PCR 反应原理 ( 一个循环 ): 1. 变性 :94~95 使模板 DNA 双链变成单链 ; 2. 复性 :50~70 下, 引物分别与互补 DNA 单链互补配对 ; 3. 延伸 : 在引物的引导和 Taq 酶作用下,72 下合成模板 DNA 的互补链 PCR 的三个步骤为一次循环, 约需 5~10 分钟 每经一次循环, 目的基因扩充一倍 经过 20 次循环, 即可扩增 10 6 倍, 只需几个小时 浙江大学第七章基因工程和基因组学 16 如何用 PCR 技术准确的克隆目的基因? 关键是如何设计目的基因两端的引物 : 同源克隆 : 根据在其他相近物种中已克隆的基因序列 (gene bank), 设计基因两端的引物来扩增基因 ; 如 : 根据水稻中的基因 玉米中相关的基因 反向遗传学 : 由蛋白质序列根据遗传密码来推测基因的 DNA 序列, 设计简并引物扩增生物体中的目的基因序列 PCR 仪 三 DNA 分子体外重组 体外通过限制性内切酶进行 DNA 修剪 ; 目标 DNA 分子 + 载体 DNA, 用连接酶进行共价连接 ; 获得重组 DNA 分子 ; 转化细菌 繁殖重组 DNA 分子 进一步构建基因 浙江大学第七章基因工程和基因组学 17 浙江大学第七章基因工程和基因组学 18
4 1. 限制性内切酶 (restriction enzyme) 一种水解 DNA 的磷酸二脂酶, 遗传工程中重要工具 限制性内切酶的类别 : 第 Ⅰ 类酶 ( 切割部位无特异性 ): 基因工程中很少应用如 EcoB( 大肠杆菌 B 株 ) EcoK( 大肠杆菌 K 株 ) 等 第 Ⅱ 类酶 ( 切割部位有特异性 ): 重要工具 识别特定碱基顺序, 为回文对称序列 (palindrome, 又称反向重复序列, 从两个方向阅读其序列相同的序列 ) 第 Ⅱ 类酶切割有两种方式 : 以直线方式切割产生平齐末端 (blunt ends), 如 Sma I: 以交错方式切断产生粘性末端 (sticky ends), 如 BamH I: 浙江大学第七章基因工程和基因组学 19 浙江大学第七章基因工程和基因组学 载体 (vector) 运载工具 : 将 目的 基因导入受体细胞的运载工具 DNA 片段 适合的载体 DNA 重组 DNA 在载体 DNA 的运载下, 高效率地进入宿主细胞, 并在其中进行复制 进一步的操作 载体有多种, 常用的有 : 质粒 DNA: 环状双链小分子 DNA, 适于做小片断基因的载体 噬菌体 DNA: 线状双链 DNA, 适于做大片断基因的载体 细菌质粒 : 质粒是细菌细胞内独立于细菌染色体而自然存在的 能自我复制 易分离和导入的环状双链 DNA 分子 可用质粒构建重组 DNA 分子 转化细菌 繁殖重组 DNA 浙江大学第七章基因工程和基因组学 21 浙江大学第七章基因工程和基因组学 22 λ 噬菌体 ( 温和型 ): 基因组全长为 49kb 噬菌体 DNA 中间约 2/3 的序列为中间基因簇, 两端为 DNA 左 右臂 中间基因簇可被外源 DNA 替代而不影响侵染细菌能力 能接受 15kb 外源 DNA 片段 作为 cdna 或核 DNA 克隆载体 优点 : 不易引起生物危害, 有助于 目的 基因进入细胞并增殖 ; 携带大片段外源 DNA 分子, 占总量 25% 时仍不失活 四 转基因的方法和技术四 转基因的方法和技术 ㈠ 基因转化的方法 浙江大学第七章基因工程和基因组学 24
5 1. 根癌农杆菌转化技术 根癌农杆菌介导的植物转化技术应用最早 ( 双子叶植物 单子叶植物 ) 农杆菌转化过程 : 过程 : 将目的基因与启动子 ( 花椰菜病毒 35S) 及终止子组成嵌合 DNA 分子 插入到 Ti 衍生质粒 RB 与 LB 内构成重组质粒 转化农杆菌细胞 利用重组农杆菌去感染植物细胞 使质粒部分 DNA 包括目的基因, 整合到植物染色体, 实现 遗传转化 利用抗草甘磷 (glyphosate) E. coli 中分离克隆的 EPSP 合成酶基因, 已培育出高抗除草剂转基因植物 浙江大学第七章基因工程和基因组学 基因枪转化技术以高压气体为动力, 高速发射包裹有重组 DNA 的金属颗粒 将目的基因直接导入植物细胞 整合到染色体上 转化的载体多以 puc 系列质粒为基础构建 通常具有 不同基因枪类型的共同特点 : 是用一种动力系统将金属微粒和包被 DNA 导入受体细胞或组织进行转化 1. 位于高压气体桶底部的爆破片 ; 2. 载有重组 DNA 和金属 细菌复制原点及抗性选择标记 可在植物中表达的启动子终止子及调控序列 植物抗性选择标记 ( 如除草剂 潮霉素等抗性 ) 浙江大学第七章基因工程和基因组学 27 抽真空 微粒的大载体 ; 3. 阻挡板 ; 4. 包裹有重组 DNA 的金属微粒 ; 5. 被轰击样品 3. 受精卵细胞注射法用于动物转基因 : 目的基因 载体 重组 DNA 微量注射法将重组 DNA 导入受体合子细胞核 遗传转化 ㈡ 转化子的筛选 转化子 : 整合有外源基因的细胞 组织或个体 筛选原理 : 在构建转化质粒时, 一般将外源基因与选择标记基因串连在一起 两者一同进入宿主细胞 根据标记基因在培养基中施加选择压 ( 加相应的化学物质 ) 未携带标记基因的细胞死亡 携带有标记基因 ( 同时也串连有目的基因 ) 的细胞存活 转化子 水稻基因转化中, 经潮霉素选择后的愈伤组织状态, 箭头所示的为转化子愈伤组织
6 ㈢ 转基因个体再生和外源基因表达 转基因个体的产生 : 来自荧火虫的荧光素酶基因的烟草 植物 : 愈伤组织诱导, 分化成苗 动物 : 胚胎移植, 发育成个体 转基因鼠胚胎, 牛乳糖酶基因特异表达 外源基因表达 : 重组 DNA 分子进入寄主细胞后, 目的基因能否表达, 表达效率高低, 还有很大差别 表达通常是指目的基因编码的蛋白质合成 生物反应器中基因工程的最后一个步骤, 是把所获得的蛋白质分离纯化, 得到蛋白质产品 生产基因工程产品的生物反应器 浙江大学第七章基因工程和基因组学 31 浙江大学第七章基因工程和基因组学 32 金稻的产生 :Ye, et al., 2000, SCIENCE,287: 应用转基因技术把番茄红素合成酶 去饱和酶和环化酶基因同时导入水稻, 将 β- 胡萝卜素 ( 维生素 A 前体 ) 的合成途径引入水稻的胚乳中 对照三个基因仅前二个基因 第二节基因工程的应用 目前, 基因工程研究发展迅速, 已取得一系列重大突破 基因工程技术已广泛用于工业 农业 畜牧业 医学 法学等领域, 为人类创造了巨大的财富 具有生长激素的转基因鼠 浙江大学第七章基因工程和基因组学 33 浙江大学第七章基因工程和基因组学 34 一 基因工程工业最早应用基因工程生产人的蛋白质的方法是在细菌中表达人的胰岛素 (1982) 基因工程生产人的胰岛素的方法如图所示 现已在细菌中生产 10 多种 药品, 例如表皮生长因子 人生长激素因子 干扰素 乙型肝炎工程疫苗等 目前, 酵母菌 植物悬浮细胞 植株和动物培养细胞均成功地应用于表达外源蛋白 基因工程应用大肠杆菌生产人类生长激素 浙江大学第七章基因工程和基因组学 36
7 基因工程创造的财富 : 胰岛素 1000 磅牛胰 10 克胰岛素 ; 200 升发酵液 10 克胰岛素 ; 干扰素 1200 升人血 2-3 万美元 / 病人 ; 1 升发酵液 美元 / 病人 ; 二 植物基因工程植物基因转化是指将外源基因转移到植物细胞内 并整合到植物基因组中稳定遗传和表达的过程 农杆菌转化法和基因枪转化法应用最多 利用抗草甘磷 (glyphosate) E. coli 中分离克隆的 EPSP 合成酶基因, 已培育出高抗除草剂转基因植物 抗除草剂转基因水稻 浙江大学第七章基因工程和基因组学 37 对照 抗虫稻 转基因作物已开始广泛种植 : 面积 ( 万公顷 ) 年份 1996 年全世界转基因植物种植面积为 170 万公顷,1997 年为 1100 万公顷,1998 年 2780 万公顷,1999 年 3990 万公顷,2000 年 4420 万公顷,2001 年 5260 万公顷,2002 年 5000 万公顷 2001 年种植面积 >100 万公顷的转基因作物 : 大豆 (3330 万 hm 2, 占全世界转基因作物的 63%, 均为抗除草剂大豆 ) 玉米(980 万 hm 2, 占 19% ) 棉花(680 万 hm 2, 占 13% ) 油菜(270 万 hm 2, 占 5% ); 其它还有水稻 小麦 花生 向日葵 亚麻 甘蓝 马铃薯等, 番茄 烟草 南瓜和木瓜等 50 多种转基因作物已培育成功 主要分布在美国 (3570 万 hm 2 ) 阿根廷(1180 万 hm 2 ) 加拿大 (320 万 hm 2 ) 和中国 (150 万 hm 2 ) 等国 浙江大学第七章基因工程和基因组学 年我国的转基因农作物和林木已达 22 种, 其中 面积 ( 万公顷 ) 转基因棉花 大豆 马铃薯 烟草 玉米 花生 菠菜 甜椒 小麦等进行了田间试验, 转基因棉花已经大规模 商品化生产 对照 转基因抗棉铃虫品种 总大豆棉花油菜玉米 总面积转基因 2001 年全世界转基因作物占相应作物种植总面积的比较 浙江大学第七章基因工程和基因组学 41 浙江大学第七章基因工程和基因组学 42
8 三 转基因动物转基因动物首先在小鼠获得成功 现在转基因动物技术已用于牛 羊, 使得从牛 / 羊奶中可以生产蛋白质药物, 称为 乳腺反应器 工程 这是生物制药全新的生产模式, 国际上已经成为生物技术领域发展的重要方向 美国开发了可生产人凝血酶原 III 的转基因羊 ; 英国 PPL 制药公司也培育出可制造人抗胰蛋白酶和人类生长因子 Ⅸ 的转基因羊 ; 荷兰制药公司制备了可大量生产人乳铁蛋白和促红细胞生成素 (EPO) 的转基因牛 生物高科技技术所带来的直接经济效益相当可观, 并且每年大幅度快速增长 根据预测 : 2005 年, 仅是美国的乳腺生物反应器生产的药物年销售额就将达到近 400 亿美元 ; 2010 年, 所有基因工程药物中利用生物反应器生产的份额将达到所有生物制药总量的 95%, 超过 1000 亿美元 分泌人类生长因子 Ⅸ 的转基因羊 Polly (Wilmut 等, Nature 385, 1997) 浙江大学第七章基因工程和基因组学 43 转移有人类生长激素转基因鼠 四 工程菌 在环境工程中应用 : 美国 GE 公司构造成功具有巨大烃类分解能力的工程菌, 并获专利, 用于清除石油污染 人类生长激素转基因猪 同胞鼠对照 喷洒工程菌清除石油污染 浙江大学第七章基因工程和基因组学 45 浙江大学第七章基因工程和基因组学 46 无冰晶细菌帮助草莓抗霜冻 第三节 基因组学 浙江大学第七章基因工程和基因组学 47 浙江大学第七章基因工程和基因组学 48
9 一 基因组学 (genomics) 遗传学研究进入分子水平后发展起来的一个分支, 主要研究生物体内基因组的分子特征 研究对象 : 以整个基因组为研究单位, 而不以单个基因为单位作为研究对象 研究目标 : 认识基因组的结构 功能和进化 ; 阐明整个基因组所包含的遗传信息和相互关系 ; 充分利用有效资源, 预防和治疗人类疾病 二 生物体基因组特征㈠ 细菌和病毒基因组 1. 基因组小, 测序容易如, 大肠杆菌含有 4000 个基因, 基因组 只有人类的千分之一 ; 2.DNA 绝大部分编码成蛋白质, 重复序列少 3. 基因中一般没有内含子, 结构比较简单 DNA bp, 浙江大学第七章基因工程和基因组学 49 浙江大学第七章基因工程和基因组学 功能相关的几个基因排列在一起形成操纵子如, 乳糖操纵子结构 ㈡ 真核生物基因组 1. 存在 C 值矛盾 C 值 : 一个物种单倍体基因组的 DNA 含量 5. 存在重叠基因如,ΦΧ174 基因组为 5386bp, 只有 11 个基因, 其中有 6 个基因相互重叠 Sanger 因完成该生物体的测序工作, 第二次获诺贝尔奖 C 值矛盾 : 庞大的基因组与现有已知的功能无法解释的矛盾 如, 人类的 C 值为 bp, 而最大的两栖动物 C 值达 bp 难道两栖动物的结构和功能会比哺乳动物更为复杂? 2. DNA 编码部分只占基因组的少部分大多真核生物基因组内编码部分只占基因组的 1%-10%, 非编码的 DNA 中存在着大量的重复序列 (repeat sequence) 浙江大学第七章基因工程和基因组学 基因内存在内含子 (intron) 和外显子 (exon) 三 基因组计划 (genome project) ㈠ 基因组学的重要组成部分 ⒈ 构建基因组的遗传图谱 ; 4. 基因家族 (gene families) 许多结构相似 功能相关的基因的总称 组成同一基因家族的基因可紧密排列在一起成为一个基因簇 (gene cluster), 也有分散排列 ⒉ 构建基因组的物理图谱 ; ⒊ 测定基因组 DNA 的全部序列 ; ⒋ 绘制基因组的转录本图谱 ; ⒌ 分析基因组的功能 浙江大学第七章基因工程和基因组学 53 浙江大学第七章基因工程和基因组学 54
10 ㈡ 人类基因组计划 1990 年 10 月, 美国启动被誉为 人体阿波罗计划 的 人类基因组计划, 投资 30 亿美元, 计划历时 15 年 测定人类基因组的 30 亿个核苷酸对的排列次序 构建高分辨率的人类基因组遗传图谱和物理图谱 发展生物信息学 解开生命的奥秘, 疾病的预防和治疗, 提高健康水平 2003 年 4 月 14 日, 全部实现 HGP 的所有目标 1986 年, 美国杜伯克在 科学 上撰文, 号召大家联合起来, 从整体上把人类的基因组搞清 1990 年 10 月, 经 5 年的辩论以后, 美国国会终于批准被誉为生命科学 阿波罗登月计划 的国际人类基因组计划 1999 年 12 月 1 日, 国际人类基因组计划联合研究小组宣布, 完整破译出人体第 22 对染色体的遗传密码 2000 年 5 月 8 日, 由德国和日本等国际科研小组宣布, 基本完成了人体第 21 对染色体的测序工作 2000 年 6 月 26 日, 中 美 日 德 法 英等 6 国科学家公布人类基因组工作草图, 标志着人类在解读自身 生命之书 的路上迈出了重要一步 2001 年 2 月 12 日,6 国科学家和美国塞莱拉公司联合公布人类基因组图谱及初步分析结果 2003 年 4 月 14 日,6 国科学家宣布人类基因组序列图绘制成功,HGP 的所有目标全部实现 覆盖人类基因组所含基因区域的 99%, 精确率达到 99.99%, 比原计划提前两年多, 耗资 27 亿美元 中国参与人类基因组计划的历程 : 1995 年, 杨焕明等人呼吁参与国际人类基因组计划 1998 年 6 月, 遗传所人类基因组中心挂牌成立, 由 4 位美国科学院院士及一位诺贝尔奖得主组成国际顾问组 1999 年 4 月, 开始进行人类和开始嗜热菌基因组测序, 大规模基因组测序的技术平台建设 1999 年 9 月 1 日, 杨焕明在第五次伦敦国际人类基因组战略讨论会上介绍情况 会议正式接受中国加入国际合作, 正式承担 1% 的测序任务 1999 年 11 月 12 日, 科技部通过这 1% 的项目成为国家支持的重点项目 2000 年 6 月 26 日, 包括中国在内的六国科学家共同宣布,HGP 工作框架图 绘制完成, 这是人类历史上值得 载入史册的一天 2000 年 6 月 28 日, 江泽民就 HGP 工作框架图 完成发表重要讲话 2001 年 4 月 1 日, 运算速度超千亿次的曙光 3000 超级计算机落户杭州华大基因研究中心, 华大基因 的测序能力名列世界第六 2001 年 8 月 26 日, 人类基因组计划中国部分测序项目汇报及联合验收会在京召开, 标志人类基因组 中国卷 通过国家验收 浙江大学第七章基因工程和基因组学 57 HGP 的科学竞赛 : 1991 年, 文特尔掌握了一种分隔 DNA 片段非常强大的技术, 称作 表达序列标签, 英文缩写 EST, 这一技术是确定数百个基因的一条捷径, 因为它不需要把整个基因组解码 1998 年, 他向美国国会提交了一份报告, 声称 在他的联邦实验室, 已经开发出一种确认基因的全新战略, 基因排序的速度快, 费用低 然而, 文特尔并没有向国会议员们讲明, 这项技术实际上参考了早在 1983 年就由 3 位科学家发表在 自然 上的那篇论文 同年 5 月, 文特尔宣布成立塞莱拉基因组公司, 并亲任公司总裁和首席科技官 与 PE 公司合作, 准备投入 3 亿美元, 用 3 年的时间完成人类基因组测序计划 向国际人类基因组计划挑战 浙江大学第七章基因工程和基因组学 58 人们担心塞莱拉公司可能会抢先完成人类基因组测序工作, 并取得人类基因的专利权 国际 HGP 的协作组速度作出反应, 重新制定计划以便与塞莱拉的计划竞争 同年 10 月 23 日, 美国国家人类基因组研究所在 科学 上发表声明说,HGP 的全部测序工作将比原计划提前两年, 即在 2003 年完成 1999 年 3 月 15 日, 英国韦尔科姆基金会宣布, 由于协作组加快工作步伐, 人类基因组工作草图将提前至 2000 年完成 2000 年 3 月 14 日, 针对一些私营公司试图将自己的研究成果申请专利, 克林顿和布莱尔发表联合声明, 将人类基因组研究成果公开 塞莱拉公司的股票从 189 美元下降到 149 美元 2001 年 2 月 12 日中 美 日 德 法 英等 6 国科学家和美国塞莱拉公司联合公布人类基因组图谱及初步分析结果 2003 年 4 月 14 日,6 国科学家宣布人类基因组序列图率先绘制成功, 全部实现 HGP 的所有目标, 并公开研究数据和结果, 赢得了这场竞赛 但国际 HGP 的协作组与私人公司的竞争仍没有停止过, 目前在许多领域研究仍进行竞争, 如在单个基因型的 SNP 图谱研究方面 同年 4 月 6 日, 塞莱拉公司宣布已破译出一名实验者的完整遗传密码, 未公布数据, 但遭到不少科学家的质疑 同年 6 月 26 日, 六国科学家共同宣布,HGP 工作框架图 绘制完成 浙江大学第七章基因工程和基因组学 59 浙江大学第七章基因工程和基因组学 60
11 模式生物基因组研究 : 在国际 HGP 中, 为人类的基因组研究提供重要的依据 1996 年, 完成酵母菌基因组测序 1998 年 12 月, 宣告完成线虫完整基因组序列的测定工作, 这是第一次绘出多细胞动物的基因组图谱 2000 年 3 月, 已完成了果蝇的基因组测序 2001 年 12 月 14 日, 美 英等国科学家宣布绘制出拟南芥基因组的完整图谱 中国人类基因组计划我国的 HGP 计划于 1994 年启动, 由国家自然科学基金委 国家高技术计划 (863) 和国家重点基础研究计划 (973) 所共同资助的 基因组多样性方面 : 如中国人群进化关系 ( 走出非洲 ) 疾病基因的研究 : 克隆了遗传性高频耳聋的致病基因, 定位了若干单基因疾病的染色体位点 功能基因研究 : 已获得 EST 十多万条, 克隆了 1000 条以上新基因的全长 cdna 在白血病和某些实体肿瘤相关基因的结构 功能研究方面, 取得了一批具有国际影响的成果 浙江大学第七章基因工程和基因组学 年 4 月 5 日 Science 以 14 页的篇幅刊登和 ㈢ 水稻基因组计划水稻的两个亚种 : 籼稻和粳稻 1. 我国超级杂交稻 ( 籼稻 ) 基因组计划 2001 年 7 月启动 浙江大学第七章基因工程和基因组学 63 宣布中国科学家独立绘制完成水稻基因组草图序列 ( 总数 :4.6 亿 ), 是继人类基因组工作草图之后完成测定的最大基因组 材料 : 籼稻 9311 完成单位 : 华大基因研究中心 中科院遗传与发育生物学研究所等 12 个单位 水平 : 水稻基因组的总基因数约为 46022~55615 个 ( 接近人类基因数的两倍 ), 工作框架图序列已覆盖水稻整个基因组 92% 以上的基因 方法 : 鸟枪射击法, 利用国产曙光 2000 曙光 3000 超级计算机 (1000 亿次 / 秒 ) 对随机 DNA 碎片进行排序和组装, 确定其在基因组的正确位置 计划 : 功能基因分析和蛋白质研究 工作草稿 ( 框架图 ) 与完成图 2. 国际水稻基因组测序计划 染色体 Chromosome 国际水稻 ( 粳稻 ) 基因组计划始于 1998 年, 日本 美国 中国 法国等国家和地区参加 工作草图 Working Draft (90%) Gap1 Gap2 中国负责第 4 号染色体 :36 Mb ( 占 9~10%) 完成图 Finished Genome (99.99%) 浙江大学第七章基因工程和基因组学 65 浙江大学第七章基因工程和基因组学 66
12 2002 年 12 月 21 日 Nature 宣布中国独立绘制完成粳稻基因组第四号染色体精确测序图, 我国对国际水稻基因组测序计划贡献率为 10% 材料 : 粳稻 日本晴 完成单位 : 中科院国家基因研究中心等 4 家单位 水平 : 第四号染色体中的总碱基数目为 0.35 亿碱基对, 覆盖了该染色体全长序列 98% 的区域, 只剩下 7 个小空洞, 碱基序列的精确度达到 99.99% 完整测定的着丝粒序列在高等生物中属于首次 计划 : 对预测鉴定的 4658 个基因作进一步分析, 并对着丝粒功能等作研究 浙江大学第七章基因工程和基因组学 67 ㈣ 基因组的测序策略 1. 小基因组物种的测序 Sanger 双脱氧 DNA 测序方法 800 个核苷酸对 (bp) 的序列 基因组打散 大量的片段测序 组装成连续的 DNA 分子 鸟枪射击法 : 基因组 DNA 剪切成片段 构建基因文库 分别测序 片段间的重叠部分 连续 DNA 分子 嗜热菌 ( T. tengcongensis ) 环状基因组, 具有 2,689,445 bp 2. 大基因组 ( 人类 ) 用鸟枪射击法测序 存在两个问题 : 片段数 (n) 庞大, 片段间连接和装配复杂, 重叠数为 2n 2 2n; 基因组中相同或相似的重复序列在连接和装配时容易出错 解决方法 : 定向鸟枪射击法 大规模序列测定前, 构建基因组图谱 锚定测知的核酸序列在染色体上的位置 以基因组图谱中标记为依据 测序 装配和构建不同 DNA 片段的序列 国际 HGP 研究中, 用了近 6 年的时间进行人类基因图谱构 浙江大学第七章基因工程和基因组学 69 建 国际人类基因组测序方法 : 作图谱 测序 装配 图域作图 Regional mapping 通过 Contig 进行染色体组装 (3 号染色体长臂的 3000 万对碱基, 占 1%) Contigs 浙江大学第七章基因工程和基因组学 71 浙江大学第七章基因工程和基因组学 72
13 contig 克隆错位来组装 DNA 测序 组装和连接成连续的 DNA 分子 ( 中国完成 1% 测序 ) stsg50796 WI WI SGC EST Bda37h09 sts-n34454 stsg stsg22463 IB262 SGC SGC SGC SGC SGC D3S4170 WI SGC WI-7400 SGC sts-t03421stsg81116 SGC sts-n30615 SGC WI-300 3S4125 stsg3157 GC DM1-2b11s A004QW I-1085 SGC stsg3143 WI-8499 D3S3525 D3S3630 GC WI-6116 GC GC D3S3706 SGC WI-13611NRU18-13s WI CHLC.GATA44a05 D3S1304 sts-t5815 GC W 3pter 605m e21 279b12 299n03 198p17 41l18 233p01 37i04 324k11 163m22 sequence fro114k09 204c23 728k15 429p24 499n06 399k19 106b10 129j10 113l10 13f06 Beijing Cent Mapped on 3p by 600o17 322f09 76o22 263j08 30m15 320c08 250a15 294h24 140b10 137g22 South centermapped on 3p by fingerprint fro265o10 717m12 762o12 156h01 324k15 283k15 572b02 61i09 534j21 166f03 497i k13 161d20 274o14 116k05 255k15 812i02 121d 6i h22 566o14 63o01 757o16 453a03 586c02 483g20 507d06 North centermapped not on 3p by fish 26f10 2 Mapped not on 3p by fish 260k16 263p03 341o12 560g03 772p01 344l09 3d22 489o22 Beijing and South 306h05 621c18 438g15 82o03 181f22 622p03 320k01 24b d STS markers 385a18 416n08 785a07 97c16 277d e03 25f01 167p 17 North 210b17 95 e11 101a04 487j12 590a20 Beijing and 99d 10 End certified 710 e04 10h06 508a20 173f11 7m24 211b19 291p21 Phase 3 811m11 372k09 194d21 16k15 318i14 529b17 53 e e12 245a06 Mapped not on 3p by sequence from NCBI 392m07 319i18 454f24 238a09 264h e16 Mapped on 3p by fish 673f20 453f03 489d19 194i0? Sequenced BACs without mapping information 93a e14 244g b e16 74 e h22 sts-n95054 SGC-107 3S3691 A002R42 IB1403 SGC s ts-f21241wi s tsg16459 W I-6949 stsg15038 sts -M91858 WI-17502W I-7625 WI-7071 AB s ts-f21841 sts-l15409 A004Z22 stsg31652 WI s tsg4381 A007593WI A008O42 D3S4194 stsg4279 WI s tsg32055 s tsg1546 WI-1104 tsg47554 stsg335 D3S3589 SGC D3S1263 stsg47397 SGC D3S3610 s tsg50845 stsg258 WI-313 A004X28 D3S3601 A001T39 tsg62586 WI sts-h83694 stsg47347 WI-5650 WI 浙江大学第七章基因工程和基因组学 a21 105k13 334l o20 593j10 169k17 309m10 813n23 83m12 19 e08 203c04 481h17 356a07 13b e21 25o17 715i e22 298m15 224p21 267l16 407i02 488o08 7f24 481b18 128a05 380o24 474f16 327h17 16m03 470i10 398j15 58i13 325l h17 134k10 299h l04 900o22 424h06 220d 58b p15 193k15 586c12 588p09 18f03 173m24 572m a18266 e23 275j11 270i10 333a02 34l06 ctb l03 ctc-237n 382a21 ctc-371o 126l09 163d23 AC c01 502k05 326o24ctb k13 224m20 167k17 219m19 266j06 438j01 627c01 659g04 AC i01 596j09 996c06 338p c06 ctc-243a06 ctc l24 94a14 380a22 70i11 citb-243a06 af176815ctb -177n07 115g03 109j15 781a02 412a07 429f16 浙江大学 622i12 第七章 45b16 基因工程和基因组学 a11 ctb -187p p11 439f04 105h19 大基因组的测序能否用鸟枪射击法呢? 鸟枪射击法测序 I : 随机阶段 人脑 电脑 水稻 新颖的思路功能强大的程序 运算速度快 ( 曙光 3000: 超千亿次 ) BAC 克隆 : kb 剪切的 DNA: kb 9311 水稻基因组测序 正反测序并读入计算机 测序模板 浙江大学第七章基因工程和基因组学 75 浙江大学第七章基因工程和基因组学 76 鸟枪射击法测序 II: 装配阶段 ( 工作框架图 ) 鸟枪射击法测序 III: 精细图 ( 完成 ) 测序准确性高 High Accuracy Sequence: < 1 error/ 10,000 bases 可靠性较差区域 Low Base Quality 单链区域 Single Stranded Region 序列空隙 Sequence Gap 装配一致区 Consensus 错配区 Mis-Assembly (Inverted) 可靠性较差区域 Low Base Quality 单链区域 Single Stranded Region 序列空隙 Sequence Gap 装配一致区 Consensus 错配区 Mis-Assembly (Inverted) 浙江大学第七章基因工程和基因组学 77 浙江大学第七章基因工程和基因组学 78
14 四 基因组图谱的构建 根据构建的途径, 可分为两种 : 遗传图谱 : 根据遗传性状连锁规律 将其定位在基因组中 位点间距以交换值表示 物理图谱 : 将各种标记直接定位在基因库 ( 染色体 ) 中的某一点上 位点间距以碱基对表示 粳稻第 4 染色体 ㈠ 遗传图谱的构建 1. 确定家系或构建遗传群体 ; 2. 确定个体的遗传标记 : 可用基因 ( 可鉴别的形态 生化等表型性状作标记 ) 或 DNA 作为可鉴别的标记 ; 3. 根据连锁交换原理来分析标记之间的连锁关系和遗传距离 ; 4. 绘制连锁图谱 如 : 果蝇的基因标记连锁图谱 浙江大学第七章基因工程和基因组学 79 浙江大学第七章基因工程和基因组学 80 人类基因组遗传图谱的构建家系分析法 : 分析 8 个家系 134 个成员 (186 个减数分裂 ) 根据 5264 个 STR( 简单重复序列 ) 标记绘制而成 将 5264 个标记定位在 2335 个位点 构建的人类基因组遗传图谱, 密度为每个标记 599 kb ( 二 ) 物理图谱的构建序列标签位点已知序列为标签的位点 (sequence tagged sites, STS) 作探针 基因组 DNA 杂交 步行法 绘制物理图谱 染色体步行法 浙江大学第七章基因工程和基因组学 81 浙江大学第七章基因工程和基因组学 82 STS 的要求 : 为已知序列, 便于 PCR 检测 ; 基因组中仅此一个位点, 无重复 常用的 STS 类型 : 表达的序列标签 (expressed sequence tag,est) EST 序列来自 cdna 的两端约 50bp 的序列 简单重复序列 (STR) 人类基因组物理图谱人类基因组序列开始测定时, 已有 45 万个 EST, 其中有一些重复序列 经计算机分析筛选后得到 个, 各代表一个基因 再从中筛选出 3 万个 EST 用于构建图谱 构建的物理图谱密度为每个标记 183kb,EST 分布结果表明基因在染色体上的排列是不均匀的 将上述遗传图谱及其它物理图谱整合 构成更加完整的人类基因组图谱, 作为基因组序列测定的框架和分析依据 可用于物理图谱的构建, 比较遗传图谱和物理图谱 浙江大学第七章基因工程和基因组学 84
15 一 后基因组学 (post-genomics) 第四节 后基因组学 1. 概念在完成基因组图谱构建以及全部序列测定的基础上 研究全基因组的基因功能 基因之间相互关系和调控机制为主要内容的学科 浙江大学第七章基因工程和基因组学 85 浙江大学第七章基因工程和基因组学 面临的最重要问题 2003 年 4 月 14 日, 宣布人类基因组序列图绘制成功 目前, 虽然完成了 99% 人类基因的序列分析, 但 90% 以上的人类基因尚不了解功能 自从 1996 年酵母菌基因组全序列测定以来, 全世界已有 如何将人类和模式生物体基因序列资料转变为有用的知识, 如何对这些基因加以利用, 使之能够造福于人类的健康 计算机科学家遗传学家生物化学家 1000 多个实验室 5000 多名科学家从事酵母菌后基因组学的研究, 共发表论文 7000 多篇, 鉴定 1060 个新基因的功能, 但 生理学家 人类功能基因组模式生物基因组 细胞生物学家 仍然还有约 1600 个阅读框架 ( 基因 ) 的功能不清楚 结构生物学家 临床和病理学家 浙江大学第七章基因工程和基因组学 87 浙江大学第七章基因工程和基因组学 88 目前已衍生出了许多新兴学科 : 功能基因组学研究对基因及其编码蛋白的功能进行研究 疾病基因组学研究发现疾病相关基因和致病基因, 从疾病诊断到疾病易感性研究 药物基因组学 (Pharmacogenomics) 研究不同个体对药物敏感性的基因基础, 特别是 SNPs 浙江大学第七章基因工程和基因组学 89 环境基因组学 ( Enviromental Genomics) 鉴定机体暴露在特定环境下的那些显示易感性或抵抗性基因的 DNA 多态性 如 DNA 修复基因 细胞周期相关基因 激素代谢基因 受体基因 参与免疫和感染反应的基因和信号转导导基因等 蛋白质组学 (Proteomics) 利用双相电泳技术研究细胞或组织的基因组表达的全部蛋白质 生物信息学 (Bioinformatics) 现代生物技术与计算机科学的结合, 收集 加工和分析生物资料和信息 浙江大学第七章基因工程和基因组学 90
16 二 蛋白质组学 (Proteomics) 双向电泳 在蛋白质水平研究基因组的基因表达 分析基因组的 蛋白质类型 数量 空间结构变异以及相互作用的机制 蛋白质组学比基因组学更为复杂 : DNA 线状结构与二级结构的功能差异不大, 但多肽链 不同状态下的组织 等电聚焦 染色 需折叠成一定的三维空间结构才形成有功能的蛋白质 ; 同 一种蛋白质经不同的加工修饰可形成不同的功能, 因此蛋 白质的多样性远复杂于基因本身 质谱分析 挖出目标蛋白分子 电泳图像分析 浙江大学第七章基因工程和基因组学 91 浙江大学第七章基因工程和基因组学 92 蛋白质 2D 电泳分析 A 对照 ;B 为人的垂体瘤蛋白质 2D 电泳箭头示有明显差异的蛋白质 引自 Zhan et al. (2003) Pituitary 6: 浙江大学第七章基因工程和基因组学 93 人角化细胞的 2D 电泳蛋白质图谱, 经 S35 放射自显影显示, 可以分辨出 100 种以上的蛋白质 引自 Gromov et al. (2002) Progress in Biophysics & Molecular Biology 80:3 22 浙江大学第七章基因工程和基因组学 94 三 生物信息学 (bioinformatics) 生物信息学是现代生物技术与计算机科学的结合, 收集 加工和分析生物资料和信息的学科 应用生物信息学可以将来自不同的基因组理论和应用综合并标准化, 利用大量的生物信息资料了解遗传网络系统 信号传递及相互关系, 计算机还可进行一些生物模拟研究 利用生物信息学能够分析从微生物 动物 植物以及人类基因组序列测定产生的大量资料 阐明遗传信息 研究内容两大类 :DNA 数据分析 ; 蛋白质数据分析 浙江大学第七章基因工程和基因组学 95 1.DNA 分析 基因结构域分析, 包括启动子 转录因子结合序列 内含子 外显子 重复序列 开放读码框架等 同源分析和检索, 包括 DNA 数据库 EST 数据库 STS 数据库 Unigene 数据库 Swissprot 数据库等 计算机基因克隆化 : 利用 EST 数据库的重叠序列克隆新基因 浙江大学第七章基因工程和基因组学 96
17 cdna: Complementary DNA, 与 RNA 序列互补的 DNA 序列, 一般代表基因的外显子序列, 即蛋白质编码序列 mrna AAAAA 逆转录 TTTTT cdna 合成第二条链 双链 cdna AAAAA TTTTT 浙江大学第七章基因工程和基因组学 97 浙江大学第七章基因工程和基因组学 蛋白质的数据分析 蛋白质一级结构分析 : 结构特点分析, 包括等电点 信号肽 穿膜区 DNA 结合序列等同源分析和检索, 包括 Nr 数据库 Swissprot 数据库等功能区分析, 包括 Prosite Emotif Identify 分析等 干扰素 α1b 分子模建图 蛋白质空间结构分析 : 蛋白质晶体结构数据库检索, 如 PDB 数据库 蛋白质空间结构预测, 如 Homology 等软件分析 浙江大学第七章基因工程和基因组学 99 浙江大学第七章基因工程和基因组学 100 四 功能基因组学 (Functional Genomics) 功能基因组学研究将是 21 世纪生命科学研究的新热点 ; 功能基因组学研究涉及众多的新技术, 包括生物信息学技术 生物芯片技术 单核苷酸多态性 转基因和基因敲除技术 酵母双杂交技术 基因表达谱系分析 蛋白质组学技术 高通量细胞筛选技术等 DNA 芯片技术 (DNA chip) 又称微列阵 (DNA microarrays), 利用 DNA 芯片技术 同时进行大量分子杂交, 分析比较不同组织或器官的基因表达水平, 筛选突变基因, 从核酸水平分析基因表达模式 浙江大学第七章基因工程和基因组学 101 浙江大学第七章基因工程和基因组学 102
18 探针荧光标记 点样 杂交 检测 数据分析 DNA 芯片技术 基因芯片展示酵母菌在发酵作用和呼吸作用状态下的基因表达 Globe Gene Expression of Yeast from Fermentation (sugar) to Respiration (ethanol) by Microarry (6400 genes 18 x 18 mm. Science:278:680, 1997 ) 浙江大学第七章基因工程和基因组学 103 浙江大学第七章基因工程和基因组学 104 DNA 芯片的用途 筛选基因 表达分析 疾病诊断 药物筛选 第一章绪言第一章绪言第二章生物的生长和繁殖第二章生物的生长和繁殖第三章遗传物质与自然界生物多样性第三章遗传物质与自然界生物多样性第四章遗传规律和性连锁第四章遗传规律和性连锁第五章数量性状和杂种优势的表现第五章数量性状和杂种优势的表现第六章基因表达与生物体发育第六章基因表达与生物体发育第七章基因工程和基因组学第七章基因工程和基因组学第八章基因社会学问题第八章基因社会学问题返回首页返回首页 浙江大学第七章基因工程和基因组学 105 浙江大学第七章基因工程和基因组学 106
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
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食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
长 安 大 学 硕 士 学 位 论 文 基 于 数 据 仓 库 和 数 据 挖 掘 的 行 为 分 析 研 究 姓 名 : 杨 雅 薇 申 请 学 位 级 别 : 硕 士 专 业 : 计 算 机 软 件 与 理 论 指 导 教 师 : 张 卫 钢 20100530 长安大学硕士学位论文 ３ １ ３系统架构设计 行为分析数据仓库的应用模型由四部分组成 如图３ ３所示
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
2008 中国生物技术发展报告 社 会 发 展 科 技 司 中华人民共和国科学技术部 中国生物技术发展中心 编著 北 2008.indd 1 京 2010-6-24 15:51:36
2008 中国生物技术发展报告 社 会 发 展 科 技 司 中华人民共和国科学技术部 中国生物技术发展中心 编著 北 2008.indd 1 京 2010-6-24 15:51:36 目 录 前言 第 １ 篇 政策篇 １ 一 国家有关部门制定相关规划 引导生物科技与产业快速发展与合理布局 ３ 二 地方政府积极响应 纷纷出台生物医药技术与产业发展规划 突出区域优势和特色 ７ 三 积极制定政策措施
获奖类别及等级 : 完成单位 : 主要完成人员 : 主要内容及重要影响 : 22
获奖类别及等级 : 完成单位 : 主要完成人员 : 主要内容及重要影响 : 21 获奖类别及等级 : 完成单位 : 主要完成人员 : 主要内容及重要影响 : 22 获奖类别及等级 : 完成单位 : 主要完成人员 : 主要内容及重要影响 : 23 五 论文和专利 六 新承担和在研的国家科研任务 序号 项目名称 总经费 ( 万元 ) 起止年限 项目种类 24 七 国际合作与区域交流 完成了第四次横断山区植物多样性科学考察
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刘世定 内容提要 : 本文在嵌入性视角的引导下, 进入关系合同理论领域 对关系合同的 分析, 以威廉姆森的合同治理结构理论作为基点 在分析了他的理论脉络和隐含假 设后, 本文提出了三个假定, 即约前关系导入 多元关系属性 对关系属性的有限控 制 在新的假设下, 首先讨论了合同治理结构和嵌入关系结构之间不同的对应关系, 并特别探讨了两者间的结构性摩擦 继而, 在关系合同的研究中引入了委托 - 代理关系,
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
经 济理论与经 济管理 第 期 我 国 汽 车产 业 政 策 和 发 展 战 略 陈建 国 国 家 发 展 与 改 革 委 员会 工 业 司 张宇贤 北京 国 家信 息 中心 发 展 研 究 部 实现 利 润 总 额 结构调整步 伐加快 我 国 汽 车产 业 发 展 基 本 情 况 加人 以来 在 投 资 消 费 的双 重拉 动下 国 汽 车产 业 摆 脱 了 长 达 了 个 快 速 发 展 阶段
工程项目进度管理 西北工业大学管理学院 黄柯鑫博士 甘特图 A B C D E F G 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 甘特图的优点 : 直观明了 ( 图形化概要 ); 简单易懂 ( 易于理解 ); 应用广泛 ( 技术通用 ) 甘特图的缺点 : 不能清晰表示活动间的逻辑关系 WBS 责任分配矩阵 ( 负责〇审批
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., 卢学峰 陈桂琛 彭敏 刘光秀 沈永平 (, ) (, ) 本文研究了乌鲁木齐河上游大西沟地区的种子植物区系特征 调查表明, 该地区现有种子植物 种, 隶属 属, 科 种子植物科的组成以世界分布型 科为主 ; 属的组成以北温带分布型为主 ; 种的组成以温带亚洲分布为主 区系成分的分析结果说明, 该地区植物区系是东天山植物区系的组成部分, 具有典型的北温 带植物区系特征 该地区植物区系具有山地植物区系和垂直变化的特点,
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件内酸 胺 酶 抑制剂 的 研 究 进 展 胡 宗礼 朱铃 英 第 二 军 医 大 学 基 础 部药 理 教研 室 当 今 在 国 内 外 临 床 细 菌 的 耐 药性 普 遍 上海 困 扰着 医 生 与 患 者 对 感染 性疾 病 特 别是 危 重 感 染构成 威 肋 内酞 胺类 抗生 素 甲 氧 苯青 霉素 金 葡 菌 尤 其是 耐 产生 耐 药性 的 重 要机 制 之 卜 内 酞胺 酶 抑 制
文章首先对 云计算 环境下数字图书馆的概念 特点 原理等进行概述 然后根据 云计算 环境下图书馆数字资源安全性要求 对影响数字图书馆安全的诸多因素进行深入探讨 最后研究了云计算环境下数字图书馆数据安全 应用安全以及虚拟化安全面临的威胁及对策 云计算数字图书馆信息安全对策 本文系甘肃省教育厅 年度科研项目 移动计算环境下的数字图书馆建设研究 批准号 的研究成果之一 马晓亭 女 年生 兰州商学院信息工程学院副教授
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药学 实践 杂志 药理 年第 卷第 期 生 物 技 术 药 品 近年 来 的 发 展 杨玉 龙 任海 祥 南 京军 区 南京 总 医 院 南京 本 文 概 述 了 近 年 来 国 内 外 生 物 技 术 药 品 与 生 化 药 品 的 研 究 与 发 展 论 述 了生 物 技 术与 生 物 药 品 摘要 间 的 关 系 介 绍 了 近 代 生物 技 术 在某 些 生 物 药 品 生 产 中 的应 用
第 期 丘志力等 从传世及出土翡翠玉器看我国清代翡翠玉料的使用
第 卷 第 期 年 月 宝石和宝石学杂志 丘志力 吴 沫 谷娴子 杨 萍 李榴芬 根据最新发现的广州海关清代同治 光绪年间玉石的进口记录以及其它翡翠资源开发的资料 通 过分析中国主流博物馆清代传世及出土的翡翠玉器 国际著名拍卖公司专场拍卖的清代翡翠玉器以及云南 等九省 市出土的清代翡翠玉器 统计分析了中国清代翡翠玉器的来源与材质特征 指出该时期进入中国市场 的翡翠玉料数量可能相当巨大 广州是翡翠玉料最重要的进关口岸之一
孙 蓝等 基于目标导向的研究生英语学习模式创新
第 期 总第 期 年 月 研究生教育研究 以中国科技大学研究生英语学习公共服务平台建设为例 孙 蓝 陈纪梁 邢鸿飞 刘海清 万洪英 中国科学技术大学外语系 安徽合肥 中国科学技术大学研究生院 安徽合肥 研究生英语教学的使命是培养学生在当今多元社会中进行有效沟通的能力 英语语言教育者的任务不是去寻求更好的教学法 而是要探索一套能够满足学生需求且与学生学习体验相一致的教与学的策略 为此 有必要构建研究生英语学习公共服务平台
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
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实现政治问责的三条道路 马 骏 建立一个对人民负责的政府是现代国家治理的核心问题 实现这一目标 需要解决两个最基本的问题 谁来使用权力 如何使用权力 选举制度是解决前一问题相对较好的制度 而预算制度是解决第二个问题最好的制度 通过历史比较分析 可以总结出三条实现政治问责的道路 世纪的欧洲道路 从建国到进步时代改革的美国道路以及雏形初现的中国道路 这意味着 西方经验并不是唯一的实现政治问责的道路 相对于西方经验来说
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/ / 河北师范大学学报 // / /... 人本与物本 翻译 与 语义谱系分析比较 牛云平, 杨秀敏 (., ;., ) : 翻译 与 的语义谱系有着根本不同之处 : 前者的本义是语官及其解释活动, 具有明显的人文特征 ; 后者的本义则是物体搬移行为, 具有明显的物化特征 两词的语义谱系不同, 决定了各自理论发展形态有别, 证明了中西翻译学自然而然地有着不同的研究重心和研究取向 因此, 中国学人强求与西人苟同乃是不智之举,
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张 翼 本文对近年来我国人口出生性别比失衡原因作了社会学意义的探索和研究 认为家族主义与以家庭为最小生产单位的农业劳作方式, 家庭人口再生产对男婴的需 求与国家人口再生产对出生人数的限定, 以及妇女经济地位的相对低下等, 是造成出 生性别比升值的基本社会动因 指出, 在影响人口再生产的三只手 国家 家庭和市场中, 惟有借助于国家强有力的调控手段, 才能使失衡的出生性别比在短期内渐次 回落 作者 :
关于罗斯福时代新政 宪法革命 的几点浅见 韩 铁 美国宪法的若干重要法理原则及其运用在富兰克林 罗斯福总统任内 发生了巨大变化 史称新政 宪法革命 不过 这种变化并不是在所谓 年最高法院的 及时转向 中一锤定音的 最高法院在正当程序 商业权 公众福利条款上的态度及其变化充分说明 新政宪法革命无论是从当时还是其后的发展来看都有它的连续性 局限性和复杂性 只有认识到了这一点 我们对新政宪法革命乃至于整个新政的历史评价才会比较准确
文化遗产的法律保护始于近代西方国家 现代以来呈现出法典化 系统化趋势 法国文化遗 产法历经两百多年的发展 迄今已形成以 遗产法典 为核心 以物质文化遗产保护为主体的比较完善的 法律保护体系 颇具典型性 法国文化遗产法律保护在立法体系 制度设计 理念应用等方面的经验 对于完善和发展中国文化遗产法律保护具有重要的借鉴意义 法国 文化遗产 法律保护 中国 借鉴 叶秋华 中国人民大学法学院教授 博士生导师
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Zebra 技术白皮书 零售业中的可跟踪性 降低 介质成本, 实现最佳价值 概要 简介 我想要的商品在哪里呢? 物品级标签带来了巨大优势 全面的库存管理 100% 2 Zebra (EAS)/ 实际结果 2009 1 27% 21% 53 2 209 提升顾客体验, 提高销售业绩 3 150 100 RF 1. : Bloomingdale 2009 2. 3. ABI Research 2009
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全 球 科 技 革 命 生 化 科 技 之 衝 擊 劉 承 揚 http://mail.tku.edu.tw/cyliu/ 生 化 科 技 之 衝 擊 基 因 解 碼 基 因 工 程 的 產 物 基 因 療 法 微 生 物 與 複 製 人 奈 米 生 醫 技 術 晶 片 科 技 生 化 科 技 的 衝 擊 1 細 胞 典 型 動 物 細 胞 中 各 個 胞 器 :⑴ 核 仁 ;⑵ 細 胞 核 ;⑶
外国文学研究 年第 期
柳向阳 论奥古斯丁时间观与罗伯特 潘 沃伦的诗歌创作 柳向阳 在 世纪美国作家中 罗伯特 潘 沃伦以博学多才的文艺复兴式人物著称 但沃伦文学生涯的核心成就是在诗歌领域 在六十余年的诗歌生涯中 沃伦有意识地将 奥古斯丁时间观引入诗歌创作 一方面借鉴奥古斯丁时间的结构特征 通过探索时间向度的变化 展示生命的历程和自我的发现 另一方面挖掘奥古斯丁时间的生命和诗学内涵 通过 对时间的体验 将时间的心灵和生命的属性赋予诗歌中的人和物
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涂正革 肖 耿 本文根据中国 个省市地区 年规模以上工业企业投入 产出和污染排放数据 构建环境生产前沿函数模型 解析中国工业增长的源泉 特别是环境管制和产业环境结构变化对工业增长模式转变的影响 研究发现 现阶段中国工业快速增长的同时 污染排放总体上增长缓慢 环境全要素生产率已成为中国工业高速增长 污染减少的核心动力 环境管制对中国工业增长尚未起到实质性抑制作用 产业环境结构优化对经济增长 污染减少的贡献日益增大
中国与欧洲关系 年
中国与欧洲关系 年 周 弘 本文全面回顾了中国与欧洲共同体 欧洲联盟及其成员国 年至 年间政治和经济关系的发展历程 分析了当前中欧关系取得的进展和存在的问题 作者认为 年来中国与欧洲关系的发展变化见证并体现了世界格局的演变以及中国和欧洲这两大很不相同的世界力量自身的发展变化 中欧之间不断深入和拓展的交往使双方都从中获益 而这种交往所创造出来的体制机制和方式方法也堪为人先 中欧关系能否在第二个 年中顺利发展
１期 赖著茹等 玉米 ＣＭＳ Ｓ材料雄花育性不稳定性与线拉体 Ｓ类质粒相关性的研究 ５１ 图 近等基因系杂交组合 Ｓ７ Ｘ 自凤 １ ＲＲ Ｓ７ Ｘ 自凤 １ ｒ ｒ 的线粒体主 ＤＮＡ 经 Ｅｃ Ｒ ｎｄ Ｂａｎ Ｈ Ｓａｒ Ｘｈｏ酶切后一 与 ＰＺＭＳ 中的 ５１探针杂交 ａ ＥｃｏＲ酶切 ｂ ｎｄ 酶切 ｃ ＢａｍＨ酶切 ｄ Ｓａ 酶切 ｅ ｘｈｏ酶切 １ Ｓ７ Ａ 自凤 １ ｒ ｒ ２ Ｓ７
避孕方法的医控模式和自控模式有变化吗 郑晓瑛 任 强 避孕节育是生殖健康极为重要的内容 文章利用国家人口和计划生育委员会 年至 年全国生育节育抽样调查和全国计划生育 生殖健康调查数据 分析了已婚育龄人口在避孕模式上的 时空变化特征 在此基础上进一步研究了在已婚育龄人口的年龄 子女数和生活的不同区域环境等方 面避孕模式的时空变化 结果表明 在我国人口转变的过程中 低生育水平下的避孕模式以及推行避 孕节育知情选择后已婚育龄人口的避孕模式
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动物遗传学 教学大纲 ( 动物科学专业用 ) 动物科学技术学院 动物遗传学 ( 课程代码 :100135 总学时 56 学时 / 讲授 40 学时 / 实验 16 学时 ) 一 课程的性质 地位和任务遗传学是研究生物遗传和变异的一门科学, 是生命科学的核心学科 动物遗传学作为遗传学的一个分支, 是动物育种学的理论基础和畜牧兽医学科的专业基础课程 通过对本课程学习, 要求学生掌握动物遗传学的基本原理和基本的实验技能,
第六章 按摩与保健 ２０５ 图 ６唱 １７ 常用穴位示意图 三 选穴原则 穴位按摩是针对穴位进行点 按 揉 推等多种手法的刺激 引起局部出现 酸 麻 胀 痛或温热感觉 一般每天按摩 １ ２ 次 每次可选用 ３ ６ 个 对 穴 位交替进行按摩 同时 穴位的选择应根据人体的体质和病情 从全身的穴位中 选出一些对某种病症有效的穴位 也称配穴 才能达到应有的治疗效果 一 一般规律 虽然全身的穴位很多 每个穴位的主治功能又有不同
上海现代设计集团建筑协同设计平台研究与应用
邓雪原 苏 昶 孙 朋 王国俭 上海交通大学土木工程系 上海 上海现代建筑设计 集团 有限公司 上海 本文首先分析了建筑 协同设计发展过程中存在的问题 指出建筑 协同设计的发展需要经过二维协同设计向三维协同设计的过渡 接着对适合于大型建筑设计企业的建筑 协同设计平台的关键问题进行了阐述 通过上海现代建筑设计集团一个实际工程项目 详细描述了建筑工程协同设计的方法与过程 然后对建筑协同设计的标准统一 工种协同等特点和高效沟通及超大项目的应用优势进行了讨论
X 傳統育種技術 分子育種技術 基因改良育種
06 2015 7 511 72 92? 2010? X 傳統育種技術 1960 1980 30 60 20 分子育種技術 5 10 3 5 基因改良育種 2015 7 511 07 改良後的基因及其生產的蛋白質都需經過嚴格的動物及田間生物安全試驗才會上市, 程序就跟新藥一樣 20 基改產品禁得起考驗 12 2013 1.75 50 1 5 1996 80 2013 156 35 21 6 90 08
科 学 出 版 社 职 教 技 术 出 版 中 心 www.aboo 科 学 出 版 社 职 教 技 术 出 版 中 心 www.aboo 科 学 出 版 社 职 教 技 术 出 版 中 心 www.aboo 科 学 出 版 社 职 教 技 术 出 版 中 心 www.aboo 科 学 出 版 社 职 教 技 术 出 版 中 心 www.aboo 科 学 出 版 社 职 教 技 术 出 版
国际政治科学 ¹ º ¹ º
印度学者对中国的安全认知 司乐如 一轨 外交和 二轨 外交都是国际关系研究中值得重视的内容 前者有助于说明两国在政府外交层面的表现 对后者的研究则有助于了解在外交现象背后起作用的观念因素 本文的研究试图把社会心理学中的一些核心概念融入国际关系的研究之中 并在此基础上探讨印度学者对中国的安全认知 本文通过提供关于 认知 的更为精确的概念和理论框架 并通过术语统计和定性的案例分析 深入印度专家的视角 深化人们对中印安全互动的了解
从美国 加拿大 英国 澳大利亚 韩国和日本图书馆学情报学学院的发展历程入手 介绍并分析国外图书馆学情报学研究生教育的改革与重组 教学目标与教学方法 专业设置与课程体系 师资队伍与学生情况 入学资格与毕业条件 进而对我国的图书馆学情报学研究生教育制度提出一些改进意见 图书馆学 情报学 研究生 教育 作者简介 葛敬民 男 年生 教授 硕士生导师 刘荣华 女 年生 硕士生 王林 男 年生 硕士生
宋守信 教授 杨书宏 教授级高工 傅 贵 教授 许开立 教授 高等工程教育专业认证委员会安全工程专业试点工作组 北京交通大学经济管理学院 北京 中国职业安全健康协会培训部 北京 中国矿业大学 北京 资源与安全工程学院 北京 东北大学资源与土木工程学院 沈阳 简要介绍我国高等工程教育专业认证试点的发展状况和主要做法 详细阐述安全工程专业认证以学生为本的指导思想和以质量保证及质量改进为出发点的基本特点
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
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浙 江 农 林 大 学 学 报!"#!"##$# 桂 花 组 织 基 因 表 达 中 荧 光 定 量 内 参 基 因 的 筛 选 付 建 新 张 超 王 艺 光 赵 宏 波 %$ 浙 江 农 林 大 学 风 景 园 林 与 建 筑 学 院 浙 江 临 安 $ 浙 江 农 林 大 学 亚 热 带 森 林 培 育 国 家 重 点 实 验 室 培 育 基 地 浙 江 临 安 摘 要 为 了 筛 选 桂 花
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兼论 上海城市人文历史地图的制作和运用 苏智良! 吴俊范 #! 由于地理学与历史学之间存在着学科分野的界限 致使已往的 景观概念缺乏全面性 其结果是 不仅地理学的景观研究缺少历史的底蕴与含量 而且历史学领域内系统的景观史研究也一直处于缺失状态 本文分别从宏观的理论角度和以 上海城市人文历史地图为中心例证 探讨在新的景观概念基础上和现代科学技术条件下 研究区域景观史的必要性 可行性以及具体的研究路径与操作方法
第四章 １０２ 图 ４唱１６ 基于图像渲染的理论基础 三张拍摄图像以及它们投影到球面上生成的球面图像 拼图的圆心是相同的 而拼图是由球面图像上的弧线图像组成的 因此我 们称之为同心球拼图 如图 ４唱１８ 所示 这些拼图中半径最大的是圆 Ｃｋ 最小的是圆 Ｃ０ 设圆 Ｃｋ 的半径为 ｒ 虚拟相机水平视域为 θ 有 ｒ Ｒ ｓｉｎ θ ２ ４畅１１ 由此可见 构造同心球拼图的过程实际上就是对投影图像中的弧线图像
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世纪 年代以来 中国社会的城市化日新月异 全球化的消费社会也开始进入 我们的生活 中国的城市文学趋向活跃 年轻一代的作家表达了对城市的感受和反思 积极地探寻着新的审美表现力 但总体看来 城市文学依然很不充分 作家的视野中并没有深刻和开放的城市精神 文学作品没有找到表现更具有活力的城市生活状况的方式 城市文学依然是一种无法解放和现身的 他者 并且被无限期延搁于主体的历史之侧 城市 现代性 乡土 幽灵化
论高校薪酬制度改革与人才强校战略 三 实施薪酬制度改革的效果 分配制度的改革就是在提高广大职工收入水平的基础上 重点要提高拔 尖人才的工资性收入及各种福利待遇 自从实施薪酬制度改革以来 我校职 工的工资性收入普遍有了大幅度的提高 薪酬改革方案得到了广大教师的支 持和欢迎 根据我们的调查 自 １９９９ 年薪酬制度改革以来我校职工的工资性 收入增长了近 ３畅 ５ 倍 具体增长情况见下图 １ 图 １ １９９９
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出 生 缺 陷 与 遗 传 性 疾 病 的 转 化 医 学 实 践 郭 永 研 究 员 博 士 生 导 师 清 华 大 学 1 出 生 缺 陷 三 级 预 防 措 施 一 级 预 防 措 施 广 泛 开 展 一 级 预 防 是 指 防 止 出 生 缺 陷 儿 的 发 生, 具 体 措 施 包 括 健 康 教 育 婚 前 医 学 检 查 孕 前 保 健 遗 传 咨 询 计 划 生 育 最 佳 生 育
欧洲研究 年第 期
论中欧伙伴关系中的不对称性与对称性 周 弘 在自然界和人类社会中都充满了不对称性和对称性的复杂关系 其中潜藏着挑战 也蕴涵着动力和机遇 这种现象同样存在于中欧关系之中 中欧关系中的不对称性表现在经济社会 政治制度和历史文化等三个主要方面 在这些不对称性中同时又包含着对称性 并孕育着发展中欧伙伴关系的机遇 中欧双方需要相互理解对方的 方式 寻求对称性与互补性 创造共赢局面 推动合作伙伴关系的继续发展
年第 期 1 :,,,,,,,,,,? :,, :. ( ) :, ( ) :, ( ) : :,. : :, 1,,, ;,,,,, :,,,,,,
冯国栋 在汉文佛教文献研究与整理工作取得相当成绩的今天, 有必要建立一门专门处理汉 文佛教文献的学科, 即汉文佛教文献学 本文初步提出汉文佛教文献学的概念, 并在此 基础上初步建构了汉文佛教文献学的学科体系, 认为汉文佛教文献学应由实体层面 方 法层面 历史层面与理论层面四部分的研究组成 关键词 : 汉文佛教文献学必要性体系 作者冯国栋, 年生, 文学博士, 浙江大学古籍研究所副教授,, 1 :,
编 者 手 记 :2016 年 6 月 7 日, 六 个 人 六 段 长 情 的 告 白, 有 着 说 得 出 的 故 事 说 不 出 的 情 怀 华 大 序 说, 说 出 华 大 最 强 音, 用 我 们 的 声 音 来 为 华 大 测 序, 这 是 华 大 人 自 己 的 TED 秀 在 第 一
六 个 人 六 段 故 事, 最 长 情 的 告 白 华 大 序 说 第 一 场 演 讲 实 录 大 放 送 陶 明 水 稻 二 三 事 2 赵 立 见 从 科 研 迈 向 临 床 4 杜 玉 涛 总 有 些 事 儿 在 做 6 张 建 国 老 兵 成 长 史 : 忠 诚 专 注 使 命 8 李 京 湘 从 1% 开 始 10 叶 葭 Love it, do it, enjoy it 13 1 编
中 南 大 学 学 报 医 学 版 D; -, + )- ) % % ) 8% % >- + ) ) &% >- % 54 )-) ) ) - ) + ) ) ;4 3 ; 5 ) - D; % &,, ) ) ) -) ) ) - % 54 ) - - ; / & + +, )) + >- + %
中 南 大 学 学 报 医 学 版 ) 基 因 多 态 性 与 胰 岛 自 身 抗 体 阴 性 酮 症 倾 向 糖 尿 病 的 关 系 周 敏 张 英 张 冬 梅 林 建 王 建 平 周 海 峰 周 智 广 中 南 大 学 湘 雅 二 医 院 代 谢 内 分 泌 研 究 所 糖 尿 病 中 心 长 沙 湘 雅 医 院 内 分 泌 科 长 沙 5 摘 要 目 的 探 讨 配 对 盒 ) 基 因 多 态
李俊新 崔 敏 刘艳春 姚艳君 周广芬 孙 宝 河北科技大学理学院 河北石家庄 滦南县职业教育中心基础部 河北滦南 在物理化学实验的基础上 对一级反应的 种不同数据处理模型进行比较和分析 通过对 实验数据处理模型进行系统的比较 来改善传统实验数据处理中存在的一些问题 从而简化数据处 理 减小作图工作量与作图误差 提升实验水平 提高数据处理结果的准确性 一级反应 数据处理模型 过氧化氢 图 过氧化氢分解实验装置图
邀请函1
2015 企业级 IT 服务与软件应用创新峰会 上海市计算机用户协会 上海市通信学会 2015 企业级 IT 服务与软件应用创新峰会 主办单位 : 支持单位 : 承办单位 : 企业级 IT 服务与软件应用创新峰会 大会拟定日程安排 合作支持媒体 参加行业及人员 相关软件开发 系统集成 信息安全 数据中心建设与运营 电信运营公司 医疗机 构 教育科研 互联网 金融保险 制造业 能源 电力 石化 交通运输
中国社会科学 年第 期,,. % 1,,,. %,. % 2,, %, ;,,,, 3,,,, 4 ( ) ( ) ( ) (),, %, 5,,,,,,,,, 1 :,, ://.. / / - / /., 2 :,, 3 :, 4,,, 5 ( ),,, ( ),, ( ), ( ), ( );
近年来农民工的经济状况和社会态度 李培林李炜 : 改革开放 年来, 农民工作为中国产业工人的组成部分, 成为支撑中国经济持续快速增长的重要力量 基于 年和 年 中国社会状况综合调查 的数据, 对近年来 特别是在国际金融危机背景下农民工的经济状况和社会态度进行分析, 结果显示, 年数据反映出农民工在收入水平较低 劳动强度较高的情况下, 却保持着较为积极的社会态度 ; 近两年的新变化是, 农民工的收入水平和社会保障水平都有了显著的提高,
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廖光洪 朱小华 杨成浩 徐晓华 基于南海 年夏季调查航次诊断计算的流函数场 选取越南以东偶极子发生海域 进行 不同的声层析观测站位设置实验 模拟计算声线传播时间信息 然后应用基函数重建方法进行了 流函数场的模拟反演研究 讨论了不同随机观测误差对反演结果的影响 研究结果表明该方法是 可行的 在所选取的约 海域内 在观测海域外围配置 个声层析观测站位就能够很好地重构原流函数场 空间分辨率约为 可以分辨模拟海域中尺度涡场结构
第十章 基因的作用
第十章基因的作用 DNA 第一節遺傳物質的發現 一 核酸 () 1. 2. (1) 1869 (F.Miescher) (nuclein) (2) (3) (ribonucleicacid;rna) (deoxyribnucleic acid;dna) () 1. (F.Griffith) 1928 2. (O.Avery) DNA 3.(H.O.Hershey)(M.Chase) DNA () 1.
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Microsoft PowerPoint - Real-time PCR原理与应用 [兼容模式]
![Microsoft PowerPoint - Real-time PCR原理与应用 [兼容模式]](/thumbs/43/23156457.jpg "Microsoft PowerPoint - Real-time PCR原理与应用 [兼容模式]")
荧 光 定 量 PCR 技 术 的 原 理 与 应 用 张 晓 辉 张 晓 辉 PCR 产 品 经 理 北 京 元 业 伯 乐 科 技 发 展 有 限 公 司 提 纲 荧 光 定 量 PCR 技 术 原 理 荧 光 化 学 物 质 简 介 定 量 PCR 技 术 延 伸 基 因 分 型 (SNP) 检 测 熔 解 曲 线 分 析 荧 光 定 量 PCR 技 术 应 用 常 规 PCR 技 术 : 常
潘军昌等 关系型借贷 破解 三农 融资难题的技术选择 二 关系型借贷 三农 融资的核心机理 三 关系型借贷 破解 三农 融资难题的技术选择
农业经济问题 月刊 年第 期 潘军昌 高名姿 陈东平 三农 融资难题牵扯层面繁多 研究的角度不同 结论也是大相径庭 本文从融资技术的角度发现 民间金融活动中所使用的关系型借贷技术可以有效解决 三农 融资过程中面临的信息不对称 缺乏抵押品问题 从而有效缓解 三农 融资难题 三农 融资 软信息 关系型借贷 一 一个案例解读 作者单位 王学渊 浙江大学农业现代化与农村发展研究中心 杭州 赵连阁 浙江工商大学经济学院
（精校版）陕西省语文卷文档版（含答案）-2011年普通高等学校招生统一考试.doc
绝 密 启 封 前 2015 年 普 通 高 等 学 校 招 生 全 国 统 一 考 试 生 物 试 题 ( 江 苏 卷 ) 一 单 项 选 择 题 : 本 部 分 包 括 20 题, 每 题 2 分, 共 计 40 分 1. 下 列 关 于 淀 粉 脂 肪 蛋 白 质 和 核 酸 4 种 生 物 分 子 的 叙 述, 正 确 的 是 ( ) A. 都 能 被 相 应 的 酶 水 解 B. 都 是
最新文物管理执法全书（十七）.doc
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赵世嘏 高乃云 楚文海 微曝气工艺是在常规 基础上发展起来的 试验表明在紫外光强 投加量为 三氯乙酸 初始浓度约为 的情况下 后该工艺对 的去除达到 以上 工艺效果受 光强 投加量 初 始浓度和 的影响 其他条件一定时 随着 光强和 投加量的增大 去除率增加 然而 投加量超过 后 去除效果增加缓慢 对不同初始浓度 时去除率最 高 而后浓度增加 去除率下降 中性或弱酸性 条件下更有利于降解 消毒副产物
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(TEM) (AFM) (STM) 150 80 三 联 兄 弟 生 物 医 药 ( 北 京 ) 有 限 公 司 经 理 电 话 :DAVID WANG 功 能 相 互 对 与 应 功 的 能 研 的 究 研, 究 结 始 构 终 与 是 功 科 能 学 的 研 基 究 础 的, 两 功 个 能 重 是 要 结 方 构 面, 特 体 别 现 是, 希 生 望 命 从 科 结 学 构 及 和 相 功
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张海峰 姚先国 张俊森 借鉴 的有效教育概念 本文利用 年间的中国省级面板数据估计了平均教育年限 教育数量 和平均师生比率 教育质量 对地区 劳动生产率的影响 本文的实证分析结果表明 以师生比率衡量的教育质量对劳动生产 率有显著且稳健的正效应 在均值处师生比率每上升一个标准差 有助于提高地区劳动生产率约 教育数量对劳动生产率的影响大小部分取决于教育质量的高低 教育质量越高教育数量对劳动生产率的促进效应越大
o -8 1 4 A 1A = 10 cm 1 44 A o o G1 S G2 M 68 31 72 15 89 22 88 22 99.6 28 27 4 95 87 80 13 32 3 77 19 84 37 89 7 1 1450O l 1700 8.5 35 1 23000 l 2200 10.5 40 l 40000
一步一步教你使用NCBI
查 找 DNA mrna cdna Protein promoter 引 物 设 计 BLAST 序 列 比 对 等 作 者 :urbest 2007-8-1 苏 州 大 学 生 命 科 学 学 院 最 近 看 到 很 多 战 友 在 论 坛 上 询 问 如 何 查 询 基 因 序 列 如 何 进 行 引 物 设 计 如 何 使 用 BLAST 进 行 序 列 比 对, 这 些 问 题 在 NCBI
晋委[1999]41号
![晋委[1999]41号](/thumbs/42/22909800.jpg "晋委[1999]41号")
晋 委 发 2011 7 号 中 共 晋 江 市 委 晋 江 市 人 民 政 府 关 于 加 快 引 进 优 秀 人 才 的 若 干 意 见 第 一 章 总 则 第 一 条 为 了 深 入 实 施 人 才 强 市 战 略, 进 一 步 优 化 人 才 政 策 环 境, 吸 引 集 聚 国 内 外 优 秀 人 才 到 晋 江 创 业 或 工 作, 为 新 一 轮 跨 越 发 展 提 供 强 有 力 的
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西 北 植 物 学 报 文 章 编 号 砀 山 酥 梨 及 其 褐 色 果 皮 芽 变!"# 基 因 克 隆 与 表 达 分 析 程 召 阳 孙 虹 丽 衡 伟 贾 兵 刘 莉 叶 振 风 朱 立 武 安 徽 农 业 大 学 园 艺 学 院 合 肥 摘 要 为 研 究 砀 山 酥 梨 及 其 褐 皮 芽 变 木 葡 聚 糖 转 葡 糖 苷 酶 基 因 表 达 水 平 差 异 该 实 验 利 用 "!
猫腻的做法 无用的伎俩 中国异教徒尤其擅长 如下文将讨论到的 阿辛 西岩
年第 期 第 期 秦立彦 北京大学中文系比较文学与比较文化研究所 北京 布莱特 哈特 华人形象 美国西部 世纪美国作家布莱特 哈特在很多作品中都写到在美国西部的中国人 这些中国人形象复杂多样 彼此 交织 对进行单一道德评价的形象研究提出一种矫正 包括诗歌 小说 戏剧 收稿日期 作者简介 秦立彦 男 黑龙江人 北京大学政治学系学士 英语系硕士 美国圣地亚哥加州大学文学博士 现为北京大学中文系比较文学与文化研究所教师
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战争制胜的秘密 评 军事力量 解释现代战争中的 胜利与失败 李 卓 近年来 美国国际安全研究中关于军事行动制胜因素的研究非常活跃 本文评述了此类研究的代表人物比德尔的 军事力量 解释现代战争中的胜利与失败 一书 对书中提出的 军事力量部署差异制胜论 的研究问题 分析框架 经验论证等主要研究环节进行了归纳和梳理 本文从理论 方法论等角度总结了此书的成就 认为该书通过构建以 军事力量部署 这一非物质变量为核心的安全理论
陈鹭真 王文卿 林 鹏 模拟正规半日潮淹水的条件下 不同淹水时间对秋茄 幼苗生长的影响 应用沙和土两种培养基质 制备盐度为 的人工海水栽培幼苗培养时间为 不淹水 和长时间淹水 对秋茄幼苗的生长有一定的抑制作用 而短时间淹水 淹水 对 幼苗生长有所促进 较长时间的淹水可促进贮气根的数量增加和长度的增长 在当前培养条件下 秋茄幼苗生长的最佳淹水时间是每个潮水循环淹水 处理的沙培秋茄幼苗总生物量和成熟叶面积最大
旅游科学
旅 游 科 学 王春雷 会展专业人才培养模式是一个院校对于会展办学的整体设计 因而需要进行系统性的构建 但目前这方面的研究成果不多 更缺乏实证性的研究 本 文基于文献综述的发现和会展专业的特点 从理论上构建了一个项目驱动型会展 专业人才培养模式的基本框架 进而以上海师范大学会展经济与管理专业为例 侧重从教育理念 培养目标 培养过程 培养制度和培养评价等方面进行了实证研究 项目驱动型 会展专业 人才培养模式
美国智库对当前中美关系的评析综述 卢 静 美国智库在美国对外政策的分析和制定中发挥着十分重要的作用 美国智库认为 美中关系是 世纪最重要的双边关系之一 而依存与合作是当前新形势下美中关系的主轴 其中合作是竞争性的 美国智库建议美国政府通过 巧实力 外交 全面接触 中国 其短期目的是让中国承担更多的 国际责任 而长远目标是塑造和改变中国 美国智库 中美关系 竞争性合作 卢静 外交学院国际关系研究所副教授
Microsoft Word - tck-103-4y-10-1(衛生)
103 學 年 度 技 術 校 院 四 年 制 與 專 科 學 校 二 年 制 統 一 入 學 測 驗 衛 生 與 護 理 類 ( 專 一 ) 試 題 試 題 分 析 : 今 年 衛 護 類 專 一 ( 基 礎 生 物 ) 部 分, 考 題 概 念 簡 單, 選 項 敘 述 也 不 繁 瑣, 且 大 部 分 皆 為 考 古 題 相 關 概 念, 要 拿 高 分 甚 至 滿 分 都 不 是 太 困 難
浙 江大 学 学 报 农业与生命科学版 ５０ ０ 第３６卷 Ａ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体 Ｂ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体活力染色结果 Ｃ 蚕豆叶肉细胞原生质体 Ｄ 蚕豆叶肉细胞原 生质体活力染色结果 ｂａｒ ２５ μ ｍ Ｅ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体中微丝骨架的分布 Ｆ 图 Ｅ 在透射光下的成像 Ｇ 蚕豆叶肉 细胞原生质体中微丝骨架的分布 Ｈ 图 Ｇ 在透射光下的成像 ｂａｒ １０ μ ｍ
Microsoft PowerPoint - 基因改造作物 [唯讀]
![Microsoft PowerPoint - 基因改造作物 [唯讀]](/thumbs/43/23140030.jpg "Microsoft PowerPoint - 基因改造作物 [唯讀]")
基 改 作 因 造 物 1 基 因 重 組 作 物 (transgenic crops) 又 稱 基 因 改 造 作 物 (genetically modified crops) 係 屬 基 因 改 造 生 物 ( g enetically modified organisms; GMO) 的 一 種 2 所 謂 的 GMO 係 指 利 用 操 作 基 因 之 方 式, 計 劃 性 的 選 擇 所
二 政策利率与市场利率关系的文献综述
央票发行利率与央票市场利率双向互动关系研究 郑振龙 莫天瑜 本文基于利率期限结构的主成分分析结果 通过构建回归方程的方法 针 对上一轮经济周期中的升息期和受金融危机影响的降息期 实证研究了央票发行利率与央票市场利率间双向关系的周内效应 结果表明 在经济正常波动时期 央票发行利率并 未直接引导市场利率 而是借由市场预期引导市场利率走势 央票发行利率的公布不对市 场利率造成影响 在金融危机时期 央行货币政策出乎市场预期
第 林浩 然 等 期 多 巴 胺 拮抗 物 诱 导 排 卵 效 应 的 研究 增强 材 料 和 方 法 士 选 腹 部 圆 而 松 软 的 雌鱼 体长 来 自 本 系 实 验 鱼场 周 左右 的 驯 养 合 饵料 部 分购 于 附 近 农 贸 市 场 试 验 在 泥 鳅 的 繁 殖季 节 克 士 试
第 卷 第 水 生 生 物 学 报 期 月 年 毛 多 巴 胺拮 抗 物 增 强 丘 脑下部 促 黄 体 素释 放 激 素 类似 物 诱 导大 鳞 副 泥 鳅 排卵 效 应 的 研 究 林浩然 彭 纯 林鸿平 中山 大 学 生 物 系 提 在注 射低 剂 量 导 的 排卵 效应 的 的 同 时注 射 多 巴 胺 拮抗 物 能促 进 脑 垂 体 释 放活 动 细 胞 的 合 成和 分 泌 而注 射 多
1 中 国 畜 牧 兽 医 卷 发 * 的 主 要 诱 因 研 究 表 明 高 脂 血 症 患 者 常 伴 有 载 脂 蛋 白 */ 含 量 升 高 因 此 对 */ 功 能 及 其 致 * 作 用 机 制 进 行 研 究 具 有 重 要 意 义 */ 是 一 种 水 溶 性 低 分 子 质 量 脂
中 国 畜 牧 兽 医! " # 载 脂 蛋 白 刺 激 猪 主 动 脉 血 管 内 皮 细 胞 差 异 表 达 基 因 的 研 究 岳 媛 陈 洪 艳 王 嘉 玮 徐 明 强 丁 瑜 姜 昊 高 妍 张 嘉 保 闫 守 庆 吉 林 大 学 动 物 科 学 学 院 长 春 摘 要 本 研 究 旨 在 探 究 载 脂 蛋 白 */ 刺 激 猪 主 动 脉 血 管 内 皮 细 胞 前 后 的 差 异 基
方 展 强 等 罗 非 鱼 脑垂 体结 构 研 究 期 结 腺 垂体 前 叶 的 超 微 结构 果 脑 垂 体 的般 结 构 性成熟 的 尼 罗 非 卿 脑 垂 体 呈 鸡 心 形 实 心 腺 体 图 版 和 腺 垂体 两 部分 构 成 和 脑垂体 细胞 维 叶 形 成 树 根 状 结构 分布 到
方 展 强 等 罗 非 鱼 脑垂 体结 构 研 究 期 结 腺 垂体 前 叶 的 超 微 结构 果 脑 垂 体 的般 结 构 性成熟 的 尼 罗 非 卿 脑 垂 体 呈 鸡 心 形 实 心 腺 体 图 版 和 腺 垂体 两 部分 构 成 和 脑垂体 细胞 维 叶 形 成 树 根 状 结构 分布 到 腺 垂 体各 腺 垂 体 由前 叶 由神 经 垂 体 神经 垂 体 由 不 同 类 型 的神 经 分
2015 Intellectual Sensitive 30 Physical A T G C DNA
2015 Intellectual Sensitive 30 Physical A T G C DNA DNA 7 24 Zemin Ning Kai Ye BIG BIG 1 104 100101 010-84097548 www.big.ac.cn zhouml@big.ac.cn REV1 FANCD2 DNA 6 18 50 聚 焦 70 88 7 22 20 7 3 complex indels
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区位学理论思考 潘允康 [ 美 ] 约翰. 罗根 [ 美 ] 边馥琴 [ 美 ] 边燕杰关颖卢汉龙 过去在理论界研究中国家庭结构特点的影响因素时主要从中国的家庭传统和社 会现实生活需求两方面展开, 本文则在此基础上集中从住房的角度分析家庭结构的 影响因素 它依据 年在津 沪两地进行的住房与家庭生活调查的有关资料, 运 用区位学理论, 指出住房是影响中国家庭模式的重要因素, 随着城市居民住房状况的改变和住房政策的变化,
李集临 徐香玲 大豆的电离辐射诱发突变 １ Ｍ１ 茎扁化 叶片畸形 ２ Ｍ２ 弱株矮生型 ３ Ｍ 无主茎类型 斗 Ｍｚ 典型矮生型 Ｍｅ 茎扁化 主茎分裂为２ 一个结实 一个完全不孕 ６ Ｍ 主茎不孕 侧枝结实 ７ Ｍ２ 十胜长叶 中出现的多分枝 两侧分枝 株形收敛 分枝少类型及不孕株 Ｂ Ｍ２ 短果校 长花序突变单株 图版 Ｉ 李集临 徐香玲 大豆的电离辐射诱发突变 ９ 对照 减数分裂中期 Ｘ１
从菜鸟到高手-手把手教你qPCR教程II
从 菜 鸟 到 高 手 - 手 把 手 教 你 qpcr 教 程 II --- 定 量 PCR 原 理 常 见 问 题 分 析 和 数 据 统 计 分 析 前 言 由 于 Real-time qpcr 的 众 多 优 点, 现 在 已 经 是 生 命 科 学 领 域 的 一 项 常 规 技 术 越 来 越 多 的 研 究 文 章 中 涉 及 RT-PCR 的 实 验, 也 基 本 上 被 real-time
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第四章 基因组测定及分析
1 第四章基因组测定及分析 人类基因组和其它一些生物基因组的大规模测序将成为科学史上的一个里程碑 基因组的测序带动了一大批相关学科和技术的发展, 一批新兴学科脱颖而出, 生物信息学 基因组学 蛋白质组学等便是一批最前沿的新兴学科 可以说, 基因组测序及其序列分析使整个生命科学界的真正认识了生物信息学, 生物信息学也真正成为了一门受到广泛重视的独立学科 基因组测序及其分析实际是人类的又一场 淘金 和
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