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1 1 盧 立 理 2 行 良 來 類 不 度 度 不 數 異 數 類 來 類 識 了 不 (1) (2) (3) 便 濾 利 異 便 利 便 靈 度 不 不 易 練 若 利 靈 度 錄 連 (RT-PCR) 利 離 離 若 料 易 不 濾 狀 1. 螺 (Phytoplasma and Spiroplasma) 易 (Yellow) 葉 (Purple-top) 葉 葉 (Witches broom) 葉 (Phyllody) (Big bug) 葉 (White leaf) (Dwarf or Stunt) 狀 2. (Virus) 類 不 異 數 Luteovirus Giminivirus (Mosaic) 不 見 (Mottling mosaic) 綠 (Vien banding mosaic) 漣 葉 (Crinkle mosaic) 葉 (Rugose mosaic) 綠 (Dark green island mosaic) 不 葉 (Vein clearing) (Stripes or Streake) (Striate) (Yellow) 綠 (Chlorosis) (Dwarf or Stunt) (Rosette) 葉 (Witches broom) 狀 葉 (Fern leaf) (Enation)

2 (Marformation) 葉 (Leafrool or Leaf curl) (Tumour) 見 狀 (Necrosis) 輪 (Ring spot) 暈 (Yellow blotch) (Lesion) 不 (Symptoless) (Latent infection) 類 (Cryptovirus) 鈴 S 度 復 狀 (Masking) 3. 類 (Viroid) 1971 年 異 類 易 (Epinasty) 葉 (Bunchy-top) 綠 (Chlorotic mottle) (Stunt) (Pale fruit) (Spindle tuber) 鱗 (Exocortis) (Yellow speckle) (Sun blotch) (Scar skin) 狀 濾 若 狀 離 論 A. 濾 異 狀 類 類 狀 葉 狀 狀 葉 鈴 Y 葉 狀 葉 數 類 B. 類 狀 來 鈴 葉 葉 葉 理 葉 切 若 葉 拉 葉 立 Rhizoctonia 若 理 葉

3 C. 省 理 狀 良 不 類 葉 (Strawberry pseudomild yellow edge virus) 利 來 UC-1 EMC 葉 量 葉 若 葉 來 葉 葉 D. 若 不 見 類 離 度 ph 量 類 金 量 葉 度 若 不 利 狀 不 ( ) 不 類 理 論 類 不 類 不 不 類 不 類 料 離 度 量 (Mole) 度 類 不 量 度 不 例 輪 量 度 易 若 若 0.1 M 度 見 度 (ph ) 0.1 量 度 不 度 不 例 Brome mosaic virus ph4-6 易 ph ph7 度 量 罹 料 量

4 不 量 度 易 不 罹 料 (in vivo) 狀 狀 (in vitro) 狀 量 不 力 不 降 類 度 不 類 量 量 易 量 罹 料 量 10 量 (w/v) 類 類 若 類 易 葉 4-10 ( ) 3-5 葉 葉 葉 葉 易 類 葉 葉 易 金 量 葉 量 金 利 金 (mesh) 金 葉 金 量 利 葉 金 粒 率 降 立 來 葉 類 金 類 度 葉 類 不 易 行 例 鈴 行 PVX 度 若 25 不 類 28 若 不 不 葉 度 了 金 不 不 力

5 葉 狀 數 不 葉 葉 E. (Inclusion body) Calcomine orange Luxol brilliant green (Azure A) 2-methoxyethyl acetate 理 率 若 便 理 論 狀 來 類 參 G. Christie J. R. Edwardson(1974) Light and electron microscopy of plant virus inclusions. (1989) 易 F. 若 利 IgG 來 ( ) 異 理 便 理 不 (Polyclonal antibody) (Monoclonal antibody) 利 類 異 利 料 ( ) (Polyclonal antibody) 說 數 (Epitope) 不 來 來 a. (Slide floculation test) 理 5-10 利 便 靈 度 不 不 易 b. (Microprecipitin test)

6 行 若 數 量 c. (Latex aggrutination test) IgG 0.8 um 粒 行 度 量 粒 易 易 靈 度 d. (Double diffusion test) Ouchterlony % 10~12 六 6-48 若 靈 度 不 數 不 量 ( ) 異 度 e. 連 (ELISA=Enzyme linked immunosorbent assay) IgG 來 利 易 連 連 利 糖 連 連 IgG Fc 異 (Fab ) 2 -SH 利 來 硫 -SH 連 連 利 ELISA 料 (Double antibody sandwich ELISA) hr hr 連

7 hr N NaOH 若 ( ) 連 理 易 ( ) 連 連 若 連 ( 來 不 ) 連 來 不 類 連 類 便 Indirect ELISA 靈 度 異 連 Direct ELISA ( ) (Monoclonal antibody) (Epitode=antigen determine side) 來 離 (Spleen cell) (Myeloma cell)

8 (Hybridoma) 來 便 兩 異 類 類 利 (Primary reaction) (Secondary reaction) 不 連 行 G. 切 (Direct tissue blotting) 不 易 不 易 來 葉 狀 切 葉 切 切 2% 0.85% ( ) Tween-20 理 連 若 H. IgG 來 度 0.5 M ph9.5 Sephadex G25 離 DEAE-cellulose 異 切 切 30 理 便 UV 便 異 便 I. : 了 粒 不 不 1. (Direct negative staining) 切 離 來 formal (grid) 2-3 濾 2% (Uranyl acetate)

9 (Phosphotungstic acid) 便 狀 易 不 易 不 易 離 2. 罹 料 濾 理 離 利 離 離 利 度 度 離 料 不 類 粒 易 理 易 不 易 不 易 J. 利 錄 (Reverse transcription polymerase chain reaction RT-PCR) 連 (Polymerase chain reaction) 量 (Template) 利 列 數 (Primer) 利 DNA (Taq DNA polymerase) DNA (Denature) (Annealing) (Synthesis) 度 (Programmable thermocycler PCR machine) 數 度 (Amplify) 列 利 ( Agarose gel electrophoresis) 量 靈 度 (Sensitivity) 不 (False positive) (Negative control) RNA RNA 錄 (Reverse transcriptase) DNA(cDNA) 來 利 PCR 理 來 量 cdna 錄 - 連 (Reverse transcription-polymerase chain reaction RT-PCR) 錄 AMV(Avian Myeloblastosis Virus) 錄 M-MuLV(Moloney Murine Leukemia Virus) 錄 M-MuLV 錄 RNase H AMV 錄 錄 列 量 PCR RT-PCR 利 (degenerate primer)

10 (genus specific primer) 利 (species or strain specific primer) K. 利 (Biochips) (Biochips) DNA Oligonucleotide 利 度 龍 (Nylon) 度 列 列 (microarrays) (gene chips; DNA chips; Oligonucleotide-chips) 度 度 數 RNA cdna 列 錄 來 不 度 列 利 類 靈 WTO 更 易 利 力 RT-PCR (Biochips DNA chips) 省 力 力

11 1. (Tomato spotted wilt virus, TSWV 2. 葉 葉 giminivirus 3. 葉 Tomato aspermy virus, TAV

12 鈴 4. 鈴 X (Potato virus X, PVX) 1. 漣 葉 PVX 鈴 S (Potato virus S, PVS) 2. 漣 葉 PVX PVY 5. 鈴 Y (Potato virus Y, PVY) 3. PVY (mosaic strain)

13 4. PVY (necrosis strain) 7. 理 葉 不 落 5. PVY (chlorotic strain) 8. 理 留 6. 葉 留 9. 葉 葉

14 10. 葉 PVY 螨 1. Strawberry latent virus 2. 葉 理 Strawberry mild yellow edge virus Strawberry vein banding virus 11. 理 葉 Potato leafroll virus

15 1. 葉 數 PVX (Cucumber mosaic virus, CMV) (TAV) PYV ( ) 4. 鈴 X PVX 葉 2. CMV (TAV 3. (Tomato mosaic virus, ToMV) 若 CMV 葉 1. (Cucumber mosaic virus, CMV) 罹 度 罹 葉 A 罹 葉

16 2. (Turnip mosaic virus, TuMV 罹 葉 輪 狀 A 罹 葉 狀 B 3. (Tomato mosaic virus, ToMV) A,B C

17 4. (Broad bean wilt virus, BBWV) 葉 暈 狀 罹 葉 輪 5. (Lisianthus necrotic virus, LNV) LNV 葉 輪 狀 葉 葉 類 罹 狀

18 1. (Carnation mottle virus, CarMV) CarMV 葉 葉 A 罹 葉 肋 葉 B 1. (Carnation mottle virus, CarMV) CarMV CarMV A CarMV B 3. (Lisianthus necrotic virus, LNV) 罹 葉 A 葉 B C