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神鲍
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1081 论著中医中西医结合研究黄芪丹参酮 ⅡA 和 5- 氟尿嘧啶单用及联合应用对人宫颈癌 HeLa 细胞的体外作用研究田亚萍, 王园园, 迟宝荣摘要目的检测黄芪丹参酮 ⅡA 5- 氟尿嘧啶 (5 FU) 单用及联合应用对人宫颈癌 HeLa 细胞的抑制作用及其抗肿瘤机制, 探讨黄芪丹参酮 ⅡA 在宫颈癌治疗中的应用价值方法 2014 年 3 12 月选取人宫颈癌 HeLa

1 1081 论著中医中西医结合研究黄芪丹参酮 ⅡA 和 5- 氟尿嘧啶单用及联合应用对人宫颈癌 HeLa 细胞的体外作用研究田亚萍, 王园园, 迟宝荣摘要目的检测黄芪丹参酮 ⅡA 5- 氟尿嘧啶 (5 FU) 单用及联合应用对人宫颈癌 HeLa 细胞的抑制作用及其抗肿瘤机制, 探讨黄芪丹参酮 ⅡA 在宫颈癌治疗中的应用价值方法 2014 年 3 12 月选取人宫颈癌 HeLa 细胞, 分为 6 组, 包括对照组黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组, 每组分别加入不同浓度的药物进行处理应用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT 法 ) 和流式细胞术检测人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率及细胞凋亡率, 检测氧化应激因子丙二醛 (MDA) 水平及超氧化物歧化酶 (SOD) 谷胱甘肽 (GSH) 活力结果 4 0g/ml 黄芪 8 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 50 0mg/L5 FU 4 0g/ml 黄芪 +8 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 4 0g/ml 黄芪 +8 0μg/ml 丹参酮 ⅡA+50 0mg/L5 FU 人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高, 同组培养 72h 后人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高 (P<0 05) 培养 72h 后, 黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率较黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组升高 (P<0 05); 黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率较黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组升高 (P<0 05) 黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞凋亡率较黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组升高 (P<0 05) 不同组 MDA 水平及 GSH 活力比较, 差异无统计学意义 (P>0 05); 不同组 SOD 活力比较, 差异有统计学意义 (P<0 05); 其中黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组 SOD 活力较对照组降低 (P<0 05) 结论黄芪丹参酮 ⅡA 5 FU 可诱导人宫颈癌 HeLa 细胞发生凋亡, 联用后可增加抗肿瘤活性, 具有临床应用价值关键词宫颈肿瘤 ; 黄芪 ; 丹参酮 ; 氟尿嘧啶 ;HeLa 细胞 ; 体外研究中图分类号 R 文献标识码 A doi: /j isn 田亚萍, 王园园, 迟宝荣黄芪丹参酮 ⅡA 和 5- 氟尿嘧啶单用及联合应用对人宫颈癌 HeLa 细胞的体外作用研究 [J]. 中国全科医学,2016,19(9): [www chinagp net] TianYP,WangYY,ChiBR Invitroefectofastragalus,tanshinoneⅡA,5-fluorouracilaloneortheircombineduseon humancervicalcarcinomahelacels[j].chinesegeneralpractice,2016,19(9): InVitroEfectofAstragalus, TanshinoneⅡ A,5-fluorouracilAloneorTheirCombinedUseonHumanCervical CarcinomaHeLaCels TIANYa-ping,WANGYuan-yuan,CHIBao-rong DepartmentofDermatologyandVenereology, thefirsthospitalofjilinuniversity,changchun130021,china Abstract Objective Toinvestigatetheinhibitoryefectandanti-tumormechanismofastragalus,tanshinoneⅡ A, and5-fluorouracil(5 FU)usedaloneorincombinationonhumancervicalcarcinomacels,andtoexploretheapplication valueofastragalusinjectionandtanshinoneⅡaincervicalcancertreatment Methods HumancervicalcarcinomaHeLacels weresampledanddividedintosixgroups:controlgroup,astragalusgroup(group1),tanshinoneⅡagroup(group2),5 FU group(group3),astragalus+tanshinoneⅡagroup(group4),astragalus+tanshinoneⅡa+5 FUgroup(group5)from MarchtoDecemberin2014 Eachgroupwasadministratedwithdiferentconcentrationsofdrugs MTTmethodandFCM method wereusedtodetectthehelacelgrowthinhibitionrateandcelapoptosisrateofhumancervicalcarcinomaanddetectmdalevel andtheactivityofsodandgsh Results Group1,group2,group3,group4andgroup5hadthehighesthumancervical carcinomahelacelgrowthinhibitionrateswhendrugconcentrationwas4 0g/ml,8 0μg/ml,50 0mg/L,4 0g/ml+8 0 μg/ml,4 0g/ml+8 0μg/ml+50 0mg/L(P<0 05);the5groupshadhighestHeLacelgrowthinhibitionratesafter72h culture(p<0 05) After72hculture,group4washigherthangroup1,group2andgroup3inHeLacelgrowthinhibition 基金项目 : 吉林省中医药管理局中医药科技项目 ( ) 作者单位 : 吉林省长春市, 吉林大学第一医院皮肤性病科 ( 田亚萍, 王园园 ), 消化内科 ( 迟宝荣 ) 通信作者 : 迟宝荣, 吉林省长春市, 吉林大学第一医院消化内科 ; chibr@jlu edu cn

1082 htp: //www chinagp net E mail:zgqkyx@chinagp net cn rate(p<0 05);group5washigherthangroup1,group2andgroup3andgroup4inHeLacelgrowthinhibitionrate(P< 0 05).

2 1082 htp: //www chinagp net E mail:zgqkyx@chinagp net cn rate(p<0 05);group5washigherthangroup1,group2andgroup3andgroup4inHeLacelgrowthinhibitionrate(P< 0 05).Group5washigherthangroup1,group2andgroup3andgroup4inHeLacelapoptosisrate(P<0 05) No significantdiferencesexistedinmdalevelandgshactivityamongdiferentgroups(p>0 05);significantdiferencesexisted insodactivityamongdiferentgroups(p<0 05);group1,group2,group3,group4andgroup5werelowerthancontrol groupinsod activity(p<0 05) Conclusion Astragalusinjectionsolution,tanshinoneⅡ A and5 FU caninducethe apoptosisofhumancervicalcancerhelacels, andtheircombinedusecanincreaseantitumoractivity, andhaveclinical applicationvalue Keywords Uterinecervicalneoplasms;Astragalusmembranaceus;Tanshinone;Fluorouracil;HeLacels;Invitro 宫颈癌是引起妇女死亡的主要原因之一中药联合化疗药物在一定程度上减少化疗药物毒副作用的产生, 提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性, 改善患者生活质量 [1] 临床用于各类中晚期癌症患者的扶正固本方剂对提高患者近期远期疗效均有益处 [2-3] 黄芪 (astragalus) 具有健脾补中升阳举陷益卫固表利尿等功效, 在体内和体外均对各类癌症具有较好的抑制作用 [3] 从丹参中提取的脂溶性单体丹参酮 ⅡA (tanshioneⅡa) 有抑制肿瘤细胞增殖诱导其分化和凋亡的作用 [4-5] 黄芪和丹参酮 ⅡA 对人宫颈癌 HeLa 细胞的抑制作用已有研究报道 [6-7], 但二者联合应用对人宫颈癌 HeLa 细胞的作用及机制研究尚未见报道另外, 黄芪丹参复方注射液具有清除氧自由基减轻氧化应激对机体细胞损伤的作用 [8], 此种药物活性能否保护肿瘤细胞未见报道因而, 本研究于 2014 年 3 12 月研究黄芪丹参酮 ⅡA 5- 氟尿嘧啶 (5 FU) 单用及联合应用对人宫颈癌 HeLa 细胞的抑制作用及其抗肿瘤机制, 为其临床应用提供实验依据 1 材料与方法 1 1 主要试剂黄芪注射液为正大制药集团产品 ( 每毫升相当于生药黄芪 2g, 批号 ) 丹参酮 ⅡA 为中国药品生物制品检定所的标准品 ( 批号 ), 溶解于适量的二甲基亚砜 (DMSO), 终浓度为 0 1% 5 FU 购自上海旭东海普药业有限公司 ( 批号 ) 胎牛血清 (GIBCO 公司 ),RPMI 培养液 (GIBCO 公司 ), 胰蛋白酶 (AMRESCO 公司 ) 3- (4,5- 二甲基噻唑 -2) -2(MTT) 试剂盒 ( 武汉华美生物工程有限公司 ), 丙二醛 (MDA) 试剂盒 ( 上海碧云天生物技术有限公司 ), 超氧化物歧化酶 (SOD) 谷胱甘肽 (GSH) 试剂盒 ( 南京建成生物科技有限公司 ) 1 2 仪器与器材荧光显微镜流式细胞仪 (Olympus), 5% 二氧化碳 (CO 2 ) 培养箱 (ThermoElectronCorporation), 恒温培养箱 ( 诺基仪器 ), 生物安全柜力新仪器 ( 上海 ) 有限公司, 倒置相差显微镜 (Olympus),Mode1680 型酶标仪 ( 美国 Bio-Rad) 1 3 研究方法细胞培养人宫颈癌 HeLa 细胞购于中国医学科学院基础医学研究所细胞中心, 置于含 10% 胎牛血清及青霉素链霉素各 100U/ml 的 DMEM 培养液中,37 5%CO 2 培养箱中培养实验分组对照组不加入任何药物 ; 黄芪组 : 分别加入不同浓度黄芪注射液, 含生药 g/ml; 丹参酮 ⅡA 组 : 分别加入不同浓度丹参酮 ⅡA, 终浓度 μg/ml;5 FU 组 : 分别加入不同浓度 5 FU, 终浓度 mg/L; 黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组 : 分别加入不同浓度黄芪注射液和丹参酮 Ⅱ A,0 1g/ml+0 5μg/ml 0 5g/ml+1 0μg/ml 1 0g/ml +2 0μg/ml 2 0g/ml+4 0μg/ml 4 0g/ml+8 0μg/ml; 黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组 : 分别加入不同浓度黄芪注射液丹参酮 Ⅱ A 和 5 FU:0 1g/ml+0 5μg/ml+3 5mg/L 0 5 g/ml+1 0μg/ml+7 0mg/L 1 0g/ml+2 0μg/ml+12 5 mg/l 2 0g/ml+4 0μg/ml+25 0mg/L 4 0g/ml+8 0 μg/ml+50 0mg/L 生长抑制率检测采用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT 法 ) 检测黄芪丹参酮 ⅡA 5 FU 单用及联合应用对人宫颈癌 HeLa 细胞生长的抑制作用取个对数生长期宫颈癌 HeLa 细胞接种于 96 孔培养板中,200μl/ 孔, 培养 24h, 吸去培养液, 分别加入 200μl 不同浓度不同组分药物, 每组设 3 个复孔各用药组细胞培养 h 后, 每孔加入 MTT (5g/L)20μl, 继续培养 6h, 弃上清液, 每孔加入 DMSO 150μl, 室温下振荡 10min 将结晶完全溶解酶标仪 570nm 波长处测吸光度值 (OD 值 ) 生长抑制率 = (1- 实验组 OD 值 / 对照组 OD 值 ) 100% 细胞凋亡率检测各用药组细胞于培养 72h 后消化收集, 磷酸盐缓冲液 (PBS) 洗涤后,70% 乙醇固定,4 过夜 PBS 洗涤 2 次 RNA 酶, 消化 30min 后, 采用流式细胞术检测每组重复 3 次采用 CelQuest 软件计算细胞凋亡率 MDA 水平及 SOD GSH 活力测定各组细胞于培养 72h 后消化收集,PBS 洗涤 2 次, 收集细胞于 1 5mlEP 管中, -80 超低温冰箱冻存待检每份细胞样本加入 0 5ml0 9% 氯化钠溶液, 超声波破碎,3000r/min 离心 10min( 离心半径 10cm) 收集上清液按照试剂盒说明书分别检测 MDA 水平及 SOD GSH 活力 1 4 统计学方法采用 SPSS13 0 统计学软件进行数据处理计量资料以 (x±s) 表示, 多组间比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用 q 检验以 P<0 05 为差异有统计学意义 2 结果 2 1 不同浓度黄芪组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较培养 h 后, 不同浓度黄芪组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较, 差异有统计学意义 (P<0 05); 其中 4 0 g/ml 黄芪人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高, 同组培养 72h 后人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高 (P<0 05, 见表 1) 2 2 不同浓度丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比

3 1083 较培养 h 后, 不同浓度丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较, 差异有统计学意义 (P<0 05); 其中 8 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高, 同组培养 72h 后人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高 (P <0 05, 见表 2) 2 3 不同浓度 5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较培养 h 后, 不同浓度 5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较, 差异有统计学意义 (P<0 05); 其中 50 0 mg/l5 FU 人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高, 同组培养 72 h 后人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高 (P<0 05, 见表 3) 2 4 不同浓度黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较培养 h 后, 不同浓度黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较, 差异有统计学意义 (P<0 05); 其中 4 0g/ml 黄芪 +8 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高, 同组培养 72h 后人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高 (P<0 05, 见表 4) 2 5 不同浓度黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较培养 h 后, 不同浓度黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较, 差异有统计学意义 (P<0 05); 其中 4 0g/ml 黄芪 +8 0μg/ml 丹参酮 ⅡA+50 0mg/L5 FU 人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高, 同组培养 72h 后人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率最高 (P <0 05, 见表 5) 2 6 不同用药组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较培养 72h 后, 选取各用药组最高浓度组进行比较, 不同用药组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较, 差异有统计学意义 (P< 0 05); 其中黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率较黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组升高, 差异有统计学意义 (P<0 05); 黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率较黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组升高, 差异有统计学意义 (P<0 05, 见表 6) 2 7 不同用药组人宫颈癌 HeLa 细胞凋亡率比较培养 72h 后, 选取各用药组最高浓度组进行比较, 不同用药组人宫颈癌 HeLa 细胞凋亡率比较, 差异有统计学意义 (P<0 05); 其中黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞凋亡率较黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组升高, 差异有统计学意义 (P<0 05, 见表 7) 2 8 不同组 MDA 水平及 SOD GSH 活力比较培养 72h 后, 选取各组最高浓度组进行比较, 不同组 MDA 水平及 GSH 活力比较, 差异无统计学意义 (P>0 05); 不同组 SOD 活力比较, 差异有统计学意义 (P<0 05); 其中黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组 SOD 活力较对照组降低, 差异有统计学意义 (P<0 05, 见表 8) 表 2 不同浓度丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较 Table2 丹参酮 ⅡA (μg/ml) inhibition rate in tanshinone Ⅱ A group among diferent ± ±1 87 e 17 23±2 22 ef < ±0 64 a 25 28±3 11 ae 37 64±4 21 aef < ±1 38 ab 31 04±3 69 abe 43 96±5 94 abef < ±1 53 abc 46 66±5 82 abce 55 37±6 74 abcef < ±3 00 abcd 56 42±5 81 abcde 59 53±6 88 abcdef F 值注 : 与 0 5μg/ml 丹参酮 ⅡA 比较, a P<0 05; 与 1 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 比较, b P<0 05; 与 2 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 比较, c P<0 05; 与 4 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 比较, d P<0 05; 与同组培养 24h 后比较, e P< 0 05; 与同组培养 48h 后比较, f P<0 05 表 1 不同浓度黄芪组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较 Table1 黄芪 (g/ml) inhibition rate in astragalus group among diferent ± ±0 87 e 17 23±1 68 ef < ±0 42 a 15 64±1 44 ae 24 27±3 27 aef 62 46< ±2 05 ab 25 79±1 98 abe 31 75±5 22 abef ±2 78 abc 31 42±4 03 abce 39 37±3 77 abcef ±1 96 abcd 47 23±3 39 abcde 55 45±4 93 abcdef 42 83<0 001 F 值注 : 与 0 1g/ml 黄芪比较, a P<0 05; 与 0 5g/ml 黄芪比较, b P< 0 05; 与 1 0g/ml 黄芪比较, c P<0 05; 与 2 0g/ml 黄芪比较, d P< 0 05; 与同组培养 24h 后比较, e P<0 05; 与同组培养 48h 后比较, f P <0 05 表 3 不同浓度 5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较 Table3 5 FU (mg/l) inhibition rate in 5 FU group among diferent ± ±2 96 e 15 16±2 45 ef ±0 65 a 18 64±2 33 ae 29 45±4 98 aef 35 66< ±2 11 ab 23 74±1 98 abe 30 98±4 51 abef ±1 85 abc 25 49±3 65 abce 36 47±4 10 abcef ±3 65 abcd 42 83±4 58 abcde 56 89±6 87 abcdef F 值注 :5 FU=5- 氟尿嘧啶 ; 与 3 5mg/L5 FU 比较, a P<0 05; 与 7 0mg/L5 FU 比较, b P<0 05; 与 12 5mg/L5 FU 比较, c P<0 05; 与 25 0mg/L5 FU 比较, d P<0 05; 与同组培养 24h 后比较, e P<0 05; 与同组培养 48h 后比较, f P<0 05

4 1084 htp: //www chinagp net E mail:zgqkyx@chinagp net cn 表 4 不同浓度黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较 Table4 ComparisonofhumancervicalcarcinomaHeLacelgrowthinhibitionrateinastragalus+tanshinoneⅡAgroupamongdiferent 黄芪 + 丹参酮 ⅡA 0 1g/ml+0 5μg/ml 6 16± ±1 48 e 17 67±1 85 ef < g/ml+1 0μg/ml 7 29±0 85 a 23 74±2 63 a 40 36±4 58 aef < g/ml+2 0μg/ml 17 01±2 35 ab 32 53±3 39 abe 54 32±5 63 abef < g/ml+4 0μg/ml 25 58±3 65 abc 46 41±5 85 abce 61 35±7 23 abcef < g/ml+8 0μg/ml 39 38±4 21 abcd 59 27±5 47 abcde 66 47±6 66 abcdef F 值注 : 与 0 1g/ml 黄芪 +0 5μg/ml 丹参酮 ⅡA 比较, a P<0 05; 与 0 5g/ml 黄芪 +1 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 比较, b P<0 05; 与 1 0g/ml 黄芪 +2 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 组比较, c P<0 05; 与 2 0g/ml 黄芪 +4 0μg/ml 丹参酮 ⅡA 比较, d P<0 05; 与同组培养 24h 后比较, e P<0 05; 与同组培养 48h 后比较, f P<0 05 Table5 表 5 不同浓度黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较 ComparisonofhumancervicalcarcinomaHeLacelgrowthinhibitionratein astragalus+tanshinoneⅡ A +5 FU group amongdiferent 黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 0 1g/ml+0 5μg/ml+ 3 5mg/L 7 35± ±1 65 e 18 68± 2 25 ef < g/ml+1 0μg/ml+ 7 0mg/L 5 34±0 58 a 25 58±3 84 ae 46 29± 5 98 aef < g/ml+2 0μg/ml+12 5mg/L 17 69±4 21 ab 35 87±4 25 abe 57 35± 7 65 abef < g/ml+4 0μg/ml+25 0mg/L 28 36±3 65 abc 42 67±5 66 abce 65 58± 8 29 abcef < g/ml+8 0μg/ml+50 0mg/L 41 64±5 96 abcd 67 43±9 55 abcde 82 85±10 55 abcdef F 值注 : 与 0 1g/ml 黄芪 +0 5μg/ml 丹参酮 ⅡA+3 5mg/L5 FU 比较, a P<0 05; 与 0 5g/ml 黄芪 +1 0μg/ml 丹参酮 ⅡA+7 0mg/L5 FU 比较, b P<0 05; 与 1 0g/ml 黄芪 +2 0μg/ml 丹参酮 ⅡA+12 5mg/L5 FU 比较, c P<0 05; 与 2 0g/ml 黄芪 +4 0μg/ml 丹参酮 ⅡA+25 0mg/L 5 FU 比较, d P<0 05; 与同组培养 24h 后比较, e P<0 05; 与同组培养 48h 后比较, f P< 讨论临床上, 黄芪常被单独或组成方剂用于各种中晚期肿瘤患者的治疗, 如十全大补汤补中益气汤等 [6] 黄芪具有抗炎免疫调节抗氧化抑制肿瘤生长抗病毒等作用, 同时具有保护心肌肝脏等重要脏器的作用, 是新药及食品保健研究的热点之一 [9-10] 丹参酮 ⅡA 是一种低毒抗瘤谱广的表 6 不同用药组人宫颈癌 HeLa 细胞生长抑制率比较 (x±s,%, n=3) Table6 inhibitionrateamongdiferentdruggroups 组别生长抑制率黄芪组 55 45± 4 93 丹参酮 ⅡA 组 59 53± FU 组 56 89± 6 87 黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组 66 47± 6 66 abc 黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组 82 85±10 55 abcd F 值 6 90 P 值注 : 与黄芪组比较, a P<0 05; 与丹参酮 ⅡA 组比较, b P<0 05; 与 5 FU 组比较, c P<0 05; 与黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组比较, d P<0 05 中药单体, 已证实其对多种肿瘤具有杀伤作用 [4] 黄芪与丹参酮 ⅡA 联合应用治疗宫颈癌疗效是否优于单药以及其作用机制的研究, 对治疗宫颈癌和黄芪与丹参酮 ⅡA 的进一步开发利用具有十分重要的价值本研究发现, 黄芪丹参酮 ⅡA 对人宫颈癌 HeLa 细胞具有明显的抑制作用, 且黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组人宫颈癌 HeLa 细表 7 不同用药组人宫颈癌 HeLa 细胞凋亡率比较 Table7 ComparisonofhumancervicalcarcinomaHeLacelapoptosisrate amongdiferentdruggroups 组别细胞凋亡率黄芪组 46 74±3 34 丹参酮 ⅡA 组 54 59± FU 组 49 07±5 36 黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组 55 84±4 85 黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组 65 92±8 88 abcd F 值 4 46 P 值注 : 与黄芪组比较, a P<0 05; 与丹参酮 ⅡA 组比较, b P<0 05; 与 5 FU 组比较, c P<0 05; 与黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组比较, d P<0 05

5 1085 表 8 不同组 MDA 水平及 SOD GSH 活力比较 (x±s,n=3) Table8 ComparisonofMDAlevelandtheactivityofSODandGSHamong diferentgroups 组别 MDA(nmol/ml) SOD(nU/mg) GSH(nU/mg) 对照组 0 55± ± ±1 04 黄芪组 0 59± ±0 40 a 12 4±1 61 丹参酮 ⅡA 组 0 60± ±1 77 a 12 69± FU 组 0 67± ±0 58 a 11 89±1 27 黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组 0 69± ±0 75 a 10 44±1 61 黄芪 + 丹参酮 Ⅱ A+5 FU 组 0 74± ±1 11 a 10 01±0 17 F 值 P 值 < 注 :MDA= 丙二醛,SOD= 超氧化物歧化酶,GSH= 谷胱甘肽 ; 与对照组比较, a P<0 05 胞抑制率高于黄芪组丹参酮 ⅡA 5 FU 组, 同时本实验还证实, 黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组人宫颈癌 HeLa 细胞抑制率高于黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组及黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组表明黄芪丹参酮 ⅡA 联合应用在抑制人宫颈癌 HeLa 细胞增殖方面效果优于两药单用, 除本身对肿瘤细胞的增殖有抑制作用外, 还能对化疗药物有增敏作用 [11] 许多诱导剂能抑制肿瘤细胞生长诱导其分化, 作用机制主要是通过抑制细胞原癌基因表达诱导抑癌基因表达, 抑制细胞进入 S 期及 DNA 合成 [12] 本研究提示, 黄芪丹参酮 Ⅱ A 5 FU 联合应用于人宫颈癌 HeLa 细胞后, 诱导细胞凋亡的作用显著提高, 与前期研究结果一致 [13] SOD 在抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡的过程中发挥重要的作用 [14],SOD 亦可通过多种途径激活自噬 [15] 生理情况下,SOD 的产生和清除保持动态平衡, 如果 SOD 产生超过了清除的能力, 就会破坏生物膜磷脂中的不饱和脂肪酸产生过量的 MDA, 损伤细胞的正常结构和功能 [16] 黄芪和丹参酮 ⅡA 能够保护机体细胞减轻氧化应激损伤, 本研究结果表明, 黄芪组丹参酮 ⅡA 组 5 FU 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA 组黄芪 + 丹参酮 ⅡA+5 FU 组 SOD 活力较对照组降低, 加剧活性氧对肿瘤细胞的破坏, 但该作用与时间药物浓度的关系仍需要深入探索黄芪和丹参是我国传统中药, 药理作用机制明确, 不良反应小, 二者联合应用于宫颈癌的治疗和作为辅助化疗药物国内外迄今还未见报道, 本研究为二者联合治疗肿瘤的临床应用提供实验依据作者贡献 : 田亚萍进行实验设计与实施资料收集整理撰写论文成文并对文章负责 ; 田亚萍王园园进行实验实施评估资料收集 ; 迟宝荣进行质量控制及审校参考文献本文无利益冲突 [1]OwrangiAM,PrisciandaroJI,SolimanA,etal Magneticresonance imaging- guided brachytherapy forcervicalcancer: initiating a program [J]. J Contemp Brachytherapy, 2015, 7 (5): [2] WangX,FengY,WangN,etal Chinesemedicinesinducecel death:themolecularandcelularmechanismsforcancertherapy[j]. BiomedResInt,2014,2014: [3]HuB,WangSS,DuQ TraditionalChinesemedicineforprevention andtreatmentofhepatocarcinoma:frombenchtobedside[j].world JHepatol,2015,7(9): [4]ZhangY,JiangP,YeM,etal Tanshinones:sources,pharmacokinetics andanti-canceractivities[j].intjmolsci,2012,13(10): [5] 王茂林, 陈世益, 李云霞, 等黄芪皂甙和丹参酮 ⅡA 注射液对大鼠骨骼肌钝挫伤后氧化应激的影响 [J]. 中国运动医学杂志, 2011,30(2): [6] 李敏州, 高彦彬自拟黄芪生脉散治疗糖尿病冠心病 29 例临床观察 [J]. 疑难病杂志,2010,09(9): [7] 沈隽, 王照艳, 张晓, 等丹参酮 ⅡA 对 HeLa 宫颈癌细胞凋亡的影响 [J]. 中国药房,2007,18(27): [8] GengLM,HanFQ,TianJB, etal Efectsofthecombinationof Dansheninjection and Huangqiinjection on the cardic patients hemorheologyandejectionfraction[j].chinesegeneralpractice, 2004,7(7):455,458 (inchinese) 耿立梅, 韩凤芹, 田金彪, 等丹参液与黄芪液合用对冠心病患者血液流变学及射血分数的影响 [J]. 中国全科医学,2004,7 (7):455,458 [9] 王晓莉, 苏志红, 李妍芹, 等黄芪对体外培养人宫颈癌 Hela 细胞的抑制作用 [J]. 西北国防医学杂志,2010,31(4): [10] ShanGZ,YeXT Clinicalobservationofastraglauspolysaccharide combinedwithchemotherapyin84casesofpatientswithadvanced cancer[j]. Chinese JournalofClinicalOncology, 2007, 34 (6): (inchinese) 山广志, 叶兴涛注射用黄芪多糖联合化疗治疗 84 例晚期恶性肿瘤临床疗效观察 [J]. 中国肿瘤临床,2007,34(6): [11] 王冬, 田亚平, 姜英雁, 等丹参酮 ⅡA 抑制 Hela 细胞生长及诱导凋亡的体外实验研究 [J]. 中国现代医学杂志,2007,17 (6): [12] FuhrmanCB,KilgoreJ,LaCoursiereYD,etal Radiosensitization ofcervicalcancercelsvia double- strand DNA break repair inhibition[j].gynecoloncol,2008,110(1):93-98 [13] 王冬, 田亚平, 姜英雁, 等丹参酮 ⅡA 与 5 FU 抑制 HeLa 细胞生长及诱导细胞凋亡的研究 [J]. 中国现代医学杂志,2008, 18(22): [14]GuhaP,DeyA,SenR,etal IntracelularGSHdepletiontriggered mitochondrialbaxtranslocationtoaccomplishresveratrol-induced apoptosisintheu937celline[j].jpharmacolexpthen,2011, 336(1): [15] 纪元, 龙建纲, 刘健康自噬发生中的 ROS 调节机制 [J]. 中国生物化学与分子生物学报,2014,30(4): [16] 李宏林, 王炜, 杜英自拟活血通脉灵对心肌缺血大鼠 SOD 活性和 MDA 含量的影响 [J], 疑难病杂志, 2012, 11 (4):277 ( 收稿日期 : ; 修回日期 : ) ( 本文编辑 : 陈素芳 )

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中国科学技术大学材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程吉林大学应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程四川大学制药 045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学