复旦学报 医学版 年 月 &, $!$#!$-&# "! #& " $ "" #$!### &!6 # 7&#!,-,"& # # # $ (" ( #$ ) # # # #$& * #"#" #0#"# *#" 0 # ) # " & "# *# # "# & > # ) # " & # # #$

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1 复旦学报 医学版 连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效 包 晨 周 霞 冯娜娜 李 静 宋元林 白春学 杨 冬 周 建 复旦大学附属中山医院呼吸科 上海 复旦大学附属华山医院呼吸科 上海 摘要 目的 评价连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效 方法 将 只 级 * 小鼠随机分为对照组 模型组 地塞米松组 连花高剂量组 连花低剂量组 每组 只 采用卵清白蛋白 氢氧化铝致敏 并雾化激发复制小鼠支气管哮喘模型 给药组于每次激发前 给药 共计 次 采用特殊气道阻力值评估气道高反应性 肺组织 染色及肺泡灌洗液 "!!! " %* 细胞分类计数评价各组小鼠气道炎症性改变 * 法和磁性 7 分析法检测 * 和血清中 ) 的表达 结果 地塞米松组和连花高剂量组能显著降低气道阻力 地塞米松组和连花高 低剂量组 * 中的各类炎性细胞数量和 的表达均明显减少 血清 的表达在地塞米松组明显降低 但在连花高 低剂量组中没有变化 各组小鼠 * 和血清中 和 ) 的表达没有统计学差异 结论 连花定喘片可缓解哮喘症状 可能与其降低 - 型细胞因子 的含量 从而减轻气道炎症有关 关键词 连花定喘片 支气管哮喘 气道高反应性 细胞因子 地塞米松 中图分类号 ( 文献标识码 * ## &! "#" $# " " # # " * )0 ) % )0 * 7 *)0!% $ % $ $#% $ % )! $*$ % $#, $ $ % $!% $ % )! $*$ % $#, $ " " (" -!& &! $!$#!$-&#"! #& ) " &* " "!&!!&"!!%"!$!,*%"!$ 7&#!%"!$%!# $!%"!$!!# $!%"!$ - " # #&% &,*$ # "!7 &! #& ##& &! " $" &" & & #!"% $" " ##&#(## &! & " $ "" #$!###" &!"% # " #"* % &7 " # &! && #!)"*" " ##&#%&" #%"!$ %!# $!%"!$ #! &!"# * &"%"!$%!# $!%"!$!!# $! %"!$ # "! " # %"!$ - " #!#%& % #& #!)!%&!# %"!$# * ##$!$#!$ -&# %&"& #$&! #! #& "% &%& " &! 北京市科委 十病十药专项 国家自然科学基金 高等学校博士学科点专项科研基金 科技部国家重点研发计划!"" #$!%&!"!

2 复旦学报 医学版 年 月 &, $!$#!$-&# "! #& " $ "" #$!### &!6 # 7&#!,-,"& # # # $ (" ( #$ ) # # # #$& * #"#" #0#"# *#" 0 # ) # " & "# *# # "# & > # ) # " & # # #$& 0* 支气管哮喘是一种由嗜酸性粒细胞 肥大细胞 - 淋巴细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症性疾病 具有可逆性气流受限的特点 在哮喘病理生理过程中 -- 细胞比例失衡 尤其是 - 细胞过度增殖活化 分泌细胞因子过多是引起气道炎 症的主要原因之一 目前 中医药治疗哮喘在临床上取得了一定进展 一些研究证明中西医结合治疗控制气道炎症的作用优于单独使用激素或常规西 药治疗 连花定喘片是一种纯中药制剂 其主要成分为麻黄 白果 桑白皮等 具有宣肺降气平喘 清热化痰通络之功效 本文拟通过建立哮喘小鼠模型 观察连花定喘片和地塞米松对哮喘小鼠外周血和支气管肺泡灌洗液 "!!! " % * 中各类炎性细胞以及 - 型细胞因子 - 型细胞因子 ) 的影响 以评价连花定喘片的治疗效果 材料和方法 实验动物及分组 健康 * 小鼠 级 雄性 周龄 购于上海斯莱克实验动物有限责任公司 生产许可证号 沪 随机分为 组 对照组 模型组 地塞米松组 连花高剂量组 连花低剂量组 主要药物和试剂 连花定喘片 批号 * 北京以岭药业股份有限公司 注射用地塞米松磷酸钠 批号 马鞍山丰原制药有限公司 卵清白蛋白 五级 氢氧化铝 乙酰甲胆碱均购于美国 % 公司 小鼠 ) * 试剂盒均购于美国 ( 公司 磁性 7 分析仪购于美国 -!!% # 公司 戊巴比妥钠购于德国默克公司 主要仪器 压缩式雾化器 型号 *0 * 德国飞利浦公司 无创式动物肺功能检测分析仪 型号!& - )* 美国 7! 公 司 全自动五分类动物血细胞分析仪 型号 "! & 7 美国 公司 低温高速离心机 型号 ( 德国 $$!" 公司 高通量多元生物医学应用软件 *#& 美国密理博公司 动物模型复制 哮喘模型的复制根据 等的方法进行改进 于实验第 天 除对照组给予 : 生理盐水外 其余各组小鼠均以新鲜配置的卵白蛋白!,* 致敏液 %,* % 氢氧化铝溶于 生理盐水 作腹腔注射 于实验第 天开始 将小鼠置于自制雾化箱 内 用超声雾化器雾化 :,* 生理盐水溶液 对照组予生理盐水雾化 每天 次 连续 天 以激发哮喘 给药方法 给药组从实验第 天开始于每次雾化激发前 给药 连续 天 连花高 低剂量组分别按 %6% 生药 体质量 药物含量煎成水溶液后灌胃 分别相当于临床成人用量的 倍 地塞米松组按 %6% 体质量左下腹腹腔注射给药 对照组和模型组给予生理盐水作对照处理 气道反应性检测 最后一次激发后 用 7! 肺功能分析仪进行无创气道反应性检测 以 不同浓度的乙酰甲胆碱溶液 % 进行支气管激发 观察不同浓度乙酰甲胆碱激发下其气道阻力参数特殊气道阻力值 #$" " ##&#( 值的变化 取材 腹腔注射 : 戊巴比妥钠 %6% 麻醉 眼球取血 于 9 下 % 离心 分离血清于 9 保存 取血后开胸 气管插管并固定 使用 注射器以无菌 行双肺肺泡灌洗 回收率 : * 进行细胞五分类计数后 于 9 下 % 离心 取上清于 9 冻存 留取肺组织 未灌洗过的肺组织放入缓冲中性 : 甲醛溶液 固定 后常规石蜡包埋切片 肺组织 染色 用于镜下观察肺内支气管损伤以及支气管 肺组织炎性

3 ! 包! 晨#等?连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效!!" 细胞浸润情况#其余肺组织于," W 冻存 指标检测! 运用 :K L,B 方法测定血清和 OBK! 中的LK %& LK #&& LA! 的水平#严格按照试剂盒说明 书操作#全自动酶标仪在 %"%; 处检测各孔的吸光 度值运用磁性 K"; % U- 分析法检测血清和 OBK! 中LK %& LK #&& LA! L IK:0E* 高 的 水 平#并 用 *LKK 通量多元生物医学应用软件进行分析 统计学方法! 应 用,I,,!"? "统计软件分析, 处理数据计量资料以 G07 表示#两组计量资料比 较采用独立样本, 检验 " 为差异有统计学 意义 结!!! 果 各组 小 鼠 气 道 反 应 性 的 情 况! 与 对 照 组 比 较# 模 型 组 值 随 着 乙 酰 甲 胆 碱 浓 度 的 不 断 增 加#在浓度为 (?!& #!? 和!;7(;K 时#差异有统 计学意义! "#图 #" 与 模 型 组 比 较#地 塞 米 松组和连花高剂量 组 气 道 阻 力 有 明 显 改 善#在 药 物 浓度为 #!? 和! ;7(;K 时#差 异 有 统 计 学 意 义! "#图 #"$连花低剂量组气道阻力稍有改 善# 但差异无统计学意义 %$ <;$7% > $ %#-#"" 6$ $ < % <7 "6$ O%!!Q 7?B% QDB7 "6$%C:0 7 "6$C%N # 0 (6:( 7 "6$:%KS 79 # 0 "6? (6:(7 图 O! 各组小鼠肺组织 T& 染色 H ; 6 0 =6 = * ) 9 : 6 *=F 6O!T&!! 各组小鼠 ^#UH 中炎性细胞计数的情况! 与对 照组 比 较#模 型 组 OBK! 中 白 细 胞 总 数&嗜 酸 性 细 胞&中性粒细胞&淋 巴 细 胞 计 数 均 显 著 增 高#差 异 有 统计学意义! "#图 &" 与 模 型 组 比 较#地 塞 米松 组 OBK! 中 的 白 细 胞 总 数&嗜 酸 性 细 胞&中 性 粒细胞&淋巴细胞计数均明显减少#差异有统计学意 义! "#图 &"$连 花 高 剂 量 组 也 能 显 著 抑 制 白 细胞总数&嗜酸性 粒 细 胞&淋 巴 细 胞 水 平#差 异 有 统 计学意义! "#图 &"#但 对 中 性 粒 细 胞 水 平 的 抑制不明 显 连 花 低 剂 量 组 炎 性 细 胞 数 量 稍 有 降 低#差异无统计学意义 各组 小 鼠 ^#UH 中 NU R% NU %I% N"H $的水平 模型组 OBK! 中 LK #& 的 表 达 显 著 高 于 对 照 组#差 异有 统 计 学 意 义! > $"? "#图 %"$地 塞 米 松 组 OBK! 中 LK #& 的 表 达 较 模 型 组 明 显 降 低#差 异 有 统计学 意 义! > $"? "#图 %" 连 花 高&低 剂 量 组 OBK! 中LK #& 的 表 达 较 模 型 组 明 显 降 低# :KL,B 法检测显示连花低 剂 量 组 差 异 有 统 计 学 意 义#磁 性! #" 7F % <7 "6# "$!!"C 7F QDB 7 "6# "?!! C 图 %! 各组小鼠气道反应性的变化 H * ; D; < 6%!B-;6 F* ) 9 : 6 *=F!! 各组小鼠肺组织 T& 染色! 对照组 小鼠 肺组织 N: 染色可见 支 气 管 和 肺 泡 结 构 清 晰#黏 膜 无 明 显 K"; %U- 法检测显 示 连 花 高 剂 量 组 差 异 有 统 计 学 意义! > $"? "#图 %"LK % 和 LA! 在各组间 OBK! 中的 表 达 差 异 无 统 计 学 意 义:KL,B 法 和 磁性 K"; %U- 两种检测方法所得结果较为一致 各组 小 鼠 血 清 中 NU R% NU %I% N"H $的水平! 模型组血清 中 LK #& 的 表 达 显 著 高 于 对 照 组#差 异 破坏及炎性细胞浸润的表现模型组小鼠支气管壁 有统计学意义! "#图 "$地 塞 米 松 组 血 清 中 LK #& 的表达 较 模 型 组 明 显 降 低#差 异 有 统 计 学 意 周围有较明显的炎性细胞浸润#平滑肌层增厚#管腔 义! "#图 "$连花高&低剂量组均不能抑制血 内上皮结构破 坏#管 腔 内 可 见 脱 落 的 上 皮 细 胞 地 塞米松组和连花高&低 剂 量 组 小 鼠 支 气 管 周 围 炎 性 清中LK #& 的表达LK % 和LA! 在各组间血清中 的 表 达 差 异 无 统 计 学 意 义 :KL,B 法 和 磁 性 细胞浸润明显减轻!图!" K"; %U- 两种检测方法所得结果较一致

4 复旦学报 医学版 年 月 %!&"! %"!$ %,*%"!$ 图 各组小鼠 70 中炎性细胞的比较 0 $ # "& # 70 # #" $ * & *&% &7 %!&"! %"!$ %,* %"!$ 图 各组小鼠 70 中细胞因子的比较 0 $*&" - ## 70 # #" $

5 包 晨 等 连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效 * & *&% &7 %!&"! %"!$ %,* %"!$ 图 各组小鼠血清中细胞因子的比较 0 $ *&" - ## # #" $ 讨 论 支气管哮喘是一种以可逆性气流受限 嗜酸性粒细胞和 - 型细胞因子浸润 气道高反应性和气 道重塑为特征的气道慢性炎症性疾病 众多研究表明 体内 -- 比例失调是引起哮喘发生的主要原因 在哮喘发病过程中 - 细胞功能亢进 - 细胞功能降低 - 细胞主要分泌 ) 介导 型免疫反应 - 细胞主要分泌 刺激 型免疫反应 是 细胞的生长因子 作用在 淋巴细胞上可刺激 淋巴细胞产生 % 还可通过 细胞对 - 细胞的抗原提呈作用 促进 % 介导体液免疫应答 从而诱发支气管哮 喘 可通过募集和激活炎性细胞而介导嗜酸性粒细胞的聚集 还可促进 % 的产生 抑制 - 细胞的分化 诱导其向 - 细胞分化 此外 还可增加气道高反应性 促进支气管内黏液的分泌和细胞外基质的合成 增强气道平滑肌细胞的收缩力 从而参与气道炎症和气道重塑的过 程 ) 不仅能够调节嗜酸性粒细胞活化和 募集 下调嗜酸粒细胞趋化因子受体的表达 还能抑制 % 的生成 此外 ) 作为 ) 合成酶的主要诱导剂 在 ) 抑制平滑肌细胞增殖的过程中具有 重要作用 实验结果显示 哮喘模型组 * 和血清中 水平显著高于对照组 且 * 中白细胞总数 嗜酸性细胞 中性粒细胞 淋巴细胞计数明显增高且伴有气道高反应性 病理结果也显示哮喘模型组小鼠气道黏膜水肿 支气管壁增厚等病理改变 提示 与气道炎症和气道重塑有关 但是本实验中各组小鼠 * 和血清中 和 ) 的差异无统计学意义 临床治疗哮喘的主要原则是控制和消除气道炎症 糖皮质激素具有较强的抗变态反应 能够有效控制炎症而抑制哮喘的发作 实验发现 地塞米松治疗能明显缓解哮喘模型组小鼠气道高反应性 降低 * 中各类炎性细胞总数 抑制 * 和血清中 水平 能够较好地控制哮喘气道炎症 均 连花高 低剂量组小鼠 * 中的 水平也较哮喘模型组显著降低 均 给予高剂量连花定喘片治疗 能够明显抑制 * 中各类炎性细胞数量 降低气道高反应性 均 较

6 复旦学报 医学版 年 月 低剂量连花定喘片效果更优 但差异无统计学意义 在临床上 部分哮喘患者常规吸入糖皮质激素 治疗无效 且高剂量吸入激素的安全性也令人担 忧 可增加条件致病菌感染的患病率 连花定喘片主要成分为麻黄 白果 桑白皮等 药理研究发现其可抑制变态反应 肥大细胞脱颗粒等 发挥对支气管哮喘的防治作用 综上所述 连花定喘片与地塞米松作用相当 可缓解小鼠哮喘症状 可能与其降低哮喘小鼠 水平 减轻气道炎症有关 连花定喘片作为一种中药制剂 不良反应少 安全性好 值得推广 参 考 文 献 0 *)) - # # &"% &#!" & "$ & & " &!"% "! #&& #$ 麻向伟 吴颜昆 李增辉 中药联合激素治疗小儿哮喘疗效分析 四川中医 赵坤 李静 王书玲 中药配合半剂量与全剂量激素吸入控制儿童哮喘的临床对照研究 中华中医药杂志 张素华 小青龙汤联合西药治疗支气管哮喘急性发作期随机平行对照研究 实用中医内科杂志 )*)0 0$" ##$ #!" &!!#& &$ * *0(** &!"# &!$&!%##! "% #& -$ -!$ *, - $ &!#& $" # &!#& # &-!$,( )0 (( -* *)0 - $ & #!&"! 7$" ##! &!$! &!!#!$ #! & & # #& 0& (0*( - $ & $ & &!## # #,$-$ % ) ) *)0 7 (*)- & "6 # & " 7 " # % " &#&$$ # % -!$ *-(* * &&!! & "6 $%& #%&" "% " &!0$% % 诸留珍 黄杰 葛蕾 等 哮喘儿童 培养上清中 变化及其与嗜酸细胞计数 % 关系探讨 临床儿科杂志 王正东 姚汉清 闵凌峰 等 白介素 受体 在哮喘小鼠肺组织细胞内表达与气道重塑的关系 中华肺部疾病杂志 电子版 -(()( * ( ( $"! & &" "&!! " # )* &&!! &!#& %#& ""! )&"!7 # &# ),$& #$ % - (, - ) ) )&#! & "$& &!&!# #& $&!!% "% " # #0-!$ 郝敏 林江涛 糖皮质激素抵抗性支气管哮喘诊治进展 中华结核和呼吸杂志 李陶 李静超 亓倩 等 地塞米松增强烟曲霉孢子侵袭力的研究 中华医院感染学杂志 收稿日期 编辑 王蔚

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