第 37 卷第 4 期刘露, 等 : 松乳菇多糖 (LDG A) 对 S180 荷瘤小鼠生理生化指标的影响 381 研究所仪器设备 AY 220 电子天平 ( 日本岛津制作所 ) UV 9100 紫外可见分光光度计 ( 北京瑞利 ) Force1418 高速离心机 (Labnet) O

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昀左萧
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1 第 37 卷 Vol 37 第 4 期 No 4 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) JournalofChinaWestNormalUniversity(NaturalSciences) 2016 年 12 月 Dec.2016 文章编号 : (2016) 松乳菇多糖 (LDG A) 对 S180 荷瘤小鼠生理生化指标的影响刘露, 宋波, 赵大群, 许婷, 丁祥, 侯怡铃 ( 西华师范大学 a. 生命科学学院 ;b. 西南野生动植物资源保护教育部重点实验室, 四川南充 ) 摘要 : 本研究主要观察松乳菇多糖 (LDG A) 对 S180 荷瘤小鼠生理生化指标的影响, 以进一步了解松乳菇多糖 (LDG A) 是否有毒副作用实验选取 S180 荷瘤小鼠眼球动脉血用于生化指标测定, 并对这些指标进行生物学功能分析结果表明各实验组小鼠生理生化指标均有不同程度变化生物学功能分析结果提示松乳菇多糖 LDG A 对小鼠的肝脏无毒副作用, 且能缓解 S180 荷瘤小鼠的肝脏损害, 同时松乳菇多糖 LDG A 不影响小鼠的脂肪代谢途径以上研究结果为多糖类抗肿瘤药物的筛选提供了科学依据关键词 : 松乳菇 ; 多糖 ;S180 荷瘤小鼠 ; 生理生化指标中图分类号 :Q539;Q594 文献标志码 :A DOI: /j.issn 多糖 (polysaccharide) 又称多聚糖, 是由 10 个以上的单糖聚合而成的生物大分子物质近年来, 食用菌多糖因具有抑 [1 3] 制肿瘤作用而备受关注而食用菌多糖的高级结构有无侧链以及连接方式均与药理作用有关, 所以在我们的前期图 1 松乳菇多糖 (LDG A) 的结构研究中, 从松乳菇 [4] (Lactarius deliciosus(l.exfr.)gray) 中纯化得到了水溶性的松乳菇多糖 (LDG A) 单体, 运用光谱学技术解析了其结构 ( 图 1), 结果显示其为一种结构新颖的多糖 (LDG A) 该多糖是由两个单糖组成的杂多糖, 即 α L 甘露糖和 α D 木糖以 3 1 的比例组成, 平均分子量约为 110kD, 具有 (1 6)α L 甘露糖的骨架,2 O 上连接一个 3) α D 木糖的侧链, 且松乳菇多糖 (LDG A) 能够显著抑制移植性肿瘤 S180 的生长 [5], 在 28mg/kg 的剂量下, [6] 抑瘤率高达 68.51% 本文拟探究松乳菇多糖(LDG A) 对 S180 荷瘤小鼠生理生化指标的影响, 探寻其有无毒性作用, 以期寻找为多糖类抗肿瘤药物的筛选提供科学依据 1 材料与方法 1.1 材料动物昆明系小鼠 30 只, 体重 (30±3)g, 均购于四川南充川北医学院动物实验中心药品松乳菇多糖 (LDG A) 来自本实验室, 按照参考文献的方法制备各种生化试剂购自南京建成生物工程收稿日期 : 作者简介 : 刘露 (1992 ), 女, 四川平武人, 硕士研究生, 主要从事微生物学研究通信作者 : 侯怡铃 (1983 ), 女, 四川南充人, 博士, 教授, 硕士生导师, 主要从事生物化学与分子生物学研究 E mail:starthlh@126.com

2 第 37 卷第 4 期刘露, 等 : 松乳菇多糖 (LDG A) 对 S180 荷瘤小鼠生理生化指标的影响 381 研究所仪器设备 AY 220 电子天平 ( 日本岛津制作所 ) UV 9100 紫外可见分光光度计 ( 北京瑞利 ) Force1418 高速离心机 (Labnet) OLYMPUS 光学显微镜 (JAPAN) XF9080 动物血液细胞分析仪 ( 南京普朗医用设备有限公司 ) L 3280 生化半自动分析仪 ( 上海科学实验仪器系统有限公司 ) 1.2 方法试验动物分组 30 只昆明系小鼠随机分为实验组和空白对照组, 实验组为皮下接种移植性肿瘤 S180, 分为对照组和腹腔注射松乳菇多糖 (LDG A) 组, 剂量为 28mg/kg; 空白对照组为正常小鼠实验周期为 7d, 实验期间动物自由采食自由饮水血样的采集腹腔注射 7 天后, 分别采血, 采血前空腹 12h 尾静脉采血用于血液常规指标测定, 眼球动脉采血用于生化指标测定 [7] 生理生化指标测定采用 L 3280 半自动生化分析仪按照试剂盒说明书进行参考值为空白对照组的正常小鼠, 并由测试系统输入为默认标准参考值数据统计方法所有数据均以平均值 ± 标准差表示, 应用 SPSS13.0 软件进行方差分析,P<0.05 为差异显著,P<0.01 为差异极显著 2 结果与分析 2.1 松乳菇多糖 LDG A 对肝脏的影响肌酐 [8] (creatinine,cre) 是人体肌肉的代谢产物, 主要通过肾小球排出体外, 当肾损伤后将导致肌酐在体内蓄积损害机体健康而血清肌酐浓度会受到肾小球的滤过能力 ( 肾小球滤过率 ) 的影响滤过能力下降, 则肌酐浓度升高通常肾小球滤过率下降到机体 1/3 时, 血肌酐会明显上升实验结果如表 1 显示, 皮下接种肿瘤 S180 后小鼠的肌酐值增加明显, 但腹腔注射 LDG A 之后, 小鼠的肌酐值相对于对照组下降极显著 (P<0.01) 提示松乳菇多糖 LDG A 可以降低 S180 肿瘤导致的机体肌酐的聚集, 减少肿瘤诱导的机体损害 [9] 血清中的胆红素包括直接胆红素和间接胆红素, 直接胆红素会在肝内经过葡萄糖醛酸化, 间接胆红素不会在肝内经过葡萄糖醛酸化结果显示 ( 表 1), 松乳菇多糖 LDG A 能减小总胆红素的量, 但值得注意的是直接胆红素增加显著, 提示间接胆红素大量的转变成的直接胆红素, 可能与小鼠体内糖代谢变化相关 [10] 尿素为含氨的化学物质, 产生于蛋白质和氨基酸的分解代谢过程, 尿素在肝脏中产生后融入血液, 最后通过肾脏由尿排出注射 S180 肿瘤之后的小鼠的尿素值相对于参考值增加极显著 (P<0.01), 提示肝脏损害, 腹腔注射松乳菇多糖 LDG A 后, 尿素值下降显著, 提示肝脏损害情况有所好转表 1 LDG A 对小鼠肝脏影响的数据结果组别肌酐 CRE/(μmol L -1 ) 总胆红素 T Bil/(μmol L -1 ) 直接胆红素 D Bil/(μmol L -1 ) 尿素 LREA/(mmol L -1 ) 对照组 34.10± ± ± ±0.71 LDG A 组 10.99±0.88 ## -0.08±0.02 # 5 00 # 4.73±0.59 ## 参考值

3 382 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) 2016 年 2.2 松乳菇多糖 LDG A 对酶学指标的影响 [11 12] 肝功能的酶学指标主要包括丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 碱性磷酸酶 (ALP) 谷氨酰转移酶 (γ GT) 目前国内外应用最广泛的反映肝细胞损害的指标是 ALT 和 AST, 各种肝病均可引起 ALT 的升高 ; 肝细胞合成分泌碱性磷酸酶 ALP, 胆管内压增高使肝脏合成增多, 胆道排泄障碍也可使血液中 ALP 增高血液中的 γ GT 主要在肝细胞线粒体产生实验结果如表 2 显示, 接种 S180 肿瘤后的小鼠, 丙氨酸氨基转移酶, 天冬氨酸氨基转移酶, 碱性磷酸酶和谷氨酰转移酶均显著增加, 提示 S180 荷瘤小鼠肝脏有所损害, 但腹腔注射 28mg/kg 松乳菇多糖 LDG A 的小鼠, 各项酶学指标均显著下降, 提示肝脏损害有所缓解表 2 LDG A 对小鼠酶学指标的数据结果组别丙氨酸氨基转移酶 ALT/(U L -1 ) 天冬氨酸氨基转移酶 AST/(U L -1 ) 碱性磷酸酶 ALP/(U L -1 ) 谷氨酰转移酶 (γ GT)/(U L -1 ) 对照组 ± ± ± ±0.28 LDG A 组 29.17±1.33 ## ±75.41 ## 16.88±7.21 ## -0.14±0.06 ## 参考值松乳菇多糖 LDG A 对蛋白质代谢的影响总蛋白 [13] TotalProtein( 简称 TP) 由白蛋白和球蛋白组成, 一般正常小鼠的总蛋白在 60~80g/L 之间, 若超出这个范围, 说明小鼠肝脏有一定的受损总蛋白偏高导致腹泻呕吐休克高热大量出汗, 严重的还会导致多发性骨髓瘤, 巨球蛋白血症等实验结果如表 3 显示, 荷瘤小鼠对照组的总蛋白含量与参考值相比具有极显著差异 (P<0.01), 注射 LDG A 后, 荷瘤小鼠实验组的总蛋白含量与参考值相比无明显差异, 提示总蛋白含量回归正常值白蛋白 [14] ( 又称清蛋白,albumin,Alb) 是血浆中含量最多的蛋白质 ; 白蛋白具有较强的亲水作用, 这使血浆中的白蛋白对球蛋白起到一种胶体保护的稳定作用荷瘤小鼠对照组的白蛋白含量与参考值相比增加极显著 (P<0.01), 注射 LDG A 的实验组小鼠的白蛋白值相对于对照组下降极显著 (P<0.01) 提示白蛋白代谢出现较大变化, 具体分子机制还有待于进一步研究球蛋白 [15] (Globulin) 是一种在机体中常见的具有免疫作用血清蛋白荷瘤小鼠对照组的球蛋白含量相对于参考值无明显变化,LDG A 组的球蛋白与对照组相比增加显著 (P<0.05) 提示腹腔注射松乳菇多糖 LDG A 后, 小鼠的免疫系统受到调控这可能与松乳菇多糖 LDG A 显示出较强的抗肿瘤活性相关表 3 LDG A 对小鼠蛋白质代谢数据结果组别总蛋白 TP/(g L -1 ) 白蛋白 ALB/(g L -1 ) 球蛋白 GLO/(g L -1 ) 白球比 A/G/(U L -1 ) 对照组 39.37± ± ± ±0.49 LDG A 组 29.45±9.81 # -0.11±0.01 ## 33.88±10.22 # ## -0.02±0.01 参考值注 : 为与参考值比较 P<0.05,# 为与对照组比较 P<0.05, 为与参考值比较 P< 0.01,## 为与对照组比较 P< 松乳菇多糖 LDG A 对血脂血糖的影响肝脏是维持血糖平衡的重要器官当肝脏受损后, 参与代谢的多种酶活性降低, 肝糖原合成减少, 肝及周围组织摄取和氧化糖的能力下降, 导致血液中的葡萄糖升高我们的实验结果如表 4 显示, 荷瘤小鼠对照组的葡萄糖含量相对于参考值增加极显著 (P<0.01), 而注射 LDG A 后的实验组葡萄糖含量相对于对照组下降极显著 (P<0.01) 该结果与前述直接胆红素增加相关总胆固醇 (totalcholesterol,tcho), 是血液中所有脂蛋白所含胆固醇之和总胆固醇主要由肝脏合成和储存, 包括游离胆固醇和胆固醇脂胆固醇还能合成肾上腺皮质激素性激素胆汁酸及维生素 D 等生理活

4 第 37 卷第 4 期刘露, 等 : 松乳菇多糖 (LDG A) 对 S180 荷瘤小鼠生理生化指标的影响 383 性物质荷瘤小鼠对照组的总胆固醇含量与参考值相比增加不明显, 而注射 LDG A 之后的实验组的总胆固醇也在正常值范围之内甘油三酯 (Triglyceride,TG) 是三分子长链脂肪酸和甘油形成的可提供能量的脂肪分子甘油三酯是机体内含量最多的脂类, 甘油三酯也可在肝脏和脂肪等组织合成荷瘤小鼠对照组与注射 LDG A 的实验组无明显变化综上结果提示松乳菇多糖 LDG A 并不影响小鼠的脂肪代谢途径表 4 LDG A 对小鼠血脂血糖的数据结果组别葡萄糖 Glu/(mmol L -1 ) 总胆固醇 TC/(mmol L -1 ) 甘油三酯 TG/(mmol L -1 ) 对照组 3.43± ± ±1.65 LDG A 组 -0.16±0.01 ## 2.22± ±0.71 参考值讨论 [16] 目前治疗恶性肿瘤的方式主要是手术, 放疗和化疗放射治疗指通过射线消除病灶的一种局部治疗方法, 会损害白细胞导致全身功能紊乱和失调 ; 化学药物治疗是一种全身治疗的手段, 到组织免疫功能下降近年来, 从天然产物中寻找抗肿瘤的活性成分成为主要的研究热点真菌多糖对肿瘤细胞有直接的细胞毒活性 [17 18], 在体外可以杀死癌细胞, 而对正常细胞无杀伤作用, 这是真菌多糖与其他细胞毒性抗肿瘤药物相比具有优势的地方之一肝脏是人体最大腺体, 是构成网状内皮系统的重要组成部分, 也是免疫的重要器官, 它虽然不直接产生抗体, 但有大量巨噬细胞能在免疫调节发挥重要作用本实验通过对荷瘤小鼠注射 LDG A 后测定生理生化指标, 表明松乳菇多糖 LDG A 对小鼠的肝脏无毒副作用, 且能缓解 S180 荷瘤小鼠的肝脏损害, 同时松乳菇多糖 LDG A 不影响小鼠的脂肪代谢途径参考文献 : [1] 曹磊. 四种真菌多糖抗氧化和抗肿瘤及免疫调节活性的研究 [D]. 河南 : 郑州大学,2010. [2] 李建军. 灵芝多糖免疫调节作用与抗肿瘤作用的关系及作用机制的研究 [D]. 广东 : 第一军医大学,2007. [3] 陈美珍, 余杰, 廖灶辉, 等. 龙须菜多糖抑瘤活性及对荷瘤小鼠抗氧化作用的研究 [J]. 中国海洋药物,2008,27(2): [4] DINGX,HOUYL,HOUW R.Structurefeatureandantitumoractivityofanovelpolysaccharideisolatedfrom lactariusdelicio susgray[j].carbohydrpolymers,2012,89(2): [5] 陈杨琼, 丁祥, 伍春莲, 等. 松乳菇多糖抗肿瘤和免疫调节活性研究 [J]. 食用菌学报,2012,19(3): [6] 刘化侠, 魏寅翼, 李蕾, 等. 酶育牛黄对肉瘤 S180 荷瘤小鼠的抑瘤作用及机制 [J]. 山东医药,2016,56(6): [7] 王强, 唐飞, 钟顺隆, 等. 大熊猫血液生理生化指标测定 [J]. 兽类学报,1998,18(4): [8] 宦红娣, 王艳, 张军力. 肝硬化中的急性肾损伤 : 现行定义及诊断标准 [J]. 肝脏,2014(3): [9] 范杰, 高卫国, 赵素斌.2 型糖尿病合并冠心病患者血清中胆红素和尿酸水平的变化 [J]. 陕西医学杂志,2007,36 (12): [10] 黄燕, 魏红霞, 钱留军. 无症状肝功酶学指标异常的系统观察及在健康状况评估中的价值 [J]. 中医临床研究,2016,8 (5): [11] 吴文峰, 宁雪, 尧永华. 右美托咪定预处理对大鼠肝脏缺血再灌注后急性肾损伤的影响 [J]. 中国医药导报,2014,11 (3): [12] 向建洲, 李文平, 彭涛, 等. 黄芪多糖对大白鼠血液生理生化指标的影响 [J]. 湖南畜牧兽医,2008(6): [13] 杨树. 脂多糖对奶山羊肝脏葡萄糖及脂肪酸代谢的影响 [D]. 河南 : 河南农业大学,2014. [14] 张秀屏, 王文灏. 血清前白蛋白和白蛋白检测在肝脏疾病中的敏感性分析 [J]. 内蒙古医学杂志,2012,44(12):

5 384 西华师范大学学报 ( 自然科学版 ) 2016 年 [15] 刘宁, 刘静, 肖军. 肝脏疾病患者免疫球蛋白及补体的诊断意义 [J]. 中国卫生检验杂志,2011,5: [16] 刘树铮. 恶性肿瘤放射治疗的新思考 [J]. 中国实验诊断学,2001,5(3): [17] 丁红梅. 红曲多糖抑瘤作用初步研究 [J]. 菌物研究,2007,5(3): [18] 卢玉振, 李祥, 周磊. 灵芝多糖的抑瘤作用及对小鼠免疫系统影响的实验研究 [J]. 河北医学,2016,22(2): EfectofPolysaccharides(LDG A)from Lactariusdeliciosus(L.exFr.)Grayon PhysiologicalandBiochemicalIndexesofMiceBearingS180Tumor LIULu,SONGBo,ZHAODaqun,XUTing,DINGXiang,HOUYiling (a.colegeoflifescience,b.keylaboratoryofsouthwestchinawildliferesourcesconservation (ChinaWestNormalUniversity),MinistryofEducation,NanchongSichuan637009,China) Abstract:ThisstudywasmainlytoobservetheefectofLDG A onthephysiologicalandbiochemicalindexesof micebearings180tumor,soastofurtherstudywhetherthepolysaccharide(ldg A)istoxicandhassideefects. TheoculararterybloodofmicebearingS180tumorwasselectedforbiochemicalindicatorsanalysis,andthebiologi calfunctionoftheseindexeswasanalyzed.theresultsshowedthatthephysiologicalandbiochemicalindexesinal theexperimentalgroupswerechangedindiferentdegrees.thebiologicalfunctionanalysissuggestedthatthepoly saccharideofldg Awasnottoxictotheliversofthemiceandcouldaleviatetheliverdamageofmicebearing S180tumor,andatthesametime,thefatmetabolismofthemicewasnotafected.Theaboveresultsprovideasci entificbasisforthescreeningofantitumordrugs. Keywords:Lactariusdeliciosus(L.exFr.)Gray;polysaccharide;S180tumorbearingmice;physiologicalandbio chemicalindex

证券代码：证券简称：迪瑞医疗公告编号：

证券代码：证券简称：迪瑞医疗公告编号：证券代码 :300396 证券简称 : 迪瑞医疗公告编号 :2017-033 迪瑞医疗科技股份有限公司关于公司部分医疗器械产品完成延续注册的公告本公司及董事会全体成员保证信息披露的内容真实准确完整, 没有虚假记载误导性陈述或重大遗漏迪瑞医疗科技股份有限公司 ( 以下简称公司 ) 于近日取得由吉林省食品药品监督管理局颁发的 52 项医疗器械注册证, 具体情况如下 : 序号产品名称

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