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1 76G84 1/2018 DOI: /j.issn.1001G G0190 草业科学 PRATACULTURALSCIENCE 第 35 卷第 1 期 Vol.35,No.1 尚校兰, 李宏宇, 杨伊婷, 梁菁菁. 化学法和生物法制备巨菌草腐植酸的比较. 草业科学,2018,35(1):76G84. ShangXL,LiHongY,YangYT,LiangJJ.ComparisonofchemicalandbiologicalmethodstomeasurehumicacidcontentinPennG isetum sp.prataculturalscience,2018,35(1):76g84. 化学法和生物法制备巨菌草腐植酸的比较 尚校兰, 李宏宇, 杨伊婷, 梁菁菁 ( 廊坊师范学院生命科学学院, 河北廊坊 ) 摘要 : 对化学方法和生物方法制备巨菌草 (Pennisetum sp.) 腐植酸和黄腐酸进行分析比较. 结果表明, 硝酸 盐酸 乙酸 草酸 氨水均能降解纤维素 半纤维素或木质素从而生产腐植酸和黄腐酸, 其中 10.0% 氨水提取巨菌草得到的腐植酸含量最高, 其次为 37.5% 硝酸和 37.5% 盐酸, 草酸和乙酸提取得到的腐植酸含量最低. 枯草芽孢杆菌 (BacilussubG tilis) 毛霉 (Mucor) 根霉 (Rhizopus) 青霉 (Penicilium) 在巨菌草腐殖质的形成中均起到了积极作用, 其中根霉对木质素的降解程度最高, 生成总腐植酸的含量最高. 根霉发酵制备得到的总腐植酸含量是 10.0% 氨水提取得到的总腐植酸含量的 1.45 倍, 毛霉发酵制备得到的总腐植酸含量是 10.0% 氨水提取得到的总腐植酸含量的 1.29 倍, 而枯草芽孢杆菌和青霉发酵制备得到的总腐植酸含量比 10% 氨水提取得到的总腐植酸含量低.37.5% 硝酸提取得到的黄腐酸含量是毛霉发酵制备得到的黄腐酸含量的 1.79 倍,22.5% 盐酸提取得到的黄腐酸含量是毛霉发酵制备得到的黄腐酸含量的 1.98 倍. 综上可知, 生物发酵法制备得到的总腐植酸含量比化学法提取得到的总腐植酸含量要高, 而化学方法提取得到的黄腐酸含量比生物发酵法制备得到的黄腐酸含量要高. 关键词 : 巨菌草 ; 腐植酸 ; 黄腐酸 ; 纤维素 ; 半纤维素 ; 木质素 ; 发酵中图分类号 :S 文献标志码 :A 文章编号 :1001G0629(2018)01G0076G09 Comparisonofchemicalandbiologicalmethodsto measurehumicacidcontentinpennisetum sp. ShangXiaoGlan,LiHongGyu,YangYiGting,LiangJingGjing (DevelopmentandApplicationResearchonEdibleand MmedicinalMushroom ResourcesofHebeiProvince, ColegeofLifeScience,LangfangTeachersColege,Langfang065000,Hebei,China) Abstract:ThehumicandfulvicacidsinPennisetum sp.werecomparedwithchemicalandbiologicalmethods. Celulose,hemicelulose,andligninweredegradedtoproducehumicacidandfulvicacidwithnitricacid,hyG drochloricacid,aceticacid,oxalicacid,andammonia.thehumicacidcontentwasthehighestwhenusing 10.0% ammonia,folowedby37.5% nitricacidand37.5% hydrochloricacid,whileoxalicacidandaceticacid werethelowest.bacilussubtilis,mucor,rhizopus,andpenicilium playedapositiveroleintheformation ofhumicandfulvicacids.thedegradationdegreeofligninwasthehighestwhenusingrhizopus.thetotalhug micacidcontentswere1.45and1.29timesthatof10.0% ammoniaunderrhizopusandmucorfermentation, respectively,whilethetotalhumicacidcontentswerelessthan10.0% ammoniaunderbothb.subtilisand Penicilium fermentation.thecontentoffulvicacidusing37.5% nitricacidwas1.79timesthatofmucorferg mentation,andthecontentoffulvicacidusing22.5% hydrochloricacidwas1.98timesthatofmucorfermentag tion. Keywords:Pennisetum sp.;humicacid;fulvicacid;celulose;hemicelulose;lignin;fermentation Correspondingauthor:ShangXiaoGlan EGmail:iris381@163.com 收稿日期 :2017G04G14 接受日期 :2017G06G09 基金项目 : 廊坊师范学院博士基金项目 (LSLB201602); 河北省高校食药用菌应用技术研发中心 (YF201411) 通信作者 : 尚校兰 (1985G), 女, 河北大城人, 讲师, 博士, 研究方向为肉制品与水产品加工.EGmail:iris381@163.com

2 第 1 期尚校兰等 : 化学法和生物法制备巨菌草腐植酸的比较 77 腐植酸 (humicacid,ha) 是由动植物残体经过 微生物的分解和合成以及地球化学的一系列过程形成 的由芳香族及其多种官能团构成的天然有机高分子聚 合物 [1]. 按照颜色和分子量不同, 腐植酸可以分为黑 腐酸 棕腐酸和黄腐酸 [2], 其中黄腐酸的某些生物活性 高于其他组分的腐植酸, 在工业 农业 环保 医药 食 品等方面有广泛的应用 [3G5]. 腐植酸的形成有 6 种学说, 糖胺缩合学说 多酚学 说 起源于木质素的多酚学说 木质素学说 细胞自溶 学说 微生物合成学说 [6]. 原生腐植酸属于不可再生 资源, 因此寻找其他腐植酸的来源成了可持续发展战 略的迫切需求, 于是生化腐植酸应运而生. 目前, 生化 腐植酸主要由秸秆 蔗渣 木屑等工农业废弃物通过化 [7] 学方法或生物发酵方法提取. 吕品等利用硝酸 乙 酸提取了稻草中的腐植酸, 腐植酸含量分别增加了 19.29% 和 17.23%, 黄腐酸含量分别增加了 32.91% 和 22.89%;Plácido 和 Capareda [8] 利用浓度分别为 2.5% 5.0% 和 10.0% 的 KMnO4 H2SO4 NaOH 于 50 24h 和 倍大气压 1h 处理棉花 (GosG sypium spp.) 废弃物制备黄腐酸, 发现低温常压长时 下, 各处理的黄腐酸含量从大到小依次为 2.5% NaOH 处理 10.0% NaOH 处理 5.0% NaOH 处理 10.0% H2SO4 处理 5.0% H2SO4 处理 2.5% H2SO4 处理 ; 高温高压短时下, 黄腐酸含量从大到小依次为 10.0% KMnO4 处理 5.0% KMnO4 处理 2.5% NaOH 处理 5.0% NaOH 处理 2.5% KMnO4 处理 [9] 10.0% NaOH 处理 2.5% H2SO4 处理. 曹均等利 [10] 用玉米 (Zea mays) 秸秆发酵制备腐植酸 ; 姜爱莉 利用锯末 玉米面和棉籽油进行发酵, 得到产物使用 3.5% NaOH, 于 60 下浸提 1.5h, 黄腐酸的产率可 达 46.9%. 巨菌草 (Pennisetum sp.), 隶属被子植物门单子 叶植物纲禾本科狼尾草属. 属于多年生植物, 直立丛 生, 植株高大, 株高一般为 3~5m, 最高可达 8 m. 利 用巨菌草制备生化腐植酸的研究尚未见报道. 本研究 以巨菌草为原料, 利用巨菌草纤维素 木质素含量高的 特点, 通过化学方法及生物发酵方法制备其本身并不含 有的生化腐植酸, 为巨菌草资源化 产业化开辟新途径. 1 材料与方法 1.1 材料 巨菌草由福建农林大学引种, 于廊坊师范学院种 植后采收烘干. 枯草芽孢杆菌 (Bacilussubtilis) 毛霉 (Mucor) 根霉 (Rhizopus) 青霉 (Penicilium ) 由廊坊师范学院微生物实验室提供. 分析用试剂均为国产分析纯. 1.2 仪器与设备马弗炉 (YHGG9039A, 上海姚式仪器设备厂 ); 恒温培养箱 (YMJG250F, 上海姚式仪器设备厂 ); 高压灭菌锅 (YXG350Z, 上海三申医疗器械有限公司 ); 离心机 (TDG10K, 上海卢湘仪离心机仪器有限公司 ). 1.3 方法 巨菌草处理 1) 化学方法处理巨菌草巨菌草粉碎烘干后, 分别加入 90mL 不同浓度的乙酸 (10.0% 20.0% 30.0% 40.0% 50.0% 60.0% 70.0% 80.0% 90.0% 100.0%) 草酸 (2.5% 5.0% 7.5% 10.0% 12.5%) 盐酸 (7.5% 15.0% 22.5% 30.0% 37.5%) 硝酸 (12.5% 25.0% 37.5% 50.0% 62.5%) 和氨水 (5.0% 10.0% 15.0% 20.0% 25.0%), 以蒸馏水为对照, 加入反应液后在室温下搅拌均匀后, 放入 70 水浴中反应 30min, 取出试样在 80 下烘干, 分别测定试样的纤维素 半纤维素 木质素 总腐植酸 黄腐酸的含量. 2) 发酵方法处理巨菌草称取 15g 粉碎的巨菌草加入 90mL 蒸馏水摇晃均匀, 灭菌. 将培养成熟的毛霉 根霉 青霉 枯草芽孢杆菌分别接种到巨菌草溶液中培养, 其中毛霉 根霉 青霉巨菌草溶液放入 26 培养箱中摇床发酵, 发酵周期 30d; 枯草芽孢杆菌巨菌草溶液放入 33 培养箱中摇床发酵, 发酵周期 30d. 取出培养好的巨菌草灭菌, 烘干 指标测定纤维素 半纤维素 木质素含量测 [11] 定采用中性洗涤纤维法测定 ; 总腐植酸和黄腐酸的 [12] 测定采用容量法 数据处理采用 SPSS16.0 软件对所测数据统计分析,n=3, 用平均值和标准误表示测定结果, 分别对不同浓度化学试剂处理 不同发酵时间处理的巨菌草进行单因素方差分析 ; 并用 Tukey sgb 法对各测定数据进行多重比较. 采用 Excel2010 制图. 2 结果 2.1 化学法制备巨菌草腐植酸的含量硝酸提取有利于总腐植酸和黄腐酸的溶出 ( 图 1). 与对照相比,12.5% 25.0% 37.5% 50.0%

3 78 草业科学第 35 卷 62.5% 的硝酸使巨菌草中总腐植酸和黄腐酸均显著升高 (P<0.05), 其中 37.5% 和 62.5% 硝酸能得到较高含量的黄腐酸,37.5% 的总腐植酸含量最高, 比对照提高了 2.86 倍. 与对照相比,37.5% 硝酸处理的巨菌草中纤维素含量无显著变化 (P >0.05), 半纤维素和木质素的含量显著下降 (P<0.05). 草酸提取有利于总腐植酸和黄腐酸的溶出 ( 图 2),2.5% 5.0% 和 10.0% 浓度的草酸提取未使黄腐酸含量发生显著变化 (P>0.05), 而 7.5% 和 12.5% 提取均使黄腐酸含量显著升高 (P<0.05).2.5% 和 12.5% 的草酸更有利于总腐植酸的溶出. 所有浓度的草酸均使纤维素和半纤维素的含量升高, 而木质素含量无显著变化 (P>0.05). 盐酸有利于总腐植酸和黄腐酸的溶出 ( 图 3), 7.5% 15.0% 22.5% 30.0% 37.5% 的盐酸会使黄腐酸和腐植酸含量显著升高 (P<0.05), 同时, 盐酸处理会使纤维素 木质素 半纤维素的含量下降. 乙酸处理对黄腐酸的溶出影响不大 ( 图 4), 但 10.0% 20.0% 40.0% 50.0% 60.0% 70.0% 乙酸处理有利于总腐植酸的溶出, 且 50.0% 乙酸处理具有最 图 1 不同浓度硝酸处理对巨菌草各成分的影响 Fig.1 EfectofdiferentnitricacidconcentrationsoncomponentsofPennisetum sp. 同一指标不同小写字母表示不同处理间差异显著 (P<0.05), 下同. Diferentlowercaseletersofthesameindexindicatesignificantdiferencesamongdiferenttreatmentgroupsatthe0.05level;similarlyforthefolG lowingfigures. 图 2 不同浓度草酸处理对巨菌草各成分的影响 Fig.2 EfectofdiferentoxalicacidconcentrationsoncomponentsofPennisetum sp.

4 第 1 期尚校兰等 : 化学法和生物法制备巨菌草腐植酸的比较 79 图 3 不同浓度盐酸处理对巨菌草各成分的影响 Fig.3 EfectofdiferenthydrochloricacidconcentrationsoncomponentsofPennisetum sp. 图 4 不同浓度乙酸处理对巨菌草各成分的影响 Fig.4 EfectofdiferentaceticacidconcentrationsoncomponentsofPennisetum sp. 优效果. 含量升高. 随着发酵时间的延长, 纤维素含量有所下 5.0% 10.0% 15.0% 20.0% 25.0% 的氨水处理 降 ( 图 6). 与对照相比,10 和 20d 发酵的巨菌草纤维 均有利于总腐植酸含量的提高 ( 图 5), 尤其是 10.0% 素含量下降但不显著 (P>0.05),30 和 60d 显著下降 氨水处理的巨菌草的总腐植酸含量得到了显著提高 (P<0.05); 半纤维素含量随发酵时间延长也有所下 (P<0.05),5.0% 10.0% 15.0% 的氨水处理后巨菌草 降, 与对照相比, d 发酵的巨菌草半纤维素 的黄腐酸含量得到显著提高 (P <0.05).10.0% 含量下降不显著 (P>0.05), 而 60d 表现为显著下降 15.0% 20.0% 氨水处理后, 木质素含量下降. (P<0.05); 木质素含量随发酵时间延长也有所下降, 综上所述,10.0% 氨水提取巨菌草得到的腐植酸 与对照相比, d 发酵的巨菌草木质素含量下 含量最高, 其次为 37.5% 硝酸和 37.5% 盐酸, 草酸和乙 降不显著 (P >0.05), 而 60d 表现为显著下降 (P < 酸提取得到的腐植酸最少. 0.05); 总腐植酸含量随发酵时间延长有所升高, 与对 2.2 生物法制备巨菌草腐植酸的含量 照相比,10d 发酵的巨菌草总腐植酸含量升高不显著 经过枯草芽孢杆菌发酵的巨菌草纤维素含量 半 (P>0.05), d 显著升高 (P <0.05); 黄腐酸 纤维素含量 木质素含量下降, 黄腐酸含量和总腐植酸 含量随发酵时间延长也有所升高, 和对照相比,10 20

5 80 草业科学第 35 卷 图 5 不同浓度氨水处理对巨菌草各成分的影响 Fig.5 EfectofdiferentammoniaconcentrationsoncomponentsofPennisetum sp. 图 6 枯草芽孢杆菌发酵对巨菌草各成分的影响 Fig.6 EfectoffermentationwithBacilussubtilisoncomponentsofPennisetum sp. d 发酵的巨菌草黄腐酸含量升高不显著 (P>0.05), 而 30 和 60d 显著升高 (P<0.05). 随着毛霉发酵时间的延长, 纤维素含量和半纤维素含量均不显著降低 (P>0.05)( 图 7); 木质素含量随发酵时间延长也有所下降, 与对照相比,10 20d 发酵的巨菌草木质素含量下降不显著 (P>0.05), 而 30 和 60 d 显著下降 (P<0.05); 总腐植酸含量随发酵时间延长有所升高, 与对照相比, d 均显著升高 (P<0.05); 黄腐酸含量随发酵时间延长也有所升高, 与对照相比,10d 发酵的巨菌草黄腐酸含量升高不显著 (P>0.05), 而 和 60d 显著升高 (P<0.05). 经过根霉发酵的巨菌草纤维素含量 半纤维素含 量 木质素含量下降, 黄腐酸含量和总腐植酸含量升高. 随着发酵时间的延长, 纤维素含量有所下降, 与对照相比,10 20 和 30d 发酵的巨菌草纤维素含量下降不显著 (P>0.05),60d 下降显著 (P<0.05)( 图 8); 半纤维素含量随发酵时间延长也有所下降, 与对照相比, d 发酵的巨菌草半纤维素含量下降不显著 (P>0.05), 而 60d 显著下降 (P<0.05); 木质素含量随发酵时间延长也有所下降, 与对照相比,10d 发酵的巨菌草木质素含量下降不显著 (P>0.05), 而 和 60d 显著下降 (P<0.05); 总腐植酸含量随发酵时间延长有所升高, 与对照相比, 和 60d 均显著升高 (P<0.05); 黄腐酸含量随发酵时间延长也有

6 第 1 期尚校兰等 : 化学法和生物法制备巨菌草腐植酸的比较 81 图 7 毛霉发酵对巨菌草各成分的影响 Fig.7 EfectoffermentationwithMucoroncomponentsofPennisetum sp. 所升高, 与对照相比,10d 发酵的巨菌草黄腐酸含量升高不显著 (P >0.05), 而 和 60d 显著升高 (P<0.05). 经过青霉发酵的巨菌草纤维素含量 半纤维素含量 木质素含量下降, 黄腐酸含量和总腐植酸含量升高. 随着发酵时间的延长, 纤维素含量 半纤维素含量和木质素含量均不显著降低 (P >0.05)( 图 9); 总腐植酸含量随发酵时间延长有所升高, 与对照相比,10d 发酵的巨菌草总腐植酸含量升高不显著 (P >0.05), d 显著升高 (P<0.05); 黄腐酸含量随发酵时间延长也有所升高, 与对照相比,10d 发酵的巨菌草黄腐酸含量升高不显著 (P>0.05), 而 和 60 d 显著升高 (P<0.05). 3 讨论与结论 [13] 鲁宇菡利用黑木耳菌糠发酵制备生化黄腐酸, 发现 0~1 mol L -1 的 NaOH 有利于生化黄腐酸的 [7] 溶出, 生化黄腐酸的含量最高可达 6%. 吕品等利 用硝酸 乙酸 草酸 盐酸 氨水提取稻草中的腐植酸, 发现这 5 种试剂提取后腐植酸的含量均显著升高 (P<0.05), 其中硝酸 > 乙酸 > 盐酸 > 氨水 > 草酸, 本 研究得到的结果不一致. 硝酸处理巨菌草后, 纤维素含量未发生显著变化 (P>0.05), 而半纤维素和木质素含量显著下降 (P< 图 8 根霉发酵对巨菌草各成分的影响 Fig.8 EfectoffermentationwithRhizopusoncomponentsofPennisetum sp.

7 82 草业科学第 35 卷 图 9 青霉发酵对巨菌草各成分的影响 Fig.9 EfectoffermentationwithPenicilium oncomponentsofpennisetum sp. 0.05), 总腐植酸和黄腐酸均显著升高 (P<0.05), 根据 瓦克斯曼学说 [14G15], 木质素是构成腐殖质的基本原料, 因此, 可以认为硝酸处理有利于半纤维素和木质素向 总腐植酸和黄腐酸转化. 盐酸处理的巨菌草和硝酸处 理类似, 也可以用瓦克斯曼的木质素转化学说来解释. 乙酸处理也有利于纤维素向总腐植酸转化.10.0% 15.0% 20.0% 的氨水处理也有利于木质素向黄腐酸 和总腐植酸转化. 草酸处理虽然有利于总腐植酸和黄 腐酸的溶出, 但是纤维素和半纤维素的含量同时升高, 而木质素含量无显著变化 (P >0.05), 因此不能用木 质素的转化学说来解释, 原因还需要进一步探讨. 多种微生物具有降解纤维素和半纤维素的能力, [16] 刘志坚等利用枯草芽孢杆菌发酵蔗渣制备腐植酸, 发现提高接种量和通气量, 延长发酵时间, 控制 37 发酵, 有利于提高腐植酸含量. 木霉和青霉等多种真 [17G18] [19] 菌也已被证明可降解纤维素. 杭怡琼等等通 过向培养基质 ( 稻草秸秆 +20% 棉籽壳 ) 接种侧耳真菌 菌株发现, 基质中木质素和纤维素含量在培养一段时 间后明显减少.Badis [20] 认为链霉菌菌株能在木质素 [21] 降解和腐殖质更新方面具有一定的作用. 侯勇利 用牛粪发酵秸秆, 发现随着发酵时间的延长, 纤维素 木质素及半纤维素含量下降, 而腐殖质的含量有所升 [22] 高.Kakezawa 等发现真菌可加快稻草秸秆的腐殖 化. 不同微生物在降解木质素 形成腐殖质中所扮演 的角色不同, 真菌在腐殖质形成中起关键作用, 而细 菌 放线菌起辅助作用 [23]. 本研究表明, 经过毛霉发 酵的巨菌草纤维素含量 半纤维素含量 木质素含量下 降, 黄腐酸含量和总腐植酸含量升高. 本研究中, 枯草芽孢杆菌 毛霉 根霉 青霉在巨菌 草腐殖质的形成中均起到了积极作用, 这和来航线 [24] 等的研究一致. 发酵法制备巨菌草的总腐植酸和 黄腐酸均是由纤维素 半纤维素和木质素的降解所 致 [25], 真菌可能在细胞内形成醌或其他芳香族化合 物, 在分泌到体外以及细胞自溶时很容易缩合 - 聚合 成腐殖质 [26]. 其中根霉对木质素的降解程度最高, 与 对照相比, 到发酵结束, 木质素降解了 2.54 倍, 这和 [27] Dümig 等的研究结果一致, 根霉发酵的巨菌草中总 腐植酸和黄腐酸含量最高, 和对照相比, 总腐植酸含量 提高了 5.26 倍, 黄腐酸含量提高了 0.71 倍. 青霉发酵 的巨菌草中总腐植酸含量和黄腐酸含量最低, 和空白 相比, 总腐植酸含量提高了 1.09 倍, 黄腐酸含量提高 了 0.32 倍. 与化学法相比, 根霉发酵制备得到的总腐植酸含 量是 10.0% 氨水提取得到的总腐植酸含量的 1.45 倍, 毛霉发酵制备得到的总腐植酸含量是 10.0% 氨水提取 得到的总腐植酸含量的 1.29 倍, 而枯草芽孢杆菌和青 霉发酵制备得到的总腐植酸含量比 10.0% 氨水提取得 到的总腐植酸含量低.37.5% 硝酸提取得到的黄腐酸 含量是毛霉发酵制备得到的黄腐酸含量的 1.79 倍, 22.5% 盐酸提取得到的黄腐酸含量是毛霉发酵制备得 到的黄腐酸含量的 1.98 倍. 化学法和生物发酵法均能提高巨菌草中腐植酸和 黄腐酸含量, 且都和巨菌草中纤维素 半纤维素或木质

8 第 1 期 尚校兰 等 : 化学法和生物法制备巨菌草腐植酸的比较 83 素的降解有关. 总体来说, 生物发酵法制备得到的总 而化学方法提取得到的黄腐酸含量比生物发酵法制备 腐植酸含量比化学法提取得到的总腐植酸含量要高, 得到的黄腐酸含量要高. 参考文献 References: [1] 呼吉亚, 红梅, 德海山, 王忠武, 韩国栋. 地形与放牧对土壤腐殖质组成成分的影响. 草业科学,2014,31(9):1603G1608. HuJY,HongM,DeHS,WangZ W,HanGD.Influenceofterrainandgrazingintensitiesonsoilhumuscomposition.PrataculG turalscience,2014,31(9):1603g1608.(inchinese) [2] TehranifarA,AmeriA.EfectofhumicacidonnutrientuptakeandphysiologicalcharacteristicsofFragariaananasavar.caG marosa.journalofbiological& EnvironmentalSciences,2012,6:77G79. [3] 张丽珍, 陈伟, 史静, 刘建荣, 王德宏, 陈本建. 腐殖酸钠对紫花苜蓿生长及生物量的影响. 草业科学,2016,33(1):101G109. ZhangLZ,Chen W,ShiJ,LiuJR,WangD H,ChenBJ.Efectsofsodiumhumateongrowthandbiomassofalfalfa.PrataculG turalscience,2016,33(1):101g109.(inchinese) [4] 杨永花, 廖伟彪, 汉梅兰, 王世新, 张建旗. 有机肥料对藤本月季生长及开花的影响. 草业科学,2014,31(8):1450G1454. YangY H,LiaoW B,HanM L,WangSX,ZhangJQ.Efectsoforganicfertilizersongrowthandflorescenceofclimbingrose. PrataculturalScience,2014,31(8):1450G1454.(inChinese) [5] ManasD,SoumyaG,KheyaliS.Efectofhumicacidapplicationonaccumulationofmineralnutritionandpungencyingarlic (Aliumsativum L.).InternationalJournalofBiotechnology & MolecularBiologyResearch,2014,5(2):7G12. [6] 王菊花. 微生物对土壤腐殖质形成及结构的影响研究. 长春 : 吉林农业大学硕士学位论文,2007. WangJH.Thestudyontheefectofmicroorganismintheformationandstructureofsoilhumus.MasterThesis.Changchun:JiG linagriculturaluniversity,2007.(inchinese) [7] 吕品, 于志民, 周琳. 稻草提取类腐植酸物质及其对水稻苗生长的影响. 国土与自然资源研究,2007(2):92G93. LyuP,YuZ M,ZhouL.ExtractHAandFAfromstrawandtheefectonriceseedlings.Territory& NaturalResourcesStudy, 2007(2):92G93.(inChinese) [8] PlácidoJ,CaparedaS.ProductionofsiliconcompoundsandfulvicacidsfromcotonwastesbiocharusingchemicaldepolymerG ization.industrialcrops& Products,2015,67:270G280. [9] 曹均, 林启美, 李旭, 赵小蓉, 李贵桐, 孙明德, 曹庆昌. 风化煤与玉米秸秆发酵过程中腐植酸及氮磷的变化. 腐植酸,2009(3): 18G23. CaoJ,LinQ M,LiX,ZhaoX R,LiG T,Sun M D,CaoQ C.Changesofhumicacid,NandPduringincubationofleonardite withmaizestraw.humicacid,2009(3):18g23.(inchinese) [10] 姜爱莉. 发酵制备黄腐酸的研究. 烟台大学学报,2000,13(3):205G209. JiangAL.Studyonfermentingpreparationoffulvicacid.JournalofYantaiUniversity,2000,13(3):205G209.(inChinese) [11] 张崇玉, 王保哲, 张桂国, 尹朋辉, 路绪明. 饲料中的粗纤维 NDF ADF 和 ADL 含量的快速测定方法. 山东畜牧兽医,2015, 36(9):20G22. ZhangCY,WangBZ,ZhangGG,YinPH,LuX M.Methodforrapiddeterminationofcrudefiber,NDF,ADFandADLconG tentinfeeds.shandonganimalhusbandryandveterinary Medicine,2015,36(9):20G22.(inChinese) [12] 北京市腐植酸分析方法会战小组. 腐植酸总量的测定. 北京师院学报,1975(S2):65G79. HumicAcidGroupofBeijing.Analysismethodofdeterminationoftotalhumicacid.JournalofBeijingTeachersColege,1975 (S2):65G79.(inChinese) [13] 鲁宇菡. 利用黑木耳菌糠制取生化黄腐酸及应用的研究. 延吉 : 延边大学硕士学位论文,2010. LuY H.Thestudyonapplicationandpreparationofbiochemicalfulvicacidwithfunguschafofauriculariaauricular.Master Thesis.Yanji:YanbianUniversity,2010.(inChinese) [14] 席北斗, 刘鸿亮, 白庆中, 黄国和, 曾光明, 李英军. 堆肥中纤维素和木质素的生物降解研究现状. 环境工程学报,2002,3(3): 19G23. XiBD,LiuHL,BaiQZ,HuangG H,ZengG M,LiYJ.StudyoncurrentstatusofligninandcelulosebiodegradationincomG

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