ωyeea 山油叫環境 及水質 取樣 實驗動物 ( 鼻氣管沖洗液 腸道內容物及重要臟器 ) 取樣 1. 培養於 B l oo d XLD M a c Co n k e Y 及 E M B 等培養基中 2. 初步鑑定 ( 染色及鏡檢 ) G 一 G+ 桿菌 球菌 F NF Rapid-NF 鑑定法 球

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1 藥試所毒理研究之 S P F 動物及相關設施 之微生物監測系統 :1. 細茵監測象統 蔡三福廖俊旺主 ) 1 頂成 前自 由於生命科學之研究拉術日益精進, 實驗動物被廣泛應用於各種學街研究 其中人類 及動物疾病的預防及治療, 化學品的使用均利用實驗動物研究以獲得相關效應和治療機制 的資訊, 並以評估其安全性和效果 因此如何獲得健康的動物, 以反應實驗的正確性, 是 實驗成功最主要步驟 針對此, 對一般實驗動物均需實施例行監測或針對 S PF ( 無特定 病原 : Specific Pathogen Free) 動物及其設施進行特殊監測 實驗動物及其設施健康監測中, 以微生物檢測最重要, 並以細菌診斷發展最述,1673 年為萌芽期 年 K o ch 發展使用固體培養基及 年 D i fco 設計粉狀培養基後, 細菌 的培養典鑑定變得較容易, 1970 年代初期細菌診斷發展快述, 其中電腦化鑑定及 1990 年說 快速細菌鑑定套組的應用及臨床細菌診斷的自動化細茵鑑定 ~ 統, 使細茵診斷進向一新紀元, 因而確保高品質動物及環境的存在 國內目前尚未建立完整對實驗動物的微生物監測血統, 張照夫等 ( ) 報告國內 4 所機構, 色括兩所動物中心的小鼠口腔 腸道 中耳道及上呼吸道, 可分離出 Pseudomonas aeruginosa 及 Yersinia pseudotube 何 ulosis 等病原細菌, 顯示圍內實騷動物之檢疫尚存重大缺失 細菌例行的監測項目, 需顧及正確性及快述性 本文主要敘述本所 SPF 動物房環境及實驗動物的細菌鑑定, 採用的傳統細菌鑑定法及各種快速細菌鑑定套 組 ~ 統組合, 配合本所實驗動物品系 ( 主要為大 小白鼠 ), 建立完整監測病原茵體章, 以達到無特定病房 實驗動物的標準, 以利各種毒理研究之進行 取樣與鑑定步驟 本所設計之流程乃依下列方法進行環境及實騷動物細茵監測, 各 ~ 統使用前, 先進行該茵純化及形態學的鑑定, 色括球商 桿茵及革蘭氏陰 陽性商及茵落在培養基上的顏色和大小 鑑定 : 定程主要包括兩種 ~ 統 : 傳統的生化培養鑑定法, 及快速鑑定套組 鑑定之初先行純化培養, 鑑定流程如圖 1.' 茲將就程各步驟說明如下 一 細菌鑑定之取祿 ( 一 ) 動物之採樣 1. 新購動物取樣 : 新購實驗動物經由無茵金送達時, 常以隨機取樣方法取 5 % 的動物或至少雌雄各 4 隻, 進行解剖 -5 一

2 ωyeea 山油叫環境 及水質 取樣 實驗動物 ( 鼻氣管沖洗液 腸道內容物及重要臟器 ) 取樣 1. 培養於 B l oo d XLD M a c Co n k e Y 及 E M B 等培養基中 2. 初步鑑定 ( 染色及鏡檢 ) G 一 G+ 桿菌 球菌 F NF Rapid-NF 鑑定法 球菌 GFB 一 12E 電腦密 1. Pseudomonas aeruginosa 碼細菌鑑定法 2. Bordetella bronchisepti 自 1. Salmonella spp. 2.Pasteurella pneumotropica 3. Yersinia pseudotuberculosis +AA-- nr.叫nh耽取mk有 鑑叫桿菌 叮航肌定分枝否 法無觸臨試驗 (Catalase test) T,,um 'K s4ιu ch er,i 圓 1. 蔓灣省農業藥物毒物試驗所 S PF 動物房細菌監測流程圓 (+ 表示陽性反應 ' G 一表革蘭氏陰性茵 ' G + 表革蘭氏陽性菌, F 表能睡酵葡萄時, NF 表不暗酵 ) 2. 試驗期間動物取樣 : (1) 每週從各飼育室取 5% 的動物, 收集每籠內糞材及飲水樣品, 進行細菌培養 (2) 每 13 迫, 各飼育室依試驗組別隨機取機, 至少雌雄各 4 隻, 進行解剖 3. 解剖過程 : 實驗動物以乙瞇麻醉後, 於無商操作臺上, 以仰臥方式周定於軟木板上, 先剪閒皮膚至下頓, 再剪闊腹腔, 以採血針插入腹部動脈後放血, 並剪閒胸膛, 取鼻氣管之沖洗波及腸道內容物, 進行細菌培養 的環境及水質之採樣 1. 環境取樣 : 利用無茵棉花棒沾取試管中之 TSB (Tryptic soy broth), 分別擦拭動物房的籠祭 操作臺 牆壁 門把手 地板及飼育盒, 再將棉花分別置入各試管中, 進行細茵培養 2. 水質取樣 : 各動物房水龍頭的水及逆滲透 (RO) 之一次蒸餾水, 分別取 O. 5m l, 置入內含 TSB 各試管中, 進行細菌培養 二 初步鑑定與培養 一 6 一

3 ) 培養基 1. 血液培養基 ( B l o o d agar) : 合 5 % 綿羊血之平板培養基 2.EMB 培養基 (Eosin methylene blue) : Difco 公司出品, 依商品標示, 稱好榜 確克數, 加入適量蒸餾水中, ph 調至 7.2 然後經加熱攪拌至完全溶解後, 於 C 滅茵 15 分鐘後, 冷卻至 50 C 倒平板 3.XLD 培養基 (Xylose-Lysine-Deoxycholate) : Difco 公司出品, 依商品標示, 稱適量 XLD 溶於適量的蒸餾水中, 然後加熱至近沸騰 ( 不經高壓減茵 ), 唯須完全溶解 經冷卻至 e {ilj 平板 4. MacConkey 培養基 : Difco 公司出品, 依商品標示, 稱好精確克數, 加入適量蒸餾水中, 經加熱攪拌溶解後, 於 e 滅茵 1 5 分鐘, 冷卻至 e 倒平板 的細菌培養 1. 利用 4ml 之 TSB 吸管沖洗鼻道, 將沖洗液宜於試管中培養 18'"'-'24 小時 (37 e), 再以接種環劃至血液培養基上 2. 取部份腸道的內容物, 於內含 TSB 之試管中培養的 '"'-'24 小時, 另取腸道內容物 接種於 Te t ra t h i n a t e broth S e l e n i te broth ( 量為 1 : 10) 中增茵 10'"'-'16 小時, 再以接種 環劃至 XLD EMB M a c C o n k ey 及血液培養基中培養 1 8 '"'-' 24 /J 峙 3. 取部份重要器官, 包括肺 肝 腎及腦, 進行組織臟器培養, 其它器官則於肉眼 病變時, 需一併進行培養 但 ) 革蘭氏染色 ( G r am ' s stain) 鑑定法 1. 於乾淨的玻片滴上一滴水, 用白金耳挑取微量細菌, 混合後做成直徑約 1 公分的 圓形區域, 再用火迅速烤幾秒鐘加以固定 2. 加適當的結晶紫弟劑 (Crystal violet) 染 1 分鐘後, 水洗 3. 覆蓋碘溶液 (Gram's iodine solution) 染 2 分鐘後, 水洗 4. 以脫, 色劑脫, 色, 至藍色液體不再流出為止, 約 10'"'-'15 秒後, 水洗 5. 最後加起接液, 染 3 0 秒 '"'-' 1 分鐘, 水洗 6. 以濾紙壓乾 ( 或烤乾 ), 鏡按記錄之 ( 附錄一 ) 7. 革蘭氏陽性茵呈藍紫色反應 ( 圖 2.), 陰性茵呈紅色反應 ( 圖 3. ) 三 GFB - 1 2E 電腦密碼細茵鑑定率統法 ( 鑑定對象 : 包括腸內桿茵 (enterobacteriaceae) 產氣草胞茵 (aeromonas) 類產氣單月色茵 ( p l e s i omon a s ) 弧茵屬 ( v ibrio) 巴氏桿茵屬 ( p a s teurell a) 放射 桿茵屬 ( ac t i n ob ac illu s ), 及其它葡萄糖躇酵性革蘭氏陰性桿菌 此法可監測的致病性 病房 體包括 : 沙門氏桿茵屬 ( Salmonella spp.) 致病性大腸桿菌 (Escherichia coli) 巴 斯德桿商 (Pas teurella pneumotropica) 及 Yersinia pseudo 的 be 何 ulosis 的鑑定用培義基及試驗 : 密碼鑑定法條依據 TS IA C IT U RE S I M VP O RN 等 6 種培養基共 11 種生化試驗, 外加氧化時 ( Ox i d as e ) 試驗 此 1 2 種生化試驗結果, 每 3 項編成 1 組, 計分成 4 組, 每一組的各項各有一個分數, 依序為 4 2 1, 該項呈陽 一 7 一

4 性反應則得該分數, 陰性則為零, 因此每一個被鑑定的細茵具有 4 個位數的密碼 ( 附錄二 1. Triple Sugar Iron Agar (TSIA) : 依指定的配方, 稱好精確重量, 加入蒸餾 水, 經水浴後, 分裝於 1 5 X 103 mm 試管中, 再經高壓滅茵後, 排成斜面 ( 注意斜面為基底長的一半 ), 將純化茵劃於斜面上並穿刺入基底的 1 / 2, 再置於一般 3 5,...,., 3 7 C 培接箱, 培養 1 8 '" 24 小時 2. Simmon's Citrate Agar (CIT) : 配製程序同 TS 尬, 唯需調整 ph 值 ( 根據配方 ) 後再經水浴, 菌種僅塗劃於斜面上 3. Christensen's Urea Agar (URE) : 程序同 C 汀, 唯 Urea Agar Base 不經高壓滅 菌, 調整 ph 值後, 過濾除菌, 依一定比例將 Agar 滅商後, 冷卻至 50 "' 5 5 C, 再將 U re a Agar Base 加入, 做成斜面 4. Sulfide-Indole-Motility Medium (SIM) : 配製程序同 TS IA, 唯僅做成垂直 面, 並將菌種穿刺入垂直面 1 / 2 5. Voges-Proskauer Medium (VP) : 配製程序同 TS IA, 唯 VP 為液體, 需接種 較大量的菌種 6. Moller's Ornithine Decarboxylase Medium (ORN) : 配製程序同 TS IA, 唯 ORN 為液體, 且其配方上除了 Basal Medium 外, 尚需加入一定比例 L( +)-ornithine' 使其佔總溶液的 1 % ' 此外調整 ph 值至 6. 0, 接種後, 再添加 5 滴的礦物油 ( M i nera l oil ' 需減茵 ) 7. 氧化時 (Oxidase) 試驗 : 此結果可在 5 "'10 秒內判讀, 因此可待 TSIA 培養後, 吊取其斜面的細菌, 塗抹在濾紙上, 再滴試劑 Ko v a cs 進行之 ( 司判讀及試劑配方 判讀方法如表 1.' 需加試 ~J 為 S IM VP 及 Oxi d a se 三部份 1. SIM : 按測是否產生 I PA (Indole pyruvic acid), 後再觀察細菌有無運動性 ( Motility), 最後滴入 Kova cs indol 試驗, 測定是否產生 Indole' 根據上述三項結果加以 宇廿貴 Kovacs indol 試劑之配方如下 : (l)pure amyl or isoamyl alcohol "150ml (2)ρ-dimethylaminobenzaldehyde "log (3) 濃 HCI ml 將 1 09 之 ( 2) 溶於 1 50ml 之 ( 1) 中, 後緩緩加入 5 0ml 之 ( 3 ), 配梨完成後於暗處放置, 隔在後使用, 平時身存於 4 C 冰箱中 2. VP: 先加入 12 滴 ( 的 0.6 m l) 的 VPl, 再加入 4 滴 ( 的 0. 2m l ) VP2 後, 輕搖管壁均勻混合, 靜宜 2 "' 5 分鐘後判讀結果 (l)vpl (5%α- Naphthol) : 5 g α- Naphthol 加入 100 ml 純酒精 (absolute alcohol) - 8 一

5 (2)VP2 (40% KOH) : 40g KOH 加入 100mI 蒸餾水 (D. W.) 3. Oxidase: 加入 2"-'3 滴 Kovacs oxidase 試劑於濾紙上, 5 "-' 10 秒內觀察反應. 結 果 Kovacs oxidase 試劑配方 : 取 1 克 tetramethyi-p-phenyienediaminedihydrochloride 加入 100ml 蒸餾水中 此試劑需以 Pseudomonas spp. 或 P. aeruginosa 做為陽性對照株 4. 判讀結呆詳見表 1. 表 1. GFB-12E 電腦密碼鑑定系統判讀依據 培養基生化試騎陽 ' 性反應現象陰,t 生反應頭, 學 AS 黃色 ( 斜面酸化 ) 紅色或不變色 TSIA AB 黃色 ( 基底酸化 ) 紅色或不變色 GAS 任何氣 i 色之產生或撕裂培養基無氣泡生成 H 2S 產生黑色沈激無黑色沈激 CIT CIT 深藍色青綠色 URE URE 粉紅色黃色 IND 加 K o v ac s indole 試劑 5 滴後, 在培養基上層呈紅色 不呈現, 紅色 ( 主銅色 ) SIM MOT 細菌生長擴散遠離接種緣 生長固定於接種線 IPA 黑色, 混濁, 培養基上棕禍色環不呈棕禍色環 Semi-VP VP 加入 V P l 及 VP 2 試劑後, 呈現紅 色 不呈現, 紅色 ( 呈銅色 ) ORN ORN 呈混濁及深紫色呈清激及淺黃綠色 OXI OXI 加入 K o v a c s oxidase 試劑後, 茵 落呈現藍色 無色或不變色 AS : Acid of slant ( 斜面酸化 ), AB : Acid of butt ( 基底敢化 ; AS,AB 均指利用時類之能力 ) 0 GAS: 指產生 CO 2 及 H 2 之能力 H 2S: 指產生 H 2S 之能力 CIT : 指細菌是否利 用 C i t r a te 為唯一破原 U RE : 指產生 U re a se 之能力 I N D : 指 I n d o le 產生之能力 MOT: 指兵運動性之能力 IPA: 指產生 Indole pyruvic acid 之能力 VP: 指產生 Acetoin 之能力 ORN: 指細菌是否具有 Decarboxylase0 OXI : 拈細茵是否具有 O x i d a s e - 9 一

6 ( 吋細菌判讀例證 : 如某一純化的細菌, 其試管培養生化反應, TSIA 為基底酸化, 有氣地及產生黑色沉波, SIM 呈運動性,ORN 呈混濁, 其餘均為陰性反應 ( 圓 4. 圍 5. ), 則計算其生化試掛結呆, 電腦密碼數為 , 經查電腦密碼哀, 可如此茵為沙門氏桿茵 (Salmonella choleraesuis) 四 R a p i d - NF 套組鑑定法 ) 鑑定對象 : 可鑑定葡萄睡非商發酵性革蘭氏陰性桿菌, 色括 Ps eudomo nas spp., Mo Yi 仰 ella spp., Acinetobacter spp., Bordetella spp. 芋, 應用於監測本所動物房之病原商, 如 Pseudomonas aeruginosa ( 假單胞茵 ) 及 Bordetella brochisφtica. 的鑑定步驟及原理 : Rapid-NF ~ 利用細菌預先存在細胞壁內的酵素作為鑑定依據 1. 將分離之純茵落經葡萄暗暗酵試驗鑑定為非自費酵葡萄睡之革蘭氏陰性菌, 培養於 TSA (Tryptic soy agar) 或 Blood agar 中, 經 , j 峙, 以接種環挑取, 移至快速接 種液 ( Rap i d inoculation fluid), 調成相當於 Mcfarl and # # 3 之濃度 2. 將接種液以巳氏德吸管全部吸取注入 Panel 中 ( 注意沿著金壁注入, 以避免氣泡 產生 ), 重新將已撕開的護膜貼回右上角處 將盤組左右搖擺 ( 但需水平 ) 後宜於水平桌 上, 將盤組往前傾斜, 使接種波等量流入各試劑中 3. 將盤祖置於 C 培養箱, 經 4 小時 ±30 分鐘後研讀結果 4. 結果判讀如表 2. 及表 2-1., 並將結果登錄於記錄紙上 ( 附錄三 ), 盤組共 1 0 個 反應孔號, 可作 2 個不同試驗, 再加上氧化時試驗, 共有 18 個試驗組 ( 圖 6. ) L 三 ) 結果判讀 : 分加試劑前及加試劑後之結果, 見表 2. 及表 2-1., 然後計算所得的鑑 定密碼, 輸入預存的軟體 (I D S) 電腦中, 按照指示則可知此陰性非自發酵茵種類 -10 一

7 呵, 因. 事 11I2. ~ 1lll Jl: 阻攔個 Jt<.#t'z. I 岫 X. 國 3. 4 i11 民染色浩陰性商成紅色 I. OOOX. SIr.! l 百頁 刷 ; 為當義哲語等 Em 直 5 餒品可草草草毛毛主 " 品可 f 品 R 暫且給海 1 呵 >A 旦胸 恤, 樹 ". ' 旬, 由自 諂 司, 一 a. 闢 臨 R a p i d - NF a: 定響越自嘲反應孔 一 11

8 表 2. Rapid-NF 套組加試劑前之判讀 編 7 虎測試項目 測試反應 + 1. ADH lox. 黃或沒橘色 2. TRD 黃或黃橘色紅或橘色 3. EST 黃或沒橘色紅或深橘 4. PHS 5. NAG 6. AGLU 黃色 清 7 草或沒禍色 7. BGLU 8. ONPG 9. URE 紅色黃 黃橘或橘色 10. GLU 黃色藍或綠色 表 2 一 - 1. Rapid-NF 套組加試劑後之判讀 編號測試項目試劑 測試反 + 應 * 4. PRO 方口 R ap i d 明顯的 顏色清澈 5. PYR NF Plus 紫 藍紫 褐色 沒橘 6. GGT Reagent 紅 橘 或粉紅 7. TRY (2 滴 )? 來 # 兮其工色 8. BANA 9. IND 加 s p o t 棕或黑色 橘或紅色 Indole (2i 為 ) 10. N0 3 方 11 Innova 紅或橘色清澈或黃色 Nitrate (2 滴 ) * 加入試清 I) 後 30 秒至 3 分鐘內觀察顏色變化, 逾時易產生偽陽性反應 一 12 一

9 五 AP I Coryne ~ 統鑑定法 ) 鑑定對象 : 可鑑定革蘭氏陽性短桿茵 Corynebacterium spp. 茵屬, 應用於本所動物 房病房 茵 Coryne bacterium kutscheri 之監測 4 二 ) 原理 1. API Coryne 套組為利用 20 個含有脫水物質來測試細菌的酵素活性或糖類的暗酵 當商量的濃度足夠峙, 則可促使及利用還水酵素之活性, 於培養期間代謝產物可使微孔 顯現出自然的主色反應, 或另藉試劑之加入以進行主色反應 2. 睡酵試驗是藉由含多種槍類物質的培養基 ( 含 ph 指示劑 ) 所組成的, 其原理為 利用碳水化合物的時酵, 以 ph 指示劑測試顏色改變 3. 於 C 培養箱培養 24 小時後, 反應的判讀乃根據樣本的比對, 及來自 APILAB 或 ATB plus 等電腦密碼鑑定 ( 司步驟及方法 1. 茵株的選取 : (1) 確認所分離到的茵株為無花于形成的 G + ( 草蘭氏陽性 ) 兼性厭氧性短桿菌 (2) 商株具溶血性 (haemolysis) (3) 挑取純化一茵株混合於 0.3ml 減茵的蒸餾水中, 再以減茵的棉花棒均勻沾取後, 塗滿整個 Co lumb i a sheep blood agar 培養且中 (4) 於 "C 培養箱中再培養 24 小時 2. 套組之準備 : (1) 準備培養盒 (2) 標禾苗株於培養金邊緣 (3) 加 5ml 蒸餾水於培養金之蜂巢狀小孔中 3. 接種波之備製 : (1) 打開懸浮液培養瓶 (2) 使用減茵棉花棒, 刮取先前製備的培養血, 調成混濁浪皮大於 Mcfarland # 6 的狀況, 4. 套組之培養 : (1) 盤組上的 11 個試驗組包括 NIT 至 GEL: 均勻置入懸浮液, 並避免氣泡產生 滴 ) NIT 至 ESC 試驗孔分別加入 150ul 懸浮液 ( 巴氏德吸管 3 滴或 PSI pette 6 URE 試騷, 懸浮液僅需充滿試管狀部份 GEL 試驗, 懸浮液需充滿整個試管狀及盃狀凹 (2) 0 至 GLYG 之最後 9 個試驗 :.將的 0. 5ml 茵液注入 GP Medium 中, 混合均勻.將此懸浮液注入各試管管狀部份 (3) 將礦物油覆蓋於 URE 及 O 至 GLYG 的盃狀凹中, 並形成微凸圓狀 -13 一

10 (4) 將培養金封密 (5) 於 35'"'-'37 C 培養箱培養 24 小時 5. 套組之判讀 ( 如表 3. ) (1) 加試劑 : NIT 試驗加入 1 滴 NIT 1 及 NIT 2 PYZ 試驗加入 1 滴 PYZ PyrA, PAL,βGUR,βGAL,αGLU,βNAG 試驗分別加入 1 滴 ZYMA 及 ZYMB 0 (2) 靜置 10 分鐘後, 對照圖譜判讀顏色反應, 必要時於 PyrA 五 βnag 試驗孔可置於 W 強光下 1 0 秒, 以去掉多餘的試劑顏色 (3) 進行觸時試騎 ( 進行第 21 個試駿 ) : 加 1 滴過氧化氫到 E SC 或 GEL 試驗孔中, 待 1 分鐘後, 若有氣泡產生為陽性反應 (4) 將結果登錄在記錄紙上 ( 附錄四 ) (5) 結果判讀依據表 3., 部份試驗孔須加試劑使其呈色再行判讀, 最後計算所得的鑑定密碼, 輸入電腦, 則可知此商屬何種棒狀桿茵 表 3. API Coryne 套組之判讀原理及結果 車為號測試項目瓦應 1. NIT nitrate 減少 2. PYZ pyrazin 缸 nidase 3. PyrA Pyrrolidonyl Arylamidase 會主 深紅色 黃藍色 橘色 + 加 N IT 1 及 N IT2 (I Om n ) PYZ (IOmn) 淡紅色或無色 沒棕 橘色 EYMA+ZYMB PyrA BNAG (IOmn) 沒橘或無色 4. PAL Alkalime Phosphatase 紫色淡紫色或無色 5. βgur β-glucuronidase 藍色淡紫色或無色 6. βgal β-galactosidase 紫色淡紫色或無色 7. αglu α-glucosidase 紫色淡紫色或無色 8. βnag N-Acetyl-B glucosaminidase 棕椅色淡紫色成無色 9. ESC Esculin 黑色灰色 10. URE Urease 桃紅色黃橘色 11. GEL gelatine 擴散的黑色無擴散 12. O 對照組 ( 時酵試驗 ) 13. GLU glucose 14. RIB ribose 15. XYL xylose 黃色紅色 16. MAN manitol 17. LAC lactose 18. SAC sucrose 19. GLYG glycogen H 20. CAT catalase 202 3%(I min) 氣泡 無氣泡 呆 -14 一

11 六 觸時試驗 ( C a t a l a s e test) ( 一 ) 用穿刺針取茵落中心的細菌至載玻片上塗抹 俱 ) 方口入 1 "- 2 滴 3 % 之 H202 討論 張照夫等 ( ) 調查圍內實驗動物設施中的小鼠, 所分離的細菌種類相當桂雜, 鑑定的工作十分繁瑣 因此設計完整的流程, 以符合不同工作項目及針對動物所關注的病房 茵做有效的監控血統, 是本所急欲建立的目標 本文中所設計的按驗流程, 乃針對本所動物房中之大 小白鼠所做的健康監控 Kitch 等 (1992) 報告指出, Rapid NF 為目前唯一商品化鑑定非睡酵茵套紅, 於 4 小 時內完成操作及判讀, 實驗中利用 Ra p id NF plus system 鑑定已知 345 株非睡酵桿菌, 結 果 3 11 (90.1 %) 茵株均可準確判讀, 故呆相當良好, 唯本試驗中最值得注意是最初的 2 4 "-72 小時內需具備有純化培養的技術, 以避免人為的誤導 本流程中 R a p i d NF 對 Pseudomonas fluorescens, P. putida, Acinetobacter species, A. xylosoxidans subspecies, Flavobacterium indologenes, F. gleum, P. alcaligenes, 及 Methylobacterium spp. 等菌種尚無法鑑定, 唯上述均非動物房重要病房 茵偵測對象, 而且 Acinetobacter genus 在分類上亦尚未完全建立及命名 至於進行電腦密碼鑑定東統時, 需注意所使用的培養基組材料, 品質不良易造成偽陽性或偽陰性反應, 因此實驗室需建立棵準茵種如 E. coli 等, 自行進行品管控制, 以為比對標準, 再具時效性或新配成的生化培養管, 均須做棵準茵種的品管, 以達到鑑定的準確性 目前全套自動化細菌鑑定 ~ 統, 已逐漸被圍內研究機構接受使用, 但由於價格昂貴, 並不令乎成本效益, 且無論自動化如何方便, 以從事微生物學診斷的觀點來看, 自動化及傳統式的鑑定法各有其優缺點, 然而是不先熟悉傳統式的鑑定操作, 冒然的全盤以自動化 做為診斷依據, 將導致判讀上嚴重的誤差, 因此 SPF 動物房的細菌學按驗, 應先建立傳 統式的人工鑑定象統及鑑定基本背景知識, 再朝向全自動化的鑑定為目標, 方能確保檢驗的準確性 話謝 : 本文完成, 復蒙中興大學獸醫學東臨床微生物學科徐慶霖老師賜于卓見和指導斧正, 謹此致謝 -15 一

12 附錄 : 農藥毒理 S PF 動物細菌檢驗記錄表格 一 初步培養表格 Record 1 : Primary culture Case No : Data: Speciman: Medium: 口 BAP 口 EMB 口 MacCon ke y 口 XLD 口 o t he r Test organism Gram Growth Colony Count 二 GF B - 1 2E 生化試驗結果計算電腦密碼數字用表格 Record 2 : GFB-12E Biochemical test Date: Test orgall1sm Speciman: TSIA CIT URE SIM VP ORN OXI AS AB Gas H 2S CIT URE IND MOT IPA VP ORN OXI REMARK: -16 一

13 三 R a p i d - N F 生化試驗結果計算電腦密碼數字用表格 Record 3 : Repid-NF Biochemical test Date: BEFORE REAGENT ADDITION Speciman: RapID NF Plus REAGENT SPOT NITRATE INDOLE A Test orgamsm ADH TRD EST PHS NAG αglu βglu ONPG URE GLU PRO PYR GGT TRY BANA IND N03 OXl l 一 I RE CORD GLU ~COLOR 一 I RE CO ~D GLU ~COLOR 一 I RE CO RD GLU ~COLOR -l RECORD GLU ~COLOR 一 I RE CO RD GLU ~COLOR Remark: 四 AP I Coryne 生化試驗結果計算電腦密碼數字用表格 Record 4 : API Coryne Biochemical test Date: Speciman: Test orgamsm NIT PYZ PYrA PAL βgur fjgal aglu fjnag ESC URE GEL 0 GLU RIB XYL MANMAL LAC SAC GLYG CAT 一