Alpha 技术 : 仅需混合操作的简单检测 Alpha(Amplified: 放大 Luminescence: 化学发光 Proximity: 接近 Homogeneous: 均相 Assay: 检测 ) 是基于微珠的高灵敏度均相 (Mix & Measure) 检测技术 Alpha 技术可快速检

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1 AlphaScreen & 化学放大型亲和发光均相检测 从小分子到活细胞适于各种样品的检测系统

2 Alpha 技术 : 仅需混合操作的简单检测 Alpha(Amplified: 放大 Luminescence: 化学发光 Proximity: 接近 Homogeneous: 均相 Assay: 检测 ) 是基于微珠的高灵敏度均相 (Mix & Measure) 检测技术 Alpha 技术可快速检测 ( 无需洗涤操作 ) 种类多样的各生物学分子间的相互作用 Alpha 是 Dade Behring 公司 ( 现为 Siemens AG 公司 ) 基于 LOCI(Luminescent Oxygen Channeling Immunoassay) 技术 * 开发而成 PerkinElmer 在获得 Alpha 技术的独家销售权的情况下, 针对生命科学研究领域生产和销售微珠和相关试剂 *Ullman EF, et al. Luminescent oxygen channeling Immunoassay: measurement of particle binding kinetics by chemiluminescence. Proc Natl Acad Sci USA Jun 7;91(12): 原理 Alpha 技术使用供体和受体两种微珠 结合于供体微珠上的分子 ( 分子 A) 与结合于受体微珠上的分子 ( 分子 B) 发生相互作用, 当两个微珠达到足够接近的状态时, 能够检测出发光信号 供体微珠表面的光敏剂经激光照射而受到激发, 将周围的氧转变为激发态的单线态氧 单线态氧向供体微珠周围扩散, 到达附近的受体微珠后可在微珠内引发化学发光反应, 并最终发射出光 如果各微珠上的分子 A 与分子 B 不发生相互作用, 则供体微珠产生的单线态氧不会到达受体微珠, 从而不会引发化学发光反应 含有高浓度光敏剂的供体微珠在 1 秒内可生成 60,000 个单线态氧, 大大增加了信号强度, 实现了埃摩尔水平的检测灵敏度 受体微珠内的 8- 巯基喹啉衍生物可与单线态氧分子发生化学发光反应 反应中生成的发光能量被转移到该微珠内的荧光物质上并诱使其发光, 不同的受体微珠发射不同波长的光 Alpha Donor Bead Alpha Acceptor Bead 特点 均相 (Mix & Measure)... 非常适合生物分子的相互作用... 无需分离和洗涤步骤, 操作简便 不同于 FRET 检测, 单线态氧的扩散距离可达到 200 nm, 最大程度减少了供体 / 受体之间的距离和方向限制 因此可用于全长蛋白检测和使用抗体的夹心免疫测定等应用 ( 下图 ) (<200 nm) Biotinylated Anti-analyte Analyte Streptavidin-coated Alpha Donor Bead ~6nm ~15nm ~15nm Anti-analyte-conjugated Acceptor Bead 具有较宽范围的亲和性... 可检测亚 nm ~ µm( 低亲和性 ) 范围的相互作用 低背景 高灵敏度... 通过激发光照射进行检测的方法会受到样品和微孔板生成的自发荧光的影响, 产生较高的背景 Alpha 技术中, 与单线态氧发生反应的受体微珠的发光时间较长 ( 半衰期 :300 毫秒 ), 因此可在激发光照射完一段时间后 (20 毫秒后 ) 再开始检测, 从而有效避免自发荧光的影响 此外, 检测波长比激发波长更短, 而自发荧光的波长比激发波长更长, 因此自发荧光的影响也会进一步降低 可实现自动化... 由于微珠的体积非常小 ( 直径 250 nm) 且不易发生沉淀, 因此不会堵塞分液头, 易于实现自动化分液操作, 非常适合 HTS 可检测微量样品... 可检测低至 5 µl 的样品 不会改变试剂浓度或造成灵敏度下降, 适用于常规的 和 1536 孔规格 贴上 TopSeal-A( 粘附密封膜 ) 的情况下进行检测可有效避免样品蒸发

3 Alpha 微珠 ( 供体 :1 种 ; 受体 :4 种 ) Alpha 微珠的直径很小, 约为 250 nm 这种直径远远小于 FMAT (6 ~ 20 µm) 等微珠检测中所用微珠的直径 因此 Alpha 微珠可在水溶液中保持稳定并均匀分散成悬浊液, 经过数小时也不会发生沉淀 微珠采用聚苯乙烯制成, 并涂覆有葡聚糖聚合物以避免非特异性结合 各类生物分子通过葡聚糖上的醛基结合到微珠表面 ** 1 个微珠表面涂覆有约 3,000 个链霉亲合素分子或 300 个 IgG 分子 检测波长受体微珠有 4 种含有不同荧光染料的类型可供选择 各种类型的检测波长不同, 因此可用于多靶点检测或根据样品种类来选择使用 专为使用血清 / 血浆的检测而开发的 受体微珠所在的波长区域可有效避免血清 / 血浆样品的荧光背景干扰 ( nm) 以及氧合血红蛋白的吸收干扰 (<600 nm) 此外, 该款微珠的检测波长区域比 AlphaScreen 受体微珠更为狭窄, 可获得更强的光信号 Relative Chemiluminescence AlphaScreen AlphaScreen( 红荧烯 ; 发射波长 : nm): 适用于缓冲液 细胞培养上清液和细胞裂解液样品 ( 铕 ; 发射波长 : nm): 适用于缓冲液 细胞培养上清液和细胞裂解液样品 AlphaPlex 545( 铽 ; 发射波长 : nm): 适用于缓冲液 细胞培养上清液和细胞裂解液样品 Wavelength (nm) AlphaPlex 545 AlphaPlex 645( 钐 ; 发射波长 :645 nm): 适用于缓冲液 细胞培养上清液和细胞裂解液样品 100 AlphaPlex Wavelength (nm) 多靶点检测 通过联用 微珠和 AlphaPlex 微珠, 用户可同时检测多个目标, 即进行多靶点检测 多靶点检测中的必要设备和附件 附件名称 产品货号 设备主机 EnVision Xcite / HTS 敬请询问 选件 *1 Alpha 标准选件 现场升级包 软件 *2 EnVision 软件升级 EnVision PC 升级包 连续检测多个波长 ( 各荧光波长依次被检测 ) Europium 滤光器 AlphaPlex Tb AlphaPlex Sm 单镜 AlphaScreen D640as(Eu-Tb)* AlphaPlex D670as(Eu-Tb-Sm) 同时检测 2 个波长 ( 仅配备 2PMT 时 ) 滤光器 见上述 双镜 Dual Alpha Eu/Tb Dual Alpha Eu/Sm or Tb/Sm 通过 Alpha 双镜模块实现同时检测 为 EnVision 配备第二检测器和 Alpha 双镜模块后, 就可以同时检测 微珠 (615 nm) 和 AlphaPlex 545 微珠 (545 nm) 的发射光信号 没有配备第二检测器的情况下, 两种发射光信号将顺次被检出 Preamplifer (Dual PMT) Bandpass filter Res/Amp 535/40 nm Mirror Block Dual Alpha prototype D640as/D595sp Bandpass filter Europium 615/8.5 nm Standard Alpha Laser module () Terbium Signal D595 D640 Europium Signal Laser *1 Alpha HTS 选件不能用于多靶点检测 *2 必须安装 EnVision 软件 1.13 版 同时需要升级 PC *3 Alpha Standard 选件中的标配 3

4 Alpha 技术 : 仅需混合操作的简单检测 Alpha 常见问答 问题 : Alpha 检测采用何种设备进行检测? 我可以使用现有的荧光微孔板检测仪或光度计进行检测吗? 回答 : Alpha 检测需要使用专用激光来发射 的激发光 基于氙闪光灯的荧光微孔板检测仪或光度计不能用于 Alpha 检测 AlphaScreen 与 可使用 PerkinElmer 的 EnVision (Alpha) EnSpire (Alpha) EnSight (Alpha) 系统来检测 由于 Victor 未配备内置激光, 因此不能用于 Alpha 检测 Alpha 检测最适合使用 PerkinElmer 的检测设备 EnVision AlphaPlex 只能使用 EnVision (Alpha 选件 ) 来检测, 并且还需要其他滤光器和光学模块 ( 关于 AlphaPlex 检测中所需附件的详细信息, 请参见第 3 页 ) 问题 : 需要使用专用微孔板吗? 回答 : 推荐使用颜色介于白色微孔板和灰色微孔板之间的灰白色 AlphaPlate( 第 38 页 ) Alpha 技术中使用发射光检测器来检 测信号 检测发射光时, 大多数情况使用白色微孔板, 但使用 AlphaPlate 可抑制交叉干扰并提高检测精度 EnSpire 问题 : 听说 Alpha 不能承受较强的光, 这是真的吗? 回答 : 受体微珠对光不敏感, 但链霉亲合素供体微珠对光较为敏感 在阳光直射或强光照射下, 供体微珠受到激发并生成单线态 氧, 这类单线态氧会与供体微珠上结合的链霉亲合素发生反应, 降低其效率 如果不注意的情况下使用过量光照射, 就会造成信号强度降低, 但大多数情况下, 该检测都能获得良好的结果 最好将供体微珠相关步骤放在 100Lux 以下 ( 右表 ) 限制了光强度的实验室中进行 例如, 可关闭实验室中一半的照明灯, 在关灯的一侧进行实验操作等 也可将绿色滤光器贴在照明灯上 Alpha 检测中进行孵育时, 请用不透明的微孔板或铝箔覆盖检测用微孔板, 以达到遮光目的 EnSight Lux 水平 700- Lux 窗边 Lux 室内 ( 照明灯正下方 ) Lux 室内 ( 照明灯非正下方 / 背光处 ) 10 Lux 桌下 问题 : 缓冲液和化合物等会对 Alpha 造成影响吗? 回答 : 单线态氧的清除剂 NaN3(0.005% 以上 ) µm 级的过渡金属 (Fe 2+ Fe 3+ Cu 2+ Ni 2+ Al 2+ ) 抗坏血酸以及基本结构为噻吩的化合物 (100 µm ~ 10 mm) 会对检测造成影响 虽然超过上述浓度时会造成信号降低, 但大多数情况下 仍可获得可接受的结果 一般使用的 HEPES PBS Tris 等缓冲液的浓度和 ph 值基本上不会影响检测 盐浓度 在 300 mm 以下以及非离子表面活性剂的用量在 3% 以下时不会影响检测 此外, 最高可耐受 5% DMSO 0.02% SDS 或 100 mm EDTA 问题 : 微珠能够与我手上现有的抗体或带标签的蛋白结合吗? 回答 : 可以 我们提供未标记的微珠 标记有用于捕获二抗或表达标记的谷胱甘肽或镍螯合物等物质的供体微珠和受体微珠 ( 第 31 ~ 41 页 ) 并提供标记定制服务 问题 : 关于微珠的分液操作, 有什么特别的技巧吗? 回答 : 缓冲液中经常含有表面活性剂或 BSA 等物质, 因此推荐使用反向移液法 由于是从顶部进行检测, 因此如果有气泡的话会影响检测信号 采用移液操作的话不需要混合或搅拌 4

5 : 只需混合无需洗涤的 ELISA 无需洗涤的 ELISA 技术帮助您进行血清, 血浆及细胞裂解液等复杂样品中靶蛋白的检测 无论小分子激素蛋白或大分子抗体蛋白均能通过简单加样无需洗涤的 Alpha 技术来检测 免疫检测试剂盒 适用于细胞裂解液, 血清及血浆样本中靶蛋白的检测 您只需准备样品, 即刻就能进行检测 vs ELISA 因其均相免洗的特性, 可以采用比 ELISA 更小体积的检测体系 如果与自动加样系统或其他自动化系统整合, 可以进行高通量筛选实验 ELISA 洗板 不要 必要 实验步骤 3 ~ 4 步 > 5 步 微孔板型号 96, 384, 1536-well 96-well 自动化程度 实验通量 高 低 样品需要量 少 (5 µl 以下 ) 多 灵敏度 动态检测范围 logs 2 logs 性价比 动态检测范围比 实验步骤比 待测样品, 抗体, 受体微珠混合 60min, 孵育 加入供体微珠 30min, 孵育 检测 ELSA 待测样品, 抗体混合孵育抗体洗涤洗板洗板洗板加入二抗孵育 抗体洗涤 洗板 洗板洗板洗板洗板 HRP 底物 孵育 测 OD 5

6 : 只需混合无需洗涤的 ELISA 免疫分析试剂盒原理细胞裂解液, 血清, 或血浆样品中的待测物 分别被生物素化抗体和受体微珠偶联的抗体识别, 形成三明治形式 之后加入链霉亲和素包被的供体微珠结合生物素化抗体 Biotinylated Analyte Anti-analyte Biotin-free(DIG-based) 免疫分析试剂盒 Streptavidin-coated Alpha Donor Bead 615 nm Anti-analyte-conjugated Acceptor Bead 与常规使用的免疫分析试剂盒不同的是, 前者用链霉亲和素包被的供体微珠识别生物素化抗体, 该试剂盒用抗地高辛抗体包被的供体微珠识别地高辛标记的抗体 该试剂盒更适用于 RPMI 培养液的细胞学实验, 能够避免培养液中的生物素干扰, 得到更高的灵敏度和 S/B 值 Analyte 615 nm Anti-DIG(Fab ) Donor Beads DIG-labeled anti-analyte antibody Anti-analyte Acceptor Beads 实验步骤 将 5µL 样品 ( 待测物 ) 加入微孔板 加入生物素化抗体, 及与受体微珠偶联的抗体, 共计 20 µl, 室温孵育 60 分钟 加入 25µL 链霉亲和素包被的供体微珠, 室温孵育 30 分钟 ( 总体积为 50 µl) 激光激发供体微珠, 产生的单线态氧扩散至受体微珠附近, 受体微珠接受单线态氧后发光 试剂盒组分 抗体偶联的受体微珠 链霉亲和素包被的供体微珠 生物素化抗体 反应溶液,10X 标准品冻干粉! 出于环保考虑, 产品未附带纸质版使用说明, 您可以进入以下网址 输入产品货号或批号进行查询下载 6

7 产品名称 CRP CXCL1/GRO-α CXCL10/IP-10 CXCL9/MIG G-CSF GM-CSF Mouse GM-CSF IFN-α IFN-γ IFN-γ biotin-free Mouse IFN-γ IL-1α IL1β Mouse IL1β Rat IL1β IL1RA Vimentin COX2 Claudin 7 规格交叉反应货号检出下限检出上限检测点人小鼠大鼠 免疫炎性靶点 500 AL233C 5000 AL233F 7.3pg/mL 1,000,000pg/mL X X 3μg AL233S 100 AL349HV 500 AL349C 0.5pg/mL 30,000pg/mL X X 5000 AL349F 0.1μg AL349S 500 AL259C 5000 AL259F 8.6pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL259S 500 AL280C 5000 AL280F 1.6pg/mL 100,000pg/mL X 0.3μg AL280S 500 AL213C 5000 AL213F 14pg/mL 300,000pg/mL X 1μg AL213S 500 AL216C 5000 AL216F 1.6pg/mL 10,000pg/mL X X 0.03μg AL216S 500 AL517C 5000 AL517F 2pg/mL 10,000pg/mL X X 10ng AL517S 500 AL297C 5000 AL297F 8.2pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL297S 500 AL217C 5000 AL217F 11pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL217S 100 AL327HV 500 AL327C 2.4pg/mL 10,000pg/mL X X 5000 AL327F 0.3μg AL327S 500 AL501C 5000 AL501F 1.1pg/mL 100,000pg/mL X X 0.1μg AL501S 500 AL238C 5000 AL238F 1.3pg/mL 30,000pg/mL X X 0.1μg AL238S 500 AL220C 5000 AL220F 0.6pg/mL 30,000pg/mL X X 0.1μg AL220S 500 AL503C 5000 AL503F 11.5pg/mL 100,000pg/mL X X 0.1μg AL503S 500 AL518C 5000 AL518F 6.2pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL518S 100 AL358HV 500 AL358C 0.43pg/mL 10,000pg/mL 5000 AL358F 0.1μg AL358S 100 AL372HV Coming 500 AL372C soon 5000 AL372F 1μg AL372S 100 AL376HV Coming 500 AL376C soon 5000 AL376F 1μg AL376S 100 AL381HV Coming 500 AL381C soon 5000 AL381F 1μg AL381S 产品名称 IL2 IL2 Mouse IL2 IL3 IL5 IL6 Mouse IL6 IL7 Mouse IL7 IL8 IL8 Biotin-free IL10 Mouse IL10 IL11 IL12(P70) IL13 IL-12 p40/ IL-23 p40 Alpha Tubulin BCL2 规格交叉反应货号检出下限检出上限检测点人小鼠大鼠 500 AL221C 5000 AL221F 1.8pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL221S 100 AL333HV 500 AL333C 2.6pg/mL 30,000pg/mL X X 5000 AL333F 0.3μg AL333S 500 AL511C 5000 AL511F 1.8pg/mL 30,000pg/mL X X 0.1μg AL511S 500 AL222C 5000 AL222F 11pg/mL 300,000pg/mL X X 0.3μg AL222S 500 AL267C 5000 AL267F 4.5pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL267S 500 AL223C 5000 AL223F 1.3pg/mL 30,000pg/mL X X 0.1μg AL223S 500 AL504C 5000 AL504F 1.4pg/mL 100,000pg/mL X 0.3μg AL504S 500 AL268C 5000 AL268F 8.5pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL268S 500 AL512C 5000 AL512F 24.8pg/mL 300,000pg/mL X 0.3μg AL512S 500 AL224C 5000 AL224F 1.1pg/mL 30,000pg/mL 0.1μg AL224S 100 AL328HV 500 AL328C 3.6pg/mL 30,000pg/mL 5000 AL328F 0.1μg AL328S 500 AL218C 5000 AL218F 4.4pg/mL 30,000pg/mL X X 0.3μg AL218S 500 AL502C 5000 AL502F 13.5pg/mL 300,000pg/mL X X 0.3μg AL502S 500 AL293C 5000 AL293F 8.6pg/mL 300,000pg/mL 0.3μg AL293S 500 AL239C 5000 AL239F 4.9pg/mL 300,000pg/mL X X 0.3μg AL239S 500 AL240C 5000 AL240F 3.9pg/mL 100,000pg/mL X X 0.1μg AL240S 100 AL382HV 500 AL382C 0.45pg/mL 100,000pg/mL 5000 AL382F 1μg AL382S 100 AL383HV 500 AL383C 77.1pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL383F 1μg AL383S 100 AL384HV 500 AL384C 30pg/mL 1,000,000pg/mL X 5000 AL384F 1μg AL384S 7

8 : 只需混合无需洗涤的 ELISA 产品名称 IL15 IL15 Biotin-Free Mouse IL15 IL17 IL-17A Biotin-Free Mouse IL17A Mouse Interleukin -17A Homodimer IL18 /Rat IL22 IL28B IP10 TNFα TNF-α Biotin-free Mouse TNFα Mouse TNF-α Biotin-Free Anti-Trypsin (A1AT) NGAL 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 500 AL283C 5000 AL283F 1.2pg/mL 100,000pg/mL X X 0.1μg AL283S 100 AL360HV 500 AL360C 1.9pg/mL 100,000pg/mL 5000 AL360F 0.1μg AL360S 500 AL513C 5000 AL513F 20.7pg/mL 300,000pg/mL X 0.3μg AL513S 500 AL219C 5000 AL219F 14pg/mL 300,000pg/mL X X 1μg AL219S 100 AL346HV 500 AL346C 13.5pg/mL 30,000pg/mL 5000 AL346F 0.3μg AL346S 500 AL514C 5000 AL514F 4.1pg/mL 100,000pg/mL X 0.1μg AL514S 100 AL540HV 500 AL540C 3.5pg/mL 300,000pg/mL X X 5000 AL540F 0.3μg AL540S 500 AL241C 5000 AL241F 5pg/mL 300,000pg/mL X X 0.3μg AL241S 100 AL320HV 500 AL320C 18pg/mL 1,000,000pg/mL X 5000 AL320F 1μg AL320S 100 AL365HV 500 AL365C 16pg/mL 100,000pg/mL X 5000 AL365F 0.3μg AL365S 100 AL326HV 500 AL326C 3.3pg/mL 300,000pg/mL X X 5000 AL326F 0.3μg AL326S 500 AL208C 5000 AL208F 2.2pg/mL 30,000pg/mL X X 0.1μg AL208S 100 AL325HV 500 AL325C 0.013ng/mL 30ng/mL X X 5000 AL325F 0.1μg AL325S 500 AL505C 5000 AL505F 2pg/mL 30,000pg/mL X 0.1μg AL505S 100 AL541HV 500 AL541C 0.007ng/mL 70ng/mL X 5000 AL541F 0.1μg AL541S 100 AL344HV Coming 500 AL344C soon 5000 AL344F 0.3μg AL344S 100 AL364HV Coming 500 AL364C soon 5000 AL364F 0.3μg AL364S 产品名称 Adiponectin Mouse Adiponectin Albumin Albumin biotin free Mouse Albumin Factor VIII Factor VIII Biotin-Free Fibrinogen GLP-1 GLP-1 Glucagon Growth Hormone Hyaluronic Acid IGF1 IGF2 Insulin 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 内分泌疾病相关 500 AL209C 5000 AL209F 45pg/mL 1,000,000pg/mL X X 1μg AL209S 500 AL515C 5000 AL515F 3.1pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL515S 500 AL294C 5000 AL294F 104.8pg/mL 1,000,000pg/mL X X 1μg AL294S 100 AL363HV 500 AL363C 102pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL363F 1μg AL363S 500 AL508C 5000 AL508F 716pg/mL 1,000,000pg/mL X X 3μg AL508S 100 AL342HV 500 AL342C 87pg/mL 100,000pg/mL 5000 AL342F 0.3μg AL342S 100 AL362HV 500 AL362C 71.2pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL362F 0.3μg AL362S 100 AL352HV 500 AL352C 9.2pg/mL 1,000,000pg/mL X X 5000 AL352F 1μg AL352S 500 AL215C 5000 AL215F 27pg/mL 30,000pg/mL 0.1μg AL215S 100 AL359HV 500 AL359C 6pg/mL 100,000pg/mL 5000 AL359F 0.1μg AL359S 100 AL312HV 500 AL312C 20pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL312F 1vial AL312S 500 AL214C 5000 AL214F 5pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL214S 100 AL354HV 500 AL354C 0.3ng/mL 3,000ng/mL 5000 AL354F 3μg AL354S 500 AL236C 5000 AL236F 150pg/mL 100,000pg/mL X X 1μg AL236S 500 AL237C 5000 AL237F 128pg/mL 300,000pg/mL X 1μg AL237S 500 AL204C 5000 AL204F 0.8μIU/mL 3,000μIU/mL 0.01IU AL204S 8

9 产品名称 Insulin HS Leptin Mouse Leptin Prolactin C-peptide Mouse C-peptide BMP-7 COL1A1 Perlecan Laminin E-Cadherin TGF-β1 TGF- β Biotin-Free VEGFA Mouse VEGFA VEGFB 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 100 AL350HV 500 AL350C 5000 AL350F 0.01IU AL350S 0.21μIU/mL 10,000μIU/mL 500 AL225C 5000 AL225F 50pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL225S 500 AL521C 5000 AL521F 16pg/mL 300,000pg/mL 1μg AL521S 500 AL227C 5000 AL227F 125pg/mL 300,000pg/mL X X 1μg AL227S 500 AL299C 5000 AL299F 23.5pg/mL 30,000pg/mL X X 0.1μg AL299S 500 AL510C 5000 AL510F 11.1pg/mL 30,000pg/mL X 0.1μg AL510S 100 AL369HV 500 AL369C 4pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL369F 0.3μg AL369S 100 AL371HV 500 AL371C 6pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL371F 0.3μg AL371S 100 AL377HV 500 AL377C 4.4pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL377F 1μg AL377S 100 AL368HV 500 AL368C 0.1pg/mL 30,000pg/mL X 5000 AL368F 3μg AL368S 100 AL370HV 500 AL370C 3.5pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL370F 0.3μg AL370S 血管新生靶点 100 AL336HV 500 AL336C 9pg/mL 100,000pg/mL 5000 AL336F 0.3μg AL336S 100 AL361HV 500 AL361C 9.2pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL361F 0.3μg AL361S 500 AL201C 5000 AL201F 2.2pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL201S 500 AL520C 5000 AL520F 1.5pg/mL 100,000pg/mL 0.1μg AL520S 500 AL251C 5000 AL251F 140pg/mL 1,000,000pg/mL 1μg AL251S 产品名称 Mouse VEGFC VEGFD AFP β-ngf CA125 E-Cadherin Caspase-3 active CXCL11/I-TAC EGF EGFR EPO ERBB2/HER2 Fibronectin (h Plasma) HGFR/c-MET IFN-β 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 500 AL252C 5000 AL252F 6.2pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL252S 500 AL253C 5000 AL253F 29.9pg/mL 300,000pg/mL 0.15μg AL253S 肿瘤标志物 500 AL230C 5000 AL230F 40.3pg/mL 300,000pg/mL 0.3μg AL230S 500 AL246C 5000 AL246F 32pg/mL 300,000pg/mL X 1μg AL246S 500 AL256C 5000 AL256F 1.5U/mL 3,000U/mL 1500U AL256S 100 AL370HV 500 AL370C 3.5pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL370F 0.3μg AL370S 500 AL278C 5000 AL278F 126pg/mL 300,000pg/mL X X 0.3μg AL278S 500 AL260C 5000 AL260F 1.4pg/mL 30,000pg/mL X 0.1μg AL260S 100 AL339HV 500 AL339C 0.24pg/mL 100,000pg/mL X 5000 AL339F 0.1μg AL339S 100 AL340HV 500 AL340C 1.46pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL340F 0.3μg AL340S 500 AL206C 5000 AL206F 1mIU/mL 30,000mIU/mL X X 30IU AL206S 500 AL235C 5000 AL235F 54.1pg/mL 300,000pg/mL 1μg AL235S 100 AL351HV 500 AL351C 148pg/mL 1,000,000pg/mL X X 5000 AL351F 1μg AL351S 500 AL281C 5000 AL281F 23.1pg/mL 1,000,000pg/mL X 3μg AL281S 500 AL265C 5000 AL265F 9.6pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL265S 9

10 : 只需混合无需洗涤的 ELISA 产品名称 MMP1 MMP2 MMP3 MMP7 MMP8 MMP9 Mouse MMP9 MMP12 MMP13 Neprilysin Nidogen-1 Oncostatin M PIP Collagen PSA TFF3 TIMP1 VCAM-1 Fibrinogen 规格检测点 500 AL242C 5000 AL242F 0.3μg AL242S 500 AL269C 5000 AL269F 0.3μg AL269S 500 AL284C 5000 AL284F 0.3μg AL284S 100 AL378HV 500 AL378C 5000 AL378F 1μg AL378S 100 AL374HV 500 AL374C 5000 AL374F 0.1μg AL374S 500 AL243C 5000 AL243F 0.3μg AL243S 500 AL519C 5000 AL519F 0.3μg AL519S 100 AL375HV 500 AL375C 5000 AL375F 0.1μg AL375S 100 AL318HV 500 AL318C 5000 AL318F 0.1μg AL318S 100 AL337HV 500 AL337C 5000 AL337F 1μg AL337S 100 AL367HV 500 AL367C 5000 AL367F 0.3μg AL367S 100 AL341HV 500 AL341C 5000 AL341F 0.1μg AL341S 100 AL353HV 500 AL353C 5000 AL353F 0.3μg AL353S 500 AL228C 5000 AL228F 3μg AL228S 500 AL273C 5000 AL273F 0.1μg AL273S 500 AL272C 5000 AL272F 0.1μg AL272S 100 AL338HV 500 AL338C 5000 AL338F 1μg AL338S 100 AL352HV 500 AL352C 5000 AL352F 1μg AL352S 货号检出下限检出上限 82.6pg/mL 300,000pg/mL X 交叉反应小大人鼠鼠 260pg/mL 300,000pg/mL X C 25.8pg/mL 300,000pg/mL X 35pg/mL 1,000,000pg/mL 10pg/mL 100,000pg/mL 10.9pg/mL 300,000pg/mL X 19.9pg/mL 300,000pg/mL X 6.1pg/mL 6.5pg/mL 10,000pg/mL 100,000pg/mL 8.9pg/mL 300,000pg/mL 17pg/mL 300,000pg/mL 0.6pg/mL 100,000pg/mL X 10pg/mL 1.2ng/mL 6.1pg/mL 300,000pg/mL 1,000ng/mL 30,000pg/mL 520pg/mL 100,000pg/mL X X 0.92pg/mL 300,000pg/mL 9.2pg/mL 1,000,000pg/mL X X X 产品名称 PD-1 PDL-1 PD-1 and PDL-1 Binding α2 macroglobulin Cardiac Troponin I D-dimer ICAM-1 Myeloperoxidase Myoglobin PAI-1 PCSK9 Plasminogen Prorenin tpa Transferin 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 肿瘤免疫治疗 100 AL343HV 500 AL343C 9pg/mL 100,000pg/mL X 5000 AL343F 0.3μg AL343S 100 AL355HV 500 AL355C 2pg/mL 300,000pg/mL X 5000 AL355F 0.3μg AL355S 100 AL356HV 500 AL356C 2nM 5000 AL356F 1.3μg/ 2.1μg AL356S 心血管疾病相关 500 AL277C 5000 AL277F 575pg/mL 1,000,000pg/mL X X 3μg AL277S 500 AL295C 5000 AL295F 4.7pg/mL 100,000pg/mL X 0.1μg AL295S 500 AL290C 5000 AL290F 41.3pg/mL 1,000,000pg/mL 1μg AL290S 500 AL282C 5000 AL282F 3.4pg/mL 100,000pg/mL X X 1μg AL282S 500 AL245C 5000 AL245F 67.1pg/mL 300,000pg/mL X 1μg AL245S 500 AL285C 5000 AL285F 1pg/mL 100,000pg/mL X X 0.3μg AL285S 500 AL286C 5000 AL286F 39pg/mL 300,000pg/mL X X 1μg AL286S 500 AL270C 5000 AL270F 1056pg/mL 300,000pg/mL X 0.3μg AL270S 500 AL248C 5000 AL248F 4.4ng/mL 10,000ng/mL X 10μg AL248S 500 AL249C 5000 AL249F 8.1pg/mL 300,000pg/mL 0.3μg AL249S 500 AL250C 5000 AL250F 11.1pg/mL 300,000pg/mL X X 1μg AL250S 100 AL311HV 500 AL311C 29pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL311F 1vial AL311S 10

11 产品名称 Amyloid β 1-15 Amyloid β 1-40 Amyloid beta 1-40 HS Mouse Amyloid β 1-40 Amyloid β 1-42 Amyloid β 1-42(HS) Mouse Amyloid β 1-42 Amyloid β 1-x Amyloid Oligomers HS Aβ42 BDNF Tau CCL2 Mouse CCL2/MCP-1 CCL2/MCP-1α CCL2/MCP-1β CCL5/ RANTES 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 CNS 相关 500 AL274C 5000 AL274F 8.1pg/mL 10,000pg/mL 0.1μg AL274S 500 AL202C 5000 AL202F 88pg/mL 100,000pg/mL 0.3μg AL202S 100 AL373HV 500 AL373C 42pg/mL 10,000pg/mL X X 5000 AL373F 20μg AL373S 500 AL506C 5000 AL506F 31.7pg/mL 30,000pg/mL x 0.3μg AL506S 500 AL203C 5000 AL203F 300pg/mL 300,000pg/mL 1μg AL203S 500 AL276C 5000 AL276F 20.8pg/mL 30,000pg/mL 0.1μg AL276S 500 AL507C 5000 AL507F 25.2pg/mL 100,000pg/mL x 0.3μg AL507S 500 AL288C 5000 AL288F 4.5pg/mL 30,000pg/mL 500 AL334C 5000 AL334F 42pg/mL 300,000pg/mL 5μg AL334S 100 AL330HV 500 AL330C 14.7pg/mL 10,000pg/mL 5000 AL330F 1μg AL330S 100 AL317HV 500 AL317C 3.3pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL317F 0.3μg AL317S 500 AL271C 5000 AL271F 14.3pg/mL 300,000pg/mL 0.3μg AL271S 500 AL244C 5000 AL244F 3.8pg/mL 100,000pg/mL x x 0.3μg AL244S 500 AL509C 5000 AL509F 6.9pg/mL 100,000pg/mL x 0.3μg AL509S 500 AL257C 5000 AL257F 0.8pg/mL 30,000pg/mL x x 0.3μg AL257S 500 AL258C 5000 AL258F 2.8pg/mL 100,000pg/mL x x 0.1μg AL258S 500 AL289C 5000 AL289F 0.8pg/mL 100,000pg/mL x x 0.3μg AL289S 产品名称 Mouse CCL5/ RANTES Frataxin GDNF TDP-43 Cortisol Progesterone Somatostatin testosterone P62 LC38 HIV p24 HIV p24 (high sensitivity) HIV P24 Biotin- Free 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 500 AL516C 5000 AL516F 2.6pg/mL 30,000pg/mL x 0.3μg AL516S 100 AL322HV 500 AL322C 8pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL322F 0.3μg AL322S 100 AL319HV 500 AL319C 3.8pg/mL 100,000pg/mL 5000 AL319F 0.1μg AL319S 100 AL357HV 500 AL357C 14.2pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL357F 1μg AL357S 激素检测 100 AL314HV 500 AL314C 177pg/mL 3,600,000pg/mL 5000 AL314F 100μM AL314S 100 AL335HV 500 AL335C 0.59nM 1,000nM 5000 AL335F 100μM AL335S 100 AL329HV 500 AL329C 55pg/mL 1,637,000pg/mL 5000 AL329F 2nmol AL329S 100 AL324HV 500 AL324C 0.7nM 875nM 5000 AL324F 20μM AL324S 自体吞噬 500 AL305C 5000 AL305F 929pg/mL 3,000,000pg/mL 3μg AL305S 500 AL306C 5000 AL306F 7.9ng/mL 3,000ng/mL C 3μg AL306S 病毒类检测 500 AL207C 5000 AL207F 0.525ng/mL 3,000ng/mL 10μg AL207S 500 AL291C 5000 AL291F 1.8pg/mL 30,000pg/mL 0.1μg AL291S 100 AL332HV 500 AL332C 9.6pg/mL 100,000pg/mL 5000 AL332F 0.1μg AL332S 11

12 : 只需混合无需洗涤的 ELISA 产品名称 total IgG Mouse total IgG FCGR3A/ CD16a (176Phe/F158) FCGR3A/ CD16a (176Val/V158) IgG1 (isotyping) IgG2 (isotyping) IgG3 (isotyping) IgG4 (isotyping) IgA IgM IgG1 (isotyping) Mouse IgG2a (isotyping) Mouse IgG2b (isotyping) Mouse IgG3 (isotyping) 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 抗体类检测抗体滴度 500 AL205C 5000 AL205F 0.24ng/mL 1,000ng/mL X X 3μg AL205S 100 AL529HV 500 AL529C 36pg/mL 3,000,000pg/mL 5000 AL529F 0.1μg AL529S 100 AL347HV 500 AL347C 22.6pM 5000 AL347F 1.5μg AL347S 100 AL348HV 500 AL348C 4.3pM 5000 AL348F 1μg AL348S 抗体分型 100 AL307HV 500 AL307C 47pg/mL 1,000,000pg/mL X 5000 AL307F 1μg AL307S 100 AL308HV 500 AL308C 6.65ng/mL 100,000ng/mL 5000 AL308F 100μg AL308S 100 AL309HV 500 AL309C 500pg/mL 3,000,000pg/mL 5000 AL309F 3μg AL309S 100 AL310HV 500 AL310C 300pg/mL 500,000pg/mL 5000 AL310F 10μg AL310S 500 AL262C 5000 AL262F 449pg/mL 3,000,000pg/mL X 10μg AL262S 500 AL263C 5000 AL263F 511pg/mL 3,000,000pg/mL X X 3μg AL263S 100 AL522HV 500 AL522C 117pg/mL 3,000,000pg/mL X 5000 AL522F 3μg AL522S 100 AL523HV 500 AL523C 23pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL523F 3μg AL523S 100 AL524HV 500 AL524C 60pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL524F 1μg AL524S 100 AL525HV 500 AL525C 60pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL525F 1μg AL525S 产品名称 Mouse IgA (isotyping) Mouse IgE (isotyping) Mouse IgM (isotyping) Anti-PEG IgM CHO cell protein (CHO-P) CHO HCP (broad) NS0 cell protein (NS0-P) PER.C6 HCP Host cell residual DNA Residual Protein A Mouse Albumin Anti-PEG IgM Transferin 规格检测点 货号检出下限检出上限 交叉反应小大人鼠鼠 100 AL528HV 500 AL528C 5000 AL528F 0.1μg AL528S 200pg/mL 1,000,000pg/mL 100 AL526HV 500 AL526C 40pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL526F 1μg AL526S 100 AL527HV 500 AL527C 104pg/mL 1,000,000pg/mL X 5000 AL527F 1μg AL527S PK/PD 100 AL313HV 500 AL313C 6.65ng/mL 100,000ng/mL 5000 AL313F 0.1mg AL313S 杂质检测 500 AL210C 5000 AL210F 181pg/mL 300,000pg/mL 0.5μg AL210S 500 AL301C 5000 AL301F 130pg/mL 1,000,000pg/mL 1μg AL301S 500 AL226C 5000 AL226F 1.6ng/mL 1,000ng/mL 1μg AL226S 500 AL302C 5000 AL302F 486pg/mL 1,000,000pg/mL 1μg AL302S 100 AL331HV 500 AL331C 0.06ng/mL 100ng/mL 5000 AL331F 1μg AL331S 500 AL287C 5000 AL287F 10.8pg/mL 30,000pg/mL 0.3μg AL287S 安全性检测 500 AL508C 5000 AL508F 716pg/mL 1,000,000pg/mL X X 3μg AL508S 100 AL313HV 500 AL313C 6.65ng/mL 100,000ng/mL 5000 AL313F 100μg AL313S 100 AL311HV 500 AL311C 29pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL311F 1 vial AL311S 12

13 产品名称 交叉反应规格货号检出下限检出上限小大检测点人鼠鼠 动物健康 100 AL536HV Bovine 500 AL536C 0.25ng/mL 3,000pg/mL X Immunoglobulin A 5000 AL536F 3μg AL536S 100 AL530HV Bovine total IgG 500 AL530C 530pg/mL 3000,000pg/mL X X 5000 AL530F 0.1μg AL530S 100 AL531HV Bovine IgG1 500 AL531C 1,700pg/mL 3000,000pg/mL X 5000 AL531F 3μg AL531S 100 AL532HV Bovine IgG2 500 AL532C 2,100pg/mL 3000,000pg/mL 5000 AL532F 3μg AL532S 100 AL533HV Bovine IgM 500 AL533C 450pg/mL 10,000pg/mL 5000 AL533F 3μg AL533S 100 AL537HV Bovine IL-1α 500 AL537C 2.58pg/mL 300,000pg/mL X 5000 AL537F 0.3μg AL537S 100 AL539HV Bovine IL-1β 500 AL539C 20pg/mL 300,000pg/mL X 5000 AL539F 0.3μg AL539S 100 AL543HV Bovine IL AL543C 30pg/mL 1,000,000pg/mL 5000 AL543F 1μg AL543S 100 AL542HV Bovine IL AL542C 1.8pg/mL 100,000pg/mL 5000 AL542F 0.1μg AL542S 100 AL538HV Bovine IL AL538C 0.01ng/mL 37ng/mL 5000 AL538F 0.3μg AL538S 100 AL545HV Coming 500 AL545C Bovine/Ovine IL-8 soon 5000 AL545F 1μg AL545S 100 AL546HV Coming 500 AL546C Bovine/Ovine IL-10 soon 5000 AL546F 1μg AL546S 100 AL547HV Coming 500 AL547C Bovine IL-17A soon 5000 AL547F 1μg AL547S 100 AL534HV Bovine TNF-α 500 AL534C 1pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL534F 0.3μg AL534S 100 AL535HV Bovine IFN-γ 500 AL535C 10pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL535F 0.3μg AL535S 产品名称 Cry1Ab/1Ac Cry1F Cry2 Chloramphenicol 规格检测点 货号 检出下限 检出上限 农作物 / 食品检测 100 AL401HV Coming 500 AL401C soon 5000 AL401F 0.5μg AL401S 100 AL402HV 500 AL402C 111pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL402F 0.5μg AL402S 100 AL403HV 500 AL403C 12pg/mL 300,000pg/mL 5000 AL403F 0.5μg AL403S 100 AL385HV Coming 500 AL385C soon 5000 AL385F 0.5μg AL385S 交叉反应小大人鼠鼠 13

14 AlphaPlex (Tb/Sm) 多标记免疫分析试剂 该免疫分析试剂盒使用 AlphaPlex545 受体微珠 可以与其他 免疫分析试剂盒联合使用 实现单孔样品检测两种靶点 AlphaPlex 检测原理 Streptavidin-coated Alpha Donor Beads Biotinylated Anti-IL8 IL8 IL6 Anti-IL8 conjugated = 615 nm Anti-IL6 conjugated AlphaPlex 545 Acceptor Beads = 545 nm 生物素化的抗 IL-6 抗体和生物素化的抗 IL-8 抗体分别与链霉亲和素化的供体微珠结合 另一个位点的抗 Il-6 抗体和抗 IL-8 抗体分别偶联在 和 AlphaPlex545 受体微珠上 抗体与分析物结合后拉近了受体和供体微珠 在 680nm 激光激发下供体微珠激发出活性单线态氧, 受体微珠接收后分别产生 615nm() 和 545nm(AphaPlex) 可以使用 Envision 的 Alpha 模块进行信号检测 Biotinylated Anti-IL6 产品规格 ( 点数 ) 货号免疫炎症相关 100 AP217TB-HV AlphaPlex AP217TB-C IFN- γ Kit 5,000 AP217TB-F 100 AP220TB-HV AlphaPlex AP220TB-C IL-1β Kit 5,000 AP220TB-F 100 AP221TB-HV AlphaPlex AP221TB-C IL2 Kit 5,000 AP221TB-F 100 AP223TB-HV AlphaPlex AP223TB-C IL6 Kit 5,000 AP223TB-F 100 AP219TB-HV AlphaPlex AP219TB-C IL17 Kit 5,000 AP219TB-F 100 AP208TB-HV AlphaPlex AP208TB-C TNF- α Kit 5,000 AP208TB-F 100 AP320TB-HV AlphaPlex AP320TB-C /rat IL22 Kit 5,000 AP320TB-F 100 AP326TB-HV AlphaPlex AP326TB-C IP10 Kit 5,000 AP326TB-F 内分泌疾病相关 AlphaPlex 545 Insulin Kit AlphaPlex 545 ICAM-1 Kit 100 AP204TB-HV 500 AP204TB-C 5,000 AP204TB-F 心血管疾病相关 100 AP282TB-HV 500 AP282TB-C 5,000 AP282TB-F 产品规格 ( 点数 ) 货号免疫炎症相关 100 AP217SM-HV AlphaPlex AP217SM-C IFN- γ Kit 5,000 AP217SM-F 100 AP220SM-HV AlphaPlex AP220SM-C IL-1β Kit 5,000 AP220SM-F 100 AP221SM-HV AlphaPlex AP221SM-C IL2 Kit 5,000 AP221SM-F 100 AP219SM-HV AlphaPlex AP219SM-C IL17 Kit 5,000 AP219SM-F 100 AP208SM-HV AlphaPlex AP208SM-C TNF- α Kit 5,000 AP208SM-F 100 AP326SM-HV AlphaPlex AP326SM-C IP10 Kit 5,000 AP326SM-F 内分泌疾病相关 100 AP204SM-HV AlphaPlex AP204SM-C Insulin Kit 5,000 AP204SM-F 心血管疾病相关 100 AP282SM-HV AlphaPlex AP282SM-C ICAM-1 Kit 5,000 AP282SM-F 试剂盒成分 : 生物素化抗体, 抗体偶联的 AlphaPlex 受体微珠, 链霉亲和素偶联的供体微珠, 标准品, 反应溶液 试剂盒规格 :100 点试剂盒每孔反应体系为 100μL,500/5000 点试剂盒每孔反应体系为 50μL 保存条件 :4 14

15 受体 - 配体结合 结合检测试剂盒 检测配体与受体结合行为的检测试剂盒, 可用于抑制剂研究等 特点 加入 10 µl 样品 高信噪比 使用 进行检测可获得非常高的信噪比 可随时使用 试剂盒中包含有检测所需的试剂和方案, 可立即开始实验 高通量 检测中仅需进行混合操作, 非常适合筛查和大量样品处理 免疫检查点 加入 10 µl His 标记的 PD-L1 加入 10 µl 生物素化 PD-1 加入 10 µl 供体微珠和受体微珠混合溶液 孵育 90 min 检测人 PD-1 与 PD-L1 结合行为的试剂盒 我们还提供检测人 PD-1 与 PD-L1 的免疫测定试剂盒 ( 请参见第 10 页免疫检查点相关信息 ) 检测 615 nm S/N 1600( 存在 5 nm PD-1 时 ) Kd (app) 2.5 nm( 存在 5 nm PD-1 时 ) 6*His-tagged hpd-l1 PD-1/PD-L1 结合抑制试验 Streptavidin Donor beads Biotinylated hpd-1 Anti-His Acceptor beads 产品名称数量 ( 检测点 ) 产品货号 PD-1 and PD-L1 Binding kit 100 AL356HV 500 AL356C 10,000 AL356F 成分 : 抗 His 受体微珠 链霉亲合素供体微珠 生物素化人 PD-1 His-PD-L1 免疫测定缓冲液 (10x) 数量 :1 检测点相当于按试剂盒推荐量 (AL356HV 为 100 μl AL356C/F 为 40 μl) 使用时,1/2 AreaPlate 96 孔板中 1 个孔的用量 保存 :+ 4 受体 - 配体结合检测人 EGF 和 EGFR 结合行为的试剂盒 Signal (Counts) 5 8.0x10 anti PD-1 Ab 6.0x10 5 anti PD-L1 neutralizing Ab anti PD-L1 non-blocking Ab 4.0x x10 5 IC Log [Ab] (g/ml) 试剂盒性能 anti PD-1 Ab 2.157e-007 anti PD-L1 neutralizing Ab 1.334e-007 存在人 PD-1 (5 nm) 和人 PD-L1 (5 nm) 时, 加入抗 PD-1 抗体 ( 绿色 ) 和抗 PD-L1 中和抗体 ( 橙色 ) 进行反应, 观察到 PD-1/PD-L1 的结合受到抑制, 信号下降 S/N 947( 存在 nm EGFR 时 ) Kd (app) 2.5 nm( 存在 nm EGFR 时 ) Streptavidin Donor beads Biotinylated EGF EGF and EGFR Binding kit EGF-EGFR Binding EGFR-Fc 615 nm Anti- IgG Fc-spesific Acceptor beads 产品名称数量 ( 检测点 ) 产品货号 100 AL366HV 500 AL366C 10,000 AL366F EGF/EGFR 结合抑制试验 A l p h a L IS A s i g n a l (c o u n t s ) L o g [ A n t i b o d y ], g /m L M A B A F M A B 存在 EGF (3.5 nm) 和 EGFR (3.5 nm) 时, 加入抗人 EGF 抗体 ( 绿色 :AF231) 和抗人 EGFR 抗体 ( 蓝色 :MAB235) 进行反应 观察到 EGF/EGFR 的结合受到抑制, 信号下降,IC50 分别为 3.9 μg/ml 和 2.2 μg/ml 15

16 AlphaScreen SureFire / SureFire Ultra: 细胞学水平磷酸化检测 细胞磷酸化检测 Alpha SureFire Surefire 是一种用 Mix Only 的方式 来检测细胞内特异性被激活的磷酸化蛋白的方法 Alpha SureFire / SureFire Ultra 在传统的 AlphaScreen Surefire 检测方法中, 用于调控细胞的抗体会与 Protein A 竞争结合, 从而抑制 AlphaScreen Surefire 的信号 新的 采用成熟的 CaptSure TM 技术代替 Protein A, 不仅实现了试剂盒抗体捕获的特异性, 而且具有更低的检测背景 新的试剂盒利用 受体微珠代替 AlphaScreen 受体微珠, 对血红蛋白淬灭干扰具有更加出色的光谱特性 检测特点 : Excita tion Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Phospho-protein i i 615 nm CaptSure Conjugated Acceptor Bead 只需混合 ( Mix & Measure) 细胞样本经过刺激 裂解后, 只需要将试剂组分加入裂解液, 无需任何多余的洗涤步骤 高灵敏度检测灵敏度大于等于 Western Blot 方法 ; 可以检测过表达蛋白靶点及内源水平表达的蛋白 ; 可以使用稳定表达细胞系或原代细胞及干细胞进行试验 满意的 Z' 值可以兼容 或 1536 孔板的不同检测模式, 均可得到很高的 Z' 值 适用于抗体药物的开发使用, 适应组织裂解液样品 (Surefire Ultra) AlphaScreen Surefire Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Phospho-substrate nm Protein A-conjugated Acceptor Bead 在药物研发过程中, 我们进行细胞学水平磷酸化蛋白检测作为功能学研究方法 当待测药物为抗体分子时, 样品中的干扰抗体会与 Protein A 进行非特异性结合从而干扰检测信号 ( 如右下图 ) Surefire Ultra 方法使用新的 Captsure 标签, 有效的避免了这种干扰 而且, 与传统的 Surefire 检测相比,Surefire Ultra 也更加适合应用于肝脏这类器官 组织样品的检测 ( 当操作组织样品时, 请进行匀浆及生物素剔除等预处理 ) Tested therapeutic antibody can saturate protein A Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Phospho-protein Protein A-conjugated Alpha screen Acceptor Bead 16

17 检测步骤 Lysis Buffer Acceptor Mix Donor Mix Measure Transfer Incubate Incubate 刺激细胞, 加入 lysis buffer 裂解细胞 将细胞裂解液与抗体及受体微珠混合, 室温孵育 1~2 小时 加入供体微珠, 室温孵育 1~2 小时 检测 Alpha Surefire 及 Surefire Ultra 检测结果对比 pakt (S473) 1000 perk1/ 2 (T202/ Y204) Alpha Signal (counts) AlphaScreen SureFire SureFire Ultra Insulin Concentration (g/ml) S/B EC50 (ng/ml) Cell Lysate Signal/ Lysis Buffer alone Signal [perk Lysate] µg/ml SureFire Ultra SureFire Ultra +spiked IgG AlphaScreen SureFire AlphaScreen SureFire +spiked IgG 结果对比 MCF7 细胞 (40,000 细胞 / 孔 ) 培养过夜,2 小时无血清培养 用 insulin 刺激 30 分钟后裂解细胞 同时用 AKT(S473)Surefire 及 Surefire Ultra 试剂盒检测 Surefire Ultra 试剂盒得到的 S/B ratio 更高, 检测结果表现出更高的灵敏度 AlphaScreen 激酶检测示例 125 与 IgG 混合后检测结果对比 EGF 刺激 A431 细胞后, 在裂解液中加入 rabbit IgG (10 µg/ml), 分别用 Surefire 和 Surefire Ultra 磷酸化 ERK(T202/204) 检测试剂盒检测梯度稀释的细胞裂解液,Surefire 试剂盒的检测信号在 IgG 抗体的影响下有所降低, 但是 IgG 抗体的加入对 Surefire Ultra 的检测信号不产生任何影响 1,000,000 p-p70 S6K (Ser389) Phosphorylation (%max) AKT IC 50-3x10-6 M P70 S6K IC 50-1x10-6 M AKT (S473) ERK MEK p70 S6K (T389) Signal (Counts) 800, , , , ng of lysate/well [LY294002] Molar 10-5 Western Blot kda PI3K 通路抑制剂特异性检测 NIH-3T3 细胞经过 PI3K 通路抑制剂 LY 处理后再用 PDGF 刺激 分别用 试剂盒检测磷酸化 AKT(Ser473) P70S6K(T389), ERK(T202/Y204), MEK1 (S217/S221) 蛋白 ERK 通路蛋白 ( 磷酸化 ERK 及 MEK) 没有受到抑制剂的作用, 但观察到 PI3K 通路蛋白 ( 磷酸化 AKT 及 p70s6k) 受到特异性的磷酸化表达抑制 AlphaScreen SureFire vs 高灵敏 Western Blot 用 IGF1 刺激 MCF7 细胞后裂解, 分别用 western lightening 及 剂盒检测细胞内源磷酸化 p70s6k(ser389) 蛋白的结果对比 17

18 SureFire Ultra 试剂盒 SureFire Ultra 检测试剂盒 AKT 通路 产品名称检测点货号 p-akt1/2/3 (T308) kit p-akt 1/2/3 (S473) Kit Total AKT1 Kit 100 ALSU-PAKT-A-HV 500 ALSU-PAKT-A500 10,000 ALSU-PAKT-A10K 50,000 ALSU-PAKT-A50K 100 ALSU-PAKT-B-HV 500 ALSU-PAKT-B500 10,000 ALSU-PAKT-B10K 50,000 ALSU-PAKT-B50K 100 ALSU-TAKT-B-HV 500 ALSU-TAKT-B500 10,000 ALSU-TAKT-B10K 50,000 ALSU-TAKT-B50K TGFb/SMAD 通路 产品名称检测点货号 SMAD1 (Ser463/465) Kit SMAD3 (Ser423/425) Kit 100 ALSU-PSM1-A-HV 500 ALSU-PSM1-A500 10,000 ALSU-PSM1-A10K 50,000 ALSU-PSM1-A50K 100 ALSU-PSM3-A-HV 500 ALSU-PSM3-A500 10,000 ALSU-PSM3-A10K 50,000 ALSU-PSM3-A50K mtor 信号 / 转录调控试剂盒 产品名称检测点货号 4E-BP1(Thr37/46) p70 S6K (T389) Kit p-eif2α (S51) Kit p-eif4e (S209) Kit p-mtor(ser2448) Kit p-rps6(ser240/244) Kit 100 ALSU-P4EBP-A-HV 500 ALSU-P4EBP-A500 10,000 ALSU-P4EBP-A10K 50,000 ALSU-P4EBP-A50K 100 ALSU-PP70-A-HV 500 ALSU-PP70-A500 10,000 ALSU-PP70-A10K 50,000 ALSU-PP70-A50K 100 ALSU-PEIF2-A-HV 500 ALSU-PEIF2-A500 10,000 ALSU-PEIF2-A10K 50,000 ALSU-PEIF2-A50K 100 ALSU-PEIF4-A-HV 500 ALSU-PEIF4-A500 10,000 ALSU-PEIF4-A10K 50,000 ALSU-PEIF4-A50K 100 ALSU-PMTOR-A-HV 500 ALSU-PMTOR-A500 10,000 ALSU-PMTOR-A10K 50,000 ALSU-PMTOR-A50K 100 ALSU-PS6R-A-HV 500 ALSU-PS6R-A500 10,000 ALSU-PS6R-A10K 50,000 ALSU-PS6R-A50K NFkB 通路 产品名称检测点货号 p-ikka (Ser176/180) Kit p-nfkb (S536) Kit 100 ALSU-PIKKA-A-HV 500 ALSU-PIKKA-A500 10,000 ALSU-PIKKA-A10K 50,000 ALSU-PIKKA-A50K 100 ALSU-PNFKB-A-HV 500 ALSU-PNFKB-A500 10,000 ALSU-PNFKB-A10K 50,000 ALSU-PNFKB-A50K MAPK 通路 产品名称检测点货号 p-erk (T202/Y204) Kit Total ERK1/2 kit p-p38 MAPK (T180/Y182) Kit Total p38 MAPK Kit p-jnk1/2/3 (Thr183/Tyr185) p-mek1(ser218/222) 100 ALSU-PERK-A-HV 500 ALSU-PERK-A500 10,000 ALSU-PERK-A10K 50,000 ALSU-PERK-A50K 100 ALSU-TERK-A-HV 500 ALSU-TERK-A ALSU-TERK-A10K ALSU-TERK-A50K 100 ALSU-PP38-A-HV 500 ALSU-PP38-A ALSU-PP38-A10K ALSU-PP38-A50K 100 ALSU-TP38-A-HV 500 ALSU-TP38-A ALSU-TP38-A10K ALSU-TP38-A50K 100 ALSU-PJNK-A-HV 500 ALSU-PJNK-A ALSU-PJNK-A10K ALSU-PJNK-A50K 100 ALSU-PMEK1-A-HV 500 ALSU-PMEK1-A ALSU-PMEK1-A10K ALSU-PMEK1-A50K 试剂盒组分 :Lysis buffer, Activation Buffer, Dilution Buffer, Reaction Buffer( 含抗体 ),Streptavidin Donor beads, CaptSure Acceptor beads, Positive control lysate. 检测点数 :100 检测点的每孔检测量是以 1/2 AreaPlate 96 孔板中每孔检测总体积为 60ul 的体系计算 ;500, 10,000 及 检测点的每孔检测量是以 384 孔板中每孔检测总体积为 20ul 的体系计算得出 储存条件 :+ 4 (Control Iysate 20 ) 18

19 SureFire Ultra 检测试剂盒 受体酪氨酸激酶 产品名称检测点货号 p-egfr (Tyr1068) Kit p-igf1 Receptor b p-insuline Receptor b Kit VEGR-Receptor 2 (Tyr1175) Kit MAPK 通路 100 ALSU-PEGFR-A-HV 500 ALSU-PEGFR-A500 10,000 ALSU-PEGFR-A10K 50,000 ALSU-PEGFR-A50K 100 ALSU-PIGFR-A-HV 500 ALSU-PIGFR-A500 10,000 ALSU-PIGFR-A10K 50,000 ALSU-PIGFR-A50K 100 ALSU-PINR-A-HV 500 ALSU-PINR-A500 10,000 ALSU-PINR-A10K 50,000 ALSU-PINR-A50K 100 ALSU-PVGFR-A-HV 500 ALSU-PVGFR-A500 10,000 ALSU-PVGFR-A10K 50,000 ALSU-PVGFR-A50K 产品名称检测点货号 p-erk (T202/Y204) Kit Total ERK1/2 kit p-p38 MAPK (T180/Y182) Kit Total p38 MAPK Kit p-jnk1/2/3 (Thr183/Tyr185) p-mek1(ser218/222) 100 ALSU-PERK-A-HV 500 ALSU-PERK-A500 10,000 ALSU-PERK-A10K 50,000 ALSU-PERK-A50K 100 ALSU-TERK-A-HV 500 ALSU-TERK-A ALSU-TERK-A10K ALSU-TERK-A50K 100 ALSU-PP38-A-HV 500 ALSU-PP38-A ALSU-PP38-A10K ALSU-PP38-A50K 100 ALSU-TP38-A-HV 500 ALSU-TP38-A ALSU-TP38-A10K ALSU-TP38-A50K 100 ALSU-PJNK-A-HV 500 ALSU-PJNK-A ALSU-PJNK-A10K ALSU-PJNK-A50K 100 ALSU-PMEK1-A-HV 500 ALSU-PMEK1-A ALSU-PMEK1-A10K ALSU-PMEK1-A50K 其他 产品名称检测点货号 p-creb (Ser133) Kit Total GAPDH Kit p-slp76(ser376) Kit 100 ALSU-PCREB-A-HV 500 ALSU-PCREB-A500 10,000 ALSU-PCREB-A10K 50,000 ALSU-PCREB-A50K 100 ALSU-TGAPD-A-HV 500 ALSU-TGAPD-A500 10,000 ALSU-TGAPD-A10K 50,000 ALSU-TGAPD-A50K 100 ALSU-PSLP-A-HV 500 ALSU-PSLP-A500 10,000 ALSU-PSLP-A10K 50,000 ALSU-PSLP-A50K SureFire Ultra MultiPlex ( 总蛋白及磷酸化蛋白检测 ) 产品名称检测点货号 Phospho-ERK1/2(Eu) + Total ERK 545(Tb) Phospho-AKT1/2/3 (ser473) (Eu) + Total Akt1(Tb) p-erk1/2 (Eu) + Total ERK 545 (Tb) Kit p-erk (Eu) + p-akt(ser473) (Tb) Kit p-erk (Eu) (directly coupled) * 储存条件 :+4 AKT 通路 100 MPSU-PTERK-K-HV 500 MPSU-PTERK-K500 10,000 MPSU-PTERK-K10K 50,000 MPSU-PTERK-K50K 100 MPSU-PTAKT-K-HV 500 MPSU-PTAKT-K500 10,000 MPSU-PTAKT-K10K 50,000 MPSU-PTAKT-K50K MAPK 通路 100 MPSU-PTERK-K-HV 500 MPSU-PTERK-K ,000 MPSU-PTERK-K-10K 50,000 MPSU-PTERK-K-50K ,000 coming soon 50, ,000 coming soon 50,000 试剂盒组分 :Lysis buffer, Activation Buffer, Dilution Buffer, Reaction Buffer( 含抗体 ),Streptavidin Donor beads, CaptSure Acceptor beads, Positive control lysate. 检测点数 :100 检测点的每孔检测量是以 1/2 AreaPlate 96 孔板中每孔检测总体积为 60ul 的体系计算 ;500 10,000 及 检测点的每孔检测量是以 384 孔板中每孔检测总体积为 20ul 的体系计算得出 储存条件 :+ 4 (Control Iysate 20 ) SureFire Ultra Buffer 及 Beads 产品名称 检测点 货号 10ml ALSU-AB-10mL Activation Buffer 100ml ALSU-AB-100mL 10ml ALSU-DB-10mL Dilution Buffer 100ml ALSU-DB-100mL 10ml ALSU-LB-10mL Lysis Buffer 100ml ALSU-LB-100mL 60ul ALSU-ASDB-0.06mL AlphaScreen Streptavidin Donor Beads-2mg/mL 1.2ml ALSU-ASDB-1.2mL 6ml ALSU-ASDB-6mL 60ul ALSU-ACAB-0.06mL CaptSure Acceptor Beads-2mg/mL 1.2ml ALSU-ACAB-1.2mL 6ml ALSU-ACAB-6mL 19

20 SureFire Ultra 试剂盒 AlphaScreen SureFire(384-well) 及 AlphaScreen SureFire HV(96-well) 检测试剂盒 AKT 通路 产品名称 检测点 货号 500 TGRA2S500 AKT1 (Thr308) Kit 10,000 TGRA2S10K 50,000 TGRA2S50K 500 TGRA3S500 AKT1/2/3 (Thr308) Kit 10,000 TGRA3S10K 50,000 TGRA3S50K 100 TGRA4SHV100 AKT1/2/3 500 TGRA4S500 (Ser473) Kit 10,000 TGRA4S10K 50,000 TGRA4S50K 500 TGRA5S500 AKT1 (Ser473) Kit 10,000 TGRA5S10K 50,000 TGRA5S50K 500 TGRAS500 AKT1/2 (Ser473) Kit 10,000 TGRAS10K 50,000 TGRAS50K 500 TGRA1S500 Total AKT1 Kit 10,000 TGRA1S10K 50,000 TGRAS50K 100 TGRTAPSHV100 Total AKT1/2/3 Kit 500 TGRTAPS500 10,000 TGRTAPS10K 50,000 TGRTAPS50K 500 TGRB2S500 BAD (Ser136) Kit 10,000 TGRB2S10K 50,000 TGRB2S50K 500 TGRBS500 BAD (Ser112) Kit 10,000 TGRBS10K 50,000 TGRBS50K 500 TGRC9S500 Caspase9 (Ser196) Kit 10,000 TGRC9S10K 50,000 TGRC9S50K 500 TGRGAS500 GSK3a (Ser21) Kit 10,000 TGRGAS10K 50,000 TGRGAS50K 500 TGRGBS500 GSK3b (Ser9) Kit 10,000 TGRGBS10K 50,000 TGRGBS50K 500 TGRMT2S500 mtor (Ser2481) Kit 10,000 TGRMT2S10K 50,000 TGRMT2S50K 500 TGRPS500 PDK1 (Ser241) Kit 10,000 TGRPS10K 50,000 TGRPS50K MAPK 通路 产品名称 检测点 货号 500 TGRAF1S500 ATF1 (Ser63) Kit 10,000 TGRAF1S10K 50,000 TGRAF1S50K 500 TGRAF2S500 ATF2 (Thr71) Kit 10,000 TGRAF2S10K 50,000 TGRAF2S50K 500 TGRCJ2S500 c-jun (Ser73) kit 10,000 TGRCJ2S10K 50,000 TGRCJ2S50K 500 TGRCJS500 c-jun (Ser63) kit 10,000 TGRCJS10K 50,000 TGRCJS50K 500 TGRELKS500 ELK1 (Ser383) Kit 10,000 TGRELKS10K 50,000 TGRELKS50K 100 TGRESBHV100 ERK1/2 Renew 500 TGRESB500 (Thr202/Tyr204) kit 10,000 TGRESB10K 50,000 TGRESB50K 100 TGRTESBHV100 Total ERK kit Renew 500 TGRTESB500 10,000 TGRTESB10K 50,000 TGRTESB50K 500 TGRHS27S500 HSP27 (Ser82) Kit 10,000 TGRHS27S10K 50,000 TGRHS27S50K 500 TGRJPS500 JNK (pan) (Thr183/Tyr185) Kit 10,000 TGRJPS10K 50,000 TGRJPS50K 500 TGRJS500 JNK1/3 (Thr183/Tyr185) Kit 10,000 TGRJS10K 50,000 TGRJS50K 500 TGRTJS500 Total JNK Kit 10,000 TGRTJS10K 50,000 TGRTJS50K 500 TGRMK3S500 MKK3/6 (Ser189/207) Kit 10,000 TGRMK3S10K 50,000 TGRMK3S50K 500 TGRMK4S500 MKK4 (Ser257/Thr261) Kit 10,000 TGRMK4S10K 50,000 TGRMK4S50K 500 TGRMS500 MEK1 (Ser217/221) Kit 10,000 TGRMS10K 50,000 TGRMS50K 500 TGR38S500 p38 MAPK Kit 10,000 TGR38S10K 50,000 TGR38S50K 500 TGRT38S500 Total p38 MAPK Kit 10,000 TGRT38S10K 50,000 TGRT38S50K 20

21 mtor 信号 / 转录调控试剂盒 产品名称检测点货号 4E-BP1 (Thr70) 4E-BP1 (Thr37/46) p70 S6K (Thr421/424) Kit p70 S6K (Thr229) Kit p70 S6K (Thr389) Kit Total p70 S6K Kit eif4e (Ser209) Kit mtor (Ser2448) Kit S6 RP (Ser240/244) Kit S6 RP (Ser235/236) Kit 500 TGR4E2S500 10,000 TGR4E2S10K 50,000 TGR4E2S50K 500 TGR4ES500 10,000 TGR4ES10K 50,000 TGR4ES50K 500 TGR702S500 10,000 TGR702S10K 50,000 TGR702S50K 500 TGR703S500 10,000 TGR703S10K 50,000 TGR703S50K 500 TGR70S500 10,000 TGR70S10K 50,000 TGR70S50K 500 TGRT70S500 10,000 TGRT70S10K 50,000 TGRT70S50K 500 TGREIF4S500 10,000 TGREIF4S10K 50,000 TGREIF4S50K 500 TGRMTS500 10,000 TGRMTS10K 50,000 TGRMTS50K 500 TGRS6P2S500 10,000 TGRS6P2S10K 50,000 TGRS6P2S50K 500 TGRS6PS500 10,000 TGRS6PS10K 50,000 TGRS6PS50K TGFb/SMAD 通路 产品名称 检测点 货号 SMAD1 500 TGR4SM1S500 (Ser463/465) Kit 10,000 TGR4SM1S10K 50,000 TGR4SM1S50K 500 TGR4SM2S500 SMAD2 (Ser465/467) Kit 10,000 TGR4SM2S10K 50,000 TGR4SM2S50K 500 TGR4SM1S500 SMAD3 (Ser423/425) Kit 10,000 TGR4SM1S10K 50,000 TGR4SM1S50K NFkB 通路 产品名称检测点货号 NFkB p65 (Ser536) Kit Total NFkB p65 Kit IkBa (Ser32/36) Kit Total IkBa Kit IKKa (Ser176/180) Kit IKKb (Ser177/181) Kit 100 TGRNFSHV TGRNFS500 10,000 TGRNFS10K 50,000 TGRNFS50K 100 TGRTNFSHV TGRTNFS500 10,000 TGRTNFS10K 50,000 TGRTNFS50k 500 TGRIKS500 10,000 TGRIKS10K 50,000 TGRIKS50K 500 TGRTIKS500 10,000 TGRTIKS10K 50,000 TGRTIKS50K 500 TGRKAS500 10,000 TGRKAS10K 50,000 TGRKAS50K 500 TGRKBS500 10,000 TGRKBS10K 50,000 TGRKBS50K JAK/STAT 通路 产品名称检测点货号 STAT1 (Tyr701) Kit STAT3 (Tyr705) Kit Total STAT3 STAT5 (Tyr694/699) Kit 500 TGRS1S500 10,000 TGRS1S10K 50,000 TGRS1S50K 100 TGRS3SHV TGRS3S500 10,000 TGRS3S10K 50,000 TGRS3S50K 100 TGRTS3SHV TGRTS3S500 10,000 TGRTS3S10K 50,000 TGRTS3S50K 500 TGRS5S500 10,000 TGRS5S10K 50,000 TGRS5S50K 21

22 SureFire Ultra 试剂盒 受体酪氨酸激酶 产品名称检测点货号 ALK (Tyr1604) Kit ALK (Tyr1586) Kit Total ALK Kit c-met (Tyr1234/1235) Kit EGFR (Tyr1068) Kit ErbB2 (Tyr1221/1222) Kit IGF1 Receptor (Tyr1135/1136) Kit Insuline Receptor (Tyr1150/1151) Kit VEGR-Receptor2 (Tyr1175) Kit 500 TGRAL2S500 10,000 TGRAL2S10K 50,000 TGRAL2S50K 500 TGRALS500 10,000 TGRALS10K 50,000 TGRALS50K 500 TGRTALS500 10,000 TGRTALS10K 50,000 TGRTALS50K 500 TGRCMS500 10,000 TGRCMS10K 50,000 TGRCMS50K 500 TGRERS500 10,000 TGRERS10K 50,000 TGRERS50K 500 TGREB2S500 10,000 TGREB2S10K 50,000 TGREB2S50K 500 TGRIGFS500 10,000 TGRIGFS10K 50,000 TGRIGFS50K 500 TGRIRS500 10,000 TGRIRS10K 50,000 TGRIRS50K 500 TGRVRS500 10,000 TGRVRS10K 50,000 TGRVRS50K AlphaScreen Protein A 试剂盒 产品名称 检测点 货号 HV AlphaSreen Protein A Kit C 10, M 50, R 若订购 AlphaScreen Surefire 试剂盒, 您需要订购等量的 AlphaScreen Protein A 试剂盒配合使用 AlphaScreen Surefire Buffer 产品名称 检测点 货号 AlphaScreen Surefire 10 ml TGRAB10ML Activation Buffer (1X) 100 ml TGRAB100ML AlphaScreen Surefire 10 ml TGRDB10ML Dilution Buffer (1X) 100 ml TGRDB10ML AlphaScreen Surefire 10 ml TGRLB10ML Lysis Buffer (1X) 100 ml TGRLB100ML 其他 产品名称检测点货号 b-catenin (Ser45) Kit CHK1 (Ser345) Kit CHK2 (Thr68) Kit Cofilin (Ser3) Kit CREB (Ser133) Kit GAPDH Kit Histone H3 (Ser10) Kit p53 (Ser15) Kit p53 (Ser392) Kit Total p53 Kit Topoisomerase II a (Thr1343) Kit Topoisomerase II a (Ser1106) Kit Total Topoisomerase II a Kit 500 TGRBCS500 10,000 TGRBCS10K 50,000 TGRBCS50K 500 TGRCHK1S500 10,000 TGRCHK1S10K 50,000 TGRCHK1S50K 500 TGRCHK2S500 10,000 TGRCHK2S10K 50,000 TGRCHK2S50K 500 TGRCOFS500 10,000 TGRCOFS10K 50,000 TGRCOFS50K 500 TGRCBS500 10,000 TGRCBS10K 50,000 TGRCBS50K 500 TGRGDS500 10,000 TGRGDS10K 50,000 TGRGDS50K 500 TGRH3S500 10,000 TGRH3S10K 50,000 TGRH3S50K 100 TGRP53SHV TGRP53S500 10,000 TGRP53S10K 50,000 TGRP53S50K 500 TGRP532S500 10,000 TGRP532S10K 50,000 TGRP532S50K 100 TGRTP53SHV TGRTP53S500 10,000 TGRTP53S10K 50,000 TGRTP53S50K 500 TGRT2AS500 10,000 TGRT2AS10K 50,000 TGRT2AS50K 500 TGRT2A2S500 10,000 TGRT2A2S10K 50,000 TGRT2A2S50K 500 TGRTT2AS500 10,000 TGRTT2AS10K 50,000 TGRTT2AS50K 试剂盒组分 :Lysis buffer, Activation Buffer, Reaction Buffer( 含抗体 ),Positive control lysate,negative control lysate. 检测点数 :100 检测点的每孔检测量是以 1/2 AreaPlate 96 孔板中每孔检测总体积为 50ul 的体系计算 ;500 10,000 及 检测点的每孔检测量是以 384 孔板中每孔检测总体积为 11ul 的体系计算得出 储存条件 :+ 4 (Control Iysate 20 ) 22

23 SureFire Ultra 多靶点检测 SureFire Ultra 多靶点检测试剂盒 Alpha SureFire Ultra 多靶点检测试剂盒利用 2 种不同波长的 Alpha 受体微珠 615(Eu) 和 AlphaPlex 545(Tb), 可同时 检测细胞裂解液中的内源性磷酸化蛋白质和总蛋白质 SureFire Ultra 多靶点检测的原理 Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Streptavidin-coated Alpha Donor Bead antibody Biotinylated Anti-totalanalyte antibody CaptSure tagged Anti-total-analyte antibody CaptSure tagged Anti-total-analyte antibody 615 nm 615 nm Biotinylated Anti-totalanalyte Phosphoprotein Anti-phospho-analyteconjugated Alpha 615 Acceptor Bead Phosphoprotein Anti-phospho-analyteconjugated Alpha 615 Acceptor Bead SureFire Ultra 多靶点检测示例 Alpha Alpha signal signal Phospho ERK To: al ERK Phospho ERK To: al ERK EGF Concentration(g/mL) EGF Concentration(g/mL) CaptSure agentconjugated Alpha 545 Acceptor Bead 细胞裂解液中的目标蛋白质结合了 CaptSure 标记抗体和 AlphaPlex 545 受体, 其磷酸化部位还结合了抗磷酸化抗体 受体微珠 此外, 目标蛋白质还结合了生物素化抗体与链霉亲合素供体微珠 采用激发光 (680nm) 照射后, 受体微珠 (615nm) 和 AlphaPlex 545 受体微珠 (545nm) 同时发射光信号以供检测 细胞溶解液 Lysis Buffer 细胞溶解液移动 10 5 min 细胞溶解液 min Accepter Mix 细胞溶解液移动 5 min 反应 Lysis Buffer Accepter Mix Donor Mix 反应 1 hour Donor Mix 10 min 1 hour CaptSure agentconjugated Alpha 545 Acceptor Bead 使用化合物等物质刺激 / 处理培养细胞后, 加入裂解缓冲液裂解细胞 移取一部分细胞裂解液至检测用微孔板中 加入受体混合溶液 ( 生物素化抗体 Captsure 标记抗体 CaptSure AlphaPlex 受体微珠 ), 在室温下反应 1 小时 同时检测磷酸化 ERK 和总 ERK 将 A431 细胞接种到微孔板 (40,000 个细胞 / 孔, 培养基为 MEM+10%FCS) 上, 孵育过夜 进行 2 小时的血清饥饿处 理后, 用 EGF 刺激 10 分钟 加入 SureFire Ultra 裂解缓冲液 (100 μl/ 孔 ) 裂解细胞, 取细胞裂解液 10μL 通过 SureFire Ultra 多靶点检测方法同时检测 p-erk 和总 ERK 产品名称 数量 ( 检测点 ) 产品货号 AKT 信号通路 Alpha SureFire Ultra Multiplex p-akt 1/2/3 (S473) (Eu) + Total Akt1 (Tb) Kit MAPK 信号通路 Alpha SureFire Ultra Multiplex p-erk 1/2 (Eu) + Total ERK 545 (Tb) Kit 100 MPSU-PTAKT-K-HV 500 MPSU-PTAKT-K ,000 MPSU-PTAKT-K-10K 50,000 MPSU-PTAKT-K-50K 100 MPSU-PTERK-K-HV 500 MPSU-PTERK-K ,000 MPSU-PTERK-K-10K 50,000 MPSU-PTERK-K-50K 成分 :Alpha 多靶点反应缓冲液 1( 含生物素化抗体 ) Alpha 多靶点反应缓冲 液 2( 含 CaptSure 标记抗体 ) Alpha 615 抗磷酸化抗体受体微珠 Alpha 545 CaptSure 受体微珠 链霉亲合素供体微珠 激活缓冲液 稀释缓冲液 裂解缓冲 液 阳性对照裂解液 数量 :100 检测点试剂盒中的 1 检测点相当于按试剂盒推荐量 (100 µl) 使用时,96 孔微孔板中 1 个孔的用量,500/10,000 检测点试剂盒中的 1 检测点相当于按试剂盒 推荐量 (40 µl) 使用时,1/2 AreaPlate-96 孔板中 1 个孔的用量 产品名称 数量 检测点 (96/384 微孔板 ) SureFire Ultra 60 µl 200/600 Terbium Captsure 1.2 ml 4,000/12,000 Acceptor Beads,2mg/mL 6 ml 20,000/60,000 成分 :Alpha 545 CaptSure 受体微珠 数量 :60 µl 的 Alpha 545 Captsure 供体微珠相当于使用 96 孔微孔板检测时 200 个孔的用量或使用 384 孔微孔板检测时 600 个检测点的用量 反应 1 hour Measure 反应 1 hour Measure 加入供体微珠, 在室温下反应 1 小时 检测 产品价格 产品名称 数量 ( 检测点 ) 产品货号 ,000 Alpha SureFire Ultra ,000 MultiPlex kit 10,000 on request 50,000 on request SureFire Ultra Terbium CaptSure Acceptor Beads 60 µl 39, ml 390,000 6 ml on request 23

24 AlphaScreen PhosphoSensor 及 Tyrosine Kinase 无需磷酸化抗体的检测方法 :AlphaScreen PhosphoSensor AlphaScreen PhosphoSensor 受体微珠上包被有 Lewis 金属离子用来捕获磷酸化基团 (LM3+) 当生物素化底物被激酶磷酸化后,PhosphoSensor 受体微珠结合磷酸根基团, 同时链霉亲和素 (SA) 包被的供体微珠结合生物素, 此时可以检测到有效信号 如果您没有特异性的磷酸化抗体, 此试剂盒是很好的选择 产品名称检测点货号 1, D AlphaScreen PhosphoSensor Assay kit 10, M 试剂盒组分 :phosphosensor 受体微珠, 链霉亲和素供体微珠, 生物素标记肽, 缓冲液 检测点数 : 以 384 孔板 25ul 总反应体系的反应为一个检测点的计算量 储存条件 :+ 4 Streptavidin- or Glutathione-coated Alpha Donor Bead Biotinylated or GST-tagged Substrate {LM3+ {LM nm {LM3+ {LM3+ {LM3+ {LM3+ PhosphoSensor Acceptor Bead {LM3+ {LM3+ 需要使用抗体的检测方法 酪氨酸激酶磷酸化检测试剂盒 AlphaScreen 磷酸化酪胺检测试剂盒 (PY20, PT66, P-Tyr-100) 在酪氨酸激酶的激活下可以检测蛋白或多肽底物的磷酸化水平 丝氨酸 / 苏氨酸激酶磷酸化检测试剂盒丝氨酸 / 苏氨酸激酶活性的检测可以使我们市售的以下试剂 : 抗丝氨酸 / 苏氨酸特异性抗体及 AlphaScreen IgG 检测试剂盒 (Protein A 或种属特异性二抗 ) nm nm 产品名称 检测点 货号 Phosphotyrosine (PY20) Assay kit C 10, M Phosphotyrosine (PT66) Assay kit C 10, M Phosphotyrosine (P-Tyr-100) Assay kit C 10, M 试剂盒组分 : 链霉亲和素包被供体微珠, 抗磷酸化酪胺抗体包被的受体微珠, 生物素化抗磷酸化酪胺多肽, 对照缓冲液 检测点数 : 以 384 孔板 25ul 总反应体系的反应为一个检测点的计算量 储存条件 :+ 4 产品名称 检测点 货号 Mouse IgG detection kit M 10, R Rabbit IgG detection kit M 10, R Protein A IgG detection kit M 10, R 试剂盒组分 : 链霉亲和素包被供体微珠, 二抗包被或 Protein A 包被的受体微珠, 生物素化抗体, 对照缓冲液 检测点数 : 以 384 孔板 25ul 总反应体系的反应为一个检测点的计算量 储存条件 :+ 4 24

25 AlphaScreen GPCR 及功能学检测 camp 检测 camp 检测试剂盒 AlphaScreen camp 检测是基于细胞产生的游离 camp 及生物素化 camp 探针竞争的检测原理 生物素化的 camp 会将供体微珠和受体微珠之间的距离拉近从而产生一个特异性信号 当细胞内源性 camp 含量增加时, 细胞内的 camp 会替代生物素化 camp 探针与供体微珠相结合, 产生的 Alpha 信号会随之降低, 信号降低的量与细胞内 camp 的量成一定比例 产品名称 检测点 货号 1, D AlphaScreen camp assay kit 10, M 50, R camp biotin supplement 10, M 50, R 100 AL315HV camp assay kit 500 AL315C 5,000 AL315F 试剂盒组分 : 链霉亲和素供体微珠, 抗 camp 抗体标记受体微珠, 生物素标记 camp,camp 标准品, 缓冲液 检测点数 : 以 384 孔板 25 ul 总反应体系的反应为一个检测点的计算量 储存条件 :+ 4 磷酸化 AKT ERK 检测 Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Biotinylated-cAMP Intracellular-cAMP nm Anti-cAMP Conjugated Acceptor Bead AlphaScreen Surefire AKT ERK 检测试剂盒 Gq Gi 协同作用的 GPCR 靶点通常很难用 camp 或钙流的方法检测 对于这类靶点, 我们会选择 ERK 盒 AKT 来进行检测 具体检测原理及产品信息, 请参见 p16~p22 页 针对小鼠神经干细胞 (mnsc) 进行 AlphaScreen Surefire 检测示例 ( 右图 ) 利用 AlphaScreen Surefire ERK 试剂盒检测 PAC(Pituitary adenylate cyclase activating peptide PACAP receptor1) 信号通路 右侧上图展示了在不同配体作用下随着时间推移 ERK 磷酸化水平的变化 右侧下图展示了随着不同配体浓度的变化 ERK 磷酸化水平的变化 将不同配体加入 mnsc 细胞培养液中, 培养基移除后, 加入 Surefire 裂解液, 随后遵照试剂盒说明书进行磷酸化 ERK 检测 Ref; Lodge AP, Langmead CJ, Daniel G, Anderson GW, Werry TD., Performance of mouse neural stem cells as a screening reagent:characterization of PAC1 activity in medium-throughput functional assays. J Biomol Screen Feb;15(2) Neurosciences CED, GlaxoSmithKline Research & Development, Harlow, Essex, UK. cgmp 检测 ERK Phosphorylation (% PACAP38 max) ERK Phosphorylation (% PACAP38 max) 200 PACAP PACAP38-6 VIP ATP-4 Buffer Time (min) PACAP27 10min PACAP38 10min VIP 10min ATP 5min [Ligand] (Log10M) cgmp 检测试剂盒此试剂盒是用来检测样品中 cgmp 含量的 它可以检测治疗性靶点, 如磷酸二酯酶 (phosphodiesterase) 苷酸环化酶 (guanylate cyclase) 一氧化氮合成等等 检测是以竞争法检测为基础 : 生物素化 cgmp 与样品中游离的 cgmp 竞争特异性抗 cgmp 抗体位点 使用此试剂需要同时购买 Protein A( ) 检测试剂盒 产品名称 检测点 货号 Biotinylated cgmp Supplement 10, M with Antibody kit 50, R C AlphaScreen Protein A kit 10, M 50, R 100 AL316HV cgmp assay kit 500 AL316C 5,000 AL316F 试剂盒组分 :Biotinylated cgmp Supplement with Antibody kit: 生物素化 cgmp, 抗 cgmp 抗体 Protein A kit: 链霉亲和素供体微珠,Protein A 包被受体微珠 检测点数 : 以 384 孔板 25ul 总反应体系的反应为一个检测点的计算量 储存条件 :+ 4 25

26 Alpha Biologics: 生物药物相关应用 Biologics Alpha 技术 为抗体药物研发提供可靠性和重现性更好的数据和结果 基于细胞的筛选 Alpha 技术具有宽泛的线性范围, 可满足对样品进一步稀释的更高要求 杂交瘤筛选 (vs ELISA) Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Biotinylated target Sample (antibody) -Cell lysate -Ce supernatant 615 nm Anti-lgG-conjugated Acceptor Bead Vainshtein I, Kurose S, Vickroy J, Russell Grove J, Liang M. Fast and efficient soluble antigen-antibody screening using homogeneous AlphaScreen assay. Poster Presentation. SBS 11th Annual Conference. September 2004, Orlando(USA) signal(counts) >5 logs Dynamic Range log [target](g/ml) CHO 细胞产生的抗体量检测 免疫检测试剂盒 Lectin 结合检测 描述 数量 货号 検出下限 (well) in Buffer in Serum IgG 500 AL205C Immunoassay kit 5,000 AL205F 0.24ng/mL N/A 产品特点等方面的详细信息, 请参阅 11 页 615 nm signa l(counts) LDL=455 pg/ml Log [ IgG] (g/ml) Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Alpha Signal (count) IgG1 LCA (αfuc) degly. IgG1 Biotinylated- Lectin blank Alpha Signal (count) IgG1 Anti-IgK antibody ECL (Galβ4GlcNAc) degly. IgG1 blank Alpha Signal (count) Anti-analyte-conjugated Acceptor Bead M Onitsuka, T Omasa. Rapid evaluation of N-glycosylation status of antibodies with chemiluminescent lectin-binding assay. Journal of Bioscience and Bioengineering Dec 使用生物素化凝集素及完整的 IgG1 来检测去糖基化的 IgG1 0 GSLⅡ ( βglcnac) IgG1 degly. IgG1 blank IgG 免疫检测试剂盒标准曲线 26

27 同型筛选 免疫检测试剂盒 产品名称数量货号检测下限检测上限 (well) 100 AL307HV IgG1 (isotyping) 1,000, AL307C 47 pg/ml immunoassay kit pg/ml 5,000 AL307F 100 AL308HV IgG2 (isotyping) 500 AL308C immunoassay kit 5,000 AL308F 100 AL309HV IgG3 (isotyping) 3,000, AL309C 500 pg/ml immunoassay kit pg/ml 5,000 AL309F 100 AL310HV IgG4 (isotyping) 500, AL310C 300 pg/ml Immunoassay kit pg/ml 5,000 AL310F IgA 500 AL262C 3,000, pg/ml Immunoassay kit 5,000 AL262F pg/ml IgE 500 AL292C 3,000, pg/ml Immunoassay kit 5,000 AL292F pg/ml IgM 500 AL263C 3,000, pg/ml Immunoassay kit 5,000 AL263F pg/ml 100 AL522HV Mouse IgG1 (isotyping) 3,000, AL522C 117 pg/ml Immunoassay kit pg/ml 5,000 AL522F 产品名称 数量 (well) 货号 检测下限 检测上限 100 AL523HV 1,000,000 Mouse IgG2a (isotyping) 500 AL523C 23 pg/ml pg/ml Immunoassay kit 5,000 AL523F 100 AL524HV 1,000,000 Mouse IgG2b (isotyping) 500 AL524C 60 pg/ml pg/ml immunoassay kit 5,000 AL524F MouseIgG3 (isotyping) 100 AL525HV 1,000,000 immunoassay kit 500 AL525C 60 pg/ml pg/ml 5,000 AL525F 100 AL528HV 1,000,000 Mouse IgA (isotyping) 500 AL528C 00 pg/ml pg/ml Immunoassay kit 5,000 AL528F 100 AL526HV 1,000,000 Mouse IgE (isotyping) 500 AL526C 40 pg/ml pg/ml Immunoassay kit 5,000 AL526F 100 AL527HV 1,000,000 Mouse IgM (isotyping) 500 AL527C 104 pg/ml pg/ml Immunoassay kit 5,000 AL527F 产品特点等方面的详细信息, 请参阅 5~13 页 抗体工程 Fc 区域改造体筛选 Streptavidin Donor Beads Trastuzumab or Fc Variants Lazar GA, Dang W, Karki S, Vafa O, Peng JS, Hyun L, Chan C, Chung HS, Eivazi A, Yoder SC, Vielmetter J, Carmichael DF, Hayes RJ, Dahiyat BI. Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function. Proc Natl Acad Sci U S A Mar 14;103(11): Xencor-USA Fcγ 受体结合检测试剂盒 该试剂盒基于人 IgG Fc 区域与 Fc 受体之间的结合, 并在此基础上采用竞争法检测来鉴定抗体与 Fc 受体的亲和力, 适用于诸如高 ADCC 活性的抗体筛选 Streptavidin Donor beads GST-FcγRIIIa (CD16a) Biotinylated FCGR3A Biotin-IgG IgG sample Anti-GST Acceptor Beads 615 nm IgG Fc region conjugated Acceptor beads 生物素化的 Fc 受体 (FCGR3A) 与链霉亲和素包被的供体微珠相结合, 其与偶联了血清衍生人 IgG (Fc 区 ) 的受体微珠结合并产生发光信号 当用于评价 IgG 样品亲和力时, 若其亲和力更强, 便会与 IgG (Fc 区 ) 偶联受体微珠竞争与 Fc 受体 (FCGR3A) 结合并抑制信号, 信号将随着 IgG 样品的量增加而降低 log [trastuzumab] (M) log [trastuzumab] (M) 曲妥珠单抗的 Fc 区域改造体亲和力结合试验 : FcγRIIIa (V158) 的变种 ( 左上 ), FcγRIIIa (F158) ( 右上 ),FcγRIIIa (V158) ( 下 ) 免疫检测试剂盒 log [trastuzumab] (M) Buffer ( * ) wild Type ( ) S239D ( ) I332E ( ) S239D/I322E ( ) S239D/I332E/A330L ( ) 产品名称 数量 (well) 货号 100 AL347HV FCGR3A (176Val) Binding Kit 500 AL347C 5,000 AL347F Biotinylated FCGR3A (176Phe) 1.5 μg AL347S 100 AL348HV FCGR3A (176Val) Binding Kit 500 AL348C 5,000 AL348F Biotinylated FCGR3A (176Val) 1.5 μg AL348S 数量 :1 个检测点相当于按试剂盒推荐量 (40 μl) 使用时,384 孔板或 96 孔板中 1 个孔 的用量 产品特点等方面的详细信息, 请参阅 5~13 页 27

28 Alpha Biologics: 生物药物相关应用 工艺开发 免疫检测试剂盒 CHO Host Cell Protein Detection Assay 产品名称检测点货号检测下限检测上限 615 nm CHO cell protein (CHO-P) 500 AL210C 181 pg/ml 300,000 pg/ml Immunoassay kit 5,000 AL210F CHO cell protein (CHO-P) 500 AL301C 130 pg/ml 1,000,000 pg/ml Immunoassay kit (Broad Reactivity) 5,000 AL301F Biotinylated anti-chop HCP PER.C6 HCP Immunoassay kit 500 AL302C 1486 pg/ml 1,000,000 pg/ml 5,000 AL302F Residual Protein A Immunoassay kit 500 AL287C 10.8 pg/ml 300,00 pg/ml 5,000 AL287F Host cell residual DNA Immunoassay kit 500 AL331C 0.06 ng/ml 300,000 pg/ml 5,000 AL331F Streptavidin-coated Alpha Donor Bead HCPs Anti-CHOP HCP Conjugated Acceptor Bead PK / PD 免疫原性 免疫检测试剂盒 产品名称 数量 货号 検出下限 検出上限 人 小鼠 大鼠 牛 猪 狗 猩猩 猴 (well) in Buffer in Serum 交差性 IgG4 (PK/PD study) 500 AL304C Immunoassay 5000 AL304F 18 pg/ml 35 pg/ml 300,000 pg/ml AL313HV Anti-PEG IgM 500 AL313C Immunoassay kit 5000 AL313F 6.7 ng/ml 100,000 pg/ml ADA 检测 高灵敏度符合 FDA 的指导原则 ( ng/ml) 卓越的重现性 ( 10%CV) 最小的基质效应 ( 血清成分的干扰 ) + 酸处理样品可耐受药物抗体达 100 μg/ml, - 酸处理为 10 μg/ml 宽泛动态范围 Biotinylated target 615 nm signal(counts) LPC MPC HPC Prozone > 20 µg/ml Cut-point log [positive control](g/ ml) -4 Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Anti-Drug antibody (ADA) Drug-conjugated Acceptor Bead LPC low level PC :15 ng/ml MPC medium level PC :250 ng/ml HPC high level PC :1000 ng/ml 28

29 Tips: Semi-Wash Alpha ( 血液中使用胰岛素制剂的浓度测量 ) 当使用低纯度 ( 特异性 ) 抗体作为检测抗体并需要提高灵敏度 Anti species IgG Fc Donor Beads 受体微珠包被的制备流程 使用 high binding 高结合力微孔板预涂覆受体微珠受体 antigen IgG sample (serum or hybridoma) 1x wash 1x wash 离心,20 度放置 1 晚 Anti antigen IgG Acceptor Beads 缓冲液洗涤 1 次 Wash:MCA (HUI-001) - PCA (Pen) :MCA (HUI-001) - PCA (Pen) LOD:0.3 pm LOD:~50 pm cps cps ph Insulin ph Insulin 结论 : 使用未纯化多克隆抗体检测胰岛素 (PCA-Pen) 左图为使用 Alpha 半洗涤步骤, 右图为使用直接混合检测 结果显示当使用半洗涤步骤时, 即便使用纯度低的多克隆抗体也能够高检测灵敏度 Ref: Fritz Poulsen, Wash-LOCI-A Semi-Heterogeneous Version of the LOCI Technology Allowing Removal of Unbound Material After Each Assay Step., Chapter 16, Trends in Immunolabelled and Related Techniques. 29

30 Epigenetics 表观遗传学 体外酶学实验 基于细胞实验 筛选的目标为组蛋白修饰酶, 我们可为您提供检测细胞学水平的组蛋白试剂盒, 且实验流程可在一个孔内完成 体外酶学实验 在被特定的酶修饰过的组蛋白 H3 或 p53 中, 加入生物素化的抗体和链霉亲和素包被的供体微珠, 受体微珠上的抗体识别修饰过的氨 基酸区域, 形成三明治夹心, 组蛋白夹在中间, 使供体微珠与受体微珠相互靠近, 产生反应并检测出信号 也可使用生物素化多肽作为底物 还可通过使用已甲基化或乙酰化的底物, 进行脱甲基酶或脱乙酰基酶活性的检测 K + Enzyme SAM SAH Me K Me K Bead ated Ab + SA-Donor eptor Bead Bead + Biotinyl ated Ab + Ab-Acceptor Bead Me K 615 nm 615 nm 优点简单操作 均相法测定, 不需要洗板和分板 高特异性 使用的抗体具有组蛋白修饰基团的高特异性 可直接使用 提供以下酶的测定 B B Me K Ready to Use 对于下列酶的测定, 我们提供相应的技术说明 PerkinElmer 公司并不出售酶和底物 我们会提供酶以及一些必要试剂的供应商 抗体特异性数据等, 详情请参阅技术说明和产品数据表 产品数据表, 可以从 下载 Histone H3 Full-length protein assay available in Alpha SET7/9 P300 PRMT4/CARM1 Writers PRMT6 G9a EZH2 NSD2 NSD3 DOT1L NH 2 AR 2 T 3 K 4 QTARK 9 S 10 TGGKAPRKQLATKAARR 26 K 27 SAPATGGVK 36 KPHR...K 79 Erasers LSD1 SIRT1 JMJD1A JMJD2A JMJD2C HDAC1 JMJD3 HDAC1 JMJD2A p53 N p53 K382Ac SIRT1 Histone 4 Writers PRMT1 PRMT3 PRMT5 PRMT6 KAT5/TIP60 SET8 NH 2 SGR 3 GK 5 GGK 8 GLGK 12 GGAK 16 RHRK 20 VLRDNIQGI... methylation demethylation acetylation deacetylation 30

31 受体微珠 甲基化修饰 抗体特异性 Ready to Use Mark Methyl- Anti-mark 受体微珠 me1 me2 me3 Demethylase transferase 货号规格检测点 AL119C 250 µg 500 H3K4 unmodified LSD1 AL119M 5 mg 10,000 AL119R 25 mg 50,000 AL116C 250 µg 500 H3K4me1-2 SET7/9 AL116M 5 mg 10,000 AL116R 25 mg 50,000 AL138C 250 µg 500 H3K9/K27 unmodified JMJD1A AL138M 5 mg 10,000 AL138R 25 mg 50,000 AL117C 250 µg 500 H3K9me2 G9a JMJD2A AL117M 5 mg 10,000 AL117R 25 mg 50,000 AL121C 250 µg 500 H3K27me2-1 EZH2 JMJD3 AL121M 5 mg 10,000 AL121R 25 mg 50,000 AL122C 250 µg 500 H3K27me3 AL122M 5 mg 10,000 AL122R 25 mg 50,000 AL123C 250 µg 500 H3K36me2 JMJD2A AL123M 5 mg 10,000 AL123R 25 mg 50,000 NSD2 AL152C 250 µg 500 H3K36me2 (Nucleosome) NSD3 AL152M 5 mg 10,000 AL152R 25 mg 50,000 AL139C 250 µg 500 H3R2me2 PRMT6 AL139M 5 mg 10,000 AL139R 25 mg 50,000 AL147C 250 µg 500 H3 protein (C-ter) DOT1L AL147M 5 mg 10,000 AL147R 25 mg 50,000 AL151C 250 µg 500 H3/H4R me generic PRMT4/CARM1 AL151M 5 mg 10,000 AL151R 25 mg 50,000 AL145C 250 µg 500 H4K20me1 SET8 AL145M 5 mg 10,000 AL145R 25 mg 50,000 (2a) PRMT1 AL150C 250 µg 500 (2s) PRMT3 H4R3me PRMT5 AL150M 5 mg 10,000 PRMT6 AL150R 25 mg 50,000 O-GlcNAc 修饰 Mark 抗体特异性 Ready to Use 货号规格检测点 S400-O-GlcNAc (S1011-O-GlcNAc) OGA (N-acetylglucosaminidase) 数量 : 在 384 孔板中进行测定 ( 反应体系为 25 µl) 所得,250 µg 的受体微珠可测 500 个点 保存 :+4 AL144C 250 µg 500 AL144M 5 mg 10,000 AL144R 25 mg 50,000 31

32 Epigenetics 受体微珠 Mark H3K4 unmodified H3K9/K27 unmodified H3K9ac H3K27ac Acetyl Lysine generic p53 K382ac 生物素化的抗组蛋白抗体 Mark H3 protein (C-ter) 乙酰化修饰 Ready to Use Acetyl-transferase Deacetylase Anti-mark Acceptor Beads 货号规格检测点 AL119C 250 µg 500 SIRT1 AL119M 5 mg 10,000 AL119R 25 mg 50,000 AL138C 250 µg 500 HDAC1 AL138M 5 mg 10,000 AL138R 25 mg 50,000 AL114C 250 µg 500 p300 AL114M 5 mg 10,000 AL114R 25 mg 50,000 AL120C 250 µg 500 HDAC1 AL120M 5 mg 10,000 AL120R 25 mg 50,000 AL143C 250 µg 500 KAT5 (TIP60) AL143M 5 mg 10,000 AL143R 25 mg 50,000 Non-Histone Target AL124C 250 µg 500 SIRT1 AL124M 5 mg 10,000 AL124R 25 mg 50,000 数量 : 在 384 孔板中进行测定 ( 反应体积为 25 µl) 所得,250 µg 的受体微珠可测 500 个点 保存 :+ 4 H4 protein (C-ter) H3K79me2 甲基化修饰 抗体特异性 Ready to Use me1 me2 me3 Methyl- Anti-mark 受体微珠 Demethylase transferase 货号规格检测点 SET7/9 AL118C 2 µg 500 NSD2 AL118M 40 µg 10,000 NSD3 AL118R 200 µg 50,000 AL146C 2 µg 500 SET8 AL146M 40 µg 10,000 AL146R 200 µg 50,000 AL148C 2 µg 500 DOT1L AL148M 40 µg 10,000 AL148R 200 µg 50,000 数量 : 在 384 孔板中进行测定 ( 反应体积为 25 µl) 所得,250 µg 的受体微珠可测 500 个点 保存 :+ 4 供体微珠 产品名称货号规格检测点 Streptavidin-coated Donor beads S 1 mg 2, mg 10, B 50 mg 100,000 数量 : 在 384 孔板中进行测定 ( 反应体系 25 µl) 所得,1 mg 的微珠可测 2,000 个点 保存 :+ 4 反应缓冲液 产品名称货号规格检测点 AL008C 10 ml 20,000 5X Epigenetics Buffer 1 AL008F 100 ml 200,000 包含 : 5X Epigenetics Buffer1, 30X Epigenetics Buffer Supplement 保存 :+ 4 组蛋白检测试剂盒 产品名称货号检测点 Total Histone H4 detection kit AL726HV 100 AL726C 500 AL726F 5,000 AlphaPlex 545 受体微珠 产品名称 货号 规格 检测点 Anti-unmodified H3K4 AP119TB-C 250 μg 500 AlphaPlex 545 AP119TB-M 5 mg 10,000 Acceptor Beads AP119TB-R 25 mg 50,000 32

33 基于细胞的实验 可检测细胞内组蛋白修饰的试剂盒 无需洗涤, 可在一个孔内快速检测细胞裂解液中修饰的组蛋白 615 nm 原理 细胞裂解液中含有被修饰的组蛋白, 依次加入抗修饰基团的抗体标记的受体微珠, 生物素化抗组蛋白抗体与链霉亲和素包被的供体微珠 修饰的组蛋白使供体微珠和受体微珠相互接近, 产生信号并检测 B Me K 实验操作步骤 全部实验步骤可在同一个孔内完成 细胞学水平检测试剂盒 PREPARATION Overnight Seed cells in plate 4 hours Treat cells overnight EXTRACTION 25 min Add Cell-Histone Lysis Buffer 15 min Add Cell-Histone Extraction Buffer 10 min DETECTION 90 min Add Acceptor Beads and Biotinylated Anti-H3 60 min Add Donor Beads 30 min Read Plate on EnVision or EnSpire Mark 产品名称 检测点 货号 100 AL714HV H3K9ac H3K9ac Cellular Detection kit 500 AL714C 5,000 AL714F 100 AL716HV H3K4me2 H3K4me2 Cellular Detection kit 500 AL716C 5,000 AL716F 100 AL717HV H3K9me2 H3K9me2 Cellular Detection kit 500 AL717C 5,000 AL717F 100 AL727HV H3K9me3 H3K9me3 cellular Detection kit 500 AL727C 5,000 AL727F 100 AL719HV Unmodified H3K4 unmodified Cellular Detection kit 500 AL719C 5,000 AL719F 100 AL720HV H3K27ac H3K27ac Cellular Detection kit 500 AL720C 5,000 AL720F 100 AL721HV H3K27me2-1 H3K27me2-1 Cellular Detection kit 500 AL721C 5,000 AL721F 100 AL722HV H3K27me3 H3K27me3 Cellular Detection kit 500 AL722C 5,000 AL722F 100 AL723HV H3K36me H3K36me Cellular Detection kit 500 AL723C 5,000 AL723F 100 AL748HV H3K79me2 H3K79me2 Cellular Detection kit 500 AL74 8C 5,000 AL748F 100 AL724HV H2A-K119ub H2A-K119ub Cellular Detection kit 500 AL724C 5,000 AL724F 100 AL725HV Total H2A Total H2A Cellular Detection kit 500 AL725C 5,000 AL725F Total H4 Total Histone H4 Cellular Detection kit 500 AL729C 5,000 AL729F 数量 : 在 1/2 AreaPlate-96 孔板中使用推荐的体积 (50μL) 时, 可使用的总量 保存 :+ 4 试剂盒组分 抗修饰基团的组蛋白 H3 的抗体标记的受体微珠 链霉亲和素包被的供体 生物素化抗组蛋白 H3(C- 末端 ) 抗体 Cell-Histone Lysis buffer Cell-Histone Extraction buffer Cell-Histone Detection(10X)buffer! 其他实验中所需要的试剂以及实验步骤 抗体特异性等数据, 请参考产品数据表 Cell-Histone Buffer Set 细胞学水平的组蛋白检测试剂盒内已包含缓冲液, 您也可以单独购买 产品名称 检测点 货号 500 AL009C Cell-Histone Buffer Set 5,000 AL009F 保存 :+ 4 33

34 Epigenetics Bromodomain 蛋白结合抑制实验 Bromodomain (BRDs) 被认为是乙酰化组蛋白残基的 Reader, 与多种疾病相关 BRD4 是 BET 家族 (BD1,BD2) 的一员, 因其是重要的药物研发靶点而受到关注 我们的试剂盒可以用来检测 BRD4 与乙酰化组蛋白多肽的相互作用 试剂盒可用于抑制实验的高通量筛选平台 615 nm JQ1 对 BRD4 (BD1) - H4 K5Ac 结合抑制曲线 8.0x10 5 Streptavidin-coated Donor bead GST-tagged bromodomain Biotinylated acetylated peptide Glutathione (GSH)-conjugated Acceptor Bead Signal (Counts) 6.0x x x Log [JQ-1], M GST-tagged-bromodomain (GST-BRD) 与生物素化的乙酰化多肽 (biotin-h4) 反应后, 再加入链霉亲和素包被的供体微珠和谷胱甘肽标记的受体微珠 GST-BRD 与 biotin-h4 相互作用从而使得供体微珠与受体微珠相互接近, 产生 615nm 的信号 BRD4 (BD1) 和 H4K5Ac 多肽的终浓度为 25 nm,alpha 试剂盒检测出浓度范围为 3 pm 10 μm 的 JQ1 抑制曲线 Mark (H4 ac) 产品名称 K5 K8 K12 K16 检测点货号 500 AL601C 〇 BRD4_BD1 / H4 K5Ac Binding Kit 5,000 AL601F 500 AL602C 〇 BRD4_BD2 / H4 K5Ac Binding Kit 5,000 AL602F 500 AL603C 〇 BRD4_BD1 / H4 K8Ac Binding Kit 5,000 AL603F 500 AL604C 〇 BRD4_BD2 / H4 K8Ac Binding Kit 5,000 AL604F 500 AL605C 〇 BRD4_BD1 / H4 K12Ac Binding Kit 5,000 AL605F 500 AL606C 〇 BRD4_BD2 / H4 K12Ac Binding Kit 5,000 AL606F 500 AL609C 〇〇〇〇 BRD4_BD1 / H4 K5,8,12,16Ac Binding Kit 5,000 AL609F 500 AL610C 〇〇〇〇 BRD4_BD2 / H4 K5,8,12,16Ac Binding Kit 5,000 AL610F 500 AL611C 〇〇〇 BRD4_BD1 / H4 K5,8,12Ac Binding Kit 5,000 AL611F 500 AL612C 〇〇〇 BRD4_BD2 / H4 K5,8,12Ac Binding Kit 5,000 AL612F 500 AL613C 〇〇 BRD4_BD1 / H4 K5,12Ac Binding Kit 5,000 AL613F 500 AL614C 〇〇 BRD4_BD2 / H4 K5,12Ac Binding Kit 5,000 AL614F 500 AL615C 〇〇 BRD4_BD1 / H4 K8,16Ac Binding Kit 5,000 AL615F 500 AL616C 〇〇 BRD4_BD2 / H4 K8,16Ac Binding Kit 5,000 AL616F 产品名称 检测点 货号 Total Histone H4 500 AL729C Cell Detection Kit 5,000 AL729F 试剂盒组分 Glutathione Acceptor beads Streptavidin-coated Donor beads Biotinylated H4 peptide, lyophilized GST-tagged BRD4 5X Epigenetics Buffer 1 30X Epigenetics Buffer Supple- ment Pioneering the Science of Epigenetics ** EpiCypher Inc. 是一家专业研究表观遗传学和染色质领域的公司, 提供真正高质量的产品 该试剂盒是与 EpiCypher 公司合作研发 34

35 Alpha Tool Box Protein-Protein Interaction 利用供体与受体微珠结合, 可建立检测蛋白与蛋白相互作用的目标化合物筛选系统 通过选择组合 Alpha 工具盒已有的供体微珠与受体微珠, 可检测蛋白 蛋白相互作用, 或蛋白 核酸相互作用等多种测定系统 除以下相互作用方式外, 其他的参考方法可在 TechSupport(www.perkinelmer.com) 中查询相关的文献列表 p53/ HDM2 结合的低亲和性 (Protein/Protein 相互作用 ) AlphaScreen Streptavidin Donor Beads (# ) Anti-GST Acceptor Beads (#AL110) 通过检测 IgE 的五聚体来测定硫酸软骨素蛋白 AlphaScreen Unconjugated Donor Beads (# ) Anti-IgM Acceptor Beads (#AL130) 蛋白 - 蛋白相互作用的抑制剂测定 AlphaScreen Nickel chelate detection kit (# ) nm Streptavidin-coated Alpha Donor Bead GST-tagged HDM2 Biotinylated P53 Anti-GST-conjugated Acceptor Bead DNA 甲基转移酶测定 (DNA/Protein 相互作用 ) AlphaScreen Streptavidin Donor Beads (# ) Unconjugated Acceptor Beads (# ) Antibody conjugated Acceptor Bead Anti-IgM conjugated Alphascreen Donor Bead IgM Biotinylated Anti-Ac Lys9 CSPG (>200kDa) Anti-IgM conjugated Acceptor Bead 蛋白酶 (BACE-1) 测定 AlphaScreen Streptavidin Donor Beads (# ) Unconjugated Acceptor Beads (# ) Anti-sAPPb IgG Conjugated Acceptor Bead Streptavidin-coated Alpha Donor Bead {Ni2+ His-tagged HOP TPR2A HOP {Ni2+ Biotinylated Hsp90 Peptide {Ni2+ {Ni2+ {Ni2+ {Ni2+ {Ni2+ {Ni2+ Nickel Chelate-coated AlphaScreen Acceptor Bead Reference Yi, F., Zhu, P., Southall, N., Inglese, J., Austin, C.P., Zheng, W. & Regan, L. An AlphaScreenbased high-throughput screen to identify inhibitors of Hsp90-cochaperone interaction. J Biomol Screen 14, (2009). Dept. Molecular Biophysics & Biochemistry, Yale University NIH Chemical Genomics Center MHCⅠ 类, 以及 Ⅱ 类多肽结合 AlphaScreen Streptavidin Donor Beads (# ) Unconjugated Acceptor Beads (# ) Methyl-Binding Protein sappb nm Alphascreen Streptavidin Donor Bead Biotinilated Origonucleotide Streptavidin-coated Alpha Donor Bead sappa BACE-1 β 2 m α Biotinylated MHC Class I αchain 泛素测定 (E2 的泛素化 ) AlphaScreen Streptavidin Donor Beads (# ) Anti-GST Acceptor Beads (#AL110) 蛋白磷酸化及 Total 磷酸化同时检测 AlphaScreen Mouse IgG detection kit (# ) Nickel chelate Acceptor beads (#AL108) Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Anti-trimeric Complex-conjugated AlphaScreen Acceptor Bead nm Anti-GST conjugated 615 nm Ni Chelate-coated Bead {Ni2+ {Ni2+ {Ni2+ α β Alphascreen Streptavidin Donor Bead UbcH5a GST-fused UbcH5a Biotinilated Ubiquitin {Ni2+ {Ni2+ {Ni2+ {Ni2+ {Ni2+ GSH-coated Alpha Donor Bead His-tagged MEK1 Anti-pTpY ERK1/2 MEK1 572 nm ERK2 GST-tagged ERK2 Anti-mouse-conjugated AlphaScreen Bead Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Biotinylated MHC Class II βchain Anti-trimeric Complex-conjugated AlphaScreen Acceptor Bead Reference Justesen, S., Harndahl, M., Lamberth, K., Nielsen, L L., Roder, G. & Buus, S. Functional recombinant MHC class II molecules and highthroughputpeptide-binding assays. Immunome Res 5:2(2009). Harndahl, M., Justesen, S., Lamberth, K., Roder, G., Nielsen, M. & Buus, S. Peptide binding to HLA class I molecules: homogenous, highthroughput screening and affinity assays. J Biomol Screen 14(2), (2009). Reference Arcand, M., Roby, P., Bossé, R., Lipari, F., Padrós, J., Beaudet, L., Marcil, A. & Dahan, S. Single-well monitoring of protein-protein interaction and phosphorylation dephosphorylation events. Biochemistry 49 (15), (2010). 35

36 Alpha Tool Box 未标记的受体与供体微珠 (AlphaScreen//AlphaPlex 545) 未标记的微珠表面具有醛基 (-CHO) 活性基团, 可以与标记分子上的氨基 (-NH2) 通过还原胺化反应相互结合 可用简单的步骤 来进行蛋白微珠标记实验, 再将未标记的蛋白分子通过洗涤和离心方法进行分离 微珠标记方法标记的分子 + 受体微珠 + NaBH3CN +Carboxymethylamine ( 去除未反应的基团 ) 37ºC 离心微珠 O/N 除去上清液 浓度调整 重复操作 微珠表面结构式 O H H2N-R * R N H NaBH3CN CH2-NH-R H2O *R: 标记的分子, 如抗体 未标记的供体裸珠 产品名称货号检测点 AlphaScreen Unconjugated Donor beads 数量 :1 mg 的量在终浓度为 20 µg/ml,25 µl/well 的反应体系下可测 2000 个实验点 保存 :+ 4 AlphaScreen 标记试剂盒 数量 : 终浓度为 20 µg/ml 25 µl/well 的反应体系下可测 4,000 个实验点 组分 : 链霉亲和素包被的供体微珠, 无标签的 AlphaScreen 受体裸珠 保存 :+ 4 标记的供体微珠 1 mg mg mg 产品名称货号检测点 AlphaScreen Conjugation kit 2 mg each K 未标记的受体裸珠 产品名称货号检测点 AlphaScreen Unconjugated Donor beads Unconjugated Acceptor beads AlphaPlex 545 Unconjugated Acceptor beads AlphaPlex 645 Unconjugated Acceptor beads 1 mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg mg 数量 :AlphaScreen 受体微珠 1 mg 的量, 在终浓度为 20 µg/ml 25 µl/well 的反应体系下可测 2,000 个实验点 AlphaScreen 受体微珠 1 mg 的量, 在终浓度为 10 µg/ml 50 µl/well 的反应体系下可测 2,000 个实验点 保存 :+ 4 标记的供体微珠 产品名称货号检测点 Streptavidin-coated Donor beads Glutathione-coated Donor beads Nickel Chelate Donor beads Protein A Donor Beads Anti-FLAG Donor Beads 1 mg S 5 mg mg B 1 mg mg mg mg AS101D 5 mg AS101M 25 mg AS101R 1 mg AS102D 5 mg AS102M 25 mg AS102R 1 mg AS103D 5 mg AS103M 25 mg AS103R 产品名称货号检测点 Anti-mouse IgG Donor Beads Anti-Rabbit IgG Donor Beads Strep-Tactin Donor Beads Anti-Digoxigenin Donor Beads 1 mg AS104D 5 mg AS104M 25 mg AS104R 1 mg AS105D 5 mg AS105M 25 mg AS105R 1 mg AS106D 5 mg AS106M 25 mg AS106R 1 mg AS107D 5 mg AS107M 25 mg AS107R 数量 : 标记的 1 mg 微珠在终浓度为 20 µg/ml 25 µl/well 的反应体系中 (AlphaScreen 实验 ), 可测 2,000 个实验点 在终浓度为 40 µg/ml 50 µl/ well 的反应体系中 ( 实验 ) 可测 500 个实验点 保存 :+ 4 36

37 标记的受体微珠 (AlphaScreen*//AlphaPlex 545)*Protein A 标记 在没有直接抗待测物抗体的情况下, 免疫球蛋白受体微珠可用于间接检测待测分子 ( 左下表格 ) 抗融合标签抗体标记的受体微珠可与含有标签的待测蛋白相互作用 ( 右下例子 ), 或者可以检测生物素标记的抗体与标签标记的蛋白相互作用 免疫球蛋白检测受体微珠免疫球蛋白检测受体微珠 ( 续 ) 产品名称 货号 检测点 AlphaScreen 受体微珠 Protein A 5 mg M AlphaScreen Acceptor beads 25 mg R (Eu) 受体微珠 Protein A 250 µg AL101C 5 mg AL101M 25 mg AL101R 250 µg AL102C Protein G 5 mg AL102M 25 mg AL102R Protein L Anti- IgG Anti- IgG1 (PK/PD) Anti- IgG4 (PK/PD) Anti- IgG1 (isotyping) Anti- IgG2 (isotyping) Anti- IgG3 (isotyping) Anti- IgG4 (isotyping) Anti-Mouse IgG Anti-Mouse IgM Anti-Mouse IgG1 (isotyping) Anti-Mouse IgG2a (isotyping) Anti-Mouse IgG2a (isotyping) Anti-Mouse IgG3 (isotyping) Anti-Mouse IgE (isotyping) Anti-Mouse IgM (isotyping) Anti-Mouse IgA Anti-Mouse total IgG 250 µg AL126C 5 mg AL126M 25 mg AL126R 250 µg AL103C 5 mg AL103M 25 mg AL103R 250 µg AL141C 5 mg AL141M 25 mg AL141R 250 µg AL142C 5 mg AL142M 25 mg AL142R 250 µg AL153C 5 mg AL153M 25 mg AL153R 250 µg AL154C 5 mg AL154M 25 mg AL154R 250 µg AL155C 5 mg AL155M 25 mg AL155R 250 µg AL156C 5 mg AL156M 25 mg AL156R 250 µg AL105C 5 mg AL105M 25 mg AL105R 250 µg AL130C 5 mg AL130M 25 mg AL130R 250 µg AL157C 5 mg AL157M 25 mg AL157R 250 µg AL158C 5 mg AL158M 25 mg AL158R 250 µg AL159C 5 mg AL159M 25 mg AL159R 250 µg AL160C 5 mg AL160M 25 mg AL160R 250 µg AL161C 5 mg AL161M 25 mg AL161R 250 µg AL162C 5 mg AL162M 25 mg AL162R 250 µg AL162C 5 mg AL163M 25 mg AL163R 250 µg AL164C 5 mg AL164M 25 mg AL164R 产品名称货号检测点 Anti-Mouse total IgG Anti-Rat IgG Accepter Beads Anti-Rabbit IgG Accepter Beads Anti-Goat IgG Accepter Beads Anti-Chicken IgY Anti-Sheep IgG Anti-Bovine total IgG Anti-Bovine IgG 1 Anti-Bovine IgG 2 Anti-Bovine IgM Anti-Bovine IgA Protein A AlphaPlex 545 Acceptor Beads Anti- IgG AlphaPlex 545 Accepter Beads Anti-Rabbit IgG AlphaPlex 545 Acceptor Beads Anti-Mouse IgG AlphaPlex 545 Accepter Beads Protein A AlphaPlex 645 Acceptor Beads Anti- IgG AlphaPlex 645 Accepter Beads Anti-Mouse IgG AlphaPlex 645 Acceptor Beads AlphaPlex 545(Tb) 受体微珠 AlphaPlex 645(Sm) 受体微珠 250 µg AL164C 5 mg AL164M 25 mg AL164R 250 µg AL106C 5 mg AL106M 25 mg AL106R 250 µg AL104C 5 mg AL104M 25 mg AL104R 250 µg AL107C 5 mg AL107M 25 mg AL107R 250 ug AL313C 5 mg AL131M 25 mg AL131R 250 µg AL132C 5 mg AL132M 25 mg AL132R 250 µg AL165C 5 mg AL165M 25 mg AL165R 250 µg AL166C 5 mg AL166M 25 mg AL166R 250 µg AL167C 5 mg AL167M 25 mg AL167R 250 µg AL168C 5 mg AL168M 25 mg AL168R 250 µg AL169C 5 mg AL169M 25 mg AL169R 250 µg AP101TB-C 5 mg AP101TB-M 25 mg AP101TB-R 250 µg AP103TB-C 5 mg AP103TB-M 25 mg AP103TB-R 250 µg AP104TB-C 5 mg AP104TB-M 25 mg AP104TB-R 250 µg AP105TB-C 5 mg AP105TB-M 25 mg AP105TB-R 数量 :AlphaScreen 蛋白 A 受体微珠 5 mg, 在终浓度为 20µg/mL 25 µl/well 的反应体系中, 可测 10,000 个点 ; 受体微珠 250 µg 在终浓度为 10µg/mL 50µL/well 的反应体系中 可测 500 个点 保存 : µg AP101SM-C 5 mg AP101SM-M 25 mg AP101SM-R 250 µg AP103SM-C 5 mg AP103SM-M 25 mg AP103SM-R 250 µg AP105SM-C 5 mg AP105SM-M 25 mg AP105SM-R 37

38 Alpha Tool Box 融合标签检测受体微珠 产品名称货号检测点 Nickel Chelate Glutathione Anti-GST Anti-c-Myc Anti-FLAG Anti-DIG Streptavidin Anti-FITC Anti-His Tag Anti-V5 Anti-MBP Strep-Tactin Anti-HA Glutathione AlphaPlex 545 Acceptor Beads Streptavidin AlphaPlex 545 Acceptor beads Anti-FLAG AlphaPlex 545 Acceptor Beads Anti-6x His AlphaPlex 545 Acceptor Beads Anti-HA AlphaPlex 545 Acceptor Beads Streptavidin AlphaPlex 645 Acceptor Beads Anti-FLAG AlphaPlex 645 Acceptor Beads Anti-6x His AlphaPlex 645 Acceptor Beads (Eu) 受体微珠 AlphaPlex 545(Tb) 受体微珠 AlphaPlex 645(Sm) 受体微珠 250 µg AL108C 5 mg AL108M 25 mg AL108R 250 µg AL109C 5 mg AL109M 25 mg AL109R 250 µg AL110C 5 mg AL110M 25 mg AL110R 250 µg AL111C 5 mg AL111M 25 mg AL111R 250 µg AL112C 5 mg AL112M 25 mg AL112C 250 µg AL113C 5 mg AL113M 25 mg AL113R 250 µg AL125C 5 mg AL125M 25 mg AL125R 250 µg AL127C 5 mg AL127M 25 mg AL127R 250 µg AL128C 5 mg AL128M 25 mg AL128R 250 µg AL129C 5 mg AL129M 25 mg AL129R 250 µg AL134C 5 mg AL134M 25 mg AL134R 250 µg AL136C 5 mg AL136M 25 mg AL136R 250 µg AL170C 5 mg AL170M 25 mg AL170R 250 µg AP109TB-C 5 mg AP109TB-M 25 mg AP109TB-R 250 µg AP125TB-C 5 mg AP125TB-M 25 mg AP125TB-R 250 µg AP112TB-C 5 mg AP112TB-M 25 mg AP112TB-R 250 µg AP128TB-C 5 mg AP128TB-M 25 mg AP128TB-R 250 µg AP170TB-C 5 mg AP170TB-M 25 mg AP170TB-R 250 µg AP125SM-C 5 mg AP125SM-M 25 mg AP125SM-R 250 µg AP112SM-C 5 mg AP112SM-M 25 mg AP112SM-R 250 µg AP128SM-C 5 mg AP128SM-M 25 mg AP128SM-R 糖链受体检测受体微珠 产品名称 货号 检测点 LCA (Lens culinaris agglutinin) 250 µg AL104C 5 mg AL104M (Detection of fucosylated glycoproteins) 25 mg AL104R 38

39 Tips: 供体微珠与受体微珠的结合方式 受体微珠与供体微珠不一定以我们需要的方式结合 如在实验中若同时使用蛋白 A 偶联的供体微珠和 higg 偶联的受 体微珠, 会因为供体微珠与受体微珠直接相互作用而使得背景值非常高 biotin-mouse Ab#1 Streptavidin Donor beads mouse Ab#2 Anti-human IgG (mouse) Acceptor beads Anti-mouse IgG Acceptor beads Protein A Donor beads Acceptor Bead Anti-Chicken IgY Anti-cMyc Anti-Digoxigenin Anti-FITC Anti-FLAG Anti-GFP Anti-Goat IgG Anti-GST Anti-His Anti- IgG Anti-MBP Anti-Mouse IgG Anti-Mouse IgM Anti-Rabbit IgG Anti-Rat IgG Anti-Sheep IgG Anti-V5 Glutathione Ni chelate Protein A Protein G Protein L Strep-Tactin Streptavidin Alpha Donor Bead Protein A Anti-FLAG Anti-Mouse Anti-Rabbit Strep-Tactin Ni chelate GSH Streptavidin You can use this pair This pair might give high background Not recommended 39

40 Alpha Tool Box AlphaScreen IgG / 融合标签检测试剂盒 链霉亲和素包被的供体微珠和抗 IgG 抗体标记的受体微珠的 AlphaScreen 试剂盒 融合标签检测试剂盒 产品名称 货号 检测点 C GST detection kit 10, M 50, R C DIG detection kit 10, M 50, R C FITC detection kit 10, M 50, R C c-myc detection kit 10, M 50, R C HA (hemagglutinin) 10, M detection kit 50, R C FLAG (M2) detection kit 10, M Ni chelate detection kit 50, R C 10, M 50, R 5µM Biotinylared-His 2.5 µmole M 5µM Biotinylared-GST 0.75 µmole M IgG 检测试剂盒 产品名称货号检测点 Mouse IgG detection kit Rabbit IgG detection kit Protein A detection kit C 10, M 50, R C 10, M 50, R C 10, M 50, R 组份 :10X buffer, Biotinylated-IgG or tag, Streptavidin Donor beads, Acceptor beads. 数量 : 在终浓度为 20µg/mL 25µL/well 体系的 384 孔中进行实验 保存 :+ 4 其他微珠 ( 干扰测定 加样精确度 仪器设备验证相关微珠 ) TruHits 试剂盒 含链霉亲和素供体和生物素化受体此试剂盒是为了评估受体微珠颜色淬灭, 单线态氧在实验中的淬灭, 某些化合物如生物所类似物分子对 Alpha 实验信号的干扰等因素 Ominibeads 该微珠上包被了产生 Alpha 信号所需的所有物质, 激发光激发微珠后可直接产生信号 可验证仪器对每个孔的读取效率和精度, 可通过 Ominibeads 校准仪器探头 产品名称货号检测点 AlphaScreen TruHits Kit TruHits Kit AlphaPlex 545 TruHits Kit Omnibeads 数量 : 在试剂盒指定用量的情况下, 使用 384 孔板的量 保存 :+ 4 1, D 10, M 1,000 AL900D 10,000 AL900M 1,000 AP900D 10,000 AP900M 1, D 10, M 50, R 信号淬灭的种类 quanchaer TruHits Kit SOQ (Singlet oxygen quanchaer) Omnibeads Peak 615 nm quanchaer quanchaer Light scattering (insoluble compounds) Streptavidin-coated Alpha Donor Bead Biotin mimetic BSA-biotin-conjugated Acceptor Bead AlphaScreen OmniBead 40

41 反应缓冲液 链霉亲和素包被的供体微珠和抗 IgG 抗体标记的受体微珠的 AlphaScreen 试剂盒 Immunoassay Buffer 250mM HEPES, 1% Casein, 5%Triton X-100, 10mg/mL Dextran-500, 0.5% Proclin-300 Universal Buffer (5X) 5 PBS, 0.5% BSA, 0.05% Proclin-300 HiBlock Buffer (10X) 250mM HEPES, 1% Casein, 5% Triton X-100, 10mg/mL Dextran-500, 0.5% Proclin-300, 5% gelatin, 5% BSA Dissociation Buffer Residual Protein A (3X) kit(al287) NaCl Buffer (5X) CCL2/MCP1 kit(al244) Mouse Albumin kit(al508) 微孔板 AlphaPlate 定制服务 消除白色微孔板孔与孔之间的串扰专门用于 Alpha 实验检测的灰白色微孔板 1/2 AreaPlate 孔的表面积设计为正常 96 孔板的一半 CulturePlate 适用于基于细胞学水平的实验 具有很好的内部表面处理和 γ 射线灭菌 适用于贴壁细胞的培养 TopSeal-A 防止样品的蒸发 建议密封在微孔板上 不会影响到信号值, 可放置一段时间来进行检测 产品名称 货号 检测点 10 ml AL000C Immunoassay Buffer (10X) 100 ml AL000F 10 ml AL001C Universal Buffer (5X) 100 ml AL001F 10 ml AL003C Lysis Buffer (5X) 100 ml AL003F 10 ml AL004C HiBlock Buffer (10X) 100 ml AL004F 10 ml AL006C Dissociation Buffer (3X) 100 ml AL006F 10 ml AL007C NaCl Buffer (5X) 100 ml AL007F 产品名称 材质 规格 货号 AlphaPlate-384 聚苯乙烯 50 块 块 AlphaPlate-384, 50 块 聚苯乙烯 shallow well 200 块 AlphaPlate-1536 聚苯乙烯 50 块 /2 AreaPlate-96( 白 ) 聚苯乙烯 50 块 块 块 CulturePlate-96( 白 ) 聚苯乙烯 160 块 块 块 CulturePlate-384( 白 ) 聚苯乙烯 160 块 块 CulturePlate-1536( 白 ) 聚苯乙烯 50 块 TopSeal-A 96 / 片 受体配体微珠的标记服务 可将靶蛋白, 配体或抗体标记到微珠上 至少需标记 1 mg 可直接提供标记分子 自定义检测服务 成功案例 Anti-g8 Antibodies pacc Phospho-PERK CNTO 1959 PAG (gestetion protein bovine) Phospho-PLC1 (Y783) Dimethyl H3 Peptide PCSK9 Phospho-Tyr ERK FoxP3 Phospho-eEF2 E1/E2+CD81 相互作用 DOT1 组蛋白甲基化 Phospho-elF2 α Serotonin Insulin Receptor 自磷酸化 Phospho-LRP6 SIGMA-1 Receptor/BIP Chaperone KIR Phospho-Merlin LRRK2 Phospho-Myosine Phosphatase 41

42 Alpha 检测设备 Alpha 检测需要使用配备了激光 ( 发射 激发光 ) 的专用设备 本公司提供 3 种能够以高灵敏度和高精度检测 Alpha 信号 的 Alpha 检测设备 * 有关各设备的详细信息请咨询本公司 EnVision EnVision 是所有检测技术中灵敏度最高并具有极快的检测速度和高通量的一款独一无二的微孔板检测仪, 其优异的灵活性和扩展性确保能适用于各种检测应用 用户可选择所需的检测功能进行配置 本系统还可用于 AlphaPlex 检测 标准配置 吸收光 ( 滤光器 ) 荧光强度 ( 滤光器 顶部 / 底部检测 ) 发光 荧光偏振 时间分辨荧光 选件 Alpha 检测 377 nm 激光 ( 标准或 HTS) 温度控制 AlphaPlex 检测 分液器 ( 标准 ) 载板架 高灵敏度发光 (20 张 /50 张 ) 吸收光 ( 单色器 ) 条形码读取器 荧光强度 ( 单色器 ) 符合 Part11 的软件 EnSight EnSight 是可配置吸收光和荧光单色器 高灵敏度发光以及 Alpha 检测等功能的灵活多模式微孔板检测仪 本系统还可用于微孔成像检测 标准配置 吸收光 ( 滤光器 ) 条形码读取器 温度控制 选件 Alpha 检测 高灵敏度发光 吸收光 ( 单色器 ) 无标记 荧光强度 ( 单色器 ) 微孔成像 时间分辨荧光 EnSpire EnSpire 是一款性能卓越 界面友好的多模式微孔板检测仪 我们提供 2 种型号, 一种是 Alpha 检测专用型号, 一种是除 Alpha 以外还可配备吸光 荧光 时间分辨荧光 发光 无标记技术的型号 型号标准配置选件 载板架 符合 Part11 的软件 Alpha 检测 EnSpire Alpha (20 张 /50 张 ) 条形码读取器 EnSpire 吸收光 ( 滤光器 ) 条形码读取器 Alpha 检测 无标记 高灵敏度发光 载板架 吸收光 ( 单色器 ) (20 张 /50 张 ) 荧光强度 ( 单色器 ) 分液器 荧光强度底部检测 温度控制 时间分辨荧光 符合 Part11 的软件 42

43 技术支持 生命科学技术中心 第一步扫一扫二维码或点击以下链接 第二步选择并勾选所需 Home > Resources Resources Use this section to access product documents, tools, and forms that are helpful in purchase decisions, ordering, and getting the most from your PerkinElmer products. Search Product Documents Tools and Forms Search Search Application Brief Application Note Article Booklet Brochure Calendar Case Study Castalog Certificate of Analysis Data Sheet FAQ Field Application Report Flyer Guide Handbook Manual Poster Material Safety Data Sheets Poster (Scientific) Newsletter Product Info 点击! Product Information Bulletin Product Note Resources Specification Sheet Technical Note Training White Paper Submit 第三步 : 点击 Submit 获取相关信息 43