j.ajcem
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- 佑书 羊
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1 American Journal of Clinical and Experimental Medicine 2015; 3(6): Published online December 5, 2015 ( doi: /j.ajcem ISSN: (Print); ISSN: (Online) The Interaction Between Recombinant Protein F Derived from Nontypeable Haemophilus influenzae and Lipoprotein(a) Liu En 1, 2, Li Weng-long 1, 2 1, 2, *, Han Run-lin 1 College of Veterinary Science, Inner Mongolia Agriculture University, Hohhot, China 2 Research Center of Plasma Lipoprotein Immunology, Inner Mongolia Agriculture University, Hohhot, China Eamil address: han-runlin@163.com (Han Run-lin), liuen1989xiaoxiang@163.com (Liu En) To cite this article: Liu En, Li Weng-long, Han Run-lin. The Interaction Between Recombinant Protein F Derived from Nontypeable Haemophilus influenzae and Lipoprotein(a). American Journal of Clinical and Experimental Medicine. Vol. 3, No. 6, 2015, pp doi: /j.ajcem Abstract: Protein F (PF) is a surface plasminogen (Plg) receptor on the nontypeable Haemophilus influenzae (NTHi). Plg via its lysine binding sites (LBS) can bind to PF. Apolipoprotein(a) [Apo(a)] is one component of Lipoprotein(a) [Lp(a)]. It has Kringle (K) domains, which contain LBS and has a high homology with Plg. Therefore, we speculated that Lp(a) might bind to Plg receptor on the surface of NTHi, subsequently competitively inhibiting the interaction of NTHi with Plg. In this study, recombinant PF (rpf) and its C-terminal lysine residue-deleted variant (rpf K) were expressed in E. coli BL21. The interactions of rpf with Plg and Lp(a) were tested by ELISA. The results showed that rpf could bind to Plg and Lp(a). The binding capacity of rpf was significantly higher than that of rpf K. The interactions of rpf with Plg and Lp(a) could be inhibited by EACA. 2 mmol/l of EACA significantly inhibited the binding of rpf to Plg, while 0.2 mmol/l of EACA could significantly reduce the binding of rpf to Lp(a). 50 ng/100 µl Lp(a) could significantly inhibit the interaction of rpf with Plg. In addition, affinity chromatography assay followed by Western biotting was also used to study the interaction. In overall, C-terminal lysine residue of rpf and the lysine binding sites (LBS) of Plg and Lp(a) should be responsible for these specifically bindings. Lp(a) could combine with rpf consequently inhibiting the interaction of Plg with rpf. This revealed that Lp(a) might play a role in anti-nthi infection. Keywords: Nontypeable Haemophilus Influenzae, Plasminogen, Lipoprotein(a), Recombinant Protein F 重组不可分型流感嗜血杆菌 F 蛋白与脂蛋白 (a) 的相互作用 1,2 1,2 刘恩, 李文龙, 韩润林 1 1,2,* 兽医学院, 内蒙古农业大学, 呼和浩特, 中国血浆脂蛋白免疫学研究中心, 内蒙古农业大学, 呼和浩特, 中国 2 邮箱 han-runlin@163.com( 韩润林 ),liuen1989xiaoxiang@163.com( 刘恩 ) 摘要 :F 蛋白 (Protein F, PF) 是不可分型流感嗜血杆菌 (nontypeable Haemophilus influenzae, NTHi) 表面的一种纤溶酶原 (Plg) 受体 Plg 利用自身的赖氨酸结合位点 (LBS) 与 PF 结合 脂蛋白 (a)[lipoprotein(a), Lp(a)] 中的载脂蛋白 [Apolipoprotein(a), Apo(a)] 与 Plg 都具有 K 结构域, 两者高度同源 基于此, 本实验研究了 PF 与 Plg Lp(a) 的相互作用, 并推测 Lp(a) 通过与 NTHi 上的 Plg 受体结合, 竞争性抑制 NTHi 与 Plg 的结合 本实验利用大肠杆菌 BL21 表达得到重组 PF(rPF) 及缺失末端赖氨酸残基的 PFΔk(rPFΔk) 通过 ELISA 试验检测 rpf 与 Plg Lp(a) 的相互作用, 结果显示 :rpf 能够与 Plg Lp(a) 结合, 且 rpf 组与 Plg Lp(a) 的结合显著高于 rpfδk 组 6- 氨基己酸 (EACA) 能够抑制 rpf 与 Plg Lp(a) 的结合, 当浓度达到 2 mmol/l 时 EACA 对 rpf 与 Plg 结合的抑制作用显著增强 对 rpf 与 Lp(a) 结合的抑制在浓度为 0.2 mmol/l 时明显增强 Lp(a) 浓度达到 50 ng/100 μl 时, 能够显著的抑制 rpf 与 Plg 结合 此外, 亲和色谱层析和 Western blot 也证明 rpf 与 Plg Lp(a) 的特异性结合主要是通过 Plg Lp(a) 的 LBS 与 rpf 羧基末端的赖氨酸残基作用进行的 Lp(a) 对 rpf 与 Plg 结合的竞争性抑制作用表明 Lp(a) 在抗 NTHi 感染过程中可能具有重要作用 关键词 : 不可分型流感嗜血杆菌, 纤溶酶原, 脂蛋白 (a), 重组 F 蛋白
2 339 刘恩等 : 重组不可分型流感嗜血杆菌 F 蛋白与脂蛋白 (a) 的相互作用 1. 引言 流感嗜血杆菌 (Haemophilus influenzae, Hi) 发现于 1892 年, 是一种革兰阴性球杆菌, 可以引起不同的疾病 根据荚膜多糖的有无可以分为荚膜型 ( 可分型 ) 及非荚膜型 ( 不可分型 ) 荚膜是侵袭性 Hi 主要的毒力因子, 荚膜型菌株又分为六个型 (a-f), 其中 b 型 (Hib) 毒力最强 [1] 二十世纪九十年代 Hib 结合疫苗的应用使得由 Hib 引起的侵袭性疾病的发病率显著降低 [2] 和荚膜型 Hi 不同, 不可分型流感嗜血杆菌 (nontypeable Haemophilus influenzae,nthi) 是人体特别是儿童呼吸道内的共栖菌, 很少引起侵袭性疾病 [3] NTHi 也是一种条件致病菌, 当宿主免疫机能降低时能够造成感染 NTHi 主要引起呼吸道局限性疾病如急性中耳炎 支气管炎 鼻窦炎等 [4-5] 和许多病原菌一样,NTHi 能够利用 Plg 黏附到宿主的胞外基质 (ECM) 对其进行破坏, 进而对宿主造成损伤 Plg 是一种单链糖蛋白, 是人体纤溶系统的重要组成成分 Plg 由 791 个氨基酸构成, 分子量大约为 90 kd, 具有 7 个结构域 [6] 构成 Plg 的 7 个结构域中有 5 个 Kringle 结构域 (Kl,K2,K3,K4,K5), 这 5 个结构域中都包含 LBS, 此位点可识别 Plg 受体羧基末端的赖氨酸残基, 而赖氨酸或赖氨酸类似物 ( 如 EACA, 氨甲环酸等 ) 可竞争性抑制 Plg 与其受体的结合 [7] 包括铜绿假单胞菌, 伯氏疏螺旋体, 肺炎链球菌, 金黄色葡萄球菌和白色念珠菌在内的大多数病原微生物都能同时表达几种不同的 Plg 受体 已有的研究发现,NTHi 表面的 E 蛋白 [8] 天冬氨酸酶 [9] 及新发现的 P4 蛋白 [10] 都是 NTHi 上的 Plg 受体 PF 是 NTHi 菌体细胞表面的结构蛋白, 由 293 个氨基酸残基组成, 成熟的 PF 分子量为 30.1 kd[11], 其羧基末端具有一个赖氨酸残基 研究表明 PF 参与了 NTHi 逃避宿主补体免疫的过程, 促进了 NTHi 与 Plg 层粘连蛋白 (Laminin, Ln) 玻粘连蛋白 (Vitronectin, Vn) 及支气管上皮细胞的结合 [12] Lp(a) 是一种特殊的血浆脂蛋白, 由 Apo(a) 和 LDL 通过二硫键连接而成 Apo(a) 中的 K 结构域与 Plg 的 K 结构域高度同源 Apo(a) 中也具有很强的 LBS, 能够结合赖氨酸及其类似物 韩润林教授提出的 Lp(a) 抗感染假说指出 :Lp(a) 可能竞争性的抑制细菌与 Plg 的结合, 从而抑制病原菌在宿主中的扩散 [13] 本研究将从 NTHi 基因组中扩增出的 hpf 片段连入 pgex-6p-1 表达载体并将其转入 E. coli BL21 中, 诱导表达出 rpf 及缺失羧基末端赖氨酸残基的 rpfδk 在此基础上对 rpf 与 Plg Lp(a) 的相互作用进行初步研究, 为进一步证实 Lp(a) 抗感染机制提供了依据 2. 材料与方法 菌株和试剂 NTHi ATCC49247 购自卫生部临床检验中心 ; 表达载体 pgex-6p-1 购自上海林渊生物科技有限公司 ; 限制性内切 酶 BamH I Not I DL DNA Marker 均购自宝生物工程 ( 大连 ) 有限公司 ;T4 DNA 连接酶购自 Promega 公司 ; 细菌基因组 DNA 提取试剂盒购自北京天根生物科技有限公司 ; Lp(a) 羊抗人 Apo(a) 多抗购自购自 Biomedical Technologies Inc 公司 ;EACA 羊抗人 LDL 多抗购自 Sigma 公司 ;Plg 鼠抗人纤溶酶原单抗 驴抗山羊 IgG-HRP 购自 R&D Systems 公司 ; 山羊抗鼠 IgG-HRP 购自北京博奥森生物技术有限公司 ; Pierce Glutathione Agarose GST-probe-HRP Pierce BCA 蛋白测定试剂盒购自 Thermo 公司 ; 大肠杆菌 E. coli BL21 Prescission 酶 引物合成均购自生工生物工程 ( 上海 ) 股份有限公司 所用引物见下表 : Target gene 表 1 引物列表 Primer: Secquence(5-3 ) F :CGCGGATCCAAATTTAAAGTCGTAACCACT Hpf R1:ATTTGCGGCCGCTCATTTTCCGAATCCTTTAAC 837 hpfδk R2:ATTTGCGGCCGCTCATCCGAATCCTTTAACAATGG 834 PCR product/bp 注 : 上游引物为共用引物 ; 下划线处为 BamH I 及 Not I 酶识别位点 目的基因的克隆克隆及连接转化 按照细菌基因组 DNA 提取试剂盒操作说明进行 NTHi 基因组 DNA 的提取 以提取的基因组 DNA 为模板, 利用引物 F R1 扩增 hpf 基因 ; 利用引物 F R2 扩增 hpfδk 基因 PCR 扩增条件为 :94 预变性 3 min;94 变性 30s;55 退火 30s; 72 延伸 1min,30 个循环 ;72 总延伸 2min 将 PCR 扩增得到的产物纯化后进行双酶切 将酶切产物进行纯化, 连接到 pgex-6p-1 表达载体上, 构建 pgex-6p-1-hpf pgex-6p-1-hpfδk 重组表达载体, 并转入感受态 E. coli BL21 中 利用通用引物进行菌落 PCR 鉴定, 并将阳性菌送交生工生物工程 ( 上海 ) 股份有限公司测序, 对测序结果正确的菌株进行冻存保菌 rPF rpfδk 的诱导表达 鉴定及纯化 rPF rpfδk 的诱导表达 取含有 pgex-6p-1-hpf pgex-6p-1-hpfδk 重组表达载体的工程菌 E. coli BL21 接种于 20 ml LB/Amp(Amp 含量为 100 μg/ml) 液体培养基中, 于恒温摇床上 37,200 rpm 振荡培养 16 h; 转接至 400 ml 培养基中, rpm 振荡培养至 0.6 OD600 nm 0.8; 向培养基中加入 IPTG( 终浓度为 1 mmol/l), rpm, 恒温摇床振荡 3 h 进行诱导培养 将诱导后的菌液离心收集沉淀并用 PBS 重悬, 置于 -80 冰箱冻融 3 次 ; 将冻融的菌悬液融化后加入 PMSF ( 1 mmol/l), 溶菌酶 (0.2 mg/ml),dna 酶 (20 μg/ml), 震荡 30 min; rpm 离心 20 min, 收集破碎后的菌沉淀和菌上清
3 American Journal of Clinical and Experimental Medicine 2015; 3(6): SDS SDS-PAGE 鉴定 取样制备诱导前 诱导后及诱导破碎后菌上清 菌沉淀的电泳样品并进行 SDS-PAGE 电泳 (4% 浓缩胶,12% 分离胶 ) 电泳完成后, 经考马斯亮兰染色 脱色 照相 重组蛋白 rpf rpfδk 的纯化 将得到的裂解后的菌上清用 Wash buffer 稀释后进行过柱 : 上清稀释液穿流 3 次 ; 然后用 Wash buffer 对结合在柱填料上的蛋白进行清洗, 除去杂蛋白 ; 最后加入 2 倍体积的 Elution buffer, 封住出口, 室温孵育 20 min; 然后收集洗脱液并用 6 个柱体积的 Elution buffer 洗脱结合在柱子上的蛋白, 收集洗脱液 得到的洗脱液过夜透析去除杂质 将透析得到的 rpf rpfδk 用 PEG 进行浓缩后测定蛋白含量, 并分装保存 rPF rpfδk 标签 (GST GST) 的切除 按照 2 U/100 µg 的量向已知含量的 rpf 和 rpf k 蛋白液中加入 Prescission 酶,4 孵育 24 h; 然后将蛋白液加入已经用 Cut buffer 平衡的柱子中, 封住出口在室温下孵育 30 min; 打开出口收集流出液, 并用 4 个柱体积的 Cut buffer 洗脱目的蛋白进行收集 将切除标签后的蛋白过夜透析 浓缩并测定含量, 分装保存 标签切除效果的 Western-blot 检测 rpf rpf-gst rpfδk rpfδk-gst 原液各取 10 μl 用 PBS 进行如下稀释 :rpf rpfδk 为 20 μg/ml;rpf-gst rpfδk-gst 为 37.3 μg/ml( 同摩尔数 ) 取上述各浓度的蛋白液作样后进行 SDS-PAGE 电泳 ( 浓缩胶 4%, 分离胶 10%) 电泳后利用半干转法将蛋白转移到 NC 膜上, 将 NC 膜放入 5% 的脱脂乳 -TBST 中室温封闭 1.5 h; 加入用 2% 脱脂乳 -TBST 稀释 (1:2 500) 的 GST 标签抗体, 室温孵育 1.5 h; 加入发光试剂, 然后进行成像操作 酶联免疫吸附试验 (ELISA ELISA) 检测 rpf rpfδk 与 Plg Lp(a) 的结合 ELISA 检测 rpf rpfδk 与 Plg 的结合 将 rpf rpfδk 稀释为 20 μg/ml, 按照 100 μl/ 孔将 rpf rpfδk 包被在酶标板中室温孵育 1.5 h;tbst 洗板 3 次,5 min/ 次 ; 向酶标板各孔中加入 1%BSA-TBST 室温封闭 1.5 h; 对应各孔加入不同浓度的 Plg( ng/100 μl)100 μl/ 孔, 室温孵育 1.5 h; 将鼠抗人 Plg 单抗 (TBST 1:2 000 稀释 ) 加入对应各孔,100 μl/ 孔, 室温孵育 1.5 h; 将山羊抗鼠 IgG-HRP(TBST 1:3 000 稀释 ) 加入对应孔中,100 μl/ 孔, 室温孵育 1.5 h; 加入四甲基联苯胺 (TMB) 显色液, 室温作用 5 min; 加入终止液, 于酶标仪上测定 OD450 nm ELISA 检测 rpf rpfδk 与 Lp(a) 的结合 实验方法如 所述 rpf rpfδk 浓度为 20 μg/ml, Lp(a) 浓度梯度为 ng/100 μl 使用一抗山 羊抗人 Apo(a) 多抗 (TBST 1:4 000 稀释 ); 二抗驴抗山羊 IgG-HRP(TBST 1:1 000 稀释 ) 亲和色谱层析层析检测 rpf rpfδk 与 Lp(a) 的结合 在三根已加入 GST 填料的层析柱中分别加入 50 μg 的 rpf rpfδk 以及相应的 PBS 然后向每个层析柱中加入 1 ml 血浆, 作用 30 min 后用 Wash buffer 洗去未结合的杂蛋白 向三根层析柱中加入 10U 的 Prescission 酶,4 孵育 24 h, 用 Cut buffer 洗脱目的蛋白 将上述得到的洗脱液处理后作样进行 SDS-PAGE, 而后用湿转电转仪将蛋白转移到 NC 膜上, 剩余操作同 1.5 检测 Lp(a) 使用的一抗为羊抗人 Apo(a), 二抗为驴抗羊 IgG-HRP; 检测 rpf/rpfδk 使用的是 GST-probe-HRP 抗体 ELISA 检测 EACA 对 rpf 与 Plg Lp(a) 结合的抑制 ELISA 检测 EACA 对 rpf rpfδk 与 Plg 结合的抑制 实验步骤及抗体使用与 操作一致 Plg 的浓度为 100 ng/100 μl,eaca 终浓度为 mmol/l 剩余步骤同 ELISA 检测 EACA 对 rpf rpfδk 与 Lp(a) 结合的抑制 实验步骤及抗体使用与 一致 Lp(a) 的浓度为 100 ng/100 μl,eaca 终浓度依次为 mmol/l 剩余步骤同 ELISA 检测 Lp(a) 对 rpf 与 Plg 结合的抑制 实验步骤与 一致 Plg 的浓度为 100 ng/100 μl, Lp(a) 终浓度为 ng/100 μl 一抗 二抗的使用及稀释比例均与 所述一致 注 :ELISA 检测结果采用 SAS 软件进行统计分析, 并进行 t 检验 3. 结果 标签切除效果的 Western-blot 检测 由于标签蛋白本身分子量过大 (26 kd), 为了不影响后续对目的蛋白的研究, 使用 Prescission 酶对标签蛋白进行剪切 利用 GST 标签抗体对重组蛋白标签的切除效果进行检测,rPF-GST rpfδk-gst 大小为 56 kd, 切除标签后的 rpf rpfδk 大小为 30 kd rpf-gst rpfδk-gst 在预期位置均有明显条带, 而 rpf rpfδk 预期大小处完全没有条带 ( 见图 1) 说明利用 Prescission 酶对重组蛋白实施的标签切除很干净 3.2.ELISA 检测 rpf rpfδk 与 Plg Lp(a) 的结合 ELISA 检测 rpf rpfδk 与 Plg 的结合 ELISA 检测纯化后的 rpf rpfδk 与 Plg 之间的相互作用, 结果 ( 见图 2A) 表明 :rpf rpfδk 与 Plg 的结合均具有一定的浓度依赖性, 随着 Plg 浓度的升高结合值也在增大 ; 同 Plg 浓度下, 相比于 rpfδk,rpf 与 Plg 的结合能力显著增强 (p<0.01)
4 341 刘恩等 : 重组不可分型流感嗜血杆菌 F 蛋白与脂蛋白 (a) 的相互作用 ELISA 检测 rpf rpfδk 与 Lp(a) 的结合 rpf rpfδk 与 Lp(a) 的 ELISA 检测结果 ( 见图 2B) 表明 :rpf rpfδk 与 Lp(a) 的结合具有浓度依赖性, 在 ng/100 μl 浓度范围内 rpf rpfδk 与 Lp(a) 的结合值随 Lp(a) 浓度的增高而增高 相比于 rpfδk,rpf 与 Lp(a) 的结合值在各浓度水平下均明显升高 (p<0.01) 图 1 重组蛋白标签切除的 Western-blot 分析 图 2 ELISA 检测 rpf rpfδk 与 Plg Lp(a) 的结合 亲和色谱层析检测 rpf rpfδk 与 Lp(a) 的结合 将亲和色谱层析得到的洗脱液进行 Western 检测, 由结果 ( 见图 3) 可知 :rpf rpfδk 与 Lp(a) 均结合, 但在 亮度上具有明显的差异 这表明 rpf 羧基末端的赖氨酸残基是主要的结合位点 图 3 Western blot 检测 rpf rpfδk 与 Lp(a) 的结合
5 American Journal of Clinical and Experimental Medicine 2015; 3(6): ELISA 检测 EACA 对 rpf rpfδk 与 Plg Lp(a) 结合的抑制 ELISA 检测 EACA 对 rpf rpfδk 与 Plg 结合的抑制 ELISA 检测 EACA 对 rpf rpfδk 与 Plg 结合的抑制结果 ( 见图 4A) 表明 : 随着 EACA 浓度的增高,rPF 与 Plg 的结合值在不断降低, 当 EACA 浓度为 2.0 mmol/l 时, 其抑制作用较浓度为 0 mmol/l 时具有显著性差异 (p<0.01) ELISA 检测 EACA 对 rpf rpfδk 与 Lp(a) 结合的抑制 ELISA 检测 EACA 对 rpf rpfδk 与 Lp(a) 结合的抑制, 结果 ( 见图 4B) 表明 : 随着 EACA 浓度的增高,rPF 与 Lp(a) 的结合值在不断降低, 当 EACA 浓度为 0.2 mmol/l 时, 其抑制作用较 EACA 浓度为 0 mmol/l 时具有显著性差异 (p< 0.01) 图 4 EACA 对 rpf,rpfδk 与 Plg Lp(a) 结合的抑制 图 5 Lp(a) 对 rpf 与 Plg 结合的抑制 ***:p< ELISA 检测 Lp(a) 对 rpf 与 Plg 结合的抑制 ELISA 检测 Lp(a) 对 rpf 与 Plg 结合的抑制作用试验结果 ( 见图 5) 表明 :Lp(a) 对 rpf 与 Plg 结合的抑制具有一定的浓度依赖性, 当 Lp(a) 浓度达到 50 ng/100 μl 时, 抑制作用显著增强 (p<0.01) 4. 讨论 PF 是一种羧基末端含有赖氨酸残基的菌体表面蛋白 Plg Lp(a) 均具有 LBS, 能够与赖氨酸及其类似物相结合 [14], 由本实验的研究结果可知,rPF 能够与 Plg Lp(a) 结合, 并且 EACA 能够抑制这种结合作用 rpfδk 与 Plg Lp(a) 的结合值明显降低, 说明 rpf 与 Plg Lp(a) 的结合作用主要是通过 rpf 羧基末端的赖氨酸残基与 Plg Lp(a) 上的 LBS 特异性结合而形成的 此外, 本研究发现 rpfδk 与 Plg Lp(a) 仍然具有结合值 这说明 rpf 内部的其他赖氨酸残基也参与了与 Plg Lp(a) 的结合作用, 但发挥主要作用的是羧基末端的赖氨酸残基, 这一点通过 ELISA 及亲和色谱层析等检测方法均得到了证实 Lp(a) 抑制 rpf 与 Plg 结合作用的研究表明,Lp(a) 能够竞争性的抑制 Plg 与 rpf 的结合, 当 Lp(a) 浓度达到 50 ng/100μl 时, 就能够产生显著的抑制作用 人们对于 Lp(a) 与肾脏疾病及动脉粥样硬化等疾病关系的研究有所突破 [15], 但 Lp(a) 具体的生理作用仍不明确 通过本实验的研究可知 Lp(a) 能够抑制细菌表面 PF 与 Plg 的结合, 由此推断 Lp(a) 能够阻断细菌利用 Plg 侵袭宿主的途径, 在抵抗 NTHi 感染方面具有重要作用 参考文献 [1] Watt JP, Wolfson LJ, Henkle E, et al. Burden of disease caused by Haemophilus influenzae type b in children younger than 5 years: global estimates[j]. Lancet, 2009, 374(9693);
6 343 刘恩等 : 重组不可分型流感嗜血杆菌 F 蛋白与脂蛋白 (a) 的相互作用 [2] Morris SK. Moss WJ, Halesa N, et al. Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine use and effectiveness[j].lancet Infectious Diseases, 2008, 8(7); [3] Erwin AL, Smith AL. Nontypeable Haemophilus influenzae: understanding virulence and commensal behavior[j]. Trends Microbiol, 2007, 15(8); [4] Murphy TF, Faden H, Bakaletz LO, et al. Nontypeable Haemophilus influenzae as a pathogen in children[j]. Pediatric Infectious Diseases, 2009, 28(1); [5] Turk DC. The pathogenicity of Haemophilus influenzae[j]. J Med Microbiol, 1984, 18:1 16. [6] Lahteenmaki K, Kuusela P, Korhonen TK. Bacterial plasminogen activators and receptor[j]. FEMS Microbiology Reviews, 2001, 25(5): [7] Redlitz A, Plow EF. Receptors for plasminogen and t-pa: an update[j]. Baillieres Clinical Haematology, 1995, 8(2): [8] Barthel D, Singh B, Riesbeck K, et al. Haemophilus influenzae uses the surface protein E to acquire human plasminogen and to evade innate immunity[j]. Immunology, 2012, 188(1); [9] Sjostrom I, Grondahl H, Falk G, et al. Purification and characterisation of a plasminogen-binding protein from Haemophilus influenzae. Sequence determination reveals identity with aspartase[j]. Biochimica et Biophysica Acta, 1997, 1324(2); [10] Su YC, Mukherjee O, Singh B, et al. Haemophilus influenza P4 interacts with extracellular matrix proteins promoting adhesion and serum resistance[z] [11] Jalalvand F, Su YC, Mörgelin M, et al. Haemophilus influenzae protein F mediates binding to laminin and human pulmonary epithelial cells[j]. Infectious Diseases, 2013, 207(5); [12] Su YC, Jalalvand F, Mörgelin M, et al. Haemophilus influenza acquires vitronectin via the ubiquitous protein F to subvert host innate immunity[j]. Molecular Microbiology, 2013, 87 (6); [13] Han RL. Plasma lipoproteins are important components of the immune system[j]. Microbiol Immunol. 2010, 54 (4); [14] Boeryd B. Action of heparin and plasminogen inhibitor (EACA) on metastatic tumour spread in an isologous system[j]. Acta pathologica et microbiologica Scandinavica. 1965, 65(3): [15] Mclean JW, Tomlinson JE, Kuang WJ, et al. cdna secquence of human apolipoprotein(a) is homologous to plasminogen[j]. Nature, 1987, 330(6144):
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
10.11648.j.si.20160402.18
Science Innovation 2016; 4(2): 65-71 http://www.sciencepublishinggroup.com/j/si doi: 10.11648/j.si.20160402.18 ISSN: 2328-7861 (Print); ISSN: 2328-787X (Online) Case Study on Career Plan of College's Students
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227 ELISA 刘 沙 洲 1,2, 桑 小 雪 1, 欧 阳 华 学 3, 雷 绍 荣 3, 白 林 含 1, * (1. 四 川 大 学 生 命 科 学 学 院, 四 川 成 都 610065;2. 成 都 市 食 品 药 品 检 测 中 心, 四 川 成 都 610045; 3. 四 川 省 农 业 科 学 院 分 析 测 试 中 心, 四 川 成 都 610066) 目 的 : 比 较
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
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在 线 投 稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮 助 平 台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v24.i5.815 世 界 华 人 消 化 杂 志 2016 年 2 月 18 日 ; 24(5): 815-820 ISSN 1009-3079 (print)
<4D6963726F736F667420576F7264202D20B2CCA3BA4542B2A1B6BE52746120496747BFB9CCE5D3EBB1C7D1CAB0A9B7D6C6DAB5C4B9D8CFB52E646F63>
EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 分 期 的 关 系 蔡 永 林, 郑 裕 明, 成 积 儒, 李 军, 莫 永 坤, 钟 青 燕 ( 广 西 梧 州 市 红 十 字 会 医 院, 梧 州 市 肿 瘤 防 治 研 究 所, 广 西 梧 州 543002) 摘 要 : 目 的 探 讨 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 临 床 分 期 的 关 系 方 法 用 酶
Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr
PCR 龙平, 崔占虎, 李虔全, 徐建平, 张春红, 周立社 * *, 李旻辉 ( 包头医学院, 内蒙古包头 014060) DNA 30 28 DNA trnl-trnf PCR PCR 136 bp 323 bp 10% PCR PCR Astragalus membranaceus Fisch. Bge. var. mongho- licus Bge. Hsiao A. membranaceus
pet28a + CD 1 3 ~ 4 NHL 85% ~ % B 2 CD B B B 3-4 CD 5 CD B Rituximab C2B8 CD IgG1 CHO FDA C2B8 Minibody IgG VL VH CH3 Linker VL-VH-CH3 Fc ADCC
35 3 12 9 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY Natural Science Edition Vol 35 No 3 Sept 12 pet28a + CD 210046 Rituximab VL VH CH3 CD overlap PCR Rituximab VL VH Linker ScFv ScFv IgG1 CH3 IgG1 cdna pet28a
: 307, [], [2],,,, [3] (Response Surface Methodology, RSA),,, [4,5] Design-Expert 6.0,,,, [6] VPJ33 ph 3,, ph, OD, Design-Expert 6.0 Box-Behnken, VPJ3
![: 307, [], [2],,,, [3] (Response Surface Methodology, RSA),,, [4,5] Design-Expert 6.0,,,, [6] VPJ33 ph 3,, ph, OD, Design-Expert 6.0 Box-Behnken, VPJ3](/thumbs/42/23094730.jpg ": 307, [], [2],,,, [3] (Response Surface Methodology, RSA),,, [4,5] Design-Expert 6.0,,,, [6] VPJ33 ph 3,, ph, OD, Design-Expert 6.0 Box-Behnken, VPJ3")
微 生 物 学 通 报 FEB 20, 2008, 35(2) 306~30 Microbiology 2008 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@im.ac.cn 生 物 实 验 室 响 应 面 分 析 法 优 化 副 溶 血 性 弧 菌 生 长 条 件 刘 代 新 宁 喜 斌 * 张 继 伦 2 (. 200090) (2. 20202) 摘 要
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
![12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL](/thumbs/91/106935627.jpg "12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL")
( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
274 % 3 0 0 28 0 0 4 0 0 7 0 0 3 0 0 2 0 0 3 0 0 50 0 0 2 0 0 3 0 0 2 0 0 1 0 0 2 0 0 3 0 0 13 0 0 63 0 0 2
274 ISSN 0255-6162 GPN 2006900031 274 92 10 20 161-2 0226531318 http://www.nlfd.gov.tw 1 274 % 3 0 0 28 0 0 4 0 0 7 0 0 3 0 0 2 0 0 3 0 0 50 0 0 2 0 0 3 0 0 2 0 0 1 0 0 2 0 0 3 0 0 13 0 0 63 0 0 2 274
SO 2 g/kg 2.0 ppm 2
ISSN 0255-6162 GPN 2006900031 273 92 9 20 161-2 02 26531318 http://www.nlfd.gov.tw 1 SO 2 g/kg 2.0 ppm 2 (Center of Biological Evaluation and Research, FDA) 30 1991 FDA 91 10 30 Trend of Vaccine Development
绎 阴 元元 510515 Caco-2 Caco-2 P 标题
环 球 中 医 药 2016 年 5 月 第 9 卷 第 5 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两 种 电 针 对 脊 髓 损 伤 14 天 后 大 鼠 运 动 功 能 神 经 元 及 MEK2 p 鄄 ERK1 表 达 的 影 响 论 著 宋 良 玉 摇 吕 威 摇 景 泉 凯 摇 莫 雨
5期xin
中 国 农 学 通 报 2014,30(5):23-27 Chinese Agricultural Science Bulletin 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 筛 选 及 生 长 曲 线 测 定 喻 华 英, 李 启 峰 ( 塔 里 木 大 学 动 物 科 学 学 院, 新 疆 阿 拉 尔 843300) 摘 要 : 为 探 究 犊 牛 腹 泻 病 中 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 形 成
标题
第 39 卷第 6 期 Vol. 39 No. 6 摇 摇 摇 摇 中南医学科学杂志 Journal of Medical Science in Central South China 2011 年 11 月 Nov. 2011 沙眼衣原体 T 细胞抗原 CT143 原核表达 纯化及免疫活性鉴定 陆春雪1,吴移谋1,彭摇 波2,刘良专1,蔡恒玲1,李忠玉1 (1. 南华大学 微生物与免疫学教研室,湖南
1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology NatureScienceLa
SARS SARS SARS SARS NatureScience 1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology 32 8 13.066 NatureScienceLancetPNAS SCI 905
Microsoft Word - 793-797 tb20150504赵宏宇s-高校教改纵横.doc
微 生 物 学 通 报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn Apr. 20, 2016, 43(4): 793 797 http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150504 高 校 教 改 纵 横 生 物 工 程 专 业 发 酵 课 程 群 建 设 探 索 * 赵 宏 宇
instillation therapy combined with Western medicine can reduce the levels of ALT, TBA, ALP, TBIL, DBIL and GGT, and improve the anti-cmv-igm negative
在 线 投 稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮 助 平 台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i28.4568 世 界 华 人 消 化 杂 志 2015 年 10 月 8 日 ; 23(28): 4568-4573 ISSN 1009-3079
22 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2011 Vol. 43 No % 3% 3% /% % 6. 67% 1. 71% 1. 11% 0. 14% 0.
2011 43 5 21 3 1 1* 1 2 3 1 1. 2. 3. 78. 68±2. 95 g 28 300 3 5 3% 3 1 ALT TP ALB AST 0. 05 P>0. 05 ALT TP ALB P>0. 05 AST 0. 05 GLOB P>0. 05 2 INS 0. 05 TSH T 3 0. 05 P>0. 05 GLU GH T4 IGF-I P>0. 05 S816.
討論
MTT cell viability assay 1 [45] succinate dehydrogenase MTT Kreb s cycle 2 MTT 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide DMSO 570 nm 15 3 MTT solution MTT Sigma Cat. M-2128 ( PBS ) 5
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 07 17 白 球 蛋 白 醇 溶 蛋 白 和 碱 溶 蛋 白 等, 发 现 白 果 中 的 蛋 白 质 主 要 以 清 蛋 白 和 球 蛋 白 为 主, 其 中 白 果 清 蛋 白 具 有 抗 氧 化 和 延 缓 衰 老 等 作
16 李 莹 莹 1, 吴 彩 娥 1, *, 杨 剑 婷 2, 范 龚 健 1 (1. 南 京 林 业 大 学 森 林 资 源 与 环 境 学 院, 江 苏 南 京 210037;2. 安 徽 科 技 学 院 食 品 药 品 学 院, 安 徽 凤 阳 233100) 对 白 果 的 主 要 过 敏 蛋 白 进 行 鉴 定, 并 对 其 过 敏 原 性 进 行 分 析 以 SDS-PAGE 和 Western-Blotting
ment group was more effective than that of the control group OR = % CI = Conclusion The clinical efficacy of Chinese medic
33 243 HAART Meta * 1 1 1 1 1 2 3 3 3 1. 530001 2. 538000 3. 530011 highly active anti-retroviral therapy HAART Pubmed HAART randomized controlled trials RCT Jadad RevMan5. 3 Meta 5 RCT 761 Meta HAART
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
Vol. 22 No. 4 JOURNAL OF HARBIN UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY Aug GPS,,, : km, 2. 51, , ; ; ; ; DOI: 10.
22 4 2017 8 Vol. 22 No. 4 JOURNAL OF HARBIN UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY Aug. 2017 150080 GPS,,, : 27. 36 km, 2. 51, 110. 43, ; ; ; ; DOI: 10. 15938 /j. jhust. 2017. 04. 015 U469. 13 A 1007-2683
11. Fab 867 (Infectious bursal disease IBD) IBD ().25 mmol/l IPTG 37 4 h [1] SDS-PAGE 1 Table 1 Primers used in the amplification of the target gene P
![11. Fab 867 (Infectious bursal disease IBD) IBD ().25 mmol/l IPTG 37 4 h [1] SDS-PAGE 1 Table 1 Primers used in the amplification of the target gene P](/thumbs/81/83370048.jpg "11. Fab 867 (Infectious bursal disease IBD) IBD ().25 mmol/l IPTG 37 4 h [1] SDS-PAGE 1 Table 1 Primers used in the amplification of the target gene P")
37 11 215 11 中国预防兽医学报 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Vol. 37 No.11 Nov. 215 doi: 1.3969/j.issn.8-589.215.11.12 张瑛杰 1, 尹杰超 1, 李天鹤 2, 周兵 3, 徐鹏飞 1, 荆燕 1,4, 任桂萍 1*, 李德山 1* (1. 153 2. 49
Microsoft Word - GJPHV3N2-4.doc
On comprehensive prevention and control strategies of hand foot mouth disease Zhao-min Yang Center for Disease Control and Prevention of Shangluo City, Shangluo, Shanxi, China Received: Jul 08, 2016 Accepted:
2000.11 2000.11 2000 11 Abstract: Background: The development of autoantibodies in the sera of patients with cancers has been described, but the mechanism is still not clear. Objective: The aim of this
标题
Vol. 36 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 5 2015 年 5 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 摇 摇 摇 摇 摇 摇 886 ~ 892 摇 摇 doi: 10. 7503 / cjcu20140965 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 伍 贤 军 1,2, 赵 摇 兵 2, 缪 摇 璇
36(4) (2004) Journal of Soil and Water Conservation, 36(4) (2004) earthworms dig soil on surface and prevent plants to grow. But until D
(1) (2) (3) 16 20 35 Effect of Vegetation and Soil Properties on Earthworm Population Li-Ling Lin Professor, Department of Soil and Water Conservation, National Chung Hsing University, Taichung, Taiwan,
5-25袁宏钧.indd
第 24 卷 第 5 期 2015 年 5 月 碘 131 doi:10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 Chinese Journal of General Surgery, 2015, 24(5):643 647. Chinese Journal of
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
sedentary lifestyle Blair Connelly, 1996; King Senn, Health People American College of Sports Medic
9 203-230 2004 12 * ** *** 2251 1160 3411 1600/800 * ** *** 204 9 88 4-5 50 17.9 sedentary lifestyle Blair Connelly, 1996; King Senn, 1996 2010Health People 2010 13 2 2 4 2 5 90 American College of Sports
2015 1 330 GLOBAL EDUCATION Vol. 44 No1 2015 / 300387 / 300387 20 20 1926 20 1912 1912 1918 1919 34 1919 1921 1 1922 1923 1925 7 100 2 1922 3 1923 5 1923 1924 4 1927 1949 20 1. 20 5 35 2. 20 20 1927 1949
穨hair&sick
"Medical Knowledge and Uses of Hair in Traditional China" 199777 The Taniguchi Foundation Medicine and the Expressive Body The 22nd International Symposium on the Comparative History of Medicine: East
1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS 8 NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology NatureScienceLance
SARS SARS SARS SARS NatureScience 2018 1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS 8 NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology 13.066 NatureScienceLancetPNAS SCI 940
材料 方法
生物技术通报 陆敏 许黎明 吴宏宇 张继恩 李国栋 黄青山 溶葡萄球菌酶 是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶 已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染 但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据 现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究 检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑 杀菌活性 结果显示 重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状
SVM OA 1 SVM MLP Tab 1 1 Drug feature data quantization table
38 2 2010 4 Journal of Fuzhou University Natural Science Vol 38 No 2 Apr 2010 1000-2243 2010 02-0213 - 06 MLP SVM 1 1 2 1 350108 2 350108 MIP SVM OA MLP - SVM TP391 72 A Research of dialectical classification
EBV-EA IgG IFA Test 操作手冊
型 號 :708301 限 由 醫 師 或 醫 檢 師 使 用 效 能 因 諾 瓦 酒 精 固 定 抗 嗜 中 性 白 血 球 細 胞 質 抗 體 檢 測 系 統 NOVA Lite ANCA (Ethanol) Kit with DAPI 使 用 前 請 務 必 詳 閱 原 廠 之 使 用 說 明 書 並 遵 照 指 示 使 用 體 外 診 斷 用 許 可 證 字 號 : 衛 部 醫 器 輸 字
Microsoft Word - 2.v3n1.gjtm.docx
Theory of carduonephric disharmony and irritable bowel syndrome Xia-min Lu 1, Min Lu 1 Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing, China Department of Digestive System, Jiangsu Integrated
, GC/MS ph GC/MS I
S00017052 O O , GC/MS ph GC/MS I Abstract Drug abuse is a serious issue throughout the world. Amphetamine-type stimulants (ATS) are substances frequently used by drug abusers. There are significant needs
10 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2012 Vol. 44 No. 4 cantly in the presence of indicating that the resistant protein was not expressed in the
2012 44 4 9 2 2 3 1. 225009 2. 200240 3. 200072 R PCR p215c3lyz R pqe-31 R IPTG Western blotting pqe- p215c3lyz COS- DH5α OD 600 Western blotting p215c3lyz Western blotting R R S852. 4 A 0529-5130 2012
Microsoft Word - 201506定版
56 Chinese Journal of Library and Information Science for Traditional Chinese Medicine Dec. 2015 Vol. 39 No. 6 综 述 中 医 药 学 语 言 系 统 研 究 综 述 于 彤, 贾 李 蓉, 刘 静, 杨 硕 *, 董 燕, 朱 玲 中 国 中 医 科 学 院 中 医 药 信 息 研 究 所,
07 353-408
編 號 :CCMP96-RD-006 以 德 菲 法 探 討 中 醫 臨 床 證 型 診 斷 基 準 - 六 淫 證 型 蘇 奕 彰 中 國 醫 藥 大 學 摘 要 德 菲 法 (Delphi Method) 是 廣 泛 被 使 用 的 研 究 方 法, 尤 其 適 用 於 新 的 研 究 領 域 (new research area) 及 探 索 性 研 究 (exploratory studies),
苗 栗 三 山 國 王 信 仰 及 其 地 方 社 會 意 涵 The Influences and Implications of Local Societies to Three Mountain Kings Belief, in Taiwan Miaoli 研 究 生 : 林 永 恩 指 導
國 立 交 通 大 學 客 家 文 化 學 院 客 家 社 會 與 文 化 學 程 碩 士 論 文 苗 栗 三 山 國 王 信 仰 及 其 地 方 社 會 意 涵 The Influences and Implications of Local Societies to Three Mountain Kings Belief, in Taiwan Miaoli 研 究 生 : 林 永 恩 指 導 教
Microsoft Word - 澎湖田調報告_璉謙組.doc
越 籍 新 住 民 妊 娠 醫 療 照 護 : 訪 談 李 亞 梅 女 士 組 長 : 郭 璉 謙 成 大 中 文 所 博 二 組 員 : 阮 壽 德 成 大 中 文 所 博 一 黃 榆 惠 成 大 中 文 所 碩 一 許 愷 容 成 大 中 文 所 碩 一 何 珍 儀 成 大 中 文 所 碩 一 指 導 老 師 : 陳 益 源 教 授 前 言 2009 年 03 月 21 日, 下 午 2 時 30
第16卷 第2期 邯郸学院学报 2006年6月
第 18 卷 第 4 期 邯 郸 学 院 学 报 2008 年 12 月 Vol.18 No.4 Journal of Handan College Dec. 2008 赵 文 化 研 究 论 赵 都 邯 郸 与 赵 国 都 城 研 究 问 题 朱 士 光 ( 陕 西 师 范 大 学 历 史 地 理 研 究 所, 陕 西 西 安 710062) 摘 要 : 战 国 七 雄 之 一 的 赵 国 都 城
流式细胞术临床应用的建议 作者 : 中华医学会检验医学分会, 卫生部临床检验中心, 中华检验医学杂志编辑委员会 作者单位 : 刊名 : 中华检验医学杂志 英文刊名 : Chinese Journal of Laboratory Medicine 年, 卷 ( 期 ): 2013,36(12) 本文链接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/periodical_zhyxjy201312003.aspx
度 身 體 活 動 量 ; 芬 蘭 幼 兒 呈 現 中 度 身 體 活 動 量 之 比 例 高 於 臺 灣 幼 兒 (5) 幼 兒 在 投 入 度 方 面 亦 達 顯 著 差 異 (χ²=185.35, p <.001), 芬 蘭 與 臺 灣 幼 兒 多 半 表 現 出 中 度 投 入 與 高 度
臺 灣 與 芬 蘭 幼 兒 園 室 內 自 由 遊 戲 內 涵 之 探 討 林 昭 溶 毛 萬 儀 經 國 管 理 暨 健 康 學 院 幼 兒 保 育 系 副 教 授 joyce@ems.cku.edu.tw 吳 敏 而 國 家 教 育 研 究 院 研 究 員 rozwu@mail.naer.edu.tw wanyi@ems.cku.edu.tw 摘 要 自 由 遊 戲 被 視 為 是 幼 兒 的
Microsoft Word - 360145.doc
项 目 批 准 号 81273814 归 口 管 理 部 门 申 请 代 码 收 件 日 期 H2716 360145 y 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 资 助 项 目 计 划 书 资 助 类 别 : 面 上 项 目 亚 类 说 明 : 非 连 续 资 助 类 项 目 附 注 说 明 : 项 目 名 称 : 益 气 养 肺 法 拮 抗 bfgf 对 肺 癌 微 环 境 介 导 化 疗
32期
中 国 农 学 通 报 2014,30(32):38-42 Chinese Agricultural Science Bulletin 中 草 药 饲 料 添 加 剂 对 黄 鳝 性 激 素 含 量 的 影 响 1,2 1,2 1,2 2 赵 庆 凯, 丁 炜 东, 邴 旭 文, 王 建 新 ( 1 南 京 农 业 大 学 无 锡 渔 业 学 院, 江 苏 无 锡 214081; 2 中 国 水 产
,,, A ECs,, A ECs,,, A ECs,,,, ( 8) 213 3,,,,,, A ECs,, ( 9) 7,,,,,, ( 10),,, 28,,A ECs,,A ECs, A ECs 7 ;, ( ) ( 11) 3 BL M IPF, IPF [2
512 Chinese Medical Journal of Metallurgical Industry,October 2005,Vol122 No1 5 3 1 1 1 2 1 ( 300020) 2 : : (5 mg/ kg), 3 7 28 : 3, ; 7 :,, ; 28 :,,, :, R 563 A 1005-5495 (2005) 05-0512 - 03 Ultrastructural
标题
摇 878 环 球 中 医 药 2015 年 7 月 第 8 卷 第 7 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, July 2015,Vol 郾 8, No 郾 7 慢 性 前 列 腺 炎 外 治 法 治 疗 进 展 综 述 莫 旭 威 摇 王 彬 摇 李 海 松 摇 赵 冰 摇 刘 洋 揖 摘 要 铱 摇 目 前 慢 性 前 列 腺 炎 的 治 疗 已 经
TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C
2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~
标题
摇 1524 艾 滋 病 合 并 肺 部 感 染 中 医 证 型 研 究 进 展 综 述 扶 伟 摇 徐 立 然 摇 马 秀 霞 摇 孟 鹏 飞 摇 宋 夕 元 摇 李 亮 平 摇 李 正 摇 丁 雪 摇 邱 荃 摇 杨 超 华 揖 摘 要 铱 摇 艾 滋 病 合 并 肺 部 感 染 的 治 疗 过 程 中 因 其 病 因 复 杂, 临 床 症 状 多 样, 辨 证 分 型 及 临 床 疗 效 评
Ansell Gash ~ ~ Rhodes ~ H. Haken 20 90
2012 4 162 2012 7 Comparative Economic & Social Systems No. 4 2012 Jul. 2012 C916 A 1003-3947 2012 04-0157-12 158 2012 4 1999 284 1 Ansell Gash 2007 543 ~ 571 2006 34 ~ 35 2009 2011 2011 1 2001 200 2002
10.11648.j.sjbm.20150306.21
Science Journal of Business and Management 2015; 3(6): 293-301 Published online January 27, 2016 (http://www.sciencepublishinggroup.com/j/sjbm) doi: 10.11648/j.sjbm.20150306.21 ISSN: 2331-0626 (Print);
490 Evidence Science Vol.20 No.4 2012 40 [2] ( 二 ) 法 庭 科 学 定 义 [34] ; (Legal med) (Forensic med) (Forensic chemistery) : [5] : : ( 二 ) 法 庭 科 学 的 定 位 1
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489 黄 瑞 亭 * 二 十 年 来 法 医 学 之 进 步 一 文 是 林 几 对 法 庭 科 学 史 法 庭 科 学 内 涵 范 围 管 理 教 育 学 术 立 法 及 法 庭 科 学 人 文 人 格 等 的 研 究 成 果 是 林 几 的 教 育 思 想 及 学 术 思 想 的 集 中 体 现 文 章 揭 示 了 法 庭 科 学 的 真 谛 对 今 天 仍 有 十 分 重 要 的 历 史 和
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
材料與方法
10-12 250-350 Sprague-Dawley rat ( SD ) 12 ( AM 8 00-PM 8 00 ) (Control group) (HS) (Heat shock group) 15 0 4 6 16 24 (PAE) ( Pulmonary air embolism group) 20 40 (25 l/min) 40 17 20 (HS&PAE) 15 4 16 20
72 (2001) group waves. Key words: Correlation coefficient for consecutive wave heights, mean run length (1993) (1996) (1998) (1999) (1993) (
(2001) 1 1 71-82 71 1 2 3 1. chtsai@mail.ntou.edu.tw 2. 3. hsiang@mail.ihmt.gov.tw 1998 9 500 (mean run length) Group waves and dangerous waves at the coast Tsai Cheng-Han Lin Yin-Chern Tseng Hsiang-Mao
( s y s t e m ) ( s t r e s s ) (stress model) ( s y s t e m ) [ ] [ 5 ] C o x [ 3 ] 1 [ 1, 2 ] [ 6-8 ] [ 9 ] Tw Fam Med Res 2003 Vol.1 No.1 23
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1, 4 1, 2 3 1 4 1, 2 1977 E n g e l 1999 5 1 ( 1 ) ( 2 ) ( 3 ) ( 4 ) ( 5 ) 2003 1 2 2-32 stress model, stress analysis [ 1 ] ( p s y c h o g e n e s i s ) (holism) (biomedical model) ( r e d u c t i o
１對外華語文詞彙教學的策略研究_第三次印）.doc
37 92 1 16 1 2 3 4 5 6 7 8????? 9????????? 10???????????????????? 11? 12 13 14 15 16 The Strategy Research of Teaching Chinese as a Second Language Li-Na Fang Department of Chinese, National Kaohsiung
211 better than those in the control group, with significant difference between two groups (P < 0.05). The ocular hypertension of patients in the cont
210 毛 果 芸 香 碱 联 合 拉 坦 前 列 素 治 疗 原 发 性 急 性 闭 角 型 青 光 眼 的 疗 效 观 察 符 元 党 1, 郑 振 优 2, 林 再 雄 2, 周 吉 良 1. 昌 江 黎 族 自 治 县 中 西 医 结 合 医 院, 海 南 昌 江 572700 2. 海 南 医 学 院 附 属 医 院 眼 科, 海 南 海 口 570100 1 摘 要 : 目 的 探 讨
BIBLID 0254-4466(2001)19:1 pp. 309-327 19 1 90 6 80 1983 1 * 1 1983.8 195-206 309 310 19 1 2 1.1983 1986 3 2 1984.9.21 1986.12.18 1984 12 42-46 1996 3 45-47 1987.2.4 1992 1 127-130 1995.12.17 1996.1.13
Microsoft Word - 第十章.doc
第 十 章 貓 免 疫 不 全 病 毒 感 染 症 許 哲 銘 1 汪 鴻 展 2 張 清 棟 3 1 國 立 台 灣 大 學 獸 醫 學 研 究 所 2 台 南 縣 家 畜 疾 病 防 治 所 3 國 立 屏 東 科 技 大 學 一 前 言 貓 免 疫 不 全 病 毒 (Feline immunodeficiency virus; FIV) 為 一 造 成 貓 免 疫 抑 制 之 傳 染 性 疾
10.11648.j.sd.20160403.18
Science Discovery 2016; 4(3): 202-206 http://www.sciencepublishinggroup.com/j/sd doi: 10.11648/j.sd.20160403.18 ISSN: 2331-0642 (Print); ISSN: 2331-0650 (Online) Construction for the Engineering Application-Oriented
黑面琵鷺2015
PG10402-0124 104-01-01 104 年 度 台 江 國 家 公 園 黑 面 琵 鷺 族 群 生 態 研 究 及 其 棲 地 經 營 管 理 計 畫 台 江 國 家 公 園 管 理 處 委 託 研 究 報 告 (104 年 ) ( 本 報 告 內 容 及 建 議, 純 屬 研 究 小 組 意 見, 不 代 表 本 機 關 意 見 ) 中 華 民 國 104 年 12 月 PG10402-0124
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ % % ~ 20% 50% ~ 60%
33 202 67 ~ 79 The Chinese Journal for the History of Science and Technology Vol. 33 No. 202 896 ~ 949 404 00083 896 ~ 907-908 ~ 98-99 ~ 949 - - N092 TF-092 A 673-44 202 0-0067-3 R. F. Tylecote R. I. McCallum
山东大学医学院
山 东 大 学 医 学 院 攻 读 临 床 医 学 专 业 学 位 硕 士 研 究 生 培 养 方 案 总 则 一 培 养 目 标 1 热 爱 祖 国, 具 有 良 好 的 医 德 医 风, 身 体 健 康, 具 有 强 烈 的 事 业 心 和 团 队 精 神 2 具 有 较 强 的 临 床 分 析 和 思 维 能 力, 在 上 级 医 师 的 带 领 指 导 下, 进 行 临 床 能 力 训 练,
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博 物 館 與 文 化 第 6 期 頁 35~68(2013 年 12 月 ) Journal of Museum & Culture 6 : 35~68 (December, 2013) 臺 灣 地 方 文 化 館 政 策 呈 現 之 多 元 文 化 2 蘇 明 如 Multi-Culture Study on Project of Taiwan Local Cultural Museums Ming-Ju
1 1. M J M M J M J M M J
2018 3 40 2 Modern Law Science Mar. 2018 Vol. 40 No. 2 1001-2397 2018 02-0041 - 16 100872 DF092 A DOI 10. 3969/j. issn. 1001-2397. 2018. 02. 03!"# 1 2017-12 - 05 2017 17CFX006 1. 1982 M. 1997 73-146 216-244.
第2期定稿.FIT)
云梦学刊 第 37 卷 第 2 期 Vol.37袁 No.2 Journal of Yunmeng 2016 年 3 月 Mar. 2016 言意之辨 要要 要魏晋玄学的语言论 韩扬文 渊云南大学 人文学院袁 云南 昆明 650091冤 摘 要院野言意之辨冶为魏晋玄学崤函之固袁后世讲论此期文学袁多探及该题遥 在野言意之辨冶中袁欧阳建尧张韩主要论及野言冶 与野意冶的关系袁而荀粲尧王弼的界说则包含了对于野言冶野象冶野意冶三者的讨论遥
Construction of Chinese pediatric standard database A Dissertation Submitted for the Master s Degree Candidate:linan Adviser:Prof. Han Xinmin Nanjing
密 级 : 公 开 学 号 :20081209 硕 士 学 位 论 文 中 医 儿 科 标 准 数 据 库 建 设 研 究 研 究 生 李 楠 指 导 教 师 学 科 专 业 所 在 学 院 毕 业 时 间 韩 新 民 教 授 中 医 儿 科 学 第 一 临 床 医 学 院 2011 年 06 月 Construction of Chinese pediatric standard database
刘陈立 邵宗泽 以柴油为惟一碳源 从胜利油田黄河码头和厦门储油码头两个海水样品中富集得到两组柴 油降解菌 共 株细菌 株真菌 它们对柴油都有降解能力 鉴定结果表明这 株细菌 中有 株摩加夫芽孢杆菌 株施氏假单胞菌 株腊样芽孢杆菌 株反硝化产碱杆菌 株阿氏葡萄球菌 株食烷菌和 株类似很小海旋菌的未知新菌 其中 对柴油的降解能力最强 已 报道的食烷菌属中其他种的同源性最高 为 表明它是该属中的一个新种
Microsoft Word - V1_2010513_王翔会计习题课二.docx
2015 注 册 会 计 师 会 计 习 题 班 二 王 翔 肆 大 会 计 高 级 培 训 师 第 二 章 金 融 资 产 1.A 公 司 于 2013 年 1 月 2 日 从 证 券 市 场 上 购 入 B 公 司 于 2013 年 1 月 1 日 发 行 的 债 券, 该 债 券 3 年 期, 票 面 年 利 率 为 4.5%, 到 期 日 为 2016 年 1 月 1 日, 到 期 日 一
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绎 1. 110032 2. 100029 3. 100045 4. 300193 5. 116023 6. 510120 7. 110004 8. 250011 9. 210029 10. 200032 11. 510405 12. 210008 13. 201102 14. 300074 13 3 1~2 doi: 10.11842/wst.2013.05.039 R725.6 A World
利 年 列 利 V 理 數 利 數 利 六 易 不 率 不 年 來 類 爲 爲 來 了 療 不 不 了 類 SARA 了 SARS 理 念 産 療 理 了 療 理 爲 爲
利 說 說 更 92116132 I P C 類 理 Surface Treatment of SARS-Infected Lungs 林 林 Lin Zhen Man 參 利 年 列 利 V 理 數 利 數 利 六 易 不 率 不 年 來 類 爲 爲 來 了 療 不 不 了 類 SARA 了 SARS 理 念 産 療 理 了 療 理 爲 爲 陸 SARS infection has wreaks
rights and interests of doctors and patients. But it is insufficient jurisprudential basis and legitimacy crisis of legal forms through the form of mi
1 Vol. 3 6 No. 1 36 2 0 1 8 1 Hebei Law Science Jan. 2 0 1 8 DOI 10. 16494 /j. cnki. 1002-3933. 2018. 01. 011 511436 DF36 A 1002-3933 2018 01-0117-13 Study on the Jurisprudential Basis on the Implementation
陆睿等 重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的检测 05,(0) 7 作用较大 半衰期短的缺点 重组人纤溶酶原 HCG 097丽珠集团丽珠制药厂 胎牛血清 激活剂 rhpaf E K 区缺失体 具有出血副作 SH0070.0HyClone M G80Sigma 用小 半衰期长 溶栓活性高等
生物技术通报 研究报告 IOTECHNOLOGY ULLETIN 05, (0):6- 重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的 检测 陆睿 宋绍征 祁正强 葛欣 邵宾 成勇 江苏省转基因动物制药工程研究中心扬州 5009 摘 要 人组织纤溶酶原激活剂 ht-pa 是临床血栓疾病治疗的主要生物药品应用转基因动物乳腺生物反应器制备已有 报道但重组人纤溶酶原激活剂 rhpa 在转基因动物中表达尚未见报道
( ) 307 A B B B B ABO LeA LeX LeB LeY 1.3 ABO ABO O Rh O α -1, 3 [6] [ 4] ABO ABO (marginal zone) T [7] 1.2 1.4 [8] ( ) [ 5] 1.5 -
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306 : 1000-1336(2009)03-0306-09 ( 200031) Q53 ABO(H) [3] Landsteiner ABO O A B AB 4 N- - L- H O N- N- A B [1] (Glycoimmunology) A B 4 [2] / 1.1-2009-03-09 ( 1 9 4 0 - ) ( ) E - m a i l : keyiwang0717@gmail.com
1 GIS 95 Y = F y + (1 F) (1) 0 0 Y0 kg/hm 2 /day F y 0 y c kg/hm 2 /day [12] y m 20 kg/hm 2 /hour Y = cl cn ch G [ F( y ) T m yo + (2) (1 F)(
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24 1 Vol.24 No.1 94 2008 1 Transactions of the CSAE Jan. 2008 2008 1 100094 2 100035 3 100081 4 100081 5 100101 GIS ( ) 65.12 16.82 13.74 15.27 11.07 t/(hm 2 a) 10.93% 41.43% 46.93% 65.4%. Bi Jiye, Zhu
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journal.newcenturyscience.com/index.php/gjanp Global Journal of Advanced Nursing Practice,214,Vol.1,No.1 The practicality of an improved method of intravenous infusion exhaust specialized in operating
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* 葉 全 益 ** 蔡 碧 如 摘 要 在 28 年 7 月 至 12 月 間 調 查 市 售 果 ( 蔬 ) 汁 價 格 與 其 原 汁 含 量 之 關 聯 性, 共 取 樣 119 項,8 種 類 別, 其 中 7 項 有 標 示 原 汁 含 有 率, 佔 58%,49 項 未 標 示, 佔 42 % 有 標 示 之 涵 蓋 純 天 然 果 汁 18 項 稀 釋 天 然 果 汁 項 果 汁 飲
2015医学版第六期
第 4 卷 第 6 期 205 年 2 月 Journal of Lanzhou University(Medical Sciences) Vol.4 No.6 Dec. 205 文 章 编 号 :000-282 (205) 06-0054-05 金 昌 队 列 人 群 代 谢 综 合 征 率 及 组 分 分 析 彭 峥, 白 亚 娜, 王 凤 杰 2, 李 娟 生, 李 海 燕 2, 刘 燕 青,
PCA+LDA 14 1 PEN mL mL mL 16 DJX-AB DJ X AB DJ2 -YS % PEN
21 11 2011 11 COMPUTER TECHNOLOGY AND DEVELOPMENT Vol. 21 No. 11 Nov. 2011 510006 PEN3 5 PCA + PCA+LDA 5 5 100% TP301 A 1673-629X 2011 11-0177-05 Application of Electronic Nose in Discrimination of Different
Microsoft Word - 18-p0402-c3.doc
第 14 卷 第 3 期 中 南 大 学 学 报 ( 社 会 科 学 版 ) Vol.14 No3 2008 年 6 月 J. CENT. SOUTH UNIV. (SOCIAL SCIENCE) Jun 2008 肺 病 隐 喻 与 性 别 身 份 建 构 中 国 现 代 文 学 中 的 肺 病 意 象 分 析 王 冬 梅 ( 枣 庄 学 院 中 文 系, 山 东 枣 庄,277160) 摘 要
II ABSTRACT Severe acute respiratory syndrome (SARS) was the first severe infectious disease in the 21 century,which was caused by a new coronavirus,n
I SARS 21 SARS-CoV GeneBank SARS-CoV Tor2 PCR N PN422 N 40% SARS N 95% N C N 38 15%~30% SARS N N 39 Western N 30 60aa 160~170aa N Bal b/c 8 39 Western Blot 8 6 2 N N 30 184 301 360 2 2 IgG1 10 6 10 9 M
性病临床诊疗指南（全）.doc
Guidelines for Diagnosis and Treatment of Sexually Transmitted Diseases National Center for STD Control, China CDC 1 2 / 3 4 5 6 1991 2000 8 1996 2004 1 1 HIV HIV 7 HIV HIV 1991 2000 8 1996 2004 1 1 HIV
考試學刊第10期-內文.indd
misconception 101 Misconceptions and Test-Questions of Earth Science in Senior High School Chun-Ping Weng College Entrance Examination Center Abstract Earth Science is a subject highly related to everyday
标题
医 药 导 报 2016 年 8 月 第 35 卷 第 8 期 803 特 约 稿 鱼 腥 草 制 剂 上 市 后 安 全 性 再 评 价 吴 健 鸿 1 ꎬ 杨 晓 燕 2 ꎬ 柳 强 妮 2 ꎬ 尹 平 2 2 ꎬ 曾 繁 典 (1. 武 汉 药 品 医 疗 器 械 检 验 所 ꎬ 武 汉 430075ꎻ2. 华 中 科 技 大 学 同 济 医 学 院 ꎬ 武 汉 430030) 摘 要 目 的
第二十四屆全國學術研討會論文中文格式摘要
以 田 口 動 態 法 設 計 物 理 治 療 用 牽 引 機 與 機 構 改 善 1, 2 簡 志 達 馮 榮 豐 1 國 立 高 雄 第 一 科 技 大 學 機 械 與 自 動 化 工 程 系 2 傑 邁 電 子 股 份 有 限 公 司 1 摘 要 物 理 治 療 用 牽 引 機 的 主 要 功 能 是 將 兩 脊 椎 骨 之 距 離 拉 開, 使 神 經 根 不 致 受 到 壓 迫 該 類 牽
Invitrogen 1.4 pet-gr, ICE-LGR, PCR TA, pmd18-t/gr pet-21a(+) (Nde I Xho I), E. coli DH-5,,,, pet-gr GR ORF cdna, GR, : PU: 5 -GGAATTCCAT
42 6 Vol.42, No.6 2011 11 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Nov., 2011 南极衣藻 (Chlamydomonas sp. ICE-L) 谷胱 * 甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化 1 1 燏 1 1 2 (1. 524025; 2. 266061) RT-PCR GR ORF cdna, ; IPTG,, pet-gr BL21,
2003 5 ; ;, ; :, ;, ;, :, ; :, ;, 500 ( 770 221 ) : ; ; ; ;,, :,,,, : 168
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