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- 炽 郦
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1 964 ISSN 1007 鄄 3949 Chin J Arterioscler,Vol 21,No 11,2013 实验研究 [ 文章编号 ] 摇 1007 鄄 3949(2013)21 鄄 11 鄄 0964 鄄 07 肿瘤坏死因子受体 2 突变载体对巨噬细胞炎症反应的影响 岳莉英, 卫娜, 白瑞, 杨慧宇, 王敏, 边云飞 ( 山西医科大学第二医院心内科, 山西省太原市 ) [ 关键词 ] 摇肿瘤坏死因子受体超家族 1B 基因 ; 摇可溶性肿瘤坏死因子受体 2; 摇巨噬细胞 ; 摇 TNF 鄄 TNFR2 信号通 路 ; 摇 炎症反应 [ 摘摇要 ] 摇目的摇探讨肿瘤坏死因子受体超家族 1B( TNFRSF1B)196 位基因多态性 ( T 突变为 G) 与巨噬细胞 TNF / TNFR2 信号通路介导炎症反应的相关性 方法摇 运用基因重组技术构建真核表达载体 pcdna6 郾 0 鄄 TN 鄄 FR2 196Met 和 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg, 采用脂质体转染法分别转染至巨噬细胞中, 转染 48 h 后使用杀稻瘟菌素抗性筛 选 4 周, 建立稳定转染细胞系 将酶消化法培养的巨噬细胞分为四组 : 空白对照组 pcdna6 郾 0 空质粒组 pcd 鄄 NA6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 组及 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 组 采用酶切及测序法鉴定重组质粒,RT 鄄 PCR 检测肿瘤坏死因子受 体 2(TNFR2) ciap 1 mrna 的变化 ;Western blot 检测 p 鄄 JNK ciap 1 TNFR2 及核因子资 B(NF 鄄资 B) 的蛋 白表达 ;ELISA 检测细胞上清液可溶性 TNFR2(sTNFR2) 白细胞介素 1 茁 (IL 鄄 1 茁 ) 和白细胞介素 6(IL 鄄 6) 水平 结果 196Met 196Arg 酶切测序结果显示成功构建了 TNFR2 基因和表达载体 转染到巨噬细胞后, 与空白对照组和 pcdna6 郾 0 空质粒组比较,pcDNA6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 组 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 组 TNFR2 ciap 1 IL 鄄 1 茁 IL 鄄 6 和 p 鄄 JNK 的表达 增高 (P < 0 郾 05); 与 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 组比较,pcDNA6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 组 TNFR2 ciap 1 IL 鄄 1 茁 IL 鄄 6 和 p 鄄 JNK 的表达明显降低 (P < 0 郾 05),TNFR2 196Arg 介导的 NF 鄄资 B 活性显著降低 结论摇成功构建稳定表达 TNFR2 196Met TNFR2 196Arg 载体,TNFR2 突变通过 TNF / TNFR2 信号通路介导炎症反应, 可能是参与慢性炎症性疾病的作用机制 [ 中图分类号 ] 摇 Q78 [ 文献标识码 ] 摇 A Effect of TNFR2 Mutation Vector on Inflammatory in Macrophages YUE Li 鄄 Ying, WEI Na, BAI Rui, YANG Hui 鄄 Yu, WANG Min, and BIAN Yun 鄄 Fei ( Department of Cardiology, The Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan, Shanxi , China) [KEY WORDS] 摇 Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily 1B Gene; 摇 Soluble Tumor Necrosis Factor Receptor 2; Macrophages; 摇 TNF / TNFR2 Signaling Pathway; 摇 Inflammation Reaction [ABSTRACT] 摇 摇 Aim 摇 To discuss the correlation of the polymorphism of tumor necrosis factor receptor superfamily 1B (TNFRSF1B) in the 196ed gene (T mutation for G) to the inflammation reaction mediated by the macrophage TNF 鄄 TNFR2 signaling pathways. 摇 摇 Methods 摇 Genetic recombination technology was used to bulid eukaryotic expression vector pcd 鄄 NA6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met and pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg, together with pcdn6 郾 0 being transferred to macrophage by liposome transfection method respectively. 摇 In order to establish stable transfection cell lines, blasticidin was used to select them for 4 weeks after transfected 48 h. 摇 Digest the macrophages by pancreatic enzyme and divide them into four groups: control group, pcdna6 郾 0 empty plasmid group, pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met group and pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg group. 摇 TNFR2, ciap 1 mrna were detected by RT 鄄 PCR, the expression of p 鄄 JNK, ciap 1, TNFR2 and NF 鄄资 B were detec 鄄 ted by Western blot, the level of stnfr2, IL 鄄 1 茁 and IL 鄄 6 in cell supernatant fluid were detected by ELISA. 摇 摇 Results TNFR2 gene 196Met and 196Arg expression vector were successfully constructed which was verified by enzyme sequencing meth 鄄 od. 摇 After transfected to marcophages, TNFR2, ciap 1, IL 鄄 1 茁, IL 鄄 6 and p 鄄 JNK expression were increased ( P < 0 郾 05) in TNFR2 196Arg and TNFR2 196Met overexpression group compared with the blank control group and empty plasmid group. 摇 Each index decreased obviously in mutant TNFR2 196Arg cell group compared with TNF2 196Met cell group, especially, [ 收稿日期 ] 摇 2013 鄄 06 鄄 03 [ 基金项目 ] 摇山西省科技攻关项目 ( 鄄 4) [ 作者简介 ] 摇岳莉英, 硕士, 研究方向为冠心病的基础与临床,E 鄄 mail 为 yly6673@ sina 郾 cn 白瑞, 硕士, 技师 通讯作者边云飞, 博士, 教授, 硕士研究生导师, 研究方向为冠心病的基础与临床,E 鄄 mail 为 yunfeibian@ sina 郾 com
2 CN 43 鄄 1262 / R 摇 中国动脉硬化杂志 2013 年第 21 卷第 11 期 965 the reduction of NF 鄄资 B activity mediated by TNFR2 196Arg was significant. 摇 Conclusions 摇 Successfully building stable ex 鄄 pression TNFR2 196Arg and TNFR2 196Met vector will lay the foundation for the next inflammation research. 摇 The mutation of TNFR2 mediates inflammatory disease through TNF / TNFR2 signaling pathways, which is molecular mechanism of chronic inflammatory disease. 摇摇肿瘤坏死因子 (tumor necrosis factor,tnf) 诱导的信号转导途径在冠心病慢性炎症过程中起关键作用 肿瘤坏死因子受体 2(tumor necrosis factor repor 鄄 tor 2,TNFR2) 由肿瘤坏死因子超家族成员 1B 基因 ( tumor necrosis factor receptor superfamily 1B, TNFRSF1B) 编码, 分为膜型和可溶性两种, 膜型 TN 鄄 FR2 特异性的表达在免疫细胞表面, 而可溶性 TNFR2 (soluble TNFR2,sTNFR2) 是由蛋白酶水解而成, 存在于血浆和尿中 [1] TNF 的生物学效应都是通过细胞表面的两种 TNF 受体 (tumor necrosis factor reportor, TNFR) 引发, 其信号转导通路主要包括 Caspase 家族介导的细胞凋亡 衔接蛋白 TRAF 介导的核因子资 B (nuclear factor 鄄资 B, NF 鄄资 B) 和 JNK 蛋白激酶的活化 [2] TNFRSF1B 基因位于染色体 1p36 郾 2, 由 10 个外显子和 9 个内含子组成, 除外显子 的非编码区存在基因多态性外, 最近发现 6 号外显子 196 位 (rs 位点核酸序列 676 位 ) 上有单核苷酸多态 (T / G) 我们已通过大量的病例对照研究对冠心病患者的 TNFR2 基因型分析发现冠心病组 rs 位点 GG 基因型较对照组有统计学差异, 提示 TN 鄄 FRSF1B 基因的 rs 位点 T / G 多态性与冠心病遗传易感性相关 [3] 国内外大量实验研究推测突变体 TNFR2 196Arg 可能影响炎症信号通路 NF 鄄资 B 活性 靶基因的诱导及细胞凋亡, 但其具体作用机制尚不明确 本研究旨在构建真核表达质粒 pcdna6 郾 0 鄄 TN 鄄 FR2 196Met 和 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg, 并将不同单倍型转染至细胞中, 观察不同单倍型与 TNFRSF1B 基因及炎症因子 mrna 和蛋白水平的变化, 分析 TNFRSF1B 基因多态性与巨噬细胞 TNF / TNFR2 信号通路介导炎症反应的相关性 1 摇材料和方法 1 郾 1 摇主要试剂摇摇定点突变试剂盒 PCR 突变引物 Trizol 逆转录试剂盒 荧光定量 PCR 试剂盒 ( 日本 TaKaRa 公司 ); 胶回收试剂盒 ( 台湾 Geneaid 公司 ); 限制性内切酶 Hind 芋和 EcoR 玉 T4 DNA Ligase( Fermentas 公司 ) TIANprep 质粒小提试剂盒 ( 北京天根生化科技有限公司 ); 胰蛋白胨 酵母菌提取物 琼脂 ( 美国 Sigma 公司 ), 氨苄青霉素钠 ( 上海吉凯基因技术有限公司 );Lipofectamine TM2000 杀稻瘟菌素( 美国 Invitrogen 公司 );DNA marker S plus PCR 引物 ( 上海生工生物工程有限公司 ); 蛋白提取试剂盒 ( 北京普利莱公司 );ciap 1 TNFR2 抗体 ( 北京博奥森公司 );NF 鄄资 B 磷酸化 JNK 和总 JNK 抗体 ( 美国 Cell Signaling Technology 公司 ); 羊抗兔二抗 ( Santa 公司 );Ecl 鄄 plus 发光试剂盒 ( 武汉博士德公司 );st 鄄 NFR2 IL 鄄 1 茁 IL 鄄 6 ELISA 试剂盒 ( 北京四正柏生物科技有限公司 ) 1 郾 2 摇菌株 质粒和细胞人工合成 pmd18 鄄 T simple 鄄 TNFR2 196Met 菌种购自日本 TaKaRa 公司 ; 真核表达质粒 pcdna6 郾 0 菌种由山西医科大学寄生虫教研室王海龙老师惠赠 ;E. co 鄄 li 感受态细胞 JM109 购自北京天根生化科技有限公司 ; 小鼠单核巨噬细胞 ( 细胞代号 RAW264 郾 7, ATCC,USA) 1 郾 3 摇仪器 CO 2 培养箱 (HERA cell 150) 倒置显微镜( Ni 鄄 kon TS100) 荧光倒置显微镜(Olympus IX50) 紫外可见光分光光度计 (CARY50) 水平电泳系列(Mini 鄄 Sub Cell GT,Bio 鄄 rad) 凝胶成像系统( GelDoc,Bio 鄄 rad) 激光共聚焦显微镜(Olympus FV300), 均由山西医科大学第二医院干细胞研究中心提供 1 郾 4 摇 pmd18 鄄 T simple 鄄 TNFR2 196Met 载体的构建根据 GenBank 人 TNFRSF1B mrna 序列 NM_ 人工合成 TNFRSF1B 全长, 在两端分别加入 Hind 芋 ( AAGCTT) 和 EcoR 玉 ( GAATTC) 序列, 共 1398 bp 与 pmd18 鄄 T simple 进行连接反应, 将连接液全量转化至 E 郾 coli Competent Cell JM109 对平板上的菌落用 M13 鄄 47 / RV 鄄 M 引物进行 PCR, 检测所含质粒中插入片段的长度大小 最后提取质粒 DNA 进行测序 其中 M13 鄄 47: 5 忆鄄 CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC 鄄 3 忆, RV 鄄 M: 5 忆鄄 GAG CGG ATA ACA ATT TCA CAC AGG 鄄 3 忆, 测序引物 pmd18 F:5 忆鄄 GCC TCT TCG CTA TTA CGC CA 鄄 3 忆,R:5 忆鄄 GAG CGG ATA ACA ATT TCA CAC AGG 鄄 3 忆 1 郾 5 摇重组体 pmd18 鄄 T simple 鄄 TNFR2 196Arg 的构建根据 TNFRSF1B 全长设计突变引物, 使得 TN 鄄 FR2 第 196 位甲硫氨酸转变为缬氨酸 定点突变引
3 966 ISSN 1007 鄄 3949 Chin J Arterioscler,Vol 21,No 11,2013 物上游 :5 忆鄄 GGG ATG CAG TCT GCA CGT CC 鄄 3 忆 ( 包 含突变位点 ), 下游 : 5 忆鄄 TGC TTG CAT TCC CAG GGA TGG 鄄 3 忆 突变 PCR 反应液 :Pyrobest DNA Poly 鄄 merase 0 郾 25 滋 L,10 伊 Pyrobest Buffer 域 5 滋 L,dNTP Mixture 4 滋 L,Primer1 1 滋 L,Primer2 1 滋 L,Template 3 郾 82 滋 L, 加灭菌蒸馏水至 50 滋 L 94 益 30 s,58 益 30 s,72 益 5 min,30 个循环 ; 取 5 滋 L PCR 反应液进 行 1% 琼脂糖凝胶电泳检测 ; 参照胶回收试剂盒说 明书回收得到线性 pmd18 鄄 T simple 鄄 TNFR2 196Arg DNA 行 Blunting Kination Ligation 连接反应 ( 按照 突变试剂盒说明书 ) 将反应液用热休克法全量转 化至 E 郾 coli 感受态细胞, 挑取单克隆菌落接种于 100 mg / L 氨苄青霉素钠的 LB 培养基中培养 用 TIANprep 质粒小提试剂盒小量提取质粒 DNA, 常规 1% 琼脂糖凝胶电泳检测 分别用 TNFR2 基因两端 的 Hind 芋和 EcoR 玉酶切位点进行酶切鉴定 反应 体系 : 提取的质粒 10 滋 L,Hind 芋 (10 MU / L) 1 滋 L, EcoR 玉 (10 MU / L) 1 滋 L,10 伊 Buffer R 4 滋 L, 灭菌蒸 馏水加至 20 滋 L, 反应物轻轻混匀,37 益水浴 4 h 酶切后常规电泳检测 TNFR2 片段和载体的大小 经酶切鉴定后的菌液送上海生工生物工程有限公 司测序鉴定 1 郾 6 摇 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 和 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 载 体的构建及鉴定 pmd18 鄄 T simple 鄄 TNFR2 196Met pmd18 鄄 T simple 鄄 TNFR2 196Arg 和 pcdna6 郾 0 质粒 DNA 各取 10 滋 L, 分 别进行 Hind 芋和 EcoR 玉双酶切反应, 反应体系同 前,37 益水浴 4 h, 常规电泳后切胶回收 TNFR2 196Met TNFR2 196Arg 与 pcdna6 郾 0 片段, 将 TNFR2 196Met TN 鄄 FR2 196Arg 分别与 pcdna6 郾 0 片段按体积比为 10 颐 1 的 比例混合,T4 DNA Ligase 16 益过夜 ; 连接反应结束 后, 将连接产物转化入 E 郾 coli 感受态细胞, 涂 LB 平 板后过夜培养 在每个平板上用接种针挑取约 20 个白色单菌落进行摇菌获得菌液 经引物设计, 上 游引物 5 忆鄄 CCC CCA GCT GAA GGG AGC ACT 鄄 3 忆, 下 游引物 5 忆鄄 TAC CCC GGG CCT TAT CGG CA 鄄 3 忆 PCR 反应体系 : 菌液 2 郾 0 滋 L, 上下游引物各 0 郾 5 滋 L, 2 伊 Mix 8 滋 L, 加 ddh 2 O 至 20 滋 L;PCR 扩增条件 : 95 益预变性 10 min,95 益变性 30 s,52 益退火 30 s, 72 益延伸 40 s, 共 30 个循环,72 益终末延伸 7 min, 16 益保存 PCR 产物 取 5 滋 L 进行 1% 琼脂糖凝胶 电泳分析 提取 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 真核表达质粒, 以 Hind 芋和 EcoR 玉双酶 切鉴定阳性克隆 双酶切反应体系和反应条件同 前 之后进行 1% 琼脂糖凝胶电泳分析鉴定 阳性 克隆送上海生工生物工程有限公司测序鉴定 保 存测序正确的菌株, 并大量制备和纯化 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 和 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 质粒 1 郾 7 摇细胞培养 质粒转染与筛选 小鼠巨噬细胞在高糖 1640 培养基, 含 10% FBS 青霉素 50 ku / L 和链霉素 50 ku / L,5% CO 2 37 益的条 件下培养 用 0 郾 25% 胰酶鄄 EDTA 消化, 按 2 伊 10 5 个 细胞 / 瓶接种至 25 cm 2 培养瓶中 通过比较不同浓 度 ( 及 10 mg / L) 杀稻瘟菌素对转染前巨噬 细胞的毒性作用, 绘制杀伤曲线后选择最适宜的药物 浓度 8 mg / L 转染前 1 天取对数生长期的巨噬细 胞, 以 2 伊 10 5 接种于 24 孔板, 加入不含抗生素的 DMEM 培养液, 次日观察细胞达 90% 聚合开始转染 取纯化的目的质粒 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 和 pcd 鄄 NA6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 4 滋 g 和 Lipofectamine TM 滋 L 分别稀释于 250 滋 L 不含抗生素的 DMEM 培养液, 5 min 内混匀, 室温孵育 20 min 后转染入巨噬细胞 6 h 后更换新鲜培养液 转染后 24 h 按 1 颐 10 的比例 传代至 6 孔板,48 h 后开始用含 8 mg / L 的杀稻瘟菌 素的选择性培养液进行筛选, 其后每 2 ~ 3 天换液 2 周后开始出现细胞集落, 约 4 周后挑取单克隆在选择 性培养液中继续传代, 扩大培养 同步转染阴性对照 质粒 pcdna6 郾 0 1 郾 8 摇实验分组 将巨噬细胞分为四组 : 空白对照组, 培养的小 鼠巨噬细胞不做任何处理 ;pcdna6 郾 0 空质粒组, 稳 定转染 pcdna6 郾 0 的巨噬细胞 ; pcdna6 郾 0 鄄 TN 鄄 FR2 196Met 组, 稳定转染 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 的巨噬 细胞 ; pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 组, 稳定转染 pcd 鄄 NA6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 的巨噬细胞 1 郾 9 摇巨噬细胞形态学观察 倒置相差显微镜观察各组巨噬细胞形态及细 胞生长状态 1 郾 10 摇 RT 鄄 PCR 检测细胞 TNFR2 ciap 1 和 ciap 2 mrna 的表达 用 Trizol 法提取细胞总 RNA, 运用分光光度计 检测 RNA 的浓度及 OD 260 / 280, 按 RNA 逆转录试剂盒 行逆转录合成 cdna, 反应体系 :5 伊 gdna Eraser Buffer 2 滋 L gdna Eraser 1 滋 L Total RNA 5 滋 L RNase Free H 2 O 2 滋 L 42 益 2 min;5 伊 PrimeScript Buffer 4 滋 L PrimeScript RT Enzyme Mix 1 滋 L RT Prime Mix 1 滋 L RNase Free H 2 O 4 滋 L 上述反应液 10 滋 L, 条件为 :37 益 15 min 85 益 5 s 4 益 forever RT 鄄 PCR 反应体系 :2 伊 Mix 8 滋 L Forward Primer 0 郾 5
4 CN 43鄄1262 / R摇 中国动脉硬化杂志 2013 年第 21 卷第 11 期 滋L Reverse Primer 0郾 5 滋L cdna 模 板 2郾 0 滋L 967 IL鄄1茁 和 IL鄄6 水平 ddh2 O 9郾 0 滋L,条件:92 益 预变性 2 min,92益 变形 1郾 13摇 统计学方法 72益 延伸 5 min 其中 TNFR2 引物同前;cIAP1 上游 方差分析,多重比较采用 LSD 法,P < 0郾 05 为差异有 30 s,55益 退火 30 s,72益 延伸 30 s,共 30 个循环, 引物 5忆鄄GCC TGA TGC TGG ATA ACT GG鄄3忆,下游 引物 5忆鄄GCT CTT GCC AAT TCT GAT GG鄄3忆;cIAP2 上游引物 5忆鄄GCC TGA TGC TGG ATA ACT GG鄄3忆, 下游引物 5忆鄄GGC GAC AGA AAA GTC AAT GG鄄3忆 扩增片段通过凝胶成像系统扫描,利用 Quantity one 4郾 6郾 2 分析系统测定灰度值,目的基因 PCR 产物的 相对表达含量 = 目标基因电泳条带灰度值 / GAPDH 电泳条带灰度值 1郾 11摇 Western blot 检测细胞 p鄄jnk ciap1 和 ciap2 TNFR2 及 NF鄄资B 的蛋白表达 弃去培养基,将各组细胞用 PBS 洗 2 遍,收集 细胞,然后按照蛋白抽提试剂盒说明书,分别制备 各组胞膜 核膜和胞质蛋白,用 Bradford 法测蛋白浓 度 取 100 滋g 样品蛋白,放沸水振荡水浴 1 min 变 性,10% SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,转 数据均为计量资料,以x 依 s 表示,采用单因素 统计学意义 2摇 结摇 果 2郾 1摇 pcdna6郾 0鄄TNFR2196Met 和 pcdna6郾 0鄄TNFR2196Arg 载体的鉴定 重组质粒切出了约 5100 bp 和 1398 bp 的两个 片段,分别与载体 pcdna6郾 0 和 TNFR2 片段大小吻 合,提示 TNFR2 基因片段己经插入到 pcdna6郾 0 中 ( 图 1) 取 PCR 初筛的和双酶切鉴定的阳性重组 子的菌液进行测序, 结果示插 入 片 段 的 rs 位点的碱基排列顺序与目的片段一致( 图 2),说明 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Met pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Arg 重 组 质粒构建成功,可用于下一步实验 移至硝酸纤维膜,将硝酸纤维膜从半干转膜仪中取 出,漂洗后置于封闭液 ( 含 5% 小牛血清白蛋白的 PBST 缓冲液) 封闭后,依次加入兔抗鼠 p鄄jnk 抗体 (1颐 2000) ciap1 (1颐 100) 和 ciap2 (1颐 100) 抗体 TN鄄 FR2 抗体(1 颐 100) 兔抗鼠 NF鄄资B(1 颐 1000) 浸泡滤 膜,4益 过夜,洗涤后加入碱磷酶标记的羊抗兔 IgG (1颐 3000),洗膜后 ECL 化学发光试剂检测 定量分 析采用分子生物学图像分析系统测定各目的条带 积分灰度值,所测结果为扣除背景的积分光密度 1郾 12摇 ELISA 测定巨噬细胞上清液中 stnfr2 IL鄄 1茁 和 IL鄄6 水平 收集各组巨噬细胞培养液,按照 ELISA 试剂盒 的操作说明测定各组巨噬细胞上清液中 stnfr2 图 1. 经双酶切鉴定 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Met 和 pcdna6郾 0鄄 TNFR2 196Arg 重组质粒阳性克隆摇 摇 M 为 DM5000 DNA Marker, 1 2 为 pmd18鄄t simple鄄tnfr2 196Arg 阳性克隆,3 为 pmd18鄄t simple鄄 TNFR2 196Met 阳性克隆,4 为 pcdna6郾 0 Figure 1郾 Identification of recombinant plasmid pcdna6郾 0鄄 TNFR2196Met, pcdna6郾 0鄄TNFR2196Arg positive clones by doub鄄 le enzyme digestion 图 2. pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Met 和 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Arg 表达基因测序图 Figure 2. The sequencing results of gene TNFR2 in pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Met and pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Arg
5 ISSN 1007鄄3949 Chin J Arterioscler,Vol 21,No 11, 郾 2摇 巨噬细胞形态变化 2郾 3摇 细胞 TNFR2 ciap1 ciap2 mrna 的表达 良好,传代后 2 h 贴壁,形态以类圆形和不规则多边 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Met 组 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Arg 组 细胞生长快,5 ~ 6 天可汇合,采用脂质体转染法分 NA6郾 0鄄TNFR2 196Met 组相比,pcDNA6郾 0鄄TNFR2 196Arg 组 巨噬细胞在含 10% 高糖 DMEM 培养基中生长 形为主,一般含 1 ~ 2 个核,有伪足,细胞体积较小, 别转染至巨噬细胞中,转染 48 h 后荧光显微镜观察 可以看到转染组有绿色荧光的表达( 图 3) 与空 白 对 照 组 和 pcdna6郾 0 空 质 粒 组 相 比, TNFR2 ciap1 ciap2 mrna 的 表 达 上 调; 与 pcd鄄 各项指标下调( P < 0郾 05;图 4) 图 3. 巨噬细胞形态学变化摇 摇 A 为倒置显微镜下观察正常培养的巨噬细胞( 伊 100),B 为倒置显微镜下观察正常培养的巨噬细胞( 伊 200),C 为倒置荧光显微镜下观察转染后的巨噬细胞 Figure 3. The morphological changes of macrophages 图 4. 巨噬细胞中 TNFR2 ciap1 和 ciap2 mrna 的表达摇 摇 M 为 DM600 DNA Marker,1 为 pcdna6郾 0 空质粒组,2 为 pcdna6郾 0鄄TN鄄 FR2 196Met 组,3 为 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Arg 组,4 为空白对照组 a 为 P < 0郾 05,与空白对照组或 pcdna6郾 0 空质粒组比较;b 为 P < 0郾 05,与 pcd鄄 NA6郾 0鄄TNFR2 196Met 组比较 Figure 4. The expression of TNFR2, ciap1 and ciap2 mrna of macrophages 2郾 4摇 细胞 p鄄jnk ciap1 ciap2 TNFR2 及 NF鄄资B 蛋 TNFR2 ciap1 ciap2 p鄄jnk NF鄄资B 蛋 白 的 表 达 明 与空 白 对 照 组 和 pcdna6郾 0 空 质 粒 组 相 比, 比, pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Arg 组 各 项 指 标 下 调 ( P < 白的表达 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Met 组 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Arg 组 显上调( P < 0郾 05 ) 与 pcdna6郾 0鄄TNFR2 196Met 组相 0郾 05;图 5)
6 CN 43 鄄 1262 / R 摇 中国动脉硬化杂志 2013 年第 21 卷第 11 期 969 图 5. 巨噬细胞中 p 鄄 JNK ciap 1 TNFR2 及 NF 鄄资 B 蛋白的表达摇摇 1 为 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 组,2 为 pcdna6 郾 0 鄄 TN 鄄 FR2 196Met 组,3 为 pcdna6 郾 0 空质粒组,4 为空白对照组 a 为 P < 0 郾 05, 与空白对照组或 pcdna6 郾 0 空质粒组比较 ;b 为 P < 0 郾 05, 与 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 组比较 Figure 5. The expression of p 鄄 JNK, ciap 1, TNFR2 and NF 鄄资 B protein of macrophages 2 郾 5 摇细胞上清液中 stnfr2 IL 鄄 1 茁和 IL 鄄 6 的水平与空白对照组和 pcdna6 郾 0 空质粒组相比,pcD 鄄 NA6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 组 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 组 stn 鄄 FR2 IL 鄄 1 茁 IL 鄄 6 水平明显升高 ( P < 0 郾 05), 与 pcd 鄄 NA6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 组相比, pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 组 stnfr2 IL 鄄 1 茁 IL 鄄 6 水平明显降低 (P < 0 郾 05; 表 1) 表 1. 各组细胞上清液中 stnfr2 IL 鄄 1 茁和 IL 鄄 6 水平 Table 1. The levels of stnfr2, IL 鄄 1 茁 and IL 鄄 6 in each group 分摇组 stnfr2(ng / L) IL - 1 茁 (ng / L) IL - 6(ng / L) 空白对照组 8 郾 57 依 0 郾 13 5 郾 01 依 2 郾 58 6 郾 51 依 0 郾 22 pcdna6 郾 0 空质粒组 10 郾 64 依 0 郾 10 8 郾 51 依 1 郾 郾 22 依 0 郾 58 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 组 120 郾 89 依 20 郾 78 a 68 郾 05 依 6 郾 56 a 38 郾 09 依 4 郾 28 a pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 组 60 郾 66 依 9 郾 54 ab 28 郾 50 依 3 郾 58 ab 17 郾 21 依 6 郾 58 ab a 为 P < 0 郾 05, 与空白对照组或 pcdna6 郾 0 空质粒组比较 ;b 为 P < 0 郾 05, 与 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Met 组比较 3 摇讨摇论近年来, 炎症学说逐渐引起了重视, 越来越多的证据表明炎症在冠心病的发生 发展和预后过程中起重要作用 [4] 炎症因子与冠心病的关系已经成为冠心病研究领域新的热点 [5,6] TNF 鄄琢的生物学功能主要是通过与细胞表面相应的受体特异性的结合来实现的 因此, 对 TNFR 的研究有助于更好的认识 TNF 的分子机制 国外学者研究发现 TN 鄄 FRSF1B 基因的单核苷酸多态性是导致冠心病及其相关危险因素如糖尿病 高血脂等的遗传易患因素 [7] 有研究证实 TNFR2 蛋白产物是由携带 TN 鄄 FRSF1A 产物的杂合子基因组构成, 导致抗凋亡蛋白 ciap 1 和 ciap 2 的活化, 两者具有 E3 泛素连接酶活性 ciap 1 可能通过泛素化使 TNFR2 退化产生抗凋亡信号增强 TNF 鄄琢诱导的细胞凋亡 因此,TN 鄄 FRSF1B 基因的遗传变异和冠心病炎症反应发生发展的相关性值得研究, 目前国内尚未见相关报道, 本课题以此为切入点, 进行相关的研究 TNF 的生物学效应是通过细胞表面的 TNFR 引发,TNFR 有两种 :TNFR1 和 TNFR2, 均为玉型跨膜蛋白 TNFR1 在体内大多数细胞表面广泛分布, TNFR2 的表达主要局限在免疫细胞 TNFR1 和 TNFR2 的胞外区都含有 4 个富含半胱氨酸的结构域 (cysteine 鄄 rich 鄄 domain,crd), 每个 CRD 包含 6 个半胱氨酸的高保守氨基酸序列 CRD 独特的折叠方式决定了 TNF 与受体之间的特异性结合, 与 TNF 结合部位是 CRD2 和 CRD3 虽然 CRD1 和 CRD4 不直接参与对 TNF 的识别与结合, 而它们的缺失导致与 TNF 的结合能力显著下降 TNFR2 的 676 位 T 突变为 G, 使得 CRD4 的 196 位氨基酸改变, 由 Met 替换为 Arg, 可能会影响 TNF 与 TNFR 相结合的能力 定点突变是研究基因功能的重要技术之一 它可以有目的的改变 DNA 序列中的碱基, 不仅可以阐明基因表达的调控机制, 还可研究蛋白质结构与
7 970 ISSN 1007 鄄 3949 Chin J Arterioscler,Vol 21,No 11,2013 功能的关系, 也可以改变目的蛋白的氨基酸, 使之 符合研究者的要求 最常用的是用 PCR 技术进行 定点突变, 其原理是利用导入变异点的引物进行 PCR 反应, 对 PCR 产物进行末端平滑化及 5 忆磷酸化 处理, 再用高效连接试剂 Ligation Solution 玉进行自 身连接 ( 环化反应 ), 然后转化 提取突变体 DNA 这种方法成功率高, 操作简单, 经济, 是一种进行定 点突变的有效的方法 大量的研究和综述资料总结出 TNFR 信号传导 通路主要包括 Caspase 家族介导的细胞凋亡 衔接 蛋白 TRAF 介导的转录因子 NF 鄄资 B 和 JNK 蛋白激 酶的活化 信号传导通路之间及各通路内部含有 各种调节机制, 使 TNF 的各种生物学功能协调发挥 出来 TNF 由保守胞内结合域如 DD 死亡结构域, 通过同型 / 异型受体相互作用蛋白调节胞内信号转 导 [8] TNFR2 虽不具有 DD 结构域, 不能通过 DD 直接激活细胞凋亡的机制, 但有结合 TRAF 的基序, TNFR2 与 TRAF 结合形成复合体激活 NF 鄄资 B 和 JNK 激酶, 诱导基因转录, 促进细胞存活 增殖和分 [8] 化 Till 等将 TNFR2 的 Met 替换为 Arg, 突变体 TNFR2 招募 TRAF2 的能力以及诱导依赖 NF 鄄资 B 的 基因如 ciap 表达大幅减少, 引起不同程度的慢性炎 症机能紊乱 为进一步研究不同单倍型对 TNFR2 基因表达 及功能的影响, 我们通过定点突变的方法扩增了 TNFR2 基因 + 90 至 基因全长, 并对 676 位 点进行了定点突变, 构建了含有两种不同单倍型的 pcdna6 郾 0 重组质粒 这两种单倍型重组质粒除了 突变的位点外, 其余序列完全一致, 因此, 实验结果 能够反映这个单核苷酸多态性位点对基因功能的 影响 我们利用 pcdna6 郾 0 质粒上的多克隆位点, 将扩增的 TNFR2 基因片段插入 pcdna6 郾 0 线性质 粒中, 构建出 pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 真核细胞表达质粒 通过酶切及测序证实重组 pcdna6 郾 0 鄄 TN 鄄 FR2 196Met pcdna6 郾 0 鄄 TNFR2 196Arg 构建成功, 利用其所携带的菌素抗性基因构建过表达的稳定细胞株, 为进一步研究 TNFR2 在心血管疾病治疗中的作用提供了良好的实验基础 本研究显示 RT 鄄 PCR West 鄄 ern blot 检测 ciap 1 p 鄄 JNK NF 鄄资 B 指标在突变体组中表达下调, 再次证实了 TNFR2 突变体使抗凋亡和炎性因子减少, 导致慢性炎症发展过程 [ 参考文献 ] [1] Hijdra D, Vorselaars AD, Grutters JC, et al. Differential expression of TNFR1 (CD120a) and TNFR2 ( CD120b) on subpopulations of human monocytes[j]. J Inflamm (Lond), 2012, 9 (1): 38. [2] Bialas M, Fiszer D, Rozwadowska N, et al. The role of IL 鄄 6, IL 鄄 10, TNF 鄄 alpha and its receptors TNFR1 and TNFR2 in the local regulatory system of normal and impaired human spermatogenesis [J]. Am J Reprod Immunol, 2009, 62 (1): 51 鄄 59. [3] 任俊峰, 李俊男, 苏锐, 等. TNFRSF1B 基因 6 号外显子 rs 多态性与冠心病的相关性 [ J]. 中国动脉硬化杂志, 2010, 18 (9): 718 鄄 721. [4] 阳巍, 廖端芳, 庹勤慧. 姜黄素抗动脉粥样硬化研究进展 [ J]. 国际病理科学与临床杂志, 2012, 32 (1): 55 鄄 58. [5] 鲍溪荷, 叶山东. 炎症与糖尿病肾病 [J]. 国际病理科学与临床杂志, 2012, 04: 325 鄄 329. [6] 李锐, 邱健, 赵树进, 等. 细胞色素氧化酶 P450 2C9 基因多态性与冠心病及血脂水平的关系 [J]. 中国动脉硬化杂志, 2009, 17 (5): 395 鄄 398. [7] 丘创华, 侯敢, 黄迪南. TNF 鄄琢信号传导通路的分子机理 [J ]. 中国生物化学与分子生物学报, 2007, 23 (6): 430 鄄 435. [8] Till A, Rosenstiel P, Krippner 鄄 Heidenreich A, et al. The Met 鄄 196 寅 Arg variation of human tumor necrosis factor receptor 2 (TNFR2) affects TNF 鄄 alpha 鄄 induced apoptosisby impairednf 鄄 kappab sig 鄄 nalingand target gene expression [ J]. J Biol Chem, 2005, 280 (7): 鄄 ( 此文编辑摇文玉珊 )
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
分子生物学实验专题手册.ai
>> 2002 Piscataway CRO OptimumGene TM CloneEZ ONE-HOUR Western TM THE TM Epitope Tag 36 36 39 40 41 41 41 45........................ 47 47 47 47 48............... 19 19 20 21 22............... 23 23 24
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白
< F63756D656E D2D796E2DB9A4D7F72D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA34C6DAB8BDBCD32D30302DB7E2C3E6CDC6BDE941A3A D34A3A92E6D6469>
2013 绎 Vol.15 No.4 阴 元元 450002 Ki-6772 Wistar 6 5 mg kg -1 30 0.8 mg kg -1 7.5 15.0 22.5 g kg -1 1 30 Ki-67 TUNEL Ki-67 P
600 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 were significantly decreased, but the levels of IL-12 in two groups were significantly increa
现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 599 喘 可 治 注 射 液 联 合 细 辛 脑 注 射 液 治 疗 小 儿 毛 细 支 气 管 炎 的 临 床 研 究 唐 辉 英, 佘 定 平, 马 颐 娇 深 圳 市 儿 童 医 院 呼 吸 科, 广 东 深 圳 518026 摘 要 : 目 的 探 讨 喘 可 治 注 射 液 联 合
..I II GST GST
10384 9826012 UDC 2001 6 2001 7 2001 7 ..I II..... 1 1.1...1 1.2 3 1.3. 11 1.4...12 13 2.1.13 2.2 17.23 3.1 23 3.2 23 3.3 24 3.4...27 30 3.6..31 3.7..32.34 4.1 GST-..34 4.2 GST-..35 4.3 36.. 39 5.1.. 39
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
o -8 1 4 A 1A = 10 cm 1 44 A o o G1 S G2 M 68 31 72 15 89 22 88 22 99.6 28 27 4 95 87 80 13 32 3 77 19 84 37 89 7 1 1450O l 1700 8.5 35 1 23000 l 2200 10.5 40 l 40000
2
问 题 1 A 部 分 你 正 在 研 究 单 倍 体 真 核 细 胞 中 一 种 称 为 大 小 因 子 受 体 ( 或 SF-R) 的 受 体 蛋 白 下 图 是 SF-R 蛋 白 的 示 意 图 信 号 肽 配 体 结 合 结 构 域 穿 膜 结 构 域 激 酶 结 构 域 为 了 定 位 于 质 膜 上,SF-R 必 须 首 先 在 细 胞 内 经 历 几 步 变 化 a) 请 画 出 当
标题
环 球 中 医 药 2016 年 5 月 第 9 卷 第 5 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两 种 电 针 对 脊 髓 损 伤 14 天 后 大 鼠 运 动 功 能 神 经 元 及 MEK2 p 鄄 ERK1 表 达 的 影 响 论 著 宋 良 玉 摇 吕 威 摇 景 泉 凯 摇 莫 雨
绎 阴 元元 510515 Caco-2 Caco-2 P < F63756D656E D2D796E2D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA31C6DA2D30312DB7E2C3E6CDC6BDE9A3A D31A3A92E6D6469>
2014 Vol.16 No.1 茁 琢 1. 550002 2. 550003 LPS IL-1 茁 IL-6 TNF- 琢 50 SD 5 20 滋 g kg -1 LPS 30 min Ti 240 min 驻 T 驻 T=T i -T 0 1 ELISA IL-1 茁 IL-6 TNF- 琢 3h 3.5 h 4 h 3 P
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
864 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 6 期 2016 年 6 月 of apoptosis related factors, decrease the incidence of adverse reactions, which is of great
现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 6 期 2016 年 6 月 863 曲 妥 珠 单 抗 联 合 多 西 紫 杉 醇 治 疗 Her-2 阳 性 乳 腺 癌 的 临 床 研 究 * 周 永 安, 刘 训 碧 黄 石 市 中 心 医 院 ( 普 爱 院 区 ) 乳 腺 肿 瘤 外 科, 湖 北 黄 石 435000 摘 要 : 目 的 探 析 注 射 用 曲
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
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( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 9 期 2015 年 5 月 1339 非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是 一 种 与 胰 岛 素 抵 抗 遗
1338 中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 9 期 2015 年 5 月 九 味 肝 泰 胶 囊 对 高 脂 饮 食 诱 导 大 鼠 非 酒 精 性 脂 肪 肝 的 治 疗 作 用 陈 菲 1 2,, 艾 国 3, 盛 柳 青 1, 麻 佳 蕾 1, 黄 正 明 1. 金 华 职 业 技 术 学 院 医 学 院, 浙 江 金 华
20 2 CJITWN November. 2 No. 959 not markedly changed in two treatment groups in this experiment. 3. It is possible that addition an subtraction of Fan
958 20 2 CJITWN November 20 Vol. 2 No. * MCP - - MCP - AIN SD 4 + A - + B ADR 6. 5 mg /kg 2 24 h > 00 mg A B + - + 2 8 24 h 4 8 MCP - 2 24 h P < 0. 05 6. 5 mg /kg MCNS 2 RT - PCR MCP - MCP - MCP - A B
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C
2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~
Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr
PCR 龙平, 崔占虎, 李虔全, 徐建平, 张春红, 周立社 * *, 李旻辉 ( 包头医学院, 内蒙古包头 014060) DNA 30 28 DNA trnl-trnf PCR PCR 136 bp 323 bp 10% PCR PCR Astragalus membranaceus Fisch. Bge. var. mongho- licus Bge. Hsiao A. membranaceus
第 卷 -.+$$$-+($-.(+"$(+$%"(+$#'$+(.$+*(.$+(%$%+.$$$+$$+-$( 7-($++$"$($(+'$+'$%*$$&$.$+$%+ $$".(+$+.$+'$+'( ".($#-$4$+" +'$".(+%+$$$++(* %$+$+$"(+'$%+$"
第 卷第 期 年 月 "## $%# - 基础医学 含 '- 野生及突变结合位点的胰岛素受体 '6,78&' 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 王 璇 蓝 茜 李 癑 刘 莉 伊 静 李 靖 宋刘梅 马莎蕊 宁启兰 李冬民 西安交通大学医学部 遗传学与分子生物学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 级临床医学七年制 级临床医学五年制 陕西西安 ( 摘要 目的 利用 6< *%&$%', :%''"D$"
中 草 药
中 草 药 致 谢 李 沛 赵 继 敏 郑 智 敏 江 亚 楠 等 病 理 生 理 学 教 研 室 老 师 在 实 验 中 给 予 的 指 导 和 帮 助 狄 建 彬 顾 振 纶 赵 笑 东 钱 培 刚 蒋 小 岗 郭 次 仪 中 草 药 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
g kg - 1 decoction respectively 10 ml kg - 1 once a day for 10 weeks during making model. After 10 weeks according to the method of
19 7 LDL-C LDL-R 谢慧臣 1, 刘芬 1*, 田春漫 1, 向靖 2 2, 杨强 ( 1. 湖北民族学院医学院中西医结合教研室, 湖北恩施 445000; 2. 湖北民族学院医学院附属医院中西医结合科, 湖北恩施 445000) LDL LDL-R Wistar 60 7. 2 10-4 g kg - 1 0. 25 0. 5 1. 0 g kg - 1 10 1 10 10 LDL
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06 年 月第 3 卷第 期 中国中医药信息杂志 47 实验研究 香砂六君子汤对脾胃虚弱型萎缩性胃炎大鼠胃排空功能 及胃蛋白酶活性和缺氧诱导因子-α表达的影响 段云燕 成映霞 3 王强 李兰珍 王庆胜 郑世铎 鲁鹏程 雷作汉 刘雪松 刘臻华.甘肃中医药大学 甘肃 兰州 73000.甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室 甘肃 兰州 73000 3.甘肃省中医院 甘肃 兰州 73000 摘要 目的 观察香砂六君子汤对脾胃虚弱型萎缩性胃炎
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pegfp-n/tnfr 载体的构建及鉴定 叶顺传, 曾秋棠, 吴辉文, 吕云波华中科技大学同济医学院协和医院心研所, 湖北武汉 (430022) E-mail:yeshunchuan@gmail.com 摘要 : 目的 : 本研究旨在构建人肿瘤坏死因子受体 (TNFR ) 绿色荧光蛋白表达载体 pegfp-n/tnfr, 为研究 TNFR 细胞内转位奠定实验基础 方法 : 培养 U937 细胞,
instillation therapy combined with Western medicine can reduce the levels of ALT, TBA, ALP, TBIL, DBIL and GGT, and improve the anti-cmv-igm negative
在 线 投 稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮 助 平 台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i28.4568 世 界 华 人 消 化 杂 志 2015 年 10 月 8 日 ; 23(28): 4568-4573 ISSN 1009-3079
标题
583 [ 文 章 编 号 ] 摇 1007 鄄 3949(2012)20 鄄 07 鄄 0583 鄄 05 实 验 研 究 甘 氨 酸 对 高 果 糖 饮 食 诱 发 高 血 压 大 鼠 血 管 内 皮 功 能 的 影 响 吴 惠 文 1,2, 韩 德 五 1, 许 瑞 龄 1, 周 鑫 1 1, 赵 元 昌 (1. 山 西 医 科 大 学 肝 病 研 究 所 山 西 医 科 大 学 病 理 生
附件2：
中国实验动物学会团体标准 实验动物肿瘤坏死因子 α 转基因关节炎小鼠模型饲养繁育规范 编制说明 联系人 : 李舸 联系电话 :15011983691 编制单位 : 广东省实验动物监测所 时 间 : 2016 年 10 月 25 日 中国实验动物学会团体标准 人肿瘤坏死因子 α 转基因关节 炎小鼠模型饲养繁育规范 编制说明 GB/T1.1 2009 1 2011A081401005 2013B040400007
討論
MTT cell viability assay 1 [45] succinate dehydrogenase MTT Kreb s cycle 2 MTT 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide DMSO 570 nm 15 3 MTT solution MTT Sigma Cat. M-2128 ( PBS ) 5
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
<46495420446F63756D656E7428452D2D796E2D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D32303134C4EA2DB5DA34C6DA2DC4BFC2BC2D34C6DA2E6D6469>
绎 1 援 401331 2. 400030 3. 400020 4. 400080 5. 400012 88 44 44 猿 孕 约 0.05 ESR 悦 CRP RF 孕 约 0.05 doi: 10.11842/wst.2014.04.018 R593.22 A Rheumatoid Arthritis RA 44 19 25 32 耀 75 47.71 依 8.53 5 耀 28 4.39
211 better than those in the control group, with significant difference between two groups (P < 0.05). The ocular hypertension of patients in the cont
210 毛 果 芸 香 碱 联 合 拉 坦 前 列 素 治 疗 原 发 性 急 性 闭 角 型 青 光 眼 的 疗 效 观 察 符 元 党 1, 郑 振 优 2, 林 再 雄 2, 周 吉 良 1. 昌 江 黎 族 自 治 县 中 西 医 结 合 医 院, 海 南 昌 江 572700 2. 海 南 医 学 院 附 属 医 院 眼 科, 海 南 海 口 570100 1 摘 要 : 目 的 探 讨
臧晓南 张学成 王高歌 刘金姐 张晓辉 刘 滨 对两种丝状蓝藻 钝顶节旋藻和盐泽螺旋藻 在基因工程中常用作选择试剂的 种抗生素 氯霉素 氨苄青霉素 红霉素 链霉素 卡那霉素 庆大霉素和新霉素 的敏感性作比较实验 结果表明 两种蓝藻对抗生素的敏感性既有共同的特点 也有 明显的差异 它们对红霉素 氯霉素和链霉素最敏感 致死浓度分别为 和 两种蓝藻对氨苄青霉素比较敏感 的氨苄青霉素即可抑制 和 的生长 但
生 物 进 化 指 生 物 与 其 生 存 环 境 之 间 相 互 作 用 并 导 致 遗 传 系 统 和 表 型 发 生 一 系 列 不 可 逆 转 的 改 变 的 过 程, 这 种 改 变 一 般 导 致 对 其 生 存 环 境 的 相 对 适 应 生 物 进 化 表 现 在 生 物 多 样 性
第 五 章 植 物 的 遗 传 变 异 与 进 化 什 么 是 生 物 的 遗 传 和 变 异? 你 是 怎 样 理 解 生 物 进 化 的? 生 物 进 化 指 生 物 与 其 生 存 环 境 之 间 相 互 作 用 并 导 致 遗 传 系 统 和 表 型 发 生 一 系 列 不 可 逆 转 的 改 变 的 过 程, 这 种 改 变 一 般 导 致 对 其 生 存 环 境 的 相 对 适 应 生
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
< F63756D656E D2D796E2DB9A4D7F72D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA35C6DA2D30352D30322DBAFEC4CFBBF9B5D82DB8CEB2A12E6D6469>
/ 410007 HBV DCs DCs HBV PBMCs DCs DCs HLA-DR CD80 CD86 CD83 CD1 琢 DCs IFN- 琢 IL-4 HBV HBV DCs HLA-DR CD1 琢 CD83 CD80 CD86 P
< F63756D656E D2D796E2D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA36C6DA2DB7E2C3E6CDC6BDE9A3A D36A3A92E6D6469>
1. 530023 2. 530001 3. 530001 DCP 100 DCP 47 53 3 HOMA -IR HOMA - IR P
< F63756D656E D2D796E2DB9A4D7F72D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA31C6DA2D30302DB7E2C3E6CDC6BDE9A3A D31A3A92E6D6469>
绎 阴 元元 / 100102 MCAT MCAO 84~333 mg kg -1 167 333 mg kg -1 MCAT 84 167 mg kg -1 MCAT 27% 37% 84~333 mg kg -1 MCAT 21%~ 32% MCAO LDH 10%~ 12% MDA 28%~38% SOD 15%~36% GSH 14%~36% doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2013.01.016
4 : pcdna3.1(+) ;PLV-EF1A-EGFP(2A) 30s,41 30s,72 2min,35 ; Puro ; TG1; (Hu min 1% manembryonickidney293cels); (Ma- din-darbycaninekidneyce
33 4 2017 6 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.33 No.4 June 2017 1# 2#,, 2, 2, 1 3* 1*,, (1., 511436; 2., 510230; 3., 510663) : HEK-293-HA RT-PCR HA, pcdna3.1(+ ), pcdna3.1(+ )-HA pcdna3.1(+)-ha PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro
File
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1 a a b a (9+2 b - ) a c - 9 2 ( ( ) a 90 ) ( ( ) b - ) 10 (9+2 ) a b - ( ) a c - 2 ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) () ( ) ( ) ( ) ( 1 2 ) ( ) ( 3 () 0.3mm 2 ( ) 2 10 ( ) ( ) ( ) 2 10 ( )
405 急 性 心 肌 梗 死 是 临 床 较 为 常 见 的 心 血 管 疾 病, 病 情 危 急, 病 死 率 高 [1] 随 着 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技 术 在 急 性 心 肌 梗 死 急 诊
![405 急 性 心 肌 梗 死 是 临 床 较 为 常 见 的 心 血 管 疾 病, 病 情 危 急, 病 死 率 高 [1] 随 着 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技 术 在 急 性 心 肌 梗 死 急 诊](/thumbs/42/23094402.jpg "405 急 性 心 肌 梗 死 是 临 床 较 为 常 见 的 心 血 管 疾 病, 病 情 危 急, 病 死 率 高 [1] 随 着 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技 术 在 急 性 心 肌 梗 死 急 诊")
404 冠 心 舒 通 胶 囊 预 防 急 性 心 肌 梗 死 PCI 术 后 再 狭 窄 的 临 床 研 究 李 静, 王 建 榜, 王 西 辉 西 安 医 学 院 第 二 附 属 医 院 心 内 科, 陕 西 西 安 710038 摘 要 : 目 的 研 究 冠 心 舒 通 胶 囊 预 防 急 性 心 肌 梗 死 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (PCI) 术 后 再 狭 窄 的 临 床
标题
摇 878 环 球 中 医 药 2015 年 7 月 第 8 卷 第 7 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, July 2015,Vol 郾 8, No 郾 7 慢 性 前 列 腺 炎 外 治 法 治 疗 进 展 综 述 莫 旭 威 摇 王 彬 摇 李 海 松 摇 赵 冰 摇 刘 洋 揖 摘 要 铱 摇 目 前 慢 性 前 列 腺 炎 的 治 疗 已 经
Invitrogen 1.4 pet-gr, ICE-LGR, PCR TA, pmd18-t/gr pet-21a(+) (Nde I Xho I), E. coli DH-5,,,, pet-gr GR ORF cdna, GR, : PU: 5 -GGAATTCCAT
42 6 Vol.42, No.6 2011 11 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Nov., 2011 南极衣藻 (Chlamydomonas sp. ICE-L) 谷胱 * 甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化 1 1 燏 1 1 2 (1. 524025; 2. 266061) RT-PCR GR ORF cdna, ; IPTG,, pet-gr BL21,
% 8. 48% 3 80 Alcalase Novozymes Alcalase 2. 4 L Bacillus licheniformis 2. 4 AU /g 1. 2 Hitachi S-4700 JEOL JEM-1200EX Olympus Bu
2011 33 6 1117-1121 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com * 311400 Alcalase 2. 4 L TS225. 1 + 6 A 1000-2286 2011 06-1117 - 05 A Study on
经 无 数 次 的 提 取 和 提 纯, 最 终 得 到 一 小 匙 东 西 这 种 东 西 在 显 微 镜 下 呈 现 出 针 状 晶 体 的 形 状, 在 水 中 溶 解 后 得 到 一 种 带 乳 光 的 汁 液 当 他 将 少 许 溶 液 涂 抹 健 康 烟 叶 上 几 天 后, 这 烟 叶
生 命 的 历 程 什 么 是 生 命 生 命 是 什 么? 人 类 是 生 命 体 的 一 类, 他 们 有 组 织 器 官 等 形 体 上 的 相 同 之 处, 但 也 有 性 别 年 龄 肤 色 等 巨 大 的 差 别 ; 我 们 知 道 成 千 上 万 种 动 物 植 物 直 至 微 生 物 都 是 生 命 体, 因 为 它 们 同 人 类 一 样 都 有 产 生 生 长 衰 老 及 消 亡
22 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2011 Vol. 43 No % 3% 3% /% % 6. 67% 1. 71% 1. 11% 0. 14% 0.
2011 43 5 21 3 1 1* 1 2 3 1 1. 2. 3. 78. 68±2. 95 g 28 300 3 5 3% 3 1 ALT TP ALB AST 0. 05 P>0. 05 ALT TP ALB P>0. 05 AST 0. 05 GLOB P>0. 05 2 INS 0. 05 TSH T 3 0. 05 P>0. 05 GLU GH T4 IGF-I P>0. 05 S816.
绪论 疾病概论
新 疆 医 科 大 学 教 案 首 页 编 号 :02 课 程 名 称 病 理 生 理 学 专 业 临 床 医 学 口 腔 医 学 基 础 医 学 医 学 影 像 麻 醉 医 学 医 学 检 验 临 床 药 学 专 业 层 次 本 硕 和 本 科 主 讲 老 师 克 拉 拉 阿 巴 斯 计 划 时 数 3 班 级 2010 级 各 班 专 业 技 术 职 称 病 理 生 理 学 教 授 编 写 时
Re NaSH VSMCs VSMCs 60 Co NO 2 NO inos 16 L Arg.17 H 2 S...18
B00017160 RS ..1..2..4.. 7 7 7 8 8 8 188 Re..9...10 NaSH...10 11 VSMCs.11..12..13..14..14 VSMCs 60 Co...14 - - NO 2 NO3.....15 inos 16 L Arg.17 H 2 S...18 CSE.18 Adm ET cgmp..19..20 Masson.21 inos 21 VSMCs
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213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as
![150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as](/thumbs/88/114888322.jpg "150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as")
微生物学通报 JAN 20, 2009, 36(1): 149~153 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2009 by Institute of Microbiology, CAS 生物实验室 人 SmD1 抗原的酵母真核表达及其初步应用 * 杨湘越吴文冰兰小鹏 ( 350025) 摘要 : 通过 PCR 扩增 Sm D1 基因, 与酵母表达载体 ppic9k 重组, 构建表达质粒
2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来
![2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来](/thumbs/42/22962570.jpg "2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来")
针 灸 临 床 杂 志 2012 年 第 28 卷 第 6 期 1 临 床 研 究 针 刀 治 疗 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 的 临 床 研 究 向 伟 明 1, 丁 思 明 1, 张 秀 芬 2, 权 五 成 2, 唐 吉 莲 1, 杨 友 金 1, 黄 涣 强 1, 颜 勋 1, 曾 晓 宇 1, 朱 传 芳 1 1, 张 雄 ( 1. 重 庆 市 梁 平 县 第 二 人 民 医 院,
932 SUZHOU UVIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE E1A inhibite H22 ascitic hepatoma obviously and almost has no side effect on immune functio
2010 30 5 931 Ad-E1A 215123 Ad-E1A BALB /c Ad-E1A RT-PCR E1A H22 BALB /c H22 PBS Ad-E1A 5-Fu 7 10 9 pfu /ml Ad-E1A Ad-E1A 5-Fu 66. 7% 68. 8% P > 0. 05 Ad-E1A PBS 5-Fu P < 0. 01 P < 0. 05 Ad-E1A PBS 5-Fu
- 14 - Drug Evaluation Research 第 36 卷 第 1 期 2013 年 2 月 料 ), 山 西 皇 城 相 府 药 业 有 限 公 司, 批 号 20111003 ( 人 口 服 推 荐 剂 量 为 每 日 3 次, 每 次 4 粒, 成 人 体 质 量 按 60
Drug Evaluation Research 第 36 卷 第 1 期 2013 年 2 月 - 13 - 柴 青 消 癖 胶 囊 对 乳 腺 增 生 模 型 大 鼠 的 治 疗 作 用 研 究 * 刘 聪, 岳 永 花, 郝 旭 亮 山 西 省 中 医 药 研 究 院, 山 西 太 原 030012 摘 要 : 目 的 探 讨 柴 青 消 癖 胶 囊 对 乳 腺 增 生 模 型 大 鼠 的 治
g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min
25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.
534 激光生物学报第 24 卷 proteinlevelsaftertransfectionwasidentifiedbyreal timepcrandwesternbloting,respectivly.theu251celprolif erationwasmeasuredbymtt.resul
第 24 卷第 6 期 2015 年 12 月 激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.24No.6 Dec.2015 doi:10.3969/j.isn.1007 7146.2015.06.008 pcdna3.1 Pax6 载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响 黄涛 1, 彭志宏 2 3, 黄柏胜 (1. 湖南师范大学附属中学, 湖南长沙 410006;2. 长沙市雅礼中学,
< F63756D656E D2D796E2D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA34C6DA2DC4BFC2BC2D34C6DA2E6D6469>
2014 绎 Vol.16 No.4 445000 CCl 4 SD 60 6 3 CCl 4 12 16 澡 ALTAST SODGSH-PxGSH CAT MDA RT-PCR HO-1 mrna ALT AST P 约 0.05 P 约 0.01 GSH GSH-Px CAT SOD P 约 0.05 P 约 0.01 MDA P 约 0.05 P 约 0.01 HO-1 mrna P 约 0.05
... (1)....(3)..(5)... (22) (22)......(22)... (22)... (23)....(33)... (33)....(34)....(47)....(51).....(52)......(61)......(62)
97017608 OO ... (1)....(3)..(5)... (22).......(22)......(22)... (22)... (23)....(33)... (33)....(34)....(47)....(51).....(52)......(61)......(62) C 2002 2 2003 12 146 64.27 110 36 Logistic 2003 12 2004
Microsoft Word - 360145.doc
项 目 批 准 号 81273814 归 口 管 理 部 门 申 请 代 码 收 件 日 期 H2716 360145 y 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 资 助 项 目 计 划 书 资 助 类 别 : 面 上 项 目 亚 类 说 明 : 非 连 续 资 助 类 项 目 附 注 说 明 : 项 目 名 称 : 益 气 养 肺 法 拮 抗 bfgf 对 肺 癌 微 环 境 介 导 化 疗
标题
第 35 卷第 3 期 2014 年 9 月 FOREIGN MEDICALSCIENCESECTION OF MEDGEOGRAPHY Vol.35No.3 Sep.2014 189 基础医学 含 mir-497 野生及突变结合位点的胰岛素受体 mrna3 UTR 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 3 1,2 1,2 1,2 1,2, 王璇, 蓝茜, 李玥, 刘莉, 1,2 1,2 伊静, 李靖,
357 P <. 5. TCD findings revealed that the contralateral vertebral artery systolic blood flow velocities in patients with phase Ⅰ Ⅱ and Ⅲ steal groups
356 TCD 212 3 215 4 TCD 45 TCD 8 Ⅰ 21 Ⅱ 11 Ⅲ 5 4 45 6 2 Ⅰ 12 9 Ⅱ 3 7 1 Ⅲ 3 2 r =. 78 P
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
4 ( ) 05 35() [] HCG A ( 50 μl) B ( 50 μl) 37 5 min ( β-hcg β-hcg 50 μl) 450 nm 5 (chorionic gonadotropin beta polypertide 5 ).4 RT-PCR 检测 mrna 表达变化 R
![4 ( ) 05 35() [] HCG A ( 50 μl) B ( 50 μl) 37 5 min ( β-hcg β-hcg 50 μl) 450 nm 5 (chorionic gonadotropin beta polypertide 5 ).4 RT-PCR 检测 mrna 表达变化 R](/thumbs/92/109232373.jpg "4 ( ) 05 35() [] HCG A ( 50 μl) B ( 50 μl) 37 5 min ( β-hcg β-hcg 50 μl) 450 nm 5 (chorionic gonadotropin beta polypertide 5 ).4 RT-PCR 检测 mrna 表达变化 R")
( ) Journal of Nantong University (Medical Sciences) 05 35() 3 * OVCAR-3 高赛楠 **, 张玉泉 ***, 苏敏, 黄华 (,, 600) [ ] 目的 : β 5 (chorionic gonadotropin beta polpeptide 5, ) OVCAR-3 方法 :, OVCAR-3, OVCAR-3, BeWo
标题
摇 1524 艾 滋 病 合 并 肺 部 感 染 中 医 证 型 研 究 进 展 综 述 扶 伟 摇 徐 立 然 摇 马 秀 霞 摇 孟 鹏 飞 摇 宋 夕 元 摇 李 亮 平 摇 李 正 摇 丁 雪 摇 邱 荃 摇 杨 超 华 揖 摘 要 铱 摇 艾 滋 病 合 并 肺 部 感 染 的 治 疗 过 程 中 因 其 病 因 复 杂, 临 床 症 状 多 样, 辨 证 分 型 及 临 床 疗 效 评
WHO ---- ---- , 200 5% 8.6% 18.8% 200, 140 , MS MS 60 80 X 1999 WHO MS (2004.12) 1. BMI>25 >24 >28 BMI kg / m 2 2. 6.1mmol/L, 2h 7.8mmol/L 3. BP 140/90mmHg ( ) 4. TG 1.7 mmol/l /L HDL-C C
10 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2012 Vol. 44 No. 4 cantly in the presence of indicating that the resistant protein was not expressed in the
2012 44 4 9 2 2 3 1. 225009 2. 200240 3. 200072 R PCR p215c3lyz R pqe-31 R IPTG Western blotting pqe- p215c3lyz COS- DH5α OD 600 Western blotting p215c3lyz Western blotting R R S852. 4 A 0529-5130 2012
中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 )*8)$ 节 功能的影响 本课题组现有的蛋白激酶 如 酪蛋白激酶 蛋白激酶 等表达质粒都构建在 与 / 相同的载体 ) 质粒上 且携带相 同的 标签 这为利用表达标签的优势研究蛋 白激酶和 / 的相互作用带来了困难 因此 本研究将 / 构建到带 * 标签的 载
)*8)$ 中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 2- 论 著 -0. 融合蛋白对 外显子 * 可变剪接的影响 缪世琛 屈舒婷 陆 颖 唐 啸 任梁梁 顾建兰 南通大学医学院 南通 摘要 目的 构建带 * 标签的 / 及其截断体质粒 探讨 */ 融合蛋白对 外显子 可变剪接的影响 方法 采用 /) 法扩增 / 基因及其各截断体 将扩增产物和载体 双酶切后回收 连接载体和目的片段 获得重组质粒 在 +
2000.11 2000.11 2000 11 Abstract: Background: The development of autoantibodies in the sera of patients with cancers has been described, but the mechanism is still not clear. Objective: The aim of this
2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 18 12 1. 1. 2 500 730 2 5 1 1 1. 1. 3 739 127 116 712 265 3 143 50 2 2 1 13 2 14 3 15 4 16 5 17 6 18 7 19 8 20 9
2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 18 12 1006-446X 2011 12-0001-28 1 2 2 1. 201800 2. 510070 R 244. 9 A 1 1. 1 3 2000 1. 1. 1 1973 3 52 299 31 136 100 32 1 13 2011-10 -20 1 2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU
# 杭州师范大学学报 自然科学版 年 材料和方法 主要仪器, (" 仪 杭州朗基公司 *&6 % 凝胶成像系统 上海天能科技 16 7 型 A 培养箱 9&72! 倒置相差显微镜 A %+9 荧光显微镜 A% &(7 " 数码照相系统 +6&)6 /* 流式细胞仪,&&+7 主要试剂 *7&; 试剂
第 卷第 期 年 月 杭州师范大学学报 自然科学版!"# "$%% &'" # & #! 表达载体构建及其表达对 ' 细胞增殖的影响 虞 游 张艳欧 赵文铖 白 坚 陈建明 杭州师范大学生命与环境科学学院 浙江杭州 # 摘 要 "* (" 扩增的 %!% 基因连接到 +8% * 载体并测序鉴定 经测序正确的 %!% 基因再连接到 +$.( 载体构建 +$.( 1.1# 重组质粒 重组质粒 +$.(
<4D6963726F736F667420576F7264202D20B2CCA3BA4542B2A1B6BE52746120496747BFB9CCE5D3EBB1C7D1CAB0A9B7D6C6DAB5C4B9D8CFB52E646F63>
EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 分 期 的 关 系 蔡 永 林, 郑 裕 明, 成 积 儒, 李 军, 莫 永 坤, 钟 青 燕 ( 广 西 梧 州 市 红 十 字 会 医 院, 梧 州 市 肿 瘤 防 治 研 究 所, 广 西 梧 州 543002) 摘 要 : 目 的 探 讨 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 临 床 分 期 的 关 系 方 法 用 酶
Microsoft Word 聂雪梅.doc
4 4 Vol. 4 No. 4 2013 8 Journal of Food Safety and Quality Aug., 2013 聂雪梅 *, 李立, 孙利, 高飞 (, 100123) 摘要 : 2011 12,, 2007~2011,,,, 关键词 : ; ; ; ; Trade and notification situation on food import and export
性; 1000 r/min 离心; SDSPAGE; 于 4 'C 100 V 转膜 组 培养 1 周后开始干预 ①正常对照组:普通 S h; 5 % 脱脂奶粉封闭 1 h ; 分别加入抗 NQ01 培养液;② THA 模型组 : S 培养液中加入 1 阳nol/L 及!)肌动蛋白 一抗温育 4 '
http://www.cjcb.org 11 相酶诱导剂 CPDT 对运动神经元损伤 卡晖 1 李斌 1 郭艳苏 1 李哲刘晓云 1 保护作用的机制初探 李 春岩 1 * (河北 省 人民 医院癫瘸病矛斗 石家庄 0500日.1 河 北 医科大第二医院 石家庄 050000; 利 用 谷氨酸转运体抑制剂制备选择性运动神经 元损伤 的 脊髓 片 培养模型 在此基础上 摘要 河北省心脑血 管 病研究所
标题
第 39 卷第 6 期 Vol. 39 No. 6 摇 摇 摇 摇 中南医学科学杂志 Journal of Medical Science in Central South China 2011 年 11 月 Nov. 2011 沙眼衣原体 T 细胞抗原 CT143 原核表达 纯化及免疫活性鉴定 陆春雪1,吴移谋1,彭摇 波2,刘良专1,蔡恒玲1,李忠玉1 (1. 南华大学 微生物与免疫学教研室,湖南
Microsoft Word - A201007-5462.doc
血 管 瘤 型 禽 白 血 病 的 诊 断 * 王 锡 增, 张 丹 英 ( 厦 门 正 大 农 牧 有 限 公 司, 厦 门 360019) 摘 要 : 禽 白 血 病 是 由 反 转 录 病 毒 科 禽 白 血 病 / 肉 瘤 病 毒 群 病 毒 (AL/SV) 引 起 的 禽 类 多 种 肿 瘤 性 疾 病 的 总 称, 感 染 率 高, 发 病 率 低,AL/SV 可 通 过 水 平 和 垂
< F63756D656E D2D796E2D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA37C6DA2D30352DD6D0D2BDD1D0BEBF2E6D6469>
1. 530011 2. 410007 KEGG HMDB metpa 9 15 CoA P 约 0.05 CoA CoA doi: 10.11842/wst.2014.07.029 R256.2 A [1~4] GC-MS metpa KEGG Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes HMDB The Human Metabolome Database [5]
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
21 13 D / 2 10 ig ig 10 d 1. 0 g kg /2 2 β- 5 g kg g kg mg kg - 1 ig ig 24 h 5% 1 2% CMC-Na 2. 5 ml 30
21 13 1 2 1* 2 1. 430065 2. 445000 20 10 5 g kg - 1 5 mg kg - 1 ig 10 d ig HE 1 TFF1 TFF1 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 05 R285. 5 doi 10. 13422 /j. cnki. syfjx. 2015130100 A 1005-9903 2015 13-0100-05
<4D F736F F D20C1D6C2B3C6BCD0A3D1F932>
动物学研究 2007, Oct. 28(5): 457 464 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research 两个蛇毒基因克隆及 cdna 序列多态性再分析 * 361005 摘要 :α-α-bungarotoxin cdna DNA α- 5 cdna cdna α- cdna α- cdna α- cdna RNA cdna 关键词 :α- ;
生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
B522211_B docx
T- 载体 PCR 产物克隆试剂盒 产品编号 :B522211_B522213 包装规格 :20 次 /100 次 试剂盒组成 组分 B522211,20 次 B522211,100 次 B522213,20 次 B522213,100 次 T Vector 1 µg 5 µg 1 µg 5 µg 10 Ligation Buffer 50 µl 200 µl 50% PEG 4000 50 µl
标题
Vol. 36 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 5 2015 年 5 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 摇 摇 摇 摇 摇 摇 886 ~ 892 摇 摇 doi: 10. 7503 / cjcu20140965 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 伍 贤 军 1,2, 赵 摇 兵 2, 缪 摇 璇
CD + 4 CD + 25 T The role of CD + 4 CD + 25 Regulatory T cells in the pathogenesis of vitiligo CD + 4 CD + 25 T The role of CD + 4 CD + 25 Regulatory T cells in the pathogenesis of vitiligo 7000064 2008
荧光定量PCR
荧 光 定 量 PCR 荧 光 定 量 PCR 原 理 荧 光 定 量 PCR 最 早 称 TaqMan PCR, 后 来 也 叫 Real-Time PCR, 是 美 国 PE(Perkin Elmer) 公 司 1995 年 研 制 出 来 的 一 种 新 的 核 酸 定 量 技 术 该 技 术 是 在 常 规 PCR 基 础 上 加 入 荧 光 标 记 探 针 或 相 应 的 荧 光 染 料
马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1073 力 争 将 茶 油 作 为 食 用 油 的 主 流 品 种 [5] 茶 麸 系 油 茶 果 实 榨 除 茶 油 后 的 废 弃 残 渣, 药 用 名 为 茶 子 饼,
![马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1073 力 争 将 茶 油 作 为 食 用 油 的 主 流 品 种 [5] 茶 麸 系 油 茶 果 实 榨 除 茶 油 后 的 废 弃 残 渣, 药 用 名 为 茶 子 饼,](/thumbs/42/22971098.jpg "马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1073 力 争 将 茶 油 作 为 食 用 油 的 主 流 品 种 [5] 茶 麸 系 油 茶 果 实 榨 除 茶 油 后 的 废 弃 残 渣, 药 用 名 为 茶 子 饼,")
1072 基 础 研 究 Basic Research www.tumorsci.org 肿 瘤 2011 年 12 月 第 31 卷 第 12 期 TUMOR Vol. 31, December, 2011 DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2011.12. 004 Copyright 2011 by TUMOR 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat
AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L
2012 13 2 201-206 Journal of Plant Genetic Resources / 071001 41 SSR 21 SSR 41 52 2 ~ 4 2. 5 Shannon 0. 21 ~ 1. 40 0. 73 5. 54 3 7 9 13. 16% ~ 186. 49% 5. 48 6 11 SSR Genetic Diversity of Peanut Arachis
Microsoft Word - 8020-8025刘霞6.0M.DOC
中 国 组 织 工 程 研 究 第 18 卷 第 49 期 2014 11 30 出 版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research November 30, 2014 Vol.18, No.49 力 竭 运 动 后 24 h 模 型 大 鼠 肾 脏 结 构 和 炎 症 因 子 对 黑 加 仑 提 取 物 干 预 的 反 应 刘 霞 1, 蒋 嘉 烨
Microsoft Word - 6--李铁松_news_.doc
重组七鳃鳗 PHB2 蛋白的原核表达及纯化 李铁松, 王颖, 高杨, 李庆伟 (, 116081) 摘要 : 为了研究 PHB2 蛋白的生物学活性及后续抗体的制备, 作者以前期构建的 pmd18-t-lm-phb2 质粒为模板, PCR 扩增 Lm-PHB2 基因全长 CDS 区, PCR 产物经 Hind III 和 EcoR I 双酶切后连接至表达载体 pet-32a, 构建重组质粒 pet-32a-lm-phb2
32期
中 国 农 学 通 报 2014,30(32):38-42 Chinese Agricultural Science Bulletin 中 草 药 饲 料 添 加 剂 对 黄 鳝 性 激 素 含 量 的 影 响 1,2 1,2 1,2 2 赵 庆 凯, 丁 炜 东, 邴 旭 文, 王 建 新 ( 1 南 京 农 业 大 学 无 锡 渔 业 学 院, 江 苏 无 锡 214081; 2 中 国 水 产
2015医学版第四期
第 41 卷 第 4 期 2015 年 8 月 兰 州 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) Journal of Lanzhou University(Medical Sciences) Vol.41 No.4 Aug. 2015 文 章 编 号 :1000-2812 (2015) 04-0048-05 子 痫 前 期 患 者 髓 过 氧 化 物 酶 和 水 通 道 蛋 白 的 表 达 及 其 与
国际肿瘤学杂志 2014 年 8 月第 41 卷第 8 期 JIntOncol,August2014,Vol 41,No edwithpcdna3.1 DCC.Results ThepopulationofcelstransfectedwithpcDNA3.1(+) DCCplasmid
628 ingprotein1asacoreregulatorofmek/erk pathway dependent genesignaturesincolorectalcancercels[j].plosgenet,2010,6 (12):e1001231. [12]TsofackSP,GarandC,SeredukC,etal.NONOandRALYproteins are required for