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1 7 3 Vol. 7 No Journal of Food Safety and Quality Mar., 2016 陈梅春 1, 张海峰 2, 陈峥 1, 潘志针 1, 朱育菁 1, 刘波 (1., ; 2., ) 1* 摘要 : 目的,, DPPH 方法 (WTPS-1), ; ; - (GC-MS) ; DPPH 结果 WTPS-1 β-, 71.9%,, 2.57:3.67:0.57:1:2.16:9.65 WTPS-1 DPPH 91.6% 60.7% 9.20% 结论 WTPS-1, 关键词 : ; ; ; DPPH Isolation purification and composition analysis of Oolong tea polysaccharides CHEN Mei-Chun 1, ZHANG Hai-Feng 2, CHEN Zheng 1, PAN Zhi-Zhen 1, ZHUYu-Jing 1, LIU Bo 1* (1. Agricultural Bio-resources Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou , China; 2. Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou , China) ABSTRACT: Objective To isolate, purify and analyze the composition of Oolong tea polysaccharides, and to evaluate the DPPH radical scavenging activity of polysaccharides. Methods Tea polysaccharids fraction (WTPS-1) was isolated and purified from Oolong tea using ion exchange chromatography, the neutral sugar of WTPS-1 was measured by phenol-sulfuric acid method, the structure of WTPS-1 was analyzed by infrared spectroscopy (IR), the monosaccharide composition of WTPS-1 was measured by gas chromatography-mass spectrometer (GC-MS), and the antioxidant activity of WTPS-1 was evaluated by DPPH assay. Results The polysaccharide WTPS-1 contained β-glycoside bond type pyranose, and the content of neutral sugar was 71.9%. The monosaccharide compositions were Rha, Ara, Xyl, Man, Glu and Gal with a ratio of 2.57:3.67:0.57:1:2.16: DPPH scavenging activity of crude polysaccharide, deproteinized polysaccharide and WTPS-1 were 91.6%, 60.7% and 9.20%, respectively. Conclusion The crude polysaccharide exhibited the relative stronger DPPH scavenging activity than deproteinized polysaccharide and WTPS-1, and the results would provide useful references for the development of Oolong tea. KEY WORDS: polysaccharide; structure composition; monosaccharides components; DPPH scavenging activity 基金项目 : (2015NZ0003) (YC ) Fund: Supported by the Fujian Key Science and Technology Special Projects (2015NZ0003) and the Youth Fund of Fujian Academy of Agricultural Sciences (YC ) * 通讯作者 :,, fzliubo@163.com *Corresponding author: LIU Bo, Researcher, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou , China. fzliubo@163.com

2 3, : 引言,,, [1-4],,,,,,,,,, [5] OH O.- 2, ; Chen [6],, ; Chen [7], ; Chen [8], ; Yang [9],,,,,,,, Sevag,, 2 材料与方法 2.1 仪器与试剂 DK-8D ( ) GL10MD ( ) ABZ P ( ) UV-2550 ( Shimadzu ) Nicolet Magana750 FT-IR ( Nicolet ) 7890A-5975C ( Agilent ) ( ) ; 1, 1- (DPPH) ; ( ) G-250 DEAE DE-52 : 2.2 茶多糖提取, 20 ml, 50 1 h,,,, 3 95%,, 2.3 茶多糖脱蛋白工艺, Sevag Sevag ( : =4:1, V:V), 20 min, 5 min,,,, 3, 3 95% 2.4 乌龙茶多糖的分离纯化 DEAE-52, φ2.6 cm 50 cm, 0.1 mol/l 0.2 mol/l 0.3 mol/l NaCl, 1 ml/min,, 3 min 1, -,,,, 2.5 中性糖含量的测定 -, 茶多糖清除 DPPH 自由基能力的测定 0.2 mg/ml, 0.2 mmol/l DPPH 2 ml,, 30 min, 50%

3 1300 7, 525 nm A i, 2.0 ml 60% 525 nm A j, 2.0 ml DPPH 2.0 ml 60% 525 nm A 0, : (%)= [1 (A i A j )/A 0 ] ~400 nm, 2 200~400 nm 2.7 紫外可见光谱 1.0 mg/ml DEAE-52,, 200~400 nm 2.8 红外光谱 DEAE-52 KBr,, 4000~400 cm 茶多糖的气相色谱 - 质谱分析 : WTPS-1 20 mg 2 ml 2 mol/l (TFA),, h, TFA : 20 mg 1 ml, min, 1 ml, min,,, 0.5 ml GC-MS : HP-5MS, 270, 17.8 kpa, 10:1, 3 ml/min, 1 μl, : min, 2 /min 220, 2 min : EI; ; 6 min; : 25.00~ amu; EMV ; MS 230, MS 结果与分析 3.1 茶多糖的 DEAE-52 纤维素柱层析 DEAE-52, 1, mol/l NaCl, 3,,, (WTPS-1), 3.2 乌龙茶 WTPS-1 多糖的紫外和红外光谱分析 0.4 mg/ml WTPS-1, 1 DEAE-cellulose Fig. 1 Chromatographic isolation of tea polysaccharides by DEAE-cellulose column Fig. 2 2 WTPS-1 UV spectrum of Oolong tea polysaccharides WTPS ~ ~ ~ ~1000 cm cm -1, ; 2945 cm 1 C-H ; 1615 cm 1 ; 1328 cm 1 C-N, ; 1153 cm 1 C-O ; 1418 cm 1 =CH 2 ; 1099 cm cm 1 ; 887 cm 1 β-d- β- C-H ; 773 cm 1 D- C-O-C, 887 cm 1, 844 cm 1

4 3, : 1301 Fig. 3 3 WTPS-1 IR spectrum of Oolong tea polysaccharides WTPS-1, β- ; 810 cm 1, WTPS-1 β- 3.3 乌龙茶 WTPS-1 多糖的单糖组成 - WTPS % WTPS-1, GC-MS, 4 : 1- Rha( min) 2- Ara( min) 3- Xyl( min) 4- Man( min) 5- Glu( min) 6- Gal( min) WTPS-1, WTPS-1, 2.57:3.67:0.57:1:2.16: 乌龙茶多糖清除 DPPH 自由基 0.2 mg/ml Sevag DEAE WTPS-1, DPPH 91.6% 60.7% 9.20%, DPPH WTPS-1 DPPH 4 (a) WTPS-1 (b) GC-MS 1- (Rha); 2- (Ara); 3- (Xyl); 4- (Man); 5- (Glu); 6- (Gal) Fig. 4 GC-MS total ion chromatograms of acetylated aldononitriles of standard monosaccharides and WTPS-1 polysaccharides hydrolysate 1-Rha; 2- Ara; 3-Xyl; 4-Man; 5-Glu; 6-Gal 4 讨论 10,, WTPS-1

5 β-, (2.57:3.67:0.57:1:2.16:9.65), [7] TPS4-1 α β, (4.88:2.19:3.07:1.82:1), [5] OTPS2-1, (7.58:2.14:7.05:1.76:1.02) [10] (1.26:3.18:4.08:1.00:1.52:3.92) [11] ( ), : H, ; ; ( ) ; Fe 2+ Cu 2+, (ROOH), [7] DPPH : > > WTPS-1, (0.2 mg/ml) DPPH (60.7%) [11] 3 (0.5 mg/ml, DPPH 40.0%) [11], [5] DPPH, [12 14], WTPS-1,, 参考文献 [1] Cai WR, Xie LL, Chen Y, et al. Purification, characterization and anticoagulant activity of the polysaccharides from green tea [J]. Carbohydr Polym, 2013, 92: [2] Müller N, Ellinger S, Alteheld B, et al. Bolus ingestion of white and green tea increases the concentration of several flavan-3-ols in plasma, but does not affect markers of oxidative stress in healt hy non-smokers [J]. Mol Nutr Food Res, 2010, 54: [3] Monobe M, Ema K, Kato F, et al. Immunostimulating activity of a crude polysaccharide derived from green tea (Camellia sinensis) extract [J]. J Agric Food Chem, 2008, 56(4): [4] Zhou X, Wang D, Sun P, et al. Effects of soluble tea polysaccharides on hyperglycemia in alloxan-diabetic mice [J]. J Agric Food Chem, 2007, 55(14): [5],,,. [J]., 2005, 25(4): Ni D J, Chen Y Q, Yu Z, et al. Change of polysaccharide during the processing of Oolong tea and its structure characteristic [J]. J Tea Sci, 2005, 25(4): [6] Chen HX, Zhang M, Xie BJ. Quantification of uronic acids in tea polysaccharide conjugates and its antioxidant properties [J]. J Agric Food Chem, 2004, 52(11): [7] Chen HX, Zhang M, Xie BJ. Components and antioxidant activity of polysaccharide conjugate from green tea [J]. Food Chem, 2005, 90(1 2): [8] Chen HX, Zhang M, Qu ZH, et al. Antioxidant activities of different fractions of polysaccharide conjugates from green tea (Camellia Sinensis) [J]. Food Chem, 2008, 106(2): [9] Yang F, Yang ZW, Xiao JB. Radical scavenging activity of crude polysaccharides from camellia sinensis [J]. Arch Biol Sci, 2011, 63 (3): [10],,,. [J]., 2014, 35(23): Ding QS, Nie SP, Feng YL, et al. Isolation, purification and physico-chemical properties of acidic polysaccharides from green tea [J]. Food Sci. 2014, 35(23): [11]. [D]. :, Shao SH. Physicochemical properties, antioxidant and hypoglycemic activities of the polysaccharides from Oolong tea [D]. Hangzhou: Zhejiang University, [12],,. [J]., 2006, 27(11): Peng YH, Jin ZY, Wang YF. Study on preparation and hypoglycemic effect of sulfated tea polysaccharides [J]. Sci Technol Food Ind, 2006, 27(11):

6 3, : 1303 [13],,. [J]., 2007, 28(1): Li YH, Wang FS, He YL. Research status of the chemical modification methods of polysaccharides [J]. Chin J Biochem Pharm, 2007, 28(1): [14],,,. [J]., 2008, 28(3): Liang J, Zhang JY, Cui YY, et al. Study on chemical modification and anticoagulant function in vitro of tea polysaccharides [J]. J Tea Sci, 2008, 28(3): ( 责任编辑 : 白洪健 ) 作者简介 陈梅春, 博士, 助理研究员, 主要研究方向为生物活性物质及保健功效研究 cmczjw@163.com 刘波, 博士, 研究员, 主要研究方向为微生物生物技术与农业生物药物研究 fzliubo@163.com

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