14卷12期 4校

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姹泱贾
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1 中国热带医学 2014 年第 14 卷第 12 期 1429 论著珠海市 2013 年肠道病毒 71 型和柯萨奇病毒 A16 型基因特征摘要 : 目的周兰兰 *, 魏泉德, 张丽荣, 林毅雄, 李红霞, 郑予柯, 方艳梅, 沈韧珠海市疾病预防控制中心, 广东珠海分析 2013 年珠海市手足口病 (Hand-foot-mouth disease,hfmd) 患者中, 肠道病毒 71 型 (EV71) 和柯萨奇病毒 A 组 16 型 (CoxA16) 的分子流行病学特征方法采集珠海市 2013 年 HFMD 临床诊断病例粪便标本 215 份, 选取其中 Real time RT-PCR 检测 EV71 病毒核酸阳性的 18 份和 CoxA16 病毒核酸阳性的 8 份标本, 进行 VP4 区基因扩增, 并进行核苷酸序列和遗传进化关系分析结果 16 份 EV71 扩增测序成功, 与 C4a 基因亚型代表株具有最高的核苷酸序列同源性 (95.2%~99.5%) 和氨基酸同源性 (91.3%~100%);5 份 CoxA16 扩增测序成功, 有 2 份与 B2a 亚型代表株具有最高的核苷酸序列同源性 (98.6%~99.0%) 和氨基酸同源性 (97.1%~98.5%),3 份与 B2b 亚型代表株具有最高的核苷酸序列同源性 (96.6%~97.1%) 和氨基酸同源性 (100%) 结论 B2a 和 B2b 两种基因亚型关键词 : 手足口病 ; 肠道病毒 71 型 ; 柯萨奇病毒 A 组 16 型 ; 基因型中图分类号 :R 文献标识码 :A 文章编号 : (2014) 年珠海市流行的 EV71 属于 C4a 基因亚型,CoxA16 为 Genetic characteristics of enterovirus 71 and coxsackie virus A16 in Zhuhai in 2013 ZHOU Lan-lan, WEI Quan-de, ZHANG Li-rong, LIN Yi-xiong, LI Hong-xia, ZHENG Yu-ke, FANG Yan-mei, SHEN Ren Zhuhai Municipal Center for Disaese Control and Prevention, Zhuhai , Guangdong, P. R. China Abstract: Objective Corresponding author: ZHOU Lan-lan, zhoulll @163.com To analyze molecular epidemiological characteristics of enterovirus 71 (EV71) and coxsackie virus A16 (CoxA16) isolated from specimens of patients with hand-foot-mouth disease (HFMD) in Zhuhai in Methods 215 HFMD specimens were collected from Zhuhai in 2013 and EV71 and CoxA16 were detected by real time RT-PCR. The whole VP4 genes of 18 EV71 positive specimens and 8 CoxA16 positive ones were amplified by RT-PCR and sequenced, and compared with other isolates available from Genbank by homogeneity and phylogenetic tree analyses. Results The Sixteen of the 18 EV71 positive specimens were amplified and sequenced successfully, and clustered within the C4a. The nucleotide and amino acid homogeneity of them with the representative isolate of C4a were 95.2%- 99.5% and 91.3%- 100%, respectively. Five of eight CoxA16 positive specimens were amplified and sequenced successfully, and 2 ones formed a distinct cluster in subgenotype B2a, with the nucleotide homogeneity and mino acid homogeneity of 98.6%-99.0% and 97.1%-98.5%, the other 3 ones formed a distinct cluster in subgenotype B2b, with nucleotide homogeneity and mino acid homogeneity of 96.6%-97.1% and 100% accordingly. Conclusion B2a and B2b subgenotypes. The EV71 and CoxA16 prevalent in Zhuhai in 2013 belonged to C4a subgenotype and Key words: Hand-foot-mouth disease; Enterovirus 71; Coxsackievirus A16; Genotype 手足口病 (Hand-foot-mouth disease,hfmd) 是由多种肠道病毒引起的小儿急性传染病, 主要发生在婴幼儿, 大部分患者症状轻微, 以发热和口腔手足等部位发生疱疹为主要临床表现, 个别患者可引起心肌炎肺水肿无菌性脑膜炎等并发症, 严重者可发生死亡该病通过粪口途径呼吸道飞沫和密切接触传播, 传染性强, 易导致流行和爆发因此, 卫生部于 2008 年 5 月 2 日下发通知, 将 HFMD 纳入丙类法定传染病管理引起 HFMD 的病原体有 20 多个血清型, 均属于小 RNA 病毒科中的肠道病毒属, 包括肠道病毒 71 型 (EV71) 柯萨奇病毒 A 组 (CAV) 柯萨奇病毒 B 组 (CBV) 和埃可病毒 (Echo), 主要为柯萨奇病毒 A 组 16 型 (CoxA16) 和肠道病毒 71 型 (EV71) [1] EV71 可引起严 [2] 重的神经系统相关疾病, 甚至死亡 CoxA16 所致的症状相对较轻, 病程多为自限性, 但是近年来也出现 [3] 其感染导致死亡的病例为深入了解珠海市 HFMD 主要病原体 EV71 和 CoxA16 的分子流行病学特征, 本研究收集了珠海市 2013 年 HFMD 临床诊断病例标本, 对 EV71 和 CoxA16 阳性标本进行 VP4 基因特征和分子进化分析, 以便给诊断预防和控制 HFMD 的流行提供实验室依据基金项目 : 珠海市卫生局医学科技项目 (No ) 作者简介 : 周兰兰 (1982~), 女, 硕士, 主管技师, 研究方向 : 病原微生物检测 * 通讯作者 : 周兰兰, zhoulll @163.com

2 1430 中国热带医学 2014 年第 14 卷第 12 期 1 材料和方法 1.1 标本采集根据卫生部手足口病预防控制指南 (2009 版 ), 采集珠海市 2013 年手足口病临床诊断病例粪便标本 215 份, 粪便标本采集量 (5 ~8)g/ 份, 采集后立即放入无菌采便管内,4 冷链运输,-20 保存备用 1.2 病毒核酸检测取 2g 粪便加入含 1mL 氯仿和 9mL PBS 的灭菌离心管中, 剧烈震荡混匀 20min, 冷冻离心 1 500rpm 20min, 吸取 140μL 上清液使用德国 QIAGEN 公司生产的 QLAamp Viral RNA Mini Kit 提取病毒 RNA 在 ABI 7500 型荧光定量 PCR 仪上, 使用上海辉睿公司的 EV 单通道 EV71/CoxA16 双通道荧光 RT-PCR 试剂盒检测 1.3 VP4 区基因扩增参照 Ishiko H [4] 设计的针对肠道病毒 VP4 区设计的一套分型引物进行半巢氏 RT- PCR 外引物和内引物的下游引物 OL68-1 序列 :GG TAAYTTCCACCACCANCC; 外引物的上游引物 MD91 序列 :CCTCCGGCCCCTGAATGCGGCTAAT, 和内引物的上游引物 EVP4 序列 :CTACTTTGGGTGTCCGT GTT 以 OL68-1 和 MD91 为引物, 按大连宝生物工程有限公司的 TaKaRa One Step RNA PCR Kit 说明书配制外引物 RT-PCR 反应体系, 反应条件如下 :50 逆转录 30 min;94 预变性 2 min;94 变性 30 s,55 退火 30 s,72 延伸 90 s,40 个循环 ;72 后延伸 10 min 取 1 μl 外引物扩增产物, 以 OL68-1 和 EVP4 为引物, 按照 TaKaRa Taq 酶说明书配制内引物 PCR 反应体系, 反应参数如下 :94 5 min;94 30 s,55 30 s,72 1 min,40 个循环 ;72 延伸 10 min 外引物和内引物扩增产物用 1.5% 琼脂糖凝胶电泳, 产物片段分别为 754bp 和 657bp 1.4 测序和分析将 PCR 阳性扩增产物送英潍捷基有限公司进行测序将测序成功标本的 VP4 基因序列提交至 NCBI Genbank 注册利用 DNAStar 软件进行核苷酸及氨基酸序列分析和同源性比较, 采用 MEGA4.1 软件中邻接法 (Neighbor-joining,NJ) bootstrap 重复检验次, 构建遗传进化树用于构建 [5] 进化树的 EV71 和 CoxA16 各基因型代表株的 VP4 区基因序列来自美国国立生物信息中心 (NCBI) 的 Gen bank 数据库 2 结果 2.1 HFMD 病毒核酸检测珠海市手足口病临床诊断病例 215 例, 肠道病毒核酸阳性 183 例, 总阳性率 85.1% 其中 EV71 阳性 45 例, 占 24.6%;CoxA16 阳性 8 例, 占 4.4%; 其他 EV 阳性 130 例, 占 71.0% 2.2 半巢氏 RT-PCR 检测及测序按照不同月份 EV71 流行强度选择 EV71 阳性标本数量, 和 12 月未检出 EV71, 因此这 4 个月没有选 EV71 标本,4 月和 5 月 EV71 检出率最高, 每月选 5 份标本, 其余 6 个月每个月选 1~2 份, 共 18 份 EV71 阳性标本, 包括普通病例标本 11 份和危重病例标本 7 份全年检出 CoxA16 阳性病例 8 份, 全部进行 VP4 全基因扩增核苷酸序列测定有 16 份 EV71 和 5 份 CoxA16 标本扩增出目的片段用 OL68-1 和 EVP4 作为测序引物对 PCR 产物进行测序,21 份 PCR 产物全部测序成功测序成功的 16 份 EV71 的 VP4 基因序列, 分别命名为 ZHJ86 ZHXJ6-7 ZHJ69 ZHW48 ZHW77-3 ZHXJ95-2 ZHW43 ZHW47 ZHW142 ZHJ53-1 ZHJ199 ZHJ221 ZHJ224 ZHXJ6-3 ZHXJ95-3 和 ZHJ27-1,Genbank 登录号依次为 KM ~KM382168;5 份 CoxA16 分别命名为 ZHC14-2 ZHW149-1 ZHJ159-1 ZHJ232 和 ZHW143,Genbank 登录号依次为 KM382148~KM 同源性分析 EV71 VP4 区核苷酸和氨基酸同源性分析 EV71 的 VP4 基因全长 207nt, 编码 69 个氨基酸用 DNAStar 软件对 16 株 EV71 的 VP4 区的核苷酸及氨基酸序列进行同源性比较, 核苷酸序列同源性 91.8%~ 100%, 氨基酸序列同源性 90.8% ~100% 将 16 株 EV71 与其各基因型和亚型参考毒株进行 VP4 区的核苷酸及氨基酸序列同源性分析, 见表 1, 显示它们与 C4a 亚型代表株具有最高的核苷酸和氨基酸序列同源性, 分别为 95.2%~99.5% 和 91.3%~100%; 与 A B 基因型代表株的核苷酸序列同源性较低分别为 79.2%~ 84.5% 和 77.3%~81.6%, 和氨基酸序列同源性均为 91.3%~100%; 与 C 基因型各亚型 C1 C2 C3 C5 和 C4b 代表株的核苷酸序列同源性分别为 86.0% ~ 89.9% 84.1%~88.4% 83.1%~86.0% 85.5%~89.4% 和 88.9% ~93.7%, 和氨基酸序列同源性均为 91.3% ~ 100% 13 株 EV71 ZHJ86 ZHJ69 ZHJ53-1 ZHW77-3 ZHW43 ZHW47 ZHW48 ZHXJ6-3 ZHXJ6-7 ZHXJ95-2 ZHXJ95-3 ZHW142 和 ZHJ224 编码的 69 个氨基酸与 A B C1 C2 C3 C4a C4b 和 C5 基因型代表株的氨基酸序列完全一致但 ZHJ199 第 19 位 45 位和 48 位氨基酸分别由丙氨酸变为甘氨酸丝氨酸变为精氨酸和谷氨酰胺变为亮氨酸 ;ZHJ221 第 14 位 51 位和 59 位氨基酸分别由谷氨酸变为赖氨酸天冬氨酸变为组氨酸和天冬氨酸变为天冬酰胺 ;ZHJ27-1 第 7 位苏氨酸变为丙氨酸 CoxA16 VP4 区核苷酸和氨基酸同源性分析

3 中国热带医学 2014 年第 14 卷第 12 期 1431 Table 1 表 1 16 株 EV71 与其各基因型和亚型参考毒株的 VP4 区核苷酸及氨基酸同源性分析 (%) Nucleotide and amino acid homogeneity of VP4 gene of 16 EV71 strains compared with different genotypes and subtypes of reference strains(%) 分离株 Isolate ZHJ86 ZHJ69 ZHJ53-1 ZHW77-3 ZHW43 ZHW47 ZHW48 ZHXJ6-3 ZHXJ6-7 ZHXJ95-2 ZHXJ95-3 ZHJ27-1 ZHW142 ZHJ199 ZHJ221 ZHJ224 CVA / / / / /72.5 A 83.6/ / / /91.3 B 80.7/ / / / /100 C1 88.9/ / / /91.3 C / / / / / /91.3 C3 84.5/ / / / / /91.3 C4a 96.4/ / / / / / /100 C4b 92.8/ / / / / / / /91.3 C5 87.4/ / / / /100 注 : 基因代表株的 Genbank 号 :CVA16:U05876 A:U22521 B:EU C1:EU C2:AF C3:DQ C4a:EU C4b: AY C5:EU527983; / 左侧数据为核苷酸序列同源性, / 右侧数据为氨基酸序列同源性 Note:Sequences with the following GenBank accession numbers were used: CVA16:U05876 A:U22521 B:EU C1:EU C2:AF C3:DQ C4a:EU C4b:AY C5:EU527983;"/" left and right data respectively indicated nucleotide and amino acid homogeneity. CoxA16 的 VP4 基因全长 207nt, 编码 69 个氨基酸 DNAStar 软件分析显示 5 株 CoxA16 间核苷酸序列同源性 92.8% ~99.0%, 氨基酸序列同源性 98.5% ~ 100% 将 5 株 CoxA16 与其各基因型和亚型参考毒株进行 VP4 区的核苷酸及氨基酸序列同源性分析, 见表 2, 显示 ZHW143 ZHC14-2 和 ZHJ232 与 B2b 亚型代表株具有最高的核苷酸和氨基酸序列同源性, 分别为 96.6%~97.1% 和 100%;ZHW149-1 和 ZHJ159-1 与 B2a 亚型代表株同源性最高, 核苷酸同源性 98.6%~ 99.0%, 氨基酸同源性 97.1%~98.5%; 与 A 和 B1 基因型代表株的核苷酸序列同源性较低, 分别为 81.2%~ 82.6% 和 89.9% ~92.3%, 氨基酸序列同源性均为 98.5%~100% 4 株 CoxA16 ZHC14-2 ZHW143 ZHJ232 和 ZHW149-1 编码的 69 个氨基酸与 A B1 和 B2b 基因型代表株的氨基酸序列完全一致, 与 B2a 基因型代表株的氨基酸序列同源性达 98.5% 但 ZHJ159-1 的第 61 位氨基酸由异亮氨酸变为甲硫氨酸 2.4 遗传进化树分析 EV71 遗传进化树分析根据 EV71 的 VP4 区编码基因核苷酸序列, 对 16 例珠海市 EV71 与其各基因型和亚型的代表株序列构建了遗传进化树, 选用 CA16 原型株 G10 为组外对照, 见图 1 进化树显示, 表 2 Table 2 分离株 Isolate ZHC14-2 ZHW143 ZHJ232 ZHW149-1 ZHJ 株 CoxA16 与其各基因型和亚型参考毒株的 VP4 区核苷酸及氨基酸同源性分析 (%) Nucleotide and amino acid homogeneity of VP4 gene of 5 CoxA16 strains compared with different genotypes and subtypes BrCr 70.0/ / / / /73.6 of reference strains(%) A 82.6/ / /98.5 B1 92.3/ /98.5 B2a 93.2/ / / / /97.1 B2b 97.1/ / / /98.8 注 : 基因代表株的 Genbank 号 :BrCr:U22521 A:U05876 B1: AY B2a:HQ B2b:KC117318; / 左侧数据为核苷酸序列同源性, / 右侧数据为氨基酸序列同源性 Note:Sequences with the following GenBank accession numbers were used: BrCr:U22521 A:U05876 B1:AY B2a:HQ B2b: KC117318;"/" left and right data respectively indicated nucleotide and amino acid homogeneity. 珠海市的 EV71 与 C4 亚型代表株处于同一分支, 属于 C4 基因亚型在 C4 基因亚型中, 又可以进一步细分为 2 个进化分支 :C4a 和 C4b 和 2004 年在广东深圳分离的 EV71 都属于 C4b; 而 2008 年在安徽省阜阳市 2010 年在山东省和浙江省宁波市 2010~2011 年在广东省广州市和东莞市 2011 年

4 1432 中国热带医学 2014 年第 14 卷第 12 期在河南省郑州市和 2012~2013 年在湖南省郴州市分离到的 EV71 都属于 C4a 2012 年广东省珠海市的 16 株 EV71 与 C4a 亚型代表株处于密切相关的一簇, 属于 C4a 基因亚型在 C4a 进化分支中, 珠海市 16 株 EV71 分别处于 5 个相对独立的小的进化分支, 表明珠海市至少存在 5 条传播链检测的 4~5 月 HFMD 高峰期的 10 份 EV71, 有 9 份扩增测序成功, 均位于 Clade 1 和 Clade 2, 其中 ZHJ86 ZHJ69 ZHJ53-1 和 ZHW77-3 处于 Clade 1, 与 2010 年在山东省分离到的 EV71 完全同源 ;ZHW43 ZHW47 ZHW48 ZHXJ6-3 和 ZHXJ6-7 处于 Clade 2, 与 2010 年广东省分离到的 EV71 同源性最高, 核苷酸同源性达 98.6% Clade 1 与 Clade 2 之间核苷酸同源性为 95.7%~98.6% 10 月的 ZHXJ95-2 和 ZHXJ95-3 位于 Clade 3, 与 2010 年在广东省广州市 2011 年在广东省东莞市和 2013 年在湖南省郴州市分离到的 EV71 完全同源 8~9 月分离的 ZHJ199 ZHJ221 和 ZHJ224 都位于 Clade 4, 与 2010 年浙江省宁波市和 2012 年湖南省分离的 EV71 同源性较高, 核苷酸同源性达 95.7% ~97.1% 3 月 ZHJ27-1 和 6 月 ZHW142 位于 Clade 5, 与 2011 年在河南省郑州市分离的 EV71 同源性较高, 核苷酸同源性达 97.6% 注 : 表示本次实验的标本 Note: represented the experimental specimens. Fig.1 图 1 EV71 的 VP4 基因遗传进化树 The phylogenetic tree of VP4 gene of EV71

5 中国热带医学 2014 年第 14 卷第 12 期 CoxA16 遗传进化树分析从 Genbank 数据库下载 CoxA16 各基因型 (A B1 B2a B2b) 代表株 VP4 区基因序列, 与 5 株测序成功的 CoxA16 进行遗传进化分析, 选用 EV71 原型株 BrCr 为组外对照, 采用 NJ 法构建遗传进化树, 见图 2 结果显示 5 株 CoxA16 VP4 序列在进化树上可分为 2 个分支, 分别与 B2a 和 B2b 亚型代表株在一个分支上, 说明珠海市的 CoxA16 分别属于 B2a 和 B2b 亚型 B2b 这个分支的 ZHW143 ZHC14-2 和 ZHJ232 与福建厦门 2009 年流行株同源性最高, 核苷酸同源性达 98.6%~99.0%, 与 2009 年广东广州分离株核苷酸同源性为 96.6%~97.6%;B2a 分支上的 ZHW149-1 和 ZHJ159-1 与 2009 年广东广州分离株核苷酸同源性最高, 为 98.6%~99.0% Clade 1 与 Clade 2 之间核苷酸同源性为 92.3%~93.7% 注 : 表示本次实验的标本 Note: represented the experimental specimens Fig.2 图 2 CoxA16 的 VP4 基因遗传进化树 The phylogenetic tree of VP4 gene of CoxA16 3 讨论人类早期发现的 HFMD 的病原体主要为 CoxA16 型, 在 1957 年由加拿大人首次报到, 并分离出 CoxA16 [6] 病原体 ;EV71 是在 1974 年由美国学者从 1 例脑炎病 [7] 人的标本中分离出来此后,EV71 与 CoxA16 感染在全球范围广泛流行并交替出现, 成为 HFMD 的主要病原体 EV71 和 CoxA16 属于肠道病毒属, 病毒粒子的衣壳组成非常复杂, 由 VP4 VP2 VP3 和 VP1 四种外壳蛋白构成原聚体 VP4 基因由 207 个核苷酸组成, 编码的 69 个氨基酸序列非常保守, 但核苷酸序列变异率较高, 因此 VP4 也是 HFMD 分子流行病学分析和基因分型研究的重要区域 EV71 可分为 A B C 三个基因型,A 基因型只有 EV71 原型株 BrCr, 而 B 和 C 基因型在系统发生树上 [8] 遗传距离较远, 进一步分为 B1~B5 和 C1~C5 亚型 C4 基因亚型又可分为 C4a 和 C4b [9] 我国大陆在 1998~ 2004 年分离的 EV71 流行株为 C4b, 而从 2004 年后分离的流行株为 C4a [10] 期间, 虽然我国周边国家和地区均有 EV71 多个基因型别的流行, 但 1998 年以来, 我国大陆一直流行 C4 单一基因亚型, 且 C4 基因亚型随着流行年代在发生变异珠海市 16 株 EV71 经核苷酸同源性和系统进化树分析, 证实全部分布在 C4 基因亚型 C4a 进化分支上, 并且流行期间存在多个传播链从亲缘进化树上可以看出, 珠海市不同传播链上的 EV71, 与近年来在中国广东省和其他省市流行的 EV71 亲缘关系较为接近在 2013 年 4 月和 5 月 HFMD 发病高峰期检出的 EV71 均位于病毒传播链 1 和 2 上, 并且传播链 1 与 2010 年在山东省分离到的 EV71 完全同源, 表明此流行株目前仍然存在而且没有发生变异 ; 传播链 2 与 2010 年广东省分离到的 EV71 同源性最高, 核苷酸同源性达 98.6%, 以及传播链 3 与 2010 年在广东省广州市 2011 年在广东省东莞市和 2013 年在湖南省郴州市分离到的 EV71 完全同源, 表明疾病的地区流行性很强传播链 4 与 2010 年浙江省宁波市和 2012 年湖南省分离的 EV71 同源性较高, 而且传播链 4 中珠海市的 3 株 EV71 都在不同程度的发生变异, 这可能是由于个体对肠道病毒免疫力的差异, 导致病毒基因组在复制过程中发生了变异传播链 5 与 2011 年在河南省郑州市分离的 EV71 同源性较高, 核苷酸同源性达 97.6% 珠海市 2013 年 EV71 流行株存在至少 5 条传播链, 而且与山东省湖南省浙江省和河南省的毒株同源性较高, 可能是由于珠海市外来人口逐年增加导致病毒传播 CoxA16 分为 A 和 B 两个基因型,A 基因型只有 CoxA16 国际标准株 CA16-G10, 而 B 基因型又分为 B1 和 B2 亚型,B2 又被细分为 B2a B2b 和 B2c [11] 珠海市 2013 年 5 株 CoxA16 在进化树上可分为 2 个分支, 分属于 B2 亚型的 B2a 和 B2b B2a 分支包括 2009 年广东省广州市分离株 ;B2b 分支包括福建省厦门市 2009 年和广东省广州市的 2009 年流行株珠海市 2013 年

6 1434 中国热带医学 2014 年第 14 卷第 12 期 CoxAl6 毒株以 B2a 和 B2b 两种亚型共同存在和流行, 与深圳市 2005~2012 年以 B2a 和 B2b 两种亚型并存的 [12-13] 现象一致在 EV71 遗传进化树上, 在病毒传播链 2 上的 5 例珠海市完全同源的病例, 有 2 例普通 (ZHXJ6-7 和 ZHXJ6-3) 和 3 例危重病例 (ZHW48 ZHW43 和 ZHW47), 在传播链 5 上的 2 例珠海市完全同源的病例, 有 1 例普通 (ZHJ27-1) 和 1 例危重病例 (ZHW142), 以及在 CoxA16 遗传进化树上, 在病毒传播链 1 上的 2 例珠海市完全同源的病例, 有 1 例普通 (ZHC14-2) 和 1 例危重病例 (ZHW143), 表明可能 EV71 和 CoxA16 的感染临床表现和结局与病毒传播链没有直接的联系, 而与其病毒感染量和个体免疫差异有关, 这与 Singh S [14] 等人对 2000 年新加坡 EV71 死亡病例和非死亡病例全基因遗传进化树分析结论一致, 但该研究没有针对肠道病毒全基因分析, 不能排除其它基因差异对疾病表现和结局的影响, 只能推测 VP4 基因本身似乎与疾病的严重程度没有太大关系综上所述, 本研究分析了珠海市 2013 年流行的 EV71 和 CoxA16 病毒基因特征, 并结合分子流行病学研究了病毒的起源地变异和流行特点, 获得了珠海市 EV71 和 CoxA16 重要的分子流行病学资料尤其是在目前 CoxA16 的基因序列较少, 流行病学资料缺乏的现状下, 珠海市关于 CoxA16 基因进化树的研究, 将有助于了解 CoxA16 基因特征和流行情况, 为我国的手足口病防控提供依据参考文献 [1] Wu D, Ke CW, Li w, et al. A large outbreak of hand, foot, and mouth disease caused by EV71 and CAV16 in Guangdong, China, 2009 [J]. Arch Virol, 2011,156(6): [2] Hamaguchi T, Fujisawa H, Sakai K, et al. Acute encephalitis caused by intrafamilial transmission of enterovirus 71 in adult [J]. Emerg Infect Dis, 2008,14(5): [3] 许文波, 檀晓娟. 手足口病 : 中国儿童传染病防控面临的新挑战 [J]. 疾病监测, 2009,24(9): [4] Ishiko H, Shimada Y, Yonaha M, et al. Molecular diagnosis of human enteroviruses by phylogeny-based classification by use of the VP4 se quence [J]. J Infect Dis, 2002, 185(6): [5] Tamura K, Dudley J, Nei M, et al. MEGA4: Molecular Evolutionary Ge netics Analysis (MEGA) software version 4.0 [J]. Mol Biol Evol, 2007, 24(8): [6] Robinson CR, Doane FW, Rhodes AJ. Report of an outbreak of febrile illness with pharyngeal lesions and exanthem: Toronto, summer 1957; isolation of group A Coxsackie virus [J]. Can Med Assoc J, 1958, 79( 8 ): [7] Chumakov M, Voroshilova M, Shindarov L, et al. Enterovirus 71 isolat ed from cases of epidemic poliomyelitis- like disease in Bulgaria [J]. 1979,60(3-4): [8] Brown BA, Oberste MS, Alexander JP, et al. Molecular epidemiology and evolution of enterovirus 71 strains isolated from 1970 to 1998 [J]. J Virol, 1999, 73(12): [9] Zhang Y, Tan XJ, Wang HY, et al. An outbreak of hand, foot, and mouth disease associated with subgenotype C4 of human enterovirus 71 in Shandong, China [J]. J Clin Virol, 2009, 44(4): [10] Zhang Y, Zhu Z, Yang W, et al. An emerging recombinant human en terovirus 71 responsible for the 2008 outbreak of hand foot and mouth disease in Fuyang city of China [J]. Virol J, 2010,7:94. [11] Li L, He Y, Yang H, et al. Genetic characteristics of human enterovi rus 71 and coxsackievirus A16 circulating from 1999 to 2004 in Shen zhen, People's Republic of China [J]. J Clin Microbiol, 2005, 43(8): [12] Zong WP, He YQ, Yu SY, et al. Molecular phylogeny of Coxsackievi rus A16 in Shenzhen, China, from 2005 to 2009 [J]. J Clin Mierobiol, 201l, 49(4): [13] 冼慧霞, 陈龙, 罗敏年至 2012 年深圳市手足口病分子流行病学研究 [J]. 中华传染病杂志, 2014, 32(4): [14] Singh S, Poh CL, Chow VT. Complete sequence analyses of enterovi rus 71 strains from fatal and non- fatal cases of the hand, foot and mouth disease outbreak in Singapore (2000) [J]. Microbiol Immunol, 2002, 46(11): 收稿日期 : 编辑 : 史金端

正文(copy)

正文(copy) 中国热带医学年第卷第期 China Tropical Medicine,February,Vol.,No. 论著东莞市年柯萨奇病毒 A 型流行情况及特征分析 * 李艳芬, 黄勇, 张莉萍, 陈永迪, 曾汉日. 东莞市疾病预防控制中心微检所, 广东东莞 ;. 广东省疾病预防控制中心微检所, 广东广州 000 摘要 : 目的征方法研究东莞市年手足口病 (HFMD) 病例中柯萨奇病毒 A