运用测序法和luminex法对生殖道 HPV进行分型的比较

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1 luminex HPV

2 HPV

3 103 HPV

4 / / HPV

5 HPV HPV6 11 HPV16 18 CIN HPV 99.7%

6 HPV cp HPV

7 HPV HPV

8 luminex HPV

9 HPV HPV

10 CIN

11

12 HPV DNA V-gene Animal Tissue Genomic DNA Mini-prep Kit DNA

13 HPV DNA MY09 5 -CGTCCMARRGGAWACTGATC-3 MY11 5 -GCMCAGGGWCATAAYAATGG-3 (M=A+C,R=A+G,W=A+T,Y=C+T)

14 94 5min 94 30s 54 30s s 72 5min

15 MIX Each PCR µl 10 PCR buffer mmol/LMgCl2 2.0 *10mmol/LdNTPs µmol/L MY µmol/L MY Taq DNA 0.2 Template 2.0 ddh2o 16.8 Total 25.0

16 PCR 1.5g100µl µlpcr 6 DNA 100V 30min TANON GIS 2010

17

18 - PC03 5 -ACACAACTGTGTTCACTAGC-3 PC05 5 -GAAACCCAAGAGTCTTCTCT-3 DNAPCR 209bp

19 94 5min 94 30s 54 30s 40cycles 72 30s 72 5min MIX Each PCR µl 10 PCR buffer mmol/LMgCl2 2.0 *10mmol/LdNTPs µmol/L PC µmol/L PC Taq DNA 0.2 Template 2.0 ddh2o 16.8 Total 25.0

20

21 HPV DNA SAP 1 ul ExonI 0.5ul PCR 3 ul 37 45min ddh2o 0.5ul 80 15min

22 CACTTGAACGGAAAGGAGTTAACCTCCCAAAAACTAAGGTTTTTATAG GGATCTGGCTTTTCCTTTTCAGGAGTGGGCTTTTGACAGGTAATGGCC TGTGACTGCACATACCTATAGGTATCTTCTAATGTACCATTTGGGGGA GGCGATAACCCAAAGTTCCAGTCTTCCAAAACAGAGGGATTCATTGTG TGAATATAGGCCATTACTTCAGCAGACAATGTAATGCTACATAATTGAA AAATAAATTGTAAATCATACTCTTCCACATGACGCATGTACTCTTTATAA TCAGAATTGGTGTATGTGGAAGATGTAGTTACGGATGCACATAATGTC ATGTTGGTACTGCGTGTGGTATCTACCACAGTAACAAACAGTTGATTAC CCCAACAAATACCATTGTTATGACCCTGGGCA

23 GNNNTCGACCGGGACNCCCNGTTNGNGGTNNTNANGGGGAAANGNAGAAGTN GGNTGNANTGGTCANANAAGGCGAGGGTTTCTGACANGNAAAGGCCTGTGACT GTNCATATCTATAAGTGTCNTCCAANGTACCATTTGGNGGAGGNGATAAACCAAA GTTCCAGNCCNCCAAAACAGAAGGATTCNTTGTGTGAATATAGGNCATGACTTCT GNAGATAATGTAANGCTACANAATTGAAAAACAAACTGTAAATCAAACTCCTCCA CATGGAGGATGTNCCCTTATAATCGGGAATTANCGNATGTCGAGANATCTAGAC ACAGATGCGCATANTGNCATATTTGTACTGCGCGTGGNATCTACCACAGTAACA NACNNNTGGTTTCNCCNGNAAATACCATTGTTATGACCCTGGGCAAGGANCCTC NTCTCTTNTACNNTTTCCTNTTTAACNAATNCTCCTNCTCCTNTTCTCCTNNCTNG TCNNGCTNNGCCNTCTNANNTCNATTNCACATCCCTCCNCTTTTTANCAGCTTCT TNNTTCCNCTATTCCTCCACGCGTGCCTTTTTCTNCNTCTTAGTACTATNCCTCN CANTACTCCTNCTCTTTNCTNCTNTNCANCCCCTTTCCTCNNATNCNNNNCTCTN NTTTNCATCNTCNTNNTCTNCTCTCCNTCCCANCNCCGTCNCNGACNGCCTTTN CCGCTCTCGNCCTTTGCANTTGNCTACTCANCNTNTNCNTANCCCTTTCTNNCTN CGCTANTNCCTACCNCTNCNTTTACCTNCCTNNACNNTTNGGCCCTTCNCNTTCC TCNCCTATCGCACTATAACGNGNANATCNTCCTCTTCNNTANACCNNNNNNNCC NACTNTCNNNCNAANCTCTCNCCTNNAGCC

24 HPV A B / 18/ 16/ / CIN CIN CIN CIN CIN CIN CIN CIN

25 CA CIN HPV6 11 CIN HPV HPV

26

27 3

28 Luminex DNA PE HPV biotin HPV PE biotin

29 7 biotin 6 AGCCAGATCCCTATAAGAACCTTAG 11 ACAGGATCCCTATAAGGATATGAGTT 16 CACCTCCAGCACCTAAAGAAGAT 18 GGATGCTGCACCGGCTG 33 AGGAAGACCCCTTAGGTAAATATACAT 35 CCCAGTGCACCAAAACCTAAA 39 ATGCTCCAGCACCTGAAAAGA

30 94 5min 94 30s 54 30s 40cycles 72 30s 72 5min MIX Each PCR µl 10 PCR buffer mmol/LMgCl2 2.0 *10mmol/LdNTPs 0.5 (7 ) 2.0 Taq DNA 0.2 Template 2.0 ddh2o 16.8 Total 25.0

31 2µl PCR 3µl 4 SSC 50µl 55 30min r/min 5min 98µl 2 SSC 2µlPE 50 5min Bio-Plex

32 No Sequencing Luminex A B si. 11 si. 6 si. 11 si. 6 si. 6 si. 6 si. 11 si. 11 si. 6 si. 11 si. 11 si. 11 si. 11 si. 11 si. 16 si. 16 mix. 18/? mix. 18/? mix. 16/? si

33 A B C A A A B B B C1 32 C2 25 C3 36

34 luminex luminex 100

35 luminex

36 luminex min 96 PCR

37 HPV DNA 15 7 HPV DNA CIN

38 HPV DNA HPV HPV DNA

39 HPV HPV luminex

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