30 ml polystyrene 4 mm ph 0.1 mg blender M -cm D. pulex D. magna 20 L 2 20
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1 NIEA B901.14B Daphnia 48 lethal concentration 50%, LC 50 acute toxic unit, TU a Daphnia pulex Daphnia magna L 1 20
2 30 ml polystyrene 4 mm ph 0.1 mg blender M -cm D. pulex D. magna 20 L 2 20
3 1. 18 L 2. 2 L 18 L % v/v NIEA W103 NIEA W104 NIEA W ml
4 2 10% v/v 1 3 A B. 10% v/v 1 C. 2 D. 1 E. 3 F mg/l 3.0 mg/l range - finding test ml ± 2 16 ±
5 definitive test % 80% 60% 40% 20% 100 ml 2. ph ph ml ml 100% ± 2 16 ± ph 48 LC = 20 4 = % LC 50 graphic method probit method Spearman - Karber method trimmed Spearman - Karber 5 20
6 method 48 TU a 1. TU a LC 50 TU a = 100% 48 LC % 48 LC 50 > 100% TU a < % 48 LC 50 < 20% TU a > LC 50 TU a 10% g/l 5 50% 50% LC 50 coefficient of variation, CV CV 50% LC SD 2 SD 3 SD
7 SD SD 3 D. magna 48 LC g/l 12.6% n = 5 U.S. EPA, Methods for Measuring the Acute Toxicity of Effluents and Receiving Waters to Freshwater and Marine Organisms, EPA-821-R , American Public Health Association, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 22 nd Edition, Part 8000, OECD, Guidelines for the Testing of Chemicals, Test No. 202: Daphnia sp. Acute Immobilisation Test, Ephippium 7 20
8 mg/l NaHCO 3 MgSO 4 7H 2 O KCl CaSO 4 2H 2 O mg CaCO 3 /L mm Daphnia magna 8 20
9 0.5 mm Daphnia magna 9 20
10 LC
11 L 4 L ± 2 16 ± L mg/l A B C 1 ml/l 1. A 6.3 g 2.6 g 0.5 g 500 ml ml 7 2. B 15 g 5 g 5 g 1 L 7 3. C g 1 L 1 2 L 11 20
12 ml g 1 L ml g 300 ml 4. NIEA B g/ 1L /ml 1.5 ml/l ± 2 16 ±
13 LC % 50% % 1. probit.exe 2. probit.exe 1 2 Chi - square test for heterogeneity LC 50 Chi - square for heterogeneity (calculated) tabular value at 0.05 level LC Overflow % 60% 2. probit.exe LC 50 56% TU a
14 % % 100% 1. tsk.exe 2. tsk.exe 3 4 SPEARMAN - KARBER TRIM LC 50 1 SPEARMAN - KARBER TRIM 0% 2 SPEARMAN - KARBER TRIM 0% % 100% 2. tsk.exe SPEARMAN - KARBER TRIM 20.51% 2 LC 50 92% TU a % 50% 14 20
15 1. 1 p 0 5 p 1 p 2 p 5 p 0 p 5 2 p 1 p 2 p 3 p 0 p 4 p 5 p 0 p 1 p 2 p 3 p 0 p 3 p 0 p 3 p s 0 p s 1 p s s 2 p 3 p 0 p 1 p 2 p 3 / p s 0 a s p i p i p s 0 / 1 p s 0 p a i i p s i i p s % 50 % LC % 0% 0% 0% 100% 100% 2. p 0 p 3 p 0 p % 1.25% 1.25% 1.25% 100% 100% 3. p 0 s 0 0% 0% 0% 0% 100% 100% p 0 s
16 5 60 % 80 % 50 % % LC 50 69% TU a % % % % %
17 EPA PROBIT ANALYSIS PROGRAM USED FOR CALCULATING LC/EC VALUES Version 1.5 Do you wish abbreviated (A) or full (F) input/output? a Output to printer (P) or disk file (D)? d File name for output? Test1 Title? Test1 Number responding in the control group =? 0 Number of exposure concentrations, exclusive of controls? 5 Input data starting with the lowest exposure concentration Concentration =? 20 Number responding =? 0 Number exposed =? 20 Concentration =? 40 Number responding =? 3 Number exposed =? 20 Concentration =? 60 Number responding =? 9 Number exposed =? 20 Concentration =? 80 Number responding =? 20 Number exposed =? 20 Concentration =? 100 Number responding =? 20 Number exposed =? 20 Number Conc. Number Resp. Number Exposed Do you wish to modify your data? n The control response = 0 Do you wish to modify it? n Output stored in Test1 1 probit 17 20
18 EPA PROBIT ANALYSIS PROGRAM USED FOR CALCULATING LC/EC VALUES Version 1.5 Test1 Proportion Observed Responding Number Number Proportion Adjusted for Conc. Exposed Resp. Responding Controls Chi - Square for Heterogeneity (calculated) = Chi - Square for Heterogeneity (tabular value at 0.05 level) = Test1 Estimated LC/EC Values and Confidence Limits Exposure 95% Confidence Limits Point Conc. Lower Upper LC/EC LC/EC probit 18 20
19 TRIMMED SPEARMAN-KARBER METHOD. VERSION 1.5 ENTER DATE OF TEST: ENTER TEST NUMBER: WHAT IS TO BE ESTIMATED? (ENTER L FOR LC50 AND E FOR EC50) L ENTER TEST SPECIES NAME: ENTER TOXICANT NAME: ENTER UNITS FOR EXPOSURE CONCENTRATION OF TOXICANT: % ENTER THE NUMBER OF INDIVIDUALS IN THE CONTROL: 20 ENTER THE NUMBER OF MORTALITIES IN THE CONTROL 1 ENTER THE NUMBER OF CONCENTRATIONS (NOT INCLUDING THE CONTROL; MAX = 10) 5 ENTER THE 5 EXPOSURE CONCENTRATIONS (IN INCREASING ORDER): ARE THE NUMBER OF INDIVIDUALS AT EACH EXPOSURE CONCENTRATION EQUAL(Y/N)? Y ENTER THE NUMBER OF INDIVIDUALS AT EACH EXPOSURE CONCENTRATION: 20 ENTER UNITS FOR DURATION OF EXPERIMENT (ENTER H FOR HOURS, D FOR DAYS, ETC.): ENTER DURATION OF TEST: 48 ENTER THE NUMBER OF MORTALITIES AT EACH EXPOSURE CONCENTRATION: WOULD YOU LIKE THE AUTOMATIC TRIM CALCULATION(Y/N)? Y 3 tsk 19 20
20 DATE: TEST NUMBER: DURATION: 48 TOXICANT : SPECIES: RAW DATA: Concentration Number Mortalities (%) Exposed SPEARMAN-KARBER TRIM: 20.51% SPEARMAN-KARBER ESTIMATES: LC50: % LOWER CONFIDENCE: % UPPER CONFIDENCE: NOTE: MORTALITY PROPORTIONS WERE NOT MONOTONICALLY INCREASING. ADJUSTMENTS WERE MADE PRIOR TO SPEARMAN-KARBER ESTIMATION WOULD YOU LIKE TO HAVE A COPY SENT TO THE PRINTER(Y/N)? 4 tsk (%) 5 20
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