35(4) : MATE 343, Zn Zn [6] Zn SbMATE, Zn pyes2-sbmate-gfp pyes2-, Zn GFP YK44,, GFP, SbMATE, Zn, 1.2.4, YK44-pYES2 YK44-pYES2- SbMATE, Zn MATE
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- 镕巴 汪
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1 J.SHANXIAGRIC,UNIV.(NaturalScience Edition) ( )2015,35(4): MATE 1,2,3 1,2,, 1 1 1,2,, (1., ;2., ; 3., ) : Zn, Sb04g031980,, MATE, SbMATE Zn, SbMATE,,, SbMATE,SbMATE Zn 2+, SbMATE Zn 2+ : ;MATE; ; :Q78;S514 :A : (2015) DOI: /j.cnki.issn CloningofMATEGenefromSorghum andanalysisofheavymetaltoleranceinyeast ZhangPing 1,2,3,ZhangYuan 1,2,WangHuichun 1,Wang Wenying 1,XuJin 1,2 (1.Colege of Life Science and Geography,Qinghai Normal University,Xining Qinghai ,China; 2.Xishuangbanna Tropical Botanical Garden,Chinese Academy of Sciences,Kunming Yunnan ,China; myof Sciences,Urumqi,Xinjiang,830011,China) 3.State Key Laboratoryof Desertand OasisEcology,XinjiangInstituteof Ecology and Geography,Chinese Acade- Abstract:AZn-responsivegene,Sb04g031980,wasobtainedbythedeepsequencingofdiferentialgeneexpressionanal- ysisinsorghum bicolor.thesequenceanalysisshowedthatthegeneencodeda MATEsubfamilytransporter,named SbMATE.Forelucidatingthefunctionofthegene,theyeast-expressedplasmidswithSbMATE wereconstructedand transferredintoheavymetalsensitiveyeastmutantcels.thesubcelularlocalizationanalysisbythefused-gfpprotein expressionshowedthatsbmate waslocalizedinvacuolarofyeastcel.furtherstudyaboutthegrowthpaternofsb- MATE-expressedyeastindicatedthatoverexpressionofSbMATEimprovedZn 2+ toxicityresistanceintheyeastcels, suggestingthatsbmateplaysaroleinznaccumulationandtoleranceinplant. Keywords:Sorghum bicolor;mate;genecloning;yeastexpression. MATE (multidrugandtoxiccom-, poundextrusiontransporter),, [1] 56 Cu Fe Mn MATE, 50 Mo Ni Zn, MATE [2] [4,5] MATE,,, Zn,MATE Zn 200 mg kg -1 [3] : : : (1987-), ( ),,, : * :, Tel: ; @qq.com;, Tel: ; xujin@xtbg.ac.cn : ( , ); (C ); ( )
2 35(4) : MATE 343, Zn Zn [6] Zn SbMATE, Zn pyes2-sbmate-gfp pyes2-, Zn GFP YK44,, GFP, SbMATE, Zn, 1.2.4, YK44-pYES2 YK44-pYES2- SbMATE, Zn MATE SbMATE 100uL 10 mlsd-ura (2%, ) + CdCl 2 (0.01~0.05 mmol L -1 ) Zn Zn ZnCl 2 (0.04~0.20mmol L -1 ) CoCl 2 (0.1~ 0.5mmol L -1 ),30,250r min -1, 36h nm, 3, 1.1 3, BTx623 2 YK44 (ura3-52his3-200,δzrc,δcot1,matingtypeα) Zn/Cd/Ni/ 2.1 SbMATE Co, Dietrich H.Nies pyes2 GAL1, SbMATE 1.2 Sb04g031980, SbMATE 1704bp, DNAman, ( 1), (DGE ), Zn 1704bp ORF, 567, MATE, 53.9kD MATE Sb04g Zn,, 88~248bp 310~472bp SbMATE NCBI SbMATE, Treeview MATE, SbMATE 1.2.2, MATE, Hind I/BamHI,, 90% pyes2-sbmate pyes2-sbmate-,clustalw GFP pyes2-gfp ( 2) GRMZM2G Si016794m MATE YK44, 98% MATE, 3,SbMATE PCR SD-ura 1d,OD , Zn,,, Zn MATE (Sb04g031980) GenBankBlast (Sb04g031980) MATE YPD (1% 2% Sb06g %,pH5.8),
3 344 山 西 农 业 大 学 学 报 自然科学版 图 1 高粱 SbMATE Sb04g031980 基因及编码蛋白 F 1 Gnandp r o t ns so fsbmate Sb04g031980 qunc g 2015
4 35 4 张苹等 高粱 MATE 基因的克隆及在酵母中的重金属耐受性分析 345
5 346 山 西 农 业 大 学 学 报 自然科学版 图 2 高粱 MATE 基因编码的氨基酸序列与其他植物 MATE 基因编码氨基酸序列比较 F 2 Compa r a t vana l s so fp r o t ns o fsbmateandt h rp l an t MATEs y qunc g 2015
6 35(4) : MATE MATE Fig.3 PhylogenetictreeofSorghum MATEprotein 2.2 pyes2-sbmate pyes2-sbmate-gfp MATE Hind I/BamHI, pyes2 P GAL1, pyes2-sbmate- GFP pyes2-sbmate, SbMATE 4, PCR,,, Sb- 4 pyes2-sbmate pyes2-sbmate-gfp pyes2-gfp Fig.4 VectorprofileofpYES2-SbMATE,pYES2-SbMATE-GFP andpyes2-gfp
7 348 ( ) SbMATE 5,SbMATE YK44-pYES2-SbMATE-GFP, SbMATE 5 SbMATE Fig.5 SubcelularlocalizationofSbMATEinyeastcel 2.4 SbMATE pyes2, 0.05~0.10 mmol L -1 ZnCl 2 Zn Co Ni Cd SbMATE 6,, Ni Co Cd SbMATE,SbMATE,SbMATE Zn 6 SbMATE Fig.6 HeavymetaltoleranceanalysisofSbMATEinyeastcels 3 TE ALF5 (At3g23560) [1] ; TT12(At3g59030),MATE, [2], MA-,
8 35(4) : MATE 349,MATE,, FRD3 (At3g08040), YK44 Zn, Fe, Fe [3] MATE, SbMATE,,,OsFRDL4 Al Zn,, Al Zn, MATE AltSB, Al, [7~10] Zn, Zn, Zn MATE SbMATE, GFP Zn [1]DienerAC,GaxiolaRA,FinkGR.ArabidopsisALF5,amultidrugefluxtransportergenefamily member,confersresistancetotoxins [J].PlantCel,2001,13(7): [3],,,.MATE [J].,2014,29(4): [4],,,. [J].,2007,18(7): [5],,,. [J].,2007,27(2): [6],,,. [J].,1993,25(6): [2]DebeaujonI,PeetersAJ,Leon-KloosterzielKM,etal.TheTransparentTesta12 geneofarabidopsisencodesa multidrugsecondary transporter-likeproteinrequiredforflavonoidsequestrationinvacuolesoftheseedcoatendothelium [J].PlantCel,2001,13(4):853- [7]MagalhaesJV,LiuJ,Guimar esct,etal.ageneinthemultidrugandtoxiccompoundextrusion(mate)familyconfersaluminumtol- eranceinsorghum [J].NatGenet,2007,39(9): [8]XuJ,SunJH,DuLG,etal.ComparativetranscriptomeanalysisofcadmiumresponsesinSolanum nigrum andsolanum torvum [J].New Phytol,2012a,196: [9]XuJ,ZhuYY,GeQ,etal.ComparativephysiologicalresponsesofSolanum nigrum andsolanum torvum tocadmiumstress [J].New Phytol,2012b,196: quencing[j].jintegrativeagriculture,2013,12(11): ( : ) ( 341 ) [12]BaconE,MorreDJ,PlasmamembraneNADH oxidaseofmaizerootsrespondstogravityandimposedcentrifugalforces [J].Plant physiologyandbiochemistry,2001,39(6): ): [10]ShiDQ,ZhangY,MaJH,etal.IdentificationofZincDeficiency-Responsive MicroRNAsinBrassicajuncea RootsbySmalRNA Se- [13]GarciaC,HicksC,MorreDJ,PlasmamembraneNADHoxidaseisgravi-responsive[J].Plantphysiologyandbiochemistry,1999,37(7- [14]PoovaiahBW,YangT,vanLoonJJ,Calcium/calmodulin-mediatedgravitropicresponseinplants[J].Journalofgravitationalphysiolo- gy,2002,9(1): [15]TauchiH,MatsumotoE,IijimaK,etal,EfectofgravitystressonfidelityofDNAdouble-strandbreakrepair[J].Biologicalsciences inspace,2003,17(3): [16]Pedroso MC,DurzanDJ,EfectofdiferentgravityenvironmentsonDNAfragmentationandceldeathinKalanchoeleaves[J].Annals ofbotany,2000,86(5): ( : )
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