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曰讨卫
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1 生态学杂志 Chinese Journal of Ecology 摇 2010,29(6): 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇 * 大连沿海鼠尾藻野生种群遗传结构的 ISSR 分析王摇 ( 1 1,2 萌摇 1,2 李世国摇 1,2 侯和胜摇 3** 王丽梅辽宁师范大学生命科学学院, 辽宁大连 ; 2 辽宁省植物生物技术重点实验室, 辽宁大连 ; 3 辽宁省海洋水产科学研究院, 辽宁大连 ) 摘摇要摇为了解大连沿海鼠尾藻野生种群的遗传结构, 采用 ISSR 分子标记技术对 5 个采自辽宁大连和 1 个采自山东蓬莱的野生鼠尾藻种群进行遗传多样性和亲缘关系分析利用筛选出的 14 个 ISSR 引物共扩增得到 160 个位点, 其中多态性位点 145 个, 多态位点个数占 90 郾 62% 6 个种群的多态位点百分率 ( PPB) 分布为 41 郾 25% ~ 64 郾 38%, 基因多样性指数 (H) 为 0 郾 2321 ~ 0 郾 3464, 而 Shannon 信息指数 (I) 则为 0 郾 1585 ~ 0 郾 2333, 大连沿海鼠尾藻种群的遗传多样性水平高于蓬莱种群分子变异分析 (AMOVA) 结果表明 : 在总的遗传变异中, 种群内部变异为 5 郾 66%, 种群之间为 64 郾 34% 基因流 N m = 0 郾 7837, 各种群间存在有限的基因交流 UPGMA 聚类结果显示, 大长山 (DC) 董坨子 (DT) 和将军石种群 (JJ) 聚为一支, 亲缘关系较近, 再与石城岛 (SC) 和盐场种群 (YC) 聚类, 最后与蓬莱种群 (PL) 聚类在一起鼠尾藻的生殖方式以及生长环境的差别可能是其种群遗传分化的主要原因关键词摇鼠尾藻 ; ISSR; 遗传多样性 ; 亲缘关系中图分类号摇 Q346 摇文献标识码摇 A 摇文章编号摇 (2010) Genetic structure of wild Sargassum thunbergii populations along Dalian coast: An ISSR analysis. WANG Meng 1,2, LI Shi 鄄 guo 1,2, HOU He 鄄 sheng 1,2, WANG Li 鄄 mei 3 ( 1 College of Life Sciences, Liaoning Normal University, Dalian , Liaoning, China; 2 Key Laboratory of Plant Biotechnology of Liaoning Province, Dalian , Liaoning, China; 3 Liaoning Ocean and Fishery Science Research Institute, Dalian , Liaoning, China). Chinese Journal of Ecology,2010,29(6): Abstract: In order to understand the genetic structure of wild Sargassum thunbergii populations along Dalian coast, an inter 鄄 simple sequence repeat (ISSR) analysis was made on the genetic di 鄄 versity and genetic relationships of six geographic populations of S. thunbergii, including five populations DC, DT, JJ, SC and YC from Dalian coast and one population PL from Penglai. 160 ISSR loci tested, 145 (90 郾 62% ) were polymorphic with 14 different ISSR primers. The values of percentage of polymorphic bands ( PPB), Shannon 爷 s index ( I), and Nei 爷 s gene diversity (H) were 41 郾 25% - 64 郾 38%, 0 郾郾 3464, and 0 郾郾 2333, respectively. Dalian populations had higher genetic diversity than Penglai population. The analysis of molecular vari 鄄 ance ( AMOVA) showed that in the total genetic variation, the variation within populations was 35 郾 66%, and the variation among populations was 64 郾 34%. The value of gene flow ( N m ) among the six populations was 0 郾 7837, suggesting a limited gene flow among the populations. The UPGMA tree based on Nei 爷 s genetic identity showed that population DC was clustered with populations DT and JJ, then with populations SC and YC, and finally with PL. All the results suggested that different reproductive mode and different growth environment might have critical roles in the genetic differentiation of S. thunbergii populations. Key words: Sargassum thunbergii; ISSR; genetic diversity; genetic relationship. * 辽宁省科学技术计划重大项目 ( ) 辽宁省海洋与渔业科研项目 (200801) 和大连市科技兴海示范工程资助项目 (2007BNC065) ** 通讯作者 E 鄄 mail: meizi4678@ sina. com 收稿日期 : 2009 鄄 11 鄄 02 摇摇接受日期 : 2010 鄄 03 鄄 30

2 1182 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇生态学杂志摇第 29 卷摇第 6 期摇摇摇鼠尾藻 ( Sargassum thunbergii) 隶属于马尾藻属 (Sargassum), 为暖温带海藻, 是中国沿海习见海藻种类, 北起辽东半岛南至雷州半岛海域均有分布, 对温度光照和盐度等生长因素变化的适应能力极强 ( 韩晓弟和李岚萍,2005) 鼠尾藻种群是海藻场建设的主要组成部分, 在近海海域生态系统修复与保护方面发挥了重要作用, 而且在水产养殖医药保健及化学工业等行业中也具有广阔的开发前景由于鼠尾藻是海参等海珍品养殖业的优质饵料, 近年来人们掠夺式的采集方式使得鼠尾藻种质资源以惊人的速度锐减, 加之近海沿岸海水污染形势的加剧, 鼠尾藻的生存空间也受到了巨大的威胁因此, 开展鼠尾藻遗传标记的研究将对保护和合理利用鼠尾藻资源维持鼠尾藻种群的遗传多样性维护海岸带生态系统稳定性等方面提供基础条件和保障简单序列重复区间扩增多态性 (inter 鄄 simple se 鄄 quence repeat, 简称 ISSR) 是 1994 年创建的一种分子标记技术 (Zietkiewicz et al.,1994) ISSR 已广泛运用于遗传多样性分析 DNA 指纹图谱绘制品种鉴定进化及分子生态学研究中 ( Adams et al., 2003; 牛东红等,2009) 目前关于鼠尾藻的研究主要集中在生理生态 ( 姜宏波等,2009) 繁殖方式( 王飞久等,2006; 詹冬梅等,2006) 与育苗技术 ( 张泽宇等,2007; 邹吉新等,2005) 等方面, 对鼠尾藻种群遗传学方面的研究报道较少 (Zhao et al.,2007; 王丽梅等,2009) 本文通过 ISSR 技术分析了 5 个大连海域和 1 个山东蓬莱海域野生鼠尾藻种群的遗传结构, 在分子水平上探讨了处于不同海域环境的鼠尾藻种群遗传多样性差异和遗传分化, 以期为鼠尾藻种质资源保护养殖和遗传育种工作提供科学的理论依据液 (20 mmol L -1 EDTA, ph 8 郾 0;100 mmol L -1 Tris 鄄 HCl ph 8 郾 0;3% CTAB;1 郾 4 mol L -1 NaCl;1% PVP), 振荡混匀 65 益水浴加热 1 h, 每 10 min 颠倒混匀 1 次加 330 滋 l 2 郾 5 mol L -1 KAc ( ph = 4 郾 7), 混匀, 冰上静置 5 min 10 益 r min -1 离心 10 min 后, 取上清, 加 300 滋 l 氯仿, 轻轻颠倒抽提 10 min, 冰上静置 5 min 10 益 r min -1 离心 15 min 后, 取上清, 重复上一步骤加 1 ml 预冷的异丙醇, - 20 益沉淀 30 min 10 益 r min -1 离心 10 min 后, 弃上清, 加 1 ml 75% 乙醇, 颠倒洗涤数次室温干燥 30 滋 l 灭菌水溶解,-20 益保存琼脂糖凝胶电泳检测提取 DNA 的质量, 紫外分光光度计法计算所得 DNA 的浓度和纯度 1 郾 3 摇 ISSR 引物和 PCR 反应 ISSR 引物由大连宝生物公司合成, 从中选取扩增条带清晰重复性较好的 14 个引物 ( 表 1) 用于 PCR 扩增扩增反应在宝生物 TP600 PCR 扩增仪上进行, 用于 PCR 反应的试剂均购于大连宝生物公司 (TAKARA) 根据预实验结果及相关文献 ( Zhao et al.,2007), 确定退火温度和反应体系优化后的 PCR 反应体系为 20 滋 l, 其中 rtaq 聚合酶 1 U,dNTP 0 郾 2 mmol L -1, 引物 0 郾 5 滋 mol L -1,10 伊 Buffer 2 滋 l 模板 DNA 5 ~ 10 ng PCR 扩增反应程序为 :94 益预变性 5 min, 之后进行 40 个循环 (94 益变性 30 s, 退火 45 s,72 益延伸 2 min), 最后 72 益延伸 10 min 1 郾 4 摇 PCR 产物鉴定 PCR 产物经 1 郾 5% 琼脂糖凝胶电泳分离, 以 DL2000 Marker 作为相对分子质量标准溴化乙锭 (EB) 染色后经柯达凝胶成像系统记录结果 1 摇材料与方法 1 郾 1 摇材料来源实验材料采自辽宁大连及山东蓬莱沿海 6 个不同海域地点 ( 图 1) 采集海区为海岸线长 500 ~ 1000 m, 宽为 100 ~ 500 m 的潮间带, 采用常规定点法随机选取 10 个非假根繁殖的个体, 置于冰盒中运回实验室,-80 益保存备用 1 郾 2 摇基因组 DNA 提取基因组 DNA 提取流程参照李世国等 (2009) 的方法, 稍加改动每个样品取 0 郾 15 g 用液氮研磨成粉末, 转移至 1 郾 5 ml 离心管中, 加 1 ml CTAB 提取图 1 摇鼠尾藻种群样品采集地点示意图 Fig. 1 摇 Map of Liaodong Peninsula showing locations of the Sargassum thunbergii populations

3 王摇萌等 : 大连沿海鼠尾藻野生种群遗传结构的 ISSR 分析郾 5 摇数据分析将同一分子量水平上每一个扩增产物条带视为一个分子标记, 代表一个引物的结合位点, 针对某一条带而言有冶记做 1 冶无冶记做 0 冶, 只记录清晰易辨的扩增带将统计的 ISSR 多态性数据输入 Excel 表格形成数据矩阵应用 POPGENE 1 郾 32 (Yeh et al.,1997) 软件对全部种群和各单个种群分别进行如下遗传参数分析 : 多态位点百分率 ( per 鄄 centage of polymorphic bands,ppb) 观测等位基因数 (number of alleles per locus,n a ) 有效等位基因数 (effective number of alleles per locus,n e ) Shannon 信息指数 (Shannon 爷 s information index,i) 种群总基因多样性 (total gene diversity,h t ) 种群内基因多样性 (gene diversity within populations,h s ) Nei 的基因多样性 (H) 各种群间的遗传分化指数( coefficient of population differentiation,g st ) (G st = 1-H s / H t ) (Slat 鄄 kin & Barton,1989) Nei(1978) 的遗传距离 ( genetic distance,d) 种群间的基因流 N m 通过公式 N m = (1- G st ) / 2G st 间接推算利用 NTSYSpc 2 郾 1 ( Rohlf, 2000) 软件对所有种群的 60 个个体进行 UPGMA ( Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean) 聚类分析, 生成聚类图 ; 采用 Arlequin(Schnei 鄄 der et al.,2000) 软件对 6 个群体进行分子变异分析 (Analysis of Molecular Variance,AMOVA), 计算遗传变异来源及遗传分化系数 (F st ) 2 摇结果与分析 2 郾 1 摇 ISSR 扩增结果共筛选出 14 条扩增产物条带清晰稳定性和重复性好的引物用于 6 个群体共 60 份样品的 PCR 扩增 ( 表 1) 图 1 为引物 ISSR-855 对所有种群个体扩增结果的电泳图谱 2 郾 2 摇遗传多样性分析所选 14 条引物在 60 份样品中共扩增出条带 160 条, 每种引物分别产生 7 鄄 14 条扩增条带, 其中多态位点 145 个, 多态位点个数占 90 郾 62 % 6 个种表 1 摇 14 个 ISSR 引物在 60 个鼠尾藻样品中的扩增结果 Tab. 1 摇 Amplification results of six Sargassum thunbergii populations with 14 ISSR primers 引物编号引物序列退火温度 ( 益 ) 扩增条带数多态性条带数 ISSR 鄄 807 AGAGAGAGAGAGAGAGT ISSR 鄄 808 AGAGAGAGAGAGAGAGC ISSR 鄄 810 GAGAGAGAGAGGAGAGT ISSR 鄄 811 GAGAGAGAGAGAGAGAC ISSR 鄄 823 TCTCTCTCTCTCTCTCC ISSR 鄄 828 TGTGTGTGTGTGTGTGA ISSR 鄄 873 GACAGACAGACAGACA ISSR 鄄 880 GGAGAGGAGAGGAG ISSR 鄄 890 GGAGAGGAGAGGAGA ISSR 鄄 889 BHBGAGAGAGAGAGAGA ISSR 鄄 855 ACACACACACACACACYT ISSR 鄄 835 AGAGAGAGAGAGAGAGC ISSR 鄄 834 AGAGAGAAGGAGAGAGT ISSR 鄄 849 GTGTGTGTGTGTGTGTYA Y = (C,T); H = (A,T,C); B = (T,C,G) 图 2 摇引物 855 对鼠尾藻 6 个种群的 ISSR 扩增谱带 Fig. 2 摇 ISSR bands of six Sargassum thunbergii populations amplified with primer 855 M:DL2000 marker

4 1184 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇生态学杂志摇第 29 卷摇第 6 期摇表 2 摇鼠尾藻种群遗传多样性参数 Tab. 2 摇 Genetic diversity of Sargassum thunbergii popula 鄄 tions 种群等位基因数 N a 有效等位基因 Ne Nei 基因多样性 H Shannon 信息指数 I 多态位点百分率 PPB(% ) SC 1 郾郾郾郾郾 25 DC 1 郾郾郾郾郾 12 DT 1 郾郾郾郾郾 50 JJ 1 郾郾郾郾郾 00 YC 1 郾郾郾郾郾 38 PL 1 郾郾郾郾郾 25 Total 0 郾郾郾郾郾 62 群内部的多态位点百分率 ( PPB) 分布于 41 郾 25% ~ 64 郾 38%, 基因多样性指数 (H) 和 Shannon 信息指数 (I) 分布于 0 郾 1585 ~ 0 郾 2333 和 0 郾 2321 ~ 0 郾 3464, 其中蓬莱 (PL) 种群各相关遗传指数均为最低 ( 表 2) 2 郾 3 摇种群间遗传分化程度的比较分析 Popgene 1 郾 32 软件分析鼠尾藻种群间的遗传分化数据表明, 鼠尾藻所有种群 Nei 总基因多样性 (H t ) 为 0 郾 3224, 种群内基因多样性 ( H s ) 为 0 郾 1968 根据 Nei 总基因多样性 ( H t ) 和种群内基因多样性 (H s ) 计算的种群间遗传分化系数 ( G st ) 为 0 郾 3895 AMOVA 分析结果 ( 表 3) 平均 F st 值为 0 郾 3566, 这与 Nei 遗传多样性分析所得到的遗传分化系数基本一致上述结果说明,6 个野生鼠尾藻种群内遗传变异大于种群间遗传变异根据公式 N m = (1 -G st ) / 2G st 计算种群间的基因流值为 0 郾 7837, 值 <1, 反映出各种群之间的基因流动水平较低 (Bohonak,1999) 2 郾 4 摇鼠尾藻种群的聚类分析为了进一步分析种群之间的遗传分化程度, 计算了 Nei 遗传距离 (D) 和遗传一致度 (I), 两两种群间遗传距离 D 为 0 郾 1131 ~ 0 郾 3305, 遗传相似度为 0 郾 7186 ~ 0 郾 9128, 其中大长山种群 (DC) 和董坨子种群 (DT) 的 D 值最低, 蓬莱种群 (PL) 和大长山种群 (DC) 的 D 值最高 ( 表 4) 表 3 摇种群间和种群内分子变异的 AMOVA 分析结果 Tab. 3 摇 Analysis of molecular variance ( AMOVA) within and among Sargassum thunbergii populations 变异来源自由度方差总和变异组分变异百分率 (% ) 种群间郾郾郾 66 种群内郾郾郾 34 Total 郾郾郾 00 表 4 摇鼠尾藻种群间遗传距离和遗传分化 Tab. 4 摇 Genetic distance and genetic differentiation of Sar 鄄 gassum thunbergii populations 种群 SC JJ DC DT YC PL SC 0 郾郾郾郾郾 7740 JJ 0 郾郾郾郾郾 7567 DC 0 郾郾郾郾郾 7186 DT 0 郾郾郾郾郾 7402 YC 0 郾郾郾郾郾 7335 PL 0 郾郾郾郾郾 3099 对角线以下为遗传距离, 对角线以上为遗传分化摇摇运用 NTSYSpc 2 郾 1 软件以非加权配对算数平均法 (UPGMA) 进行聚类分析, 构建个体间亲缘关系聚类图 ( 图 3) 种群间遗传分化遗传距离和聚类结构显示, 大长山种群 (DC) 和董坨子种群 ( DT) 与将军石种群 (JJ) 亲缘关系最近, 首先聚为一支, 之后再与石城岛种群 (SC) 盐场种群 (YC) 聚类, 最后与蓬莱种群 (PL) 聚在一起铜藻 (Sargassum horneri) 对照个体与鼠尾藻种群亲缘关系最远 3 摇讨摇论种群遗传多样性分析实验结果的可靠性受取样策略的直接影响鼠尾藻具有无性繁殖的特性, 因此在取样时种群内每两个位点的距离都控制在 100 m 以上以保证不对遗传变异完全相同的个体重复取样 Marshall(1975) 等认为, 一个种群内最佳的取样数要求包括 95% 以上基因频率以及大于 0 郾 05 的等位基因, 因此在不了解某一物种生物学特性和遗传背景的情况下, 对一个种群进行资源保护的随机取样数目可以确定在 20 ~ 30 个 ( 金燕和卢宝荣, 2003) 但是, 目前鼠尾藻野生资源受到较大的人为影响, 辽宁大连沿海资源量已经相当贫乏从实验中运用的 14 个引物的扩增图谱来看, 每个种群都表现出一定的特征条带和共有带, 每个种群内部个体能够很好的聚类, 可以反映该种群的基本遗传关系和规律因此, 在个体样品数量受到限制的情况下,10 个样本也能够显示出该种群的基本遗传特征, 可以用于遗传关系分析, 在已报道的其他海藻遗传多样性研究中也有类似取样数目的应用 ( 张全胜等,2008; 李世国等,2009) 物种的遗传多样性水平在一定程度上体现着这个物种适应环境的能力, 制约着物种适应性进化的水平, 同时为其资源现状和保护价值的评估提供非常重要的信息 ( Hogbin & Peakall,1999) Zhao 等 (2007) 报道了利用 RAPD 和 ISSR 两种分子标记技

5 王摇萌等 : 大连沿海鼠尾藻野生种群遗传结构的 ISSR 分析 1185 图 3 摇鼠尾藻种群 60 个个体间 Nei 遗传距离的 UPGMA 聚类图 Fig. 3 摇 UPGMA dendrogram for Sargassum thunbergii populations based on Nei 爷 s genetic distance 1 ~ 10 为庄河石城岛种群,11 ~ 20 为瓦房店将军石种群,21 ~ 30 为长海大长山种群,31 ~ 40 为旅顺董坨子种群,41 ~ 50 为旅顺盐场种群,51 ~ 60 为山东蓬莱种群,61 ~ 62 为铜藻对照个体术对山东半岛沿海 4 个不同采集地点 ( 青岛荣成威海和烟台 ) 的鼠尾藻样品进行的遗传多样性分析, 其结果显示, 山东沿海鼠尾藻野生种群内的遗传差异和多态性较低, 这与本研究中使用的蓬莱种群的结果一致与其相比,5 个大连野生鼠尾藻种群的遗传多样性水平较高 ( 表 2), 山东沿海鼠尾藻种群出现种质退化的风险较大, 作为养殖生产中的种菜来源不如大连地区野生种群优势明显根据我们对大连地区鼠尾藻资源长期实地调查的结果, 上述几个地点维持种群生物量的主要方式是假根繁殖 ( 营养繁殖 ), 有性繁殖方式占到极少部分, 影响到了种群间的基因交流计算所得基因流为 0 郾 7837, Wright(1951) 认为如果 N m <1, 则说明基因流动较小, 遗传漂变可以导致种群间明显的遗传分化地理距离造成的地理隔离因素及生长海域环境的差别, 导致了山东蓬莱鼠尾藻种群和大连沿海野生种群遗传多样性上的较大差异除上述因素外, 生活史特征种群布局的性质种群扩散的物理障碍以及干扰其种群分布的一些环境因子也会影响鼠尾藻种群的遗传结构特征采集自旅顺盐场 ( YC) 的鼠尾藻种群遗传多样性水平最高, 究其原因, 可能是盐场海域周围海水的高盐环境影响到了鼠尾藻种群的生长和繁殖, 进而使其遗传结构发生了较大的改变, 与其他群体相比亲缘关系较远这一现象在同属于马尾藻属的海黍子 (Sargassum muticum) 生长和繁殖研究中有所报道 ( Steen,2004),2 种藻类的生活史和生长繁殖对环境的要求十分相似可以推论, 鼠尾藻的生殖方式以及生长环境的差别可能是其种群遗传分化较大的主要原因时至今日, 鼠尾藻养殖还没有形成规模化, 仅山东和辽宁大连地区有小范围的试养, 年产量较低, 对种菜选择的依赖性较大, 养殖技术不成熟与海带裙带菜等大型褐藻不同, 鼠尾藻没有世代交替的生活史, 缺少配子体阶段, 至今没有实现室内人工种质的长期保存, 因此每年需要采集大量种菜维持年度养殖产业的需求, 导致了野生鼠尾藻资源日趋枯竭如何充分利用现有的野生鼠尾藻资源, 在充分了解其遗传背景的基础上进行良种培育, 提高种质的适应性和繁殖力, 是海藻科技工作者面临的艰巨任务和努力方向本文结果能为鼠尾藻人工养殖的实现和产业化提供参考

6 1186 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇生态学杂志摇第 29 卷摇第 6 期摇参考文献韩晓弟, 李岚萍鼠尾藻特征特性与利用. 特种经济动植物, 8(1): 27. 姜宏波, 田相利, 董双林, 等鼠尾藻生长藻体成分及其生境的初步研究. 海洋湖沼通报, (2): 姜宏波, 田相利, 董双林, 等温度和光照强度对鼠尾藻生长和生化组成的影响. 应用生态学报, 20(1): 金摇燕, 卢宝荣遗传多样性的取样策略. 生物多样性, 11(2): 李世国, 单体锋, 侯和胜, 等个海带栽培品种自交系后代遗传多样性和亲缘关系的 AFLP 分析. 中国水产科学, 16(2): 牛东红, 李家乐, 冯冰冰, 等缢蛏 6 个种群遗传结构的 ISSR 分析. 应用与环境生物学报, 15 (3): 王飞久, 孙修涛, 李摇锋鼠尾藻的有性繁殖过程和幼苗培育技术研究. 海洋水产研究, 27(5): 1-6. 王丽梅, 戚贵成, 高祥刚, 等中国沿海鼠尾藻遗传多样性分析. 生物技术通报, (S1): 詹冬梅, 李美真, 丁摇刚, 等鼠尾藻有性繁育及人工育苗技术的初步研究. 海洋水产研究, 27(6): 张全胜, 石媛媛, 杨官品, 等我国引种海带和栽培品种 ( 系 ) 来源配子体克隆的 AFLP 分析. 中国海洋大学学报, 38(3): 邹吉新, 李源强, 刘雨新, 等鼠尾藻的生物学特性及筏式养殖技术研究. 齐鲁渔业, 22(3): 张泽宇, 李晓丽, 韩余香, 等鼠尾藻的繁殖生物学及人工育苗的初步研究. 大连水产学院学报, 22(4): Adams RP, Schwarzbach AE, Pandey RN The concord 鄄 ance of terpenoid, ISSR and RAPD markers, and its se 鄄 quence data sets among genotypes: An example from Juni 鄄 perus. Biochemical Systematics and Ecology, 31: Bohonak AJ Dispersal, gene flow and population struc 鄄 ture. Quarterly Reviews of Biophysics, 74: Hogbin PM, Peakall R Evaluation of the contribution of genetic research to the management of the endangered Zie 鄄 ria prostrat. Conservation Biology, 13: Marshall DR, Brown AHD Optimum Sampling Strategies in Genetic Conservation. London: Cambridge University Press. Nei M Estimation of average heterezygosity and genetic distance from a small number of individuals. Genetics, 8: Rohlf FJ NTSYSpc. Numerical Taxonomy and Multivari 鄄 ate Analysis System, Version New York: Exeter Soft 鄄 ware Setauket. Schneider S, Roessli D, Excoffier L Arlequin Version. 2. 0: A Software for Population Genetics Data Analysis. Switzerland: Genetics and Biometry Laboratory, University of Geneva. Slatkin M, Barton NH A comparison of three indirect methods for estimating average levels of gene flow. Evolu 鄄 tion, 43: Steen H Effects of reduced salinity on reproduction and germling development in Sargassum muticum (Phaeophyce 鄄 ae, Fucales). European Journal of Phycology, 39: Wright S The genetical structure of populations. Annals of Eugenics, 15: Yeh FC, Yang RC, Boyle T, et al POPGENE, the user 鄄 friendly shareware for population genetic analysis. Canada: Molecular Biology and Biotechnology Center, University of Alberta. Zhao FJ, Wang XL, Liu JD, et al Population genetic structure of Sargassum thunbergii ( Fucales, Phaeophyta) detected by RAPD and ISSR markers. Journal of Applied Phycology, 19: Zietkiewicz E, Rafalski A, Labuda D Genome finger 鄄 printing by simple sequence repeat ( SSR) 鄄 anchored poly 鄄 merase chain reaction amplification. Genomics, 20: 作者简介摇王摇萌, 女, 1983 年生, 硕士研究生主要从事海藻发育与分子生物学等方面的研究 E 鄄 mail: 163. com 责任编辑摇李凤芹

AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L

AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L 2012 13 2 201-206 Journal of Plant Genetic Resources / 071001 41 SSR 21 SSR 41 52 2 ~ 4 2. 5 Shannon 0. 21 ~ 1. 40 0. 73 5. 54 3 7 9 13. 16% ~ 186. 49% 5. 48 6 11 SSR Genetic Diversity of Peanut Arachis