树脂和填料操作手册

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4 1. t 0 t R t R t 0 t 0 NaNO 2 NaNO 3 k t R t 0 k ' k ' t 0 k t R k K k 0.4k 2030 k 25 V R t R F C ( F C --- ml/min ) V R t R t R t R t 0 V R V R V R 0 t R F C tr(2) ' t R(1) t R(2) tr(1) () t' R(2) k' (2) ( 1.1 ) t' R(1) k' (1) /97/98

5 2. t R 2 N ( ) 1/2 h 2σ σ σ W 1/ /2 h W 1/2 ( 2t 1/2 ) W b N t 5 R.54 W1/ 2 t 16 R N Wb 2 2 W b W 1/2 L H N L H2d P ( d P 10 H20 N5 ) ( d P 5 H10 N10 ) d P 87(V/V): W 1/2 t R N 3. T f h A B 1/10h /97/98

6 B T f AB A T f T f 2 SiOH NH 2 () t R(1) t R(2) 2( tr2 tr1) RS W 1/2(1) W 1/2(2) t t W1 W 2 t W1 t W2 4. K 1 K 3 HPLC W 1/2 t R K 1 t K1 W R(2) 1/ 2(2) t R(1) W 1/ 2(1) K 1 H Hh K3 H K 3 1 K 3 5. L u mm/sec L t 0 H(m) t 0 h A u1 mm/sec A u(1mm/sec) /97/98

7 5 mm 1.0 ml/min 1 mm/sec 2 mm 0.2 ml/min 1 mm/sec 1 mm 50 L/min 1 mm/sec 1 mm/sec 5mm 1mm 6. lnk ablnc b cc b C b lnk acc b abc lnk ablnc b lnk lnk C b C b lnk lnk / D / C b D C b (/) D Dk lnk lnk C A B C b A A D A C b /97/98

8 A B C k B A D C b C b k C b HPLC 1090/ 30min C b C b C b 10k /97/98

9 1 2 3 SFE 90% 50% ( 99.5%) 5ppm 3% FDA Food Additive Regulation 21CFR [2000]56 Amberlite XAD HP /97/98

10 SEC Sephadex LH-20 Toyopearl 1 () ()() 2 3 ph 4 ( )()() 11 80%- 90%- C18 C18 MCI GEL MCI MCI MCI GEL MCI GEL Amberlite FP 5-200mg TSK Toyopearl HW-40 Sephadex LH-20 Toyopearl HW /97/98

11 Petunia integrifolia 1h 5 50 C18 20mL 180mL 1 / 2 PVPhide powder /97/98

12 mm TLC TLC /97/98

13 V ( cm / s) ( ρ ρ ) 2 2gd = 3600η g cm/s2d cmρg/cm3ρo g/cm3ηmpa.s ρρo, o 1 LiChrospher g/cm3LiChrospher g/cm3LiChrospher g/cm3 2.2g/cm3 (ρ/g cm -3 ) η (mpa.s 20 o C) /97/98

14 YMC-Pack AA12S50 C18 Millipore Vantage V2 1 50m 12bar 7bar 2 YMC S50 D40/D Toyopearl Amberchrom & MCI GEL cm cm/h 810 CV 3 80/2070/30 50/50 40cm/h /97/98

15 Sephadex LH-20 Sephadex LH-20 G-25 Pharmadex LH-20 Sephadex LH m 250cm Sephadex LH % 25% 3 1.5ba 0.45um 1-2% 0.45um 12cm/min 1.5ba 1-10cm/h /97/98

16 =/ Sephadex LH-20 =/ Sephadex LH KD 20% 1% um 70um um 103 um 720cm/min 60 cm/min ph ph pH6-8 20%0.04% /97/98

17 ml /g Dimethyl sulphoxide Pyridine Water Dimethylformamide Saline Methanol Methane dichloride Chloroform Propanol Ethanol Isobutanol Formamide Methylene dichloride Butanol Isopropanol Tetrahydrofuran Dioxane Acetone Acetonitrile Carbon tetrachloride Benzene Ethyl acetate Toluene mL/g /97/98

18 Toyopearl Toyopearl TSK-GeL 5PW ph I 1 a Toyopearl TSK-GEL 5PW Toyopearl 0.53bar745psiTSK-GEL 5PW 310bar 45140psi Toyopearl TSK-GEL 5PW Toyopearl 5barTSK-GEL 5PW 20bar Toyopearl TSK-GEL 5PW HPLC PEEK btosoh /97/98

19 4 5L 78L L 2Toyopearl TSK-GEL 5PW Toyopearl Coarse C : 100µm Medium M : 65µm Fine F : 45µm Superfine S : 35µm TSK-GEL 5PW 30µm µm > /97/98

20 c) Toyopearl TSK-GEL TOSOH HIC I SEC Toyopearl HW-40, HW-50, HW-55,HW M Na 2 SO 4, NaNO 3, NaCl 50mM HW-75 Tris IEC Toyopearl DEAE, QAE, SuperQ, CM,SP 1M NaCl 50mM,Tris, Toyopearl MegaCap SP-550 TSK-GEL DEAE-5PW, SuperQ-5PW,SP-5PW HIC Toyopearl Ether, Phenyl, Butyl,Hexyl-650, 2M Na 2 SO 4, (NH 4 ) 2 SO 4 NaCl 50mM PPG-600, Super Butyl-550 TSK-GEL Ether-5PW, Phenyl-5PW AFC 0.5M NaCl 0.1M NaHCO 3 Toyopearl AF-Tresyl AF-Epoxy-650 Toyopearl AF-Formyl-650, AF-Amino-650, 1M NaCl 100mM NaHCO 3 AF-Carboxy-650 Toyopearl AF-Chelate-650, AF-Blue HC M NaCl 0.2M 20mM AF-Red-650 Tris d) 1 2>12 3 Toyopearl 3050 TSK-GEL 5PW /97/98

21 Toyopearl HW-40, HW-50, HW-55, HW-65, HW-75F Toyopearl Ether-650, Phenyl-650,Butyl-650, Super Butyl-550,Hexyl-650, PPG-600, DEAE-650,SuperQ-650, CM-650, SP-650, TSKgel DEAE-5PW, SuperQ-5PW, SP-5PW, Ether-5PW Phenyl-5PW Toyopearl QAE-550C, SP-550C, Toyopearl MegaCap g 1mL /97/98

22 2 µ µ µ µ µ /97/98

23 5L / cm /97/98

24 a 8b Toyopearl 3bar44psi cm /97/98

25 cm Toyopearl /97/98

26 cm / /97/98

27 cm 15 3 Toyopearl B cm/hr TSK-GEL 5PW 20mm 30mm TSK-GEL 5PW Toyopearl TSK-GEL 5PW Toyopearl ÅTSK-GEL 5PW Toyopearl DAC 3bar TSK-GEL 5PW 310bar 15 20bar As < 0.8 As > /97/98

28 SEC IEC HIC AFC Toyopearl S F M I.D.(cm) (/) (/) (/) C (/) µm 30µm I.D. (cm) (/) (/) IEC DAC* ** HIC DAC* ** *DAC = Dynamic Axial Compression >3bar ** = >0.5M NaCl /97/98

29 II 1 a) SEC I510 Toyopearl HW 13 / 1020 b) IEC 510 ph MES HEPES L Tris-Cl ph c)hic 1M3M /97/98

30 ph HIC ph 8 HIC (1.5M 25C) HIC Triton X-100 Tween 20 SDS CHAPS Emulgen 911 CTAB Lubrol PX 310 ph d) AFC Toyopearl AF RedAF Blue-HC 35 Tris 1M 2M 4M 20mM ph /97/98

31 2M 3M 1 2M KCl 3M NaCl 2 1% Triton X-100 / 1M NaSCN / 75% / 4M 0.1M NaOH / 4.2M () 10mM 2 Toyopearl TSK-GEL 5PW 3 SEC M M M Toyopearl Toyopearl IEC 0.51M M M DEAE QAE M M M HIC /97/98

32 0.51M M Toyopearl TSK-GEL 5PW AFC 2 0.5M AF-Heparin 3 SECIEC HIC C AFC 1M C AF-Formyl 650M 1M 1%gluteraldehyde 410 C 4// Toyopearl TSK-GEL 5PW 121 C ppm 12 Toyopearl TSK-GEL 5PW ph212 <12 ph0.5n NaOH 0.5NNaOH Toyopearl TSK-GEL 5PW /97/98

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34 Amberchrom MCI GEL Amberchrom MCI GEL Amberchrom CG161CG300 CG1000 MCI GEL CHP20P - Amberchrom CG71 MCI GEL CHP2MGY 25mL 50L Amberchrom Amberchrom 0.510bar7150psi Amberchrom TFA /97/98

35 3 4 5 / / Amberchrom Millipore E.Merck Amberchrom TechniKrom ProChrom Amberchrom 4 "S" 1015 mm "M" 3040 mm "C" 5070 mm /97/98

36 23 2 1Amberchrom (cm ID cm) (ml/min) (ml/min) S S S M M M C C C cm /97/98

37 /97/98

38 7 8 (cm ID x cm) 2 Amberchrom (ml/min) (ml/min) (min) 1.0 x 10 CG71c x 30 CG161m x 100 CG1000s DAC /97/98

39 2 12cm DAC 8 10bar /97/98

40 Amberchrom CIP cm/h 810 CV 3 45/5550/50 50/50 40cm/h % /75% Amberchrom CG1000s 35%/65% Amberchrom CG71 CG300 45%/55% Amberchrom CG161 1mg/ml55 40cm/h Amberchrom 3 3 Amberchrom (cm) S (/) M (/) C (/) Amberchrom TFA Amberchrom 26 (2~3%) Amberchrom 0.5M /97/98

41 NaOH 1218 / Amberchrom C25 C 3 Amberchrom 15a 15b /97/98

42 BV 2BV/H BV 2BV/H 6 a b nm 250nm 7 2BV/H 8 2BV4% HCL 5BV/H 3 ph ph= BV 5% NaOH 5BV/H 3 ph ph=7 10 3ml 10ml /97/98

43 XAD BV/h BV BV ph BV BV ph BV ph BV BV /97/98

44 1 HPSP HP-MG 2 HP (1) (Cap )SP200 >HP SP >HP-MG SP200 SP200 HP-MG SP200 2 SP200>HP-MG >HP SP HP-MG<SP200 <HP / 2030 HP-MG 10SP SP >HP HP-MG SP HP SP /97/98

45 HP SP NaOH NaOH SV0.52 SV0.52 LV HP HP LV 5 8 SP SV0.52 SV0.52 SV15 HP SP SV0.52 [] 50+1N NaOH SV0.51 SV15 SVSpace Velocity LVLinear Velocity BVBed Volume /97/98

46 (H&E Co.,Ltd.) TOSOH Develosil YMC Amersham MERCK Millipore Varian Applexion Sigma-Aldrich /97/98

47 Web

+

+ ~ 1 ~ ~ 2 ~ 1-1 UHPLC-SEC 法对治疗性抗体的分析 TSKgel UP-SW3 UHPLC HPLC A TSKgel UP-SW3 2 μm (4.6 mm ID. 15 cm B UHPLC-SEC 1.7 μm (4.6 mm ID. 15 cm mmol/l (ph 6.7 + 2SO4 mmol/l Na +.5 % NaN3.35 ml/ 25 UV 28 nm 5

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