消毒技术规范(2002)正文.doc

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1 disinfection sterilization chemical indicator ( )/ biological indicator disinfectant sterilant ( ) high-efficacy disinfectant intermediate-efficacy disinfectant low-efficacy disinfectant available chlorine ( ) mg/l % neutralizer product of neutralization 1

2 colony forming unitcfu natural bacteria survival timest (min) killing timekt (min) D D value 90% (min) killing log value killing ratekr sterility assurance levelsal SAL 10 -n SAL disinfection of epidemic focus concurrent disinfection terminal disinfection preventive disinfection sterility testing bioburden exposed time personnel decontamination carrier antibacterial bacteriostasis 2

3

4 () pH ph ph ph ph ph d / 54 14d 4 5 (Staphylococcus aureus)atcc 6538 (Escherichia coli)8099 (Pseudomonas aeruginosa)atcc (Staphylococcus albus)8032 (Mycobacterium chelonae subsp. abscessus)atcc (Bacillus subtilis var.niger)atcc 9372 (Candida albicans)atcc (Aspergillus niger)atcc (Poliovirus-) 4

5 ( + ) + + ( ) ( ) () :

6 6 2 3 ; % ( ) ( ) ( ph )

7 % ( ) mg/l mg/kg 2 %100 ml ml 100 ml ml % 100 g g mg/lg/l 1L mg g 1L mg g ( ) mol/l mol/l (molemol) mol ( )

8 (1) ( ) 1) 2) 3) 4) 5) 6) (2) ( ) 1) 2) ( ) L5178Y V79 ( ) ( ) ( ) DNA (DNA ) ( ) ( ) (3) 1) 2) (4) 1) 2)

9 9 (1) 4 ( ) ( ) (2) ( ) (3) ( ) (4) (5) (6) ph

10 ( ) 4 ( ) ( )

11 / 5 / (1) (2) (3) (4) (5)

12 ( ) h 12 h 24h 48h (1) 10L (2) 30cm30cm40cm (3) (1) 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7)

13 13 (2) 1) 2) (3) 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) 11) 12) ) 14) 15) 16) 17) 18) (4) 1 2 3

14 4) 5) 6) 7) 8) 14

15 : ATCC 6538 ATCC ATCC 9372 ATCC ATCC10231 ATCC A 3 A 4 5 A 6 TSA TSB A 7 A 8 A ml5.0ml10.0ml 12 10µl20µl100µl200µl1000µl ml10.0ml 37 18h24h h24h h 24h 3 15

16 h24h5.0ml 3.0 ml5.0ml 5.0ml 20s ml10ml 37 18h24h h24h h24h ml 5.0 ml10.0ml h24h 37 5d7d 3 95% 5.0% min 0.5% 1min ml 10.0ml L 5.0ml 5min h r/min 30min min 60 30min mm 10mm 16

17 12mm 0.5mm 2 30 min 10min ph 3 4 TSB 18h24h cfu/ml cfu/ml 10µl 10µl 37 20min30min cfu/ cfu/ min ml5.0ml 2 A 3 A : 5.0ml 20s 80 17

18 2 4.5ml s ml s ml :11:4 5 15cfu300cfu 1.0ml ml20ml h 72h cfu300cfu cfu100cfu 15 cfu % 1 = 100% ( ) = = 2 = 100 % ( ) = = 18

19 cfu300cfu :1 1:10 2

20 ml5.0ml 3 4 cm6cm 4 5 A 6 TSA A

21 4 2 30s ATCC 6538 ATCC ATCC ml cfu/ml cfu/ml 4.5ml 30min1.0ml TSA 2 0.5ml cfu/ml cfu/ml 4.5ml 30min1.0ml TSA 3 0.5ml 4.5ml 30min1.0ml TSA 3 X X±50%X ml 2.0ml ml 20±1 21

22 5min 4.0ml 0.5ml 4.5ml 1.0ml ml 20±1 5min 4.0ml 0.5ml 4.5ml 10min 1.0ml ml 20±1 5min 0.4ml 4.5ml 10min ml ml 20±1 5min 4.9ml 0.4ml 4.5ml 10min 10min 0.5ml ml ml 20±1 5min 0.4ml 4.5ml 10min ml ml 25ml ml 20±1 5min 5.0ml 10min 20s ml ml 20±1 5min 5.0ml 20s 80 10min 1.0ml ml 1.0ml ml 20±1 5min 1 10min 5.0 ml 20s ml ml ml 10min5.0ml 20±1 5min 1 10min 5.0ml 20s ml 22

23 10 1.0ml ml 20±1 5min 1 10min 5.0ml 20s ml ml ml 15ml20ml : >5 X110 Y>10 >X + 5 >Y Y cfu/ml cfu/ml cfu/ cfu/ 15% 3 45 ( ) = 100%

24 PBS0.1%0.5% 80PBS s ATCC ATCC 6538 ATCC ml 0.5ml 20±1 5min 4.0ml 20±1 0.5ml 4.5ml 1.0ml ml 0.5ml 20±1 5min 4.0ml 1.0ml

25 0.5ml PBS 1.0ml ml 0.5ml 20±1 5min 4.0ml 0.5 ml ml ml 4.0 ml 3 : cfu/ml cfu/ml 50% : = 100% A 5 3%BSA TSB( A) 6TSA 7 TSB 8 1.0ml5.0ml

26 min 10min20min30min mg/L 250mg/L 20± cfu/ml cfu/ml 3 0.5ml 0.5ml 20±1 5min 4.0 ml 4 0.5ml 4.5ml 5 10min 1.0ml h 72h 8 3 cfu/ml N : (KL) No Nx ml 2 20±1 5min 26

27 ml 20s 80 5min 1.0ml ml h 72h 6 3 cfu/ N ml min ml TSB 20s ml 4 2 5ml TSB 2 5.0ml 20s ml h 7d 6 5 cfu/ min 10min 20min 30min ml 20s ml

28 h 72h 9 3 cfu/ N %W/V 0.5ml %W/V 0.5ml (1) ATCC (2) ( ) (3) (4) ( ) (5) 0.1% (6) A (7) A (8) (0.1ml1.0ml5.0ml) 28

29 (9) (10) (11) (12) (13) ATCC ml10.0mlmadc 37 18h24h h h h 5.0ml 3.0 ml5.0ml 5.0ml 6-7g 5min : (1) (2) (3) : (1) (2)

30 (1) MEA (2) A (3) ATCC ATCC (1) (2) 4 ( ) 5 ( PBS0.03 mol/lph7.2) 6 A 7 A 8 (0.1ml1.0ml5.0ml) ml10.0ml 37 18h24h h24h h24h h24h 5.0 ml 3.0ml5.0ml 5.0ml 20s cfu/ml510 7 cfu/ml ATCC ) 5.0ml 30±1 42h48h 1 MEA 30±1 42h48h 30

31 30±1 42h48h ) h 3.0~5.0ml MEA 30±1 7d9d 3) 5.0 ml10.0ml 0.05%V/V 80 1min r/min6000 r/min 20min 400 4) d 400 5) cfu/ml510 7 cfu/ml 6) 10µl 37 (30min) 7) cfu/ cfu/ : (1) (2) (3) MEA h 30 72h (1) (2)

32 (1) (2) poliovirus- PV- 1 HIV-1 2 VERO BGMHela FL PV-1 T 1 human T cell leukemiavirus 1HTLV-1 MT4 HIV A 13 A r/min3min 10ml / r/min15min 1.0ml (1.5ml)

33 1 TCID 50 TCID 50 TCID 50 = 50% + 50% 50% 50% 50% 50% 50% % % 50 = 50 % 50 % HIV - + % (-) (+) / / / / /8 0 50% % 80 50% % 20 50% = = TCID 50 = 60.5 = pfu pfu/ml 3 TCID 50 pfu N 0 TCID 50 pfu Nx 33

34 = s : : h4h h4h 34

35 h4h ml 20±1 5 min 0.5 ml 1.0ml ml 20±1 5min 0.5ml 1.0ml 10min ml 20±1 5 min 0.5 ml 10 min 1.0 ml ml 20±1 5 min 1.0ml 0.5ml 10min ml 20±1 5 min 0.5 ml :

36 ml 20±1 5min 0.1ml ml 20±1 5min 0.1ml ml 0.9ml ml 0.9ml : PoliovirusPV s

37 ml /4 1.0ml 1.5ml ± µl 100µl 20±1 5min 0.8ml 0.1ml h2h 37 5%CO 2 3d TCID ml 37 1h2h 0.8% 3ml 37 48h72h 2ml pfu/ml 10pfu30pfu 5 TCID 50 pfu N 0 TCID 50 pfu Nx = log Nolog Nx

38 human immunodeficiency virushiv 2 HIV HIV 3 HIV biological safety level 3BSL 3 HIV s HIV 2 HIV HIV 3 HIV 4 100µl 100µl MT /ml d 5HIV 1 MT ml 2 HIV-1 10ml /ml /ml 3/4 0.5ml 1.5ml :21:41: µl 50µl 0.9ml MT /ml37 40min 5 HIV 38

39 µl MT /ml µl MT % CO 2 4 d 50µl 7d HIV HIV 2 HIV TCID HIV HIV 7 1 BSL3 2 BSL ( ) (1) ATCC ATCC (2) (PBS0.03mol/LpH ) (3) ( 342mg/L) A (4) ( ) (5) ( ) (1) 50mg/L (ph ) 24h 6.0ml 4.0ml 10 6 cfu/ml10 7 cfu/ml (2) A(1.5x)B(x)C(0.5x) 3 ( x ) 3.0ml 39

40 (3)1 1.0ml 1 A (4)A 8min A 20µl A ml (5) 1 10min 2 1.0ml A (6) 2 8min( 1 18min) A 20µl A 2 5 5ml (7) 2 10min( 1 20min) 1.0ml A (8) 3 8min( 1 28min) A 20µl A 3 5 5ml (9)B(x)C(0.5x) A (X min) A B C (5 ) (5 ) (5 ) (10)2 5ml ( ) 5µl (11)2 5ml (12) 37 48h (13) 20±1 (14) 1 3 (15) 10 6 cfu/ml10 7 cfu/ml ( ) ( ) ;

41 (%v/v) (1) (2) (3) : "+" "-" % (1) (2) ph pH T 2 1 2T 3 3T 4 4T > 30min 41

42 1 5min % 50% %25% ±1 20±1 30± ph 1 ph 3 1 ph x ph x 3 ph x + 2 [ ph ph ] ph ph ph ph ph ph ph ph ph ±1 ph ph

43 ph () () () (1) (8099) ) (2)) (PBS0.03mol/LpH7.2) (3) A (4) ( ) (5) (6) (7) ( 5.0cm 5.0cm (8) () 2.0cm 12.5cm (5.0cm 5.0cm) 0.1ml L cm ml L 10min 1.0ml 2 20ml~25ml 60s min 1.0ml h ml 20ml~25ml 43

44 cfu/ cfu/ ( cfu/cm cfu/cm 2 ) 5 PBS 6 cfu/= (1) () (2) ) (1) (ATCC 9372) ( (2) (2) (PBS0.03mol/LpH7.2) (3) ( ) (4) 5 ( (2) ) (6) (1.8cm 18cm) (1) (2) 0.1ml 0.02ml L 37 (3) 10ml 20±2 5min (4)30 (5) 10ml ml 37 72h (6) cfu/ cfu/ (7) ; 44

45 ) (1) (ATCC 9372) ( (2) (2) (PBS0.03mol/LpH7.2) (3) ( ) (4) 5 ( (2) ) (6) (1.8cm 18cm) (1) 0.5 (2) (2) (3) 10ml 20±2 5min (4)20 10ml d 5 2 (6) 3 10ml 1min h cfu/ cfu/ (7) (8) (1) (2)

46 ) (1) (ATCC 9372) ( (2) (2) (PBS0.03mol/LpH7.2) (3) ( ) (4) A 5 [ ] (6) ( (7) (1) (2) 2000ml 2 2 (3) (4) ( ) (1) (2) (3) NCTC TSA 3 TSB A 4 TSB 5 200g/L 6 60%V/V 60%V/V 7 A 8 (PBS0.03mol/LpH7.2)

47 (1) 2 TSB 18h24h 1LTSB 36±1 18h24h TSB cfu/ml cfu/ml min cfu/ml cfu/ml 5 s min 6 10ml TSB min s60s 5min 5s 10ml 1min 1.0ml 37 48h (9) 60% 3 ml 30s 60s 60% 3ml 3ml 3min 5s (10) (11) (1) 47

48 (2) (3) h ) % mol/L ph7.2 4 (PBS0.03mol/LpH7.2) 5 A 6 7 TSB A 8 TSA (1) 30 (2) 10ml 2 (3) 1min 3min (4) 1.0ml 1 2 (5) 1ml h (6)

49 (1) (2) (3) 4h (4) (5) 2h ATCC TSA 3 (PBS0.03mol/LpH7.2) g/L 6 2.2cm 3cm mm min 3 3.0cm 4 10µl cfu/ cfu/ 4mm 5mm 5 1 min 3min 6 1.0ml 49

50 60s 1.0ml 30s ml 9 1.0ml h cfu/ cfu/ HIV 3 70% 4 48h 72h % mol/L ph7.2 4 (PBS0.03mol/LpH7.2) 5 A 6 7 ( 3.0cm 10.0cm )12115min 8 TSA

51 (1) 30 (2) 10ml (3) 1min 3min (4) (5) 1.0ml h (6) (1) (2) (3) (4) (5) 2h 4 4h [ () ] (1) (8099) (ATCC 6538) cfu/ cfu/ ( cfu/cm cfu/cm 2 ) (2) (PBS0.03mol/LpH7.2) (3) (0.1% 80 PBS ) (4) ( ) (5) (6) (7) ( 5.0cm 5.0cm ) (1) (2) 30 (3) 51

52 60 ( 25cm 2 ) (4) 5ml min (5) 5ml min (6) 1.0ml (7) 1.0ml h (8) (1) (2) (3) ( ) (4) (5) 2h 4 4h [ () ] (1) (PBS0.03mol/LpH7.2) (2) (3) (0.1% 80 PBS ) (4) (5) ( 5.0cm 5.0cm ) (6) (1) ( ) 2 25cm 2 (2) 5ml 8 20s 80 52

53 (3) 5ml 8 20s 80 (4) 1.0ml (5) 1.0ml h (6) = (1) (2) (3) (4) ( ) (5) (6) 2h 4 4h () (1) (2) [ ] (3) ( ) (4) ( PBS0.03 mol/lph 7.2 ) (5) (6) (7) ( )( (8) 90% 1µm10µm (9) (10) 53

54 (1) (2) ( ) (3) ( ) ( ) (4) 5 min 5 5 ( ) ( ) ( ) cfu/m cfu/m () 1m 3 10m 3 20m 3 20m 3 <10µm <10µm %70% 50%70% 1m ( ) (6) ( ) ( ) (7) ( ) (8) h (9) h (10) ( ) (11) PBS ( 1 2 ) 54

55 (12) % : N t = V 0 V t V % V '(1 Nt ) Vt ' K t = V '(1 N ) 0 0 t 100% N t : ; V 0 V t : ; K t : ; V 0 'V t ': 3 ( cfu ) ( cfu / m ) = L / min (min) [ : 10 min cfu/m 3 50 cfu/m 3 ; cfu/m cfu/m 3 10 min : 10 min N t = 100% = 44.44% : ( %) 50 K t = 100 % ( %) = 100% = 99.91% min 99.91% (1) ( ) (2) 1.0m 10m 2 10m 2 (3) ( ) : = 100% [ : 5000 cfu/m 3 30 min 50cfu/m 3 30 min 55

56 : = 100% = 99.00% min 99.00% (4) (5) 3 90% (1) (2) (3) (4) 4 h (5) () (6) (7) (8) (1) (8099) 37 18h24 h (2) ( 0.45µm0.65 µm 35 mm 47 mm ) (3) (4) (5) (6) (7) ( 500ml) (8) (9) A (10) ( ) 56

57 (11) ( ) (12) (13) ( ) (14) ( ) ph cfu/100ml cfu/100ml (1) 3 15min 23 (2) ( min ) (3) ( ) 0.05 Mpa (4) 5s 37 22h24h (5) : (cfu/100ml ) ( cfu /100 ml ) = ( ml ) ; 2 57

58 (20±2) ( ) 100 ml10 ml1 ml ( ) cfu/100 ml cfu/100 ml 3 0/100 ml ) ; ( ( 2 kg/cm 2 3 kg/cm 2 ) 3 kg/cm 2 5 kg/cm 2 3kg/cm 2 5 kg/cm 2 100ml10ml1ml ( ) cfu/100ml cfu/100ml 3 0/100ml 58

59 3 1 ) ( ( ) :1/42/43/44/4 ( ) 100ml10ml1ml 2 ( ) 2 ( ) cfu/100ml cfu/100ml 3 0/100ml ( ) 1 : 5±2 20±2 30± g 2.0 mol/l 50 ml mol/l HCl ph 100 ml ( 1 1 )

60 ph ph ph (1 1 ) ph ph ph ph ph ) 1 1 2) ( 20±2) 2 100ml ( ) 3) 4) 100ml ) 2 ( ) 6) 3 3 0/100ml 7) 2 1) 1 1 2) 2 100ml ( ) ) 2 100ml ) ) 2 ( ) 6) 3 3 0/100ml 7) 60

61 3 1)2 100ml ( ) 2) :1/42/43/44/4 ( ) 3) 100ml10ml1ml ) 2 ( ) 5) 3 3 0/100ml 6) 4 1) ( ) 2) ( ) [ ] 5 ( 0.3 mg/l0.5mg/l ) 3) [ ] 5 ( 0.3 mg/l0.5 mg/l ) 4) ( ) ( ) ( cfu/100ml cfu/100ml ) [

62 ] 5 ( 0.3 mg/l0.5 mg/l ) (1) 1000 m m 2 3 (2) (3) 30 cm ( ) 1 2 ( ) (4) (5) 1000cfu/ml 18cfu/L ( )) (6) min10min ( ) (1) ( ATCC 9372 ) ( 10mm 10mm ) 160±2 3.9 min 19 mind 1.3min1.9min (2) (A ) (3) ( ) (4) ( ) (5) ( ) 3 min 3 62

63 (1) (2) 2 (3) 5.0ml 37 72h ; 7d 0.2ml L h ) (4) ( ) ( (5) 2 5.0mlPBS (6) 2 5.0ml (7) 2 5.0ml (8) 5 (9) cfu/ cfu/ (1) 3 (2) cfu/ cfu/ (1) (2) (3) (4)

64 ( ) () (1) ( 8099 ) ( 10mm 10mm) (4) ( ) (5) ( ) (6) ()( ) (7) ( 3 ) () ( 3 min (1) ( ) (2) 2 ( ) (3) 5ml PBS (4) PBS (5) (6) cfu/ cfu/ (1) (2) 2 ( ) (3) 1ml ml TCID

65 (6) 3 (7) TCID (1) min (2) cfu/ cfu/ 3.00 (3) TCID (1) (2) (3) (4) (1) ( ATCC 6538 ) ( 8099 ) ATCC ATCC93326 ( 9372 ) (2) ( 10mm 10mm ) (3) ( ) (4) A ( ) (5) ( ) ( 10mm 10mm ) 2 2 ( ) ( 37) 7d 65

66 0.2 ml L h ) 5 ( ) ( ml PBS ml ml cfu/ cfu/ cfu/ cfu/ cfu/ cfu/ (1) (2) (3) (4) (5) ( )

67 (1) ( ATCC 6538 ) ( 8099 ) ATCC ( ATCC 9372 ) 8032 (2) ( 10mm 10mm ) (3) ( ) (4) ( 2 m ) (5) ( 220V ) 6 ( ) (1) 1m (2) 5min 1m ( µw/cm 2 ) (3) 220V (4) ( 30W ) 1m 90µW/cm 2 (5) 1m 70µW/cm 2 (6) (7) ( ) 30W [ (s)] (8) (1) (2) 30 W 1 m (3) (4) (5) ( ) (6) ( ) ( ) (7) 2 5.0ml PBS 20s (8) PBS (9) cfu/ 67

68 cfu/ 3.00 (10) ( ) 30W cfu/ cfu/ ( ) ( ) ( 0.3mg/m 3 ) µW/cm 2 ( h ) ( h (1) (2) (3) 0.3mg/m 3 (4) ( ) ( ATCC 6538 ) ( 8099 ) ATCC ( ATCC 9372 ) ( ATCC ) ATCC ( 10mm 10mm ) 3 ( ) 4 [ (3)] 5 ( ) ( )

69 ( ) ( ) 15mm 5min ( µw/cm 2 ) ( ) ( ) ml PBS PBS cfu/ cfu/ ( ) ( ) 1ml ml TCID

70 cfu/ cfu/ 3.00 TCID (1) ( ) (2) ( ) (1) ( ATCC 9372 ) cfu/ cfu/( ) 600mg/L±30mg/L 54±2 60%±10% 7.8min 58minD 2.6min5.8min (2) ( 10mm 10mm (3) ( 60mm 40mm 0.2min0.4mm ) (4) ( ) (5) ( ) (1) 2 20 (2) (3) 5 ml 37 7d ( ) 0.2ml L 37 48h (4) (5) 2 5.0ml PBS (6) 2 5.0ml (7) 2 5.0ml 70

71 (8) 5 (9) cfu/ cfu/ cfu/ cfu/ (1) (2) (3) (4) 8h 1.82mg/m 3 1ppm15min 9.1mg/m 3 5.0ppm ( ) (1) ( ATCC 6538 ) ( 8099 ) ATCC ( ATCC ) (2) (10mm 10mm ) (3) (4) ( ) (5) ( ) (6) (1) : (2) :

72 ( ) PBS [ ( ) ] ( ) 1ml ml TCID cfu/ cfu/ (TCID 50 ) (1) (2) (3) 0.3mg/m 3 72

73 (4) (1) ( ATCC 6538 ) ( 8099 ) ATCC ( ATCC ) (2) (10mm 10mm ) (3) (4) ( ) (5) ( ) (6) (7) 500 ml (8) 1L/min10L/min (9) (10) ml 3000ml 20±

74 5 ml 10 min min PBS (1) (2) (3) 5min (4) 1.0ml 1ml (5) 1.0ml 1ml (7) 3 (8) TCID cfu/ cfu/ (TCID 50 ) 4 74

75 ±0.5 D (1) (biological indicator evaluator resistometer pressured steam sterilizationbier ) s 5s ±0.5 (2) (3) ( A) (4) ( A) (5) ( ) (6) (PBS0.03 mol/lph 7.2) (7) (0.1% 80 PBS ) (1) (Bacillus stearothermophilus ATCC 7953SSI K31) cfu/ cfu/ cfu/ml cfu/ml (2) 121± min 19min (3) 121±0.5 D 1.3min1.9min PBS ( ) PBS h (1) 3.9min 19min 20 (2) (3) (4) (121±0.5) (5) (6) ( 20 ) (7) (8) (9) (10) (5)(9) 75

76 (11) ( 2h) d (12) 3.9min ( )20 19min ( )20 4 (3.9min19min 2) [ 7d ] D (1) 50 0min20min 10 5 ( ) (2) (2)(10) (3) (4) (X) (Y) = a + bx) (5) ( ) (6) 90% (D )D (1) (2) (3) % ( ) (1) (2) 100s (3) (4) ( )

77 (1) [ (1) ] (2) ( ) (3) ( ) min 2 20 min min min ( ) : min min min 132 3min : min min min [ ( ) ] (1) (2) (2)(10) ( ) (3) (4) 56 7d (5) (6) 3 (7) % 2 3 =20% ± ( ) ( ) (1) 77

78 (2) (3) (4) (5) (6) ( ) (7) (1) (2) ( ) min min min ( ) min min min 132 3min min min min [ ( ) ] (1) 5 5 (2) (3) (4) (5) 3 78

79 (6) % 0.5 [ ] (1) (2) ( ) (1) ( ) (2) [30 W ( ) 90µW/cm 2 ] (3) 220V (1) ( ) (2) 5 min ( ) (3) 10 1min 330 (4) (5) (6) 90% (1) (2) (3) [ (6)] (1) (2) (3) 1min (4) 79

80 (5) (6) (7) ( ) ( 3 ) (1) 3 (2) 1 (3) 90% (1) (2) (3) [ (3)] (1) (3) ( ISO 536) 1 1) 2mg 0.5% 2) 1.0% %2% 80

81 25 500cm 2 200mm250mm g 4 g/m 2 = m / A m g A cm 2 3 g 4 5% 56 g/m ph ( ISO 6588) ms/m 2 ph pH g 0.1 g 5mm5mm 100ml 1h ph 3 : 4 ph ( ISO ) ( ISO 9198) EN (1) 1) min30min 134 2min6min 2) mg/L1000mg/L 3) 10 kgy30 kgy (2) 1) GB ) ) GB (3) (4) ( ISO ) (1) 81

82 (2) (1) 1) 110mm75mm32mm 110mm75mm12mm 800g50g % A 5) 15mm 135 mm95 mm 6) 250mm105mm (2) 1) 2) 1 min 3) 15mm 2 min 4) (3) : (4) (1) 1 : ATCC 6538 : 100 mbar 50mm50mm min100 mbar 10min 6 ml 37 16h 10 7 cfu/ml ml %50% 6h 5s6s 37 16h24h 3) 5 4) (2) 82

83 1) 250 ml 34 mm 34 mm (PTFE) (ATCC 9372) 2) 100ml 10 6 cfu/ml (96%) 100g (0.04mm0.15mm) 5016h 20ml 10 42mm min 0.25g h 3) : 10 4) 5cfu10 15cfu (1) (2) %5% 7d 180d (1) (2) ( 2000 H )

84 (1) (ATCC 6538) (8099) (ATCC 10231) ( ) (2) (5 mm 120 2h ) (3) ( ) (4) (5µl50µl ) (5) (6) (1) : 20µl (37) 5mm 4mm () 4 () (2) : 20µl () (3) : cfu/ml cfu/ml min (4) : mm 15mm 37 16h18h ( ) (1) : 7mm 7mm (2) 3 (3) (1) (2) ; (3) 84

85 (4) 18h (5) (Minimal Inhibitory ConcentrationMIC) ATCC ATCC MH 38gMH 1000ml min mol/L ph µl10µl ml5g 45ml 10% 2 10% PBS gMH 1000ml min ml MH 10ml 5 1µl2µl 10 7 cfu/ml 5mm8mm 10 4 cfu 6 MH h24h MIC

86 (Minimal Inhibitory ConcentrationMIC) ATCC ATCC A 3 A ml 2.5ml 3 0.1ml 10 8 cfu/ml h cfu/ml cfu/ml ( ) ( ) cfu/ml510 6 cfu/ml MIC h 24h (1) : 25 2 (2) ml/ (3) 25 (4) (TSB) (5) TSA (6) 0.075mol/L (7) 70% (8) 86

87 (9) 2.2cm 3cm (10) 4mm (11) 2.2cm 2.5mm (12) Darapore3M (13) (14) Triton-X ml (15) ( : ) (16) (17) (18) ATCC (19) (1) 7d 14d 7d 14d (2) 3d : s 3 45s 4 15s h 9 3 ( 12h 24h) : 1 ATCC TSB 35±2 20h ±2h 10 8 cfu/ml10 9 cfu/ml 2 : 3.0cm 10µl 10 6 cfu/ 10 7 cfu/ 4mm5mm 3 : 4 2h±5min 87

88 1ml 0.1% triton-x mol/L 60s 1ml 0.1%triton X mol/L 2 30s : 70% 70% 6 : mol/L ml 2 5% TSA 35±2 48h ±4h 7 =[ / ] 100% % d HIV h72h

89 1 A T C C A T C C % A 1.5 % TSA 3 4 Tergitol ( ) 11 (12) 0.16cm ml 121 C 2 5 min 1445 r/ min6 0 r/ min 15 16( 1ml5ml 10 ml) /cm 32 /cm 24 3mm5 mm 2.5cm 3.75cm

90 5g 5 g 1 L 1.5g 1.5g 3 L g 3 L 1h 5 m i n 5 min 2 5 cm 15g ±1 g mi n ml 10 ml 3 5 C ± 2 C 2 4 h 10µl 35 C ± 2 C 2 4h C h m l P B S 0.5 ml 9.5 ml PBS 1 ml2 ml 20 m l B 35 24h 5m l PBS 3g PBS cf u /ml cfu/ml 3% 4 20µl 35±2 20min 5 20 m i n 265ml (25±1) m i n ml 0.5% 8 0 PBS 10s 200 PBS 10 TSA %V/V : 33 0 ml 0.5 % 8 0 PBS 10s 2 0 0PBS ml TSA ± h ± 4 h

91 % (1) (ATCC 6538) (8099) (ATCC 10231) (2) (PBS0.03mol/LpH ) (3) (300r/min) (4) (5) TSA mm 10mm 0.75g g 250ml 70ml PBS 5ml PBS cfu/ml cfu/ml r/min 2min 1.0 ml PBS g 70 ml PBS 5ml r/min 0.5ml 1h 1.0 ml PBS 5 1.0ml ml 70mlPBS 250ml 1h 1.0ml PBS = 100 % (1) cfu/ml cfu/ml 10% (2) > 26% (1) 91

92 (2) (1) ATCC 6538 (2) 5cm (3) (4) (5)0.03mol/L ph7.2 (6) (7) cm 1m 5cm 1ml min (2) 37 24h 37 24h cfu/ml cfu/ml (1) 1ml (2) 100ml 1min 1ml 10 0 (3) 37 20h±2h 100ml 1min 1ml 10 (4) 0 100ml 1min (5) 1 1ml 37 20h±2h 100ml 1min 1ml 10 (6) 37 48h (7) 3 (8) B C (BC)/2-A 92

93 %= 100 B C (BC)/2 A- B-0 C-0 B C B C cfu/ml cfu/ml % (ATCC 6538) (8099) (ATCC 10231) ( ) 2 (PBS0.03mol/LpH ) cfu/ml10 6 cfu/ml 3 50mm 50mm 75% 0.1ml 5mm min60min ml5.0ml 37 18h24h cfu/ml210 3 cfu/ml 0.1ml

94 = 100% cfu/ 99.00% A 2 A 3 A 4 PBS0.03mol/LpH7.2 A mol5.0mol g 5 10g 5 1/4 1/4 2/

95 g 5 100ml 20s ml 20s ml 20s cm 2 10ml 20s ml 300 PBS ml 20ml 37 48h 4 <15cfu/ 15cfu/300cfu/ 5 1.0ml PBS 2 ATCC653818h 1.0ml 37 48h PBS

96 h ATCC h cfu/ml cfu/cm 2 cfu/gcfu/ A 2 A 3 A /4 1/4 2/ f9cm 30min 1.0cfu/ 2-1.0ml 10 [Micrococcus 96

97 luteacmccb28001] h 1.0ml 50 [Clostridium sporogenescmccb64941] 3 1.0ml 50cfu [Candida albicans CMCCF98001] h 4 3d - 1.0ml h 5 3d h 6 [CMCCB26003] h 18h h % 2 70% /4 2 2/ cm 3cm ml 3-1.0ml [ ] ml - 1.0ml [ ] ml10.0ml ml 1.0ml 1-1.0ml [ ] ml10ml 5 97

98 ml 0.5ml2ml 1.0ml5ml10ml 2.0ml20 ml50ml 5.0ml 2ml 15.0ml 5ml 40.0ml 1-1.0ml [ ] 5 25cm ml 1-1.0ml [ ] 6 - [ ] d [ ] d (1) (2) g 5 10g 5 1/3 2/ ) (2) 1) (3)

99 /3 2/ (2)1) 3) (2)1) /3 1/3 1/ (1) 2000 B (2) ph 2000 H ph (3) 2000 G (4) g 20.0 ml 0.03mol/L (PBS) PBS 2 1.0ml h

100 4 ( 2000 H ) ) (ATCC ) (ATCC 6538) (ATCC 9027) (ATCC 10231) ATCC ) ~14 18h~24h 0.03mol/L PBS cfu/ml510 8 cfu/ml ml min 0.1ml cfu/ml510 6 cfu/ml 3 T 3/4T1/2T 1.0ml 9.0ml 10min ml h( )72h d14d 0.03mol/L PBS PBS 1.0ml ) 3 14 (18h24h) 0.03mol/L PBS 10% cfu/ml510 8 cfu/ml ( cfu/ml510 6 cfu/ml) ( )

101 3) 0.01ml cfu/ cfu/ min10min (1) 2.3 (2) 5.0ml 150ml 10% 5ml 10ml 0.002mol/L 15s X ( mg X mg/lv ml V 0 mlc mol/l %50%75%100% 3) 25%50%75%100% 2 4) 50ml 0.5ml 10 8 cfu/ml 10 6 cfu/ml ml 9.0ml 10min ml ( ) ( ) h( )72h mol/L PBS 1.0ml 0.03mol/L PBS (2 ) 0.5ml 10 5 cfu/ml 10 3 cfu/ml / L ) = ( V V 0 ) C

102 50% 14d

103 2-6 *ph * mosmol * mg/l 30 (cfu/g) (mg/kg) >5000 * * * * /4 1/4 2/ g1g 200ml 50ml

104 (3) (4) (1) 5ml 50 ml h h24h h (2) (1) 5 ml 50 SCDLP h24 h h 24h 1% 30s h 3 ml5ml 1mol/L 1ml h h h48h (2)

105 (1) 5ml 50ml SCDLP h h48 h h 5min ml 24h 0.5ml h 0.5 ml (2) (1) 5ml 50ml h h 0.2 ml0.01g 5mL 0.8 ml 24 h 0.5 ml 0.25 % 0.25 ml min 10 min 2 h 24 h 24 h h24h (2) (1) 5 1 ml 45 15ml25ml d 3d5d7d (2) X N t = 105 K 5 F

106 X F cfu/g cfu/mln t 5 K (3) (1) 5ml 50ml d (2) ATCC ATCC (ATCC 10231) (18h24h) 5 ml 0.03mol/L PBS 100l 2.0cm3.0cm cfu/ cfu/ (18h24h)5 ml 0.03mol/L PBS. (2) (3) ) 24h PBS 100l cfu/ cfu/ 2.0cm3.0cm l 2min5min10min20min 5ml ml ml h72h 3 X = N C N C N S 100 % 106

107 X % N C cfu/ N S cfu/ 4 90% (1) 24h PBS 100l 5ml cfu/ ml910 4 cfu/ ml 2.0cm3.0cm 5ml l / 2min5min10min20min 0.5ml 5ml PBS ml ml h72h 3 : X % N C cfu/ N S cfu/ 2 50%90% 90% (1) 1) 2) d % (2) 1) X = 2) ) 37 2 N C N N 100 % ( GB ) C S

108 ( ) 2-7 * * * (1) (2) 1) 1g/10ml h 2) (1) ATCC cfu/ cfu/ 600mg/L30mg/L %10% 90% D 2.5min5.8min 7.5min 58min (2)

109 h 7d (1) E 601ATCC cfu/ cfu/ D kgy (2) h 7d GB (1) (2) (3) 2-8 (4) 90% 90% 1 (5) 50%( )>26%( ) 50%( ) 26%( ) 1 (6) 250g/g 109

110 2-8 1 (cfu/g) (cfu/g cfu/ml) (cfu/g cfu/ml) ) 2) (1) (1 ml5 ml10 ml25 ml) 100l1000l (2) (2 ml5 ml10 ml15 ml25 ml50 ml ) (3) (4) (100 ml250 ml) (5) (50 ml100 ml250 ml1000 ml) (6) (100 ml250 ml500 ml) (7) () (8) (9) 250 ml (10) (11) (12) (13) (14) (15) ( 0.1 mg) (16) (17) (18) (19) (1ml5ml100ml) (10l25l100l) (20) (21) (1) 2 mol/l 100g/L 5g/L 0.1mol/L ( ) 110

111 (2) 0.6g 100ml 0.6g 100ml 3 (3) 100ml 2 mol/l 10ml10 0g/L 10ml 10.0ml 5min ( 25 ml ) 5 g/l (4) 1mol/L 1mL g c Vst X % = 100% m c Vst X g / L = 1000 V 1 2 X %g/lc mol/lv st mlm gv ml (1) 5 g/l 36% 0.1mol/L ( ) (2) 0.25g 100 ml mol/l 5g/L 10 ( ) 2 2 (3) 1 mol/l 1 ml g c Vst X % = 100% m 1 X %g/lc mol/lv st mlm gv ml c Vst Xg / L = 1000 V (C 2 H 4 O 3 ) 2 (1) 2 mol/l 100g/L 0.01 mol/l 100g/L 30g/L 5g/L 0.05 mol/l ( ) 111

112 (2) 0.7g 100 ml (3) 100 ml 2 mol/l 5 ml100g/l ml 0.01 mol/l 100g/L 10 ml 30g/L mol/l ( 25 ml ) 5g/L 3 ( ) 2 2 (4) 1 mol/l 1 ml g X g/lc mol/lv st mlv ml (H 2 O 2 ) (1) 2 mol/l 100g/L 0.02 mol/l ( ) (2) 0.3g 100 ml (3) 10.0 ml 100 ml 2 mol/l 20 ml 100g/L mol/l 25 ml 2 2 (4) 1 mol/l 1 ml g X g/lc mol/lv pp mlv ml (O 3 ) (1) 3 mol/l 200g/L 5g/L 0.05 mol/l ( ) (2) : ml300.0ml 10mg/L ml 500 ml 200g/L 20 ml 3 mol/l 5 ml 5 min ( 350 ml 200g/L 20 ml) 500 ml 5L 3 mol/l 5 ml 5 min (3) 0.05 mol/l 5g/L 1 ml 2 c Vst Xg / L = 1000 V c Vpp Xg / L = 1000 V (4) 2 1 mol/l 1 ml mg c Vst X mg / L = V 112

113 X mg/lc mol/lv st mlv L (ClO 2 ) (1) DPD 0.1mol/L ( ) 0.01mol/L 5g/L 2.5 mol/l 100g/L 10g 100ml ph = g KH 2 PO gNa 2 HPO 4 12H 2 O 800ml 1000ml 50g/L 5g 100ml (2)500ml 200ml 1ml 1.0ml10.0 ml 10ml 0.01mol/L 1ml A (3) A 2.5 mol/l 2.5ml 5min 0.01mol/L B (4)500ml 200ml 1ml 1.0ml10.0ml 10ml 1ml C (5) C 2.5 mol/l 2.5ml 5min 0.01mol/L D (6)50ml 1ml 10ml 1.0ml10.0ml 20min 10 ml 5s 25ml 500ml 50ml 500ml 200ml300ml 0.01mol/L 1ml E = (7) CLO 2 mg/l=b-d c16863v CLO 2 - mg/l=dc16863v CLO 3 - mg/l=[e-a+b] c13908v CL 2 mg/l=[a-(b-d)4] c35450v ABCDE mlv mlc mol/l (8) 0.1mg/L 98.0% 10% (1) A 300ml A B 113

114 B 5mm C 10g 750ml B 10% 20ml C D 2L 1500ml ( 2-3) 2-3 ClO 2 5min 5ml 30min 4 250mg/L600mg/L (2) 250mg/L (3) 0.0ml4.0ml10.0ml20.0ml40.0ml60.0ml80.0ml100.0ml 100ml 0mg/L 10mg/L 25mg/L 50mg/L 100mg/L150mg/L200mg/L250mg/L 430nm (mg) (4) 430nm (mg/l) (5) X mg/l mg/lv 1 mlv 2 ml 10mg/L ~250mg/L 103.3% <10% AR mol/l 5g/L X mg / L = ρ V V g g 125ml 2g 250ml 1+820ml 20ml 5min 114

115 4 ( V X = V ) C m % 100 % X %V 1 mlv 2 mlm gc mol/l (CH 2 O) (1) 50g/L (1 2 ) 5g/L 0.05 mol/l ( ) 0.05 mol/l ( ) (2) 0.30g 100 ml (3) 50g/L 10 ml 5.0 ml 50 ml 0.05 mol/l 40 ml 20 min 25 ml 0.05 mol/l 25 ml 5g/L 10 ( ) 2 2 (4) 1 mol/l 1 ml g : V IS c = X g/lv IS mlc st mol/lv st mlc I mol/l V I mlv IF mlv ml C 5 H 8 O 2 (1) 6.5% 1% 10g/L 0.4g/L [17.5 g 75 ml 500 ml 0.4g/L 15 ml 6.5% ] 0.25 mol/l ( ) (2) 0.2g 250 ml 6.5% 20.0 ml 25 ml 1 h 0.25 mol/l 25 ml ( ) 2 2 st V c I s t V I F = V c VIF Xg / L = I 1000 V I V IS (3) 1 mol/l 1 ml g 115

116 c ( V Xg / L = X g/lc mol/lv 1 V 2 mlv ml 1% 10g/L ph 7.0 V 1) V (C 2 H 4 O) 2 (1) 5g/L - (0.2 mol/l MgCL 2 6H 2 O 120 g 100 ml) 0.1 mol/l ( ) (2) 20 ml - 40 ml 40mg50mg 5g/L mol/l ( 25 ml ) ( ) 2 2 (3) 1 mol/l 1 ml g c ( V X = V ) m 2 1 % 100% X %C mol/lv 1 V 2 mlm g (1) 2m4mm ( ) (N 2 ) 50 ml /min (2) 5mL 1 ml 1.965mg 100 ml 100 ml g/mL0.005g/mL0.01g/mL0.05g/mL 0.1g/mL 0.1ml (g) (3) 0.1 ml (4)1 116

117 X mg/m 3 V mlp KPat m gv 0 ml 273 p V 0 = V 273+ t m 1000 X mg / m = V (C 2 H 6 O) 0 (1) 2.0m4mm GDX N 2 45mL/min ml /min 450 ml /min (2) 0.1%0.2%0.3%0.5%1.0%2.0% 1ul (3) 1ul (4) V X = C V X %C %V 1 mlv 2 ml 0.1% 0.0%2.0% 99.5% 10% ( C 22 H 30 CL 2 N 10 2C 2 H 4 O 2 ) (1) (0.1 g 50 ml ) 0.1 mol/l ( ) (2) 0.15 g 100 ml 30 ml 2 ml ml ( ) 2 (3) 1 ml 1 mol/l g c ( V V ) X = m 1 2 % %

118 X %c mol/lv 1 V 2 mlm g (4) 0.15g G 1 G 2 G 2 G 1 30 ml 2 ml 3 m g/ L (X) (1) 0.02mol/L 2.7g 1000 ml ph g 100 ml 1L 1g (2) C mm4.6mm I.D.5µm 0.02mol/L µm 1.0 ml /min 254nm25 t R 3.1min (3) 0g/L0.05g/L0.2g/L0.4g/L 0.5g/L 5µl C Y (4) c ( V X % = 10µl 0.45µm ( C 22 H 40 BrN) (1) (4.3 g 100 ml ) (0.1 g 0.05 mol/l 3l 200 ml) 0.02mol/L ( ) (2) ( ) 0.25g 250 ml 50 ml 1 ml 0.4 ml 10 ml 50 ml V2 ) % m (3)1 mol/l 1 ml g c Vstp X % = 100% m c Vstp X g / L = 1000 V

119 X %g/lc mol/lv stp mlm mv ml C 22 H 40 Cl N (1) 0.1 mol/l 50g/L 0.05 mol/l (2) 0.5 g 35 ml ml 0.1 mol/l 10 ml 25 ml 50g/L 10 ml 3 10 ml ml 3 40 ml 25 5 ml 2 2 (3) 1 mol/l 1 ml g c Vst X % = 100% m c Vst Xmg / L = 1000 V 1 2 X %mg/lc mol/lv st mlm gv ml C 7 H 8 O 1 2% 4%10% g 50 ml 0.65g 25 ml 5ml 1µl g 0.1ml 3ml 20ml 5ml 5ml 5ml 1µl A 1 X % = f 1 + A 2 A m f m % X %A A 1 A 2 119

120 f 1 f 2 m 1 gm g HPLC (1) 280nmC mol/L (500:500:1 ph ) (2) g 100ml 1.00ml 50ml 0.05mg/ml 2 0.5g 50ml 40ml 3min 1.00ml 3 10µl (3) X % mg/mla F V mla m g (Na 2 S 2 O 3 ) (1) 0.1 mol/l Na 2 S 2 O 3 5H 2 O 26 g ml 30 d (2) g ( g) 250 ml 50 ml 2 mol/l 15 ml 200g/L 10 ml 10 min 90 ml ml 5 g/l 10 ( ) 1 mol/l 1 ml g m C( mol / L) = V C mol/lm gv ml 0.05 mol/l 0.1 mol/l (3) % ρ A F V X = 100 % A m

121 (I 2 ) (1) 0.1 mol/l 13 g 36 g 100 ml ml (2) 100 ml 0.05mol/L0.09 mol/l 25.0 ml5g/l 2 ml 25 1 mol/l 1 mol/l C1 V ( mol / L) = V C 2 C mol/l C 1 mol/lv 1 mlv ml 0.05 mol/l 0.1 mol/l (KMnO 4 ) (1) 0.02 mol/l 3.2 g 1000 ml 15 min 2 d (2) g( g) 250 ml 10 ml ml 65 30s ( 55) 1 mol/l 1 ml g m C( mol / L) = V C mol/lm gv ml (H 2 SO 4 ) (1) 0.25 mol/l 15 ml 1000 ml (2) g( g) 250 ml 50 ml - 1 g/l 20 ml 2g/L 30 ml ml 2 min 1 mol/l 1 ml g m C( mol / L) = V 121

122 ml C mol/lm gv (NaOH) (1) 37 g 50 ml 0.1 mol/l 5.6 ml 1000 ml (2) g ( g) 250 ml 50 ml 2 (1 g 100 ml ) ( 50 ml ) 1 mol/l 1 ml g m C( mol / L) = V C mol/lm gv ml (HCLO 4 ) (1) 0.1 mol/l 750 ml ( 70%72% ) 8.5 ml ( ) ml 24 h (2) g( g) 100 ml 20 ml (0.5 g 100 ml )1 ( 25 ml ) ( ) 1mol/L 1 ml g m C( mol / L) = ( V 1 V 2 ) C mol/lm gv 1 V 2 ml [(C 6 H 5 ) 4 BNa] (1) 0.02 mol/l 7.0 g 50 ml ( 1.0 g 25 ml ph g 250 ml 15 min 10 min ph ml (2) 10.0 ml - ( 20g 300 ml 1 ml 60 ml80 ml 1000 mlph 3.7) 10 ml 0.5 ml 0.01 mol/l ( ) 1 mol/l 1 ml 1 mol/l 1 ml 122

123 ( V1 V2) C C( mol / L) = V C mol/lv 1 V 2 ml C 1 mol/lv ml (C 22 H 40 ClN) (1) 0.01 mol/l 3.8 g - (ph 3.7)10 ml 1000 (2) h 0.18g( g) 250 ml - (ph 3.7) 20.0 ml 50 ml 0.02 mol/l 25.0 ml 25.0 ml 250 ml 0.5 ml - ( ) 1 mol/l 1 ml g m C( mol / L) = ( V 1 V 2 ) C mol/lm gv 1 V 2 ml KIO mol/l g 1000 ml ph (ph ) (1) ph ph ph ph ph (2) ph ph ph ph ph ph ph (3) (ph ) h3h KHC 8 H 4 O g 1000 ml ph h3h 3.533g 3.387g 1000 ml ph Na 2 B 4 O 7 10H 2 O3.80g( ) 1000ml (4) ph 3 ph ph ph 0.02 ph ph 0.02pH 123

124 ph ph ph 1min 0.05 ph 0.1 ph ph ( ) GB GB (1) 1 g 0.1 g g g (2) (RSD%) (%) (3) 2 (%) 0.5% (%) 1% (4) 1% (%) 5% 1% (%) 10% (5) (6) (1) (2) X10.0% (n6) (3) RSD 5.0%(n6) (4) 5 10 ( ) ( 124

125 ) r 0.999(n5) (5) S/N= (1) 37( >75%) d 2 (2) 10% % d 10% 1 (3) (4) ( ) 10% (1) ( ) (2) (3) (4) (5) 10% (1) 24.0 mm 1.0 mm 2.0mm 9.80 cm 2 ( ) 6 : ( GB ) ( GB ) ( GB ) ( GB ) 125

126 (2) ( 800 ml1000 ml) (3) (120 GB 2477) (4) (5) ( 0.1 mg) (1) 10 min mm 50 1 h ( mg (2) 200 ml (3) 72 h 72 h (4) 3 1 cm (600 ml ) (5) GB : : (500ml 36%38% 1000ml 1.19)1min3min 200 g/l 5 min30 min ( 20 g 500ml 1000ml 1.69) 80 5min10min ( 1.42) 1min 60 (66%68% 100 ml 1000 ml) 20 min 70 ( 150 g 1000 ml)10 min60 min (6) 50 1h 3 ( ) (7) (8) <0.3 mg (9) (R) [R mm/a / m gm t g m k g m k S cm 2 t hd kg/m 3 ] R = S ( m t d m t m k ) 126

127 Rmm/a < < < (1) (2) (3) (4) (5) (5) o C (7) ) 2) g22g 180g220g LD LD % 10% % 0.2ml/10g 1.0ml/100g 3 24h d LD 50 14d LD ( )

128 % 100% % % : 10 ( 0%) % : % 100% 0% 100% ) (X) (Y) 3) LD 50 LD 50 95% S =(X X )/(Y Y ) Sm =S/(N'/2) -1/2 128

129 LD 50 95% = log LD 50 ± 1.96Sm ( LD 95% ) 50 [Sm LD 50 S X 1 X 2 4(Y 1 )6(Y 2 ) N'Y 1 (=4)Y 2 (=6) ] ( ) 5000mg/kg 14d 5000mg/kg (Horn) (Karber) LD mg/kg LD mg/kg5000mg/kg LD 50 51mg/kg500mg/kg LD 50 1mg/kg50mg/kg LD 50 1mg/kg LD mg/kg 5 LD 50 LD g22g 180g200g h 1 3L 30L 2 4 ~5 ad C= 10 6 : C mg/m 3 V a (ml) d V L h 129

130 C ad C= 10 6 V 1 + V 2 mg/m 3 a (ml) d V 1 V 2 (L) L LC 50 (2.3.1) 20 2h 10000mg/m 3 14d LC mg/m LC 50 2h 10000mg/m 3 LC 50 2h 1001 mg/m mg/m 3 LC 50 2h 101 mg/m3 1000mg/m 3 LC 2h 10 mg/m mg/m 3 LC 50 2h 10mg/m / (1) 24h 3cm 3cm (2) ( 5 0.5mlg 2.5cm 2.5cm 2 ~4 ( ) 4h 130

131 (3) 1h24h 48h cm 2.5cm [ (2)]0.5mlg 4h 14d 24h ( ) = 14d : mm 3 1mm

132 ml 2 4s30s 1h24h48h72h 7d14d 21d 72h 7d 14d 2% h48h 72h 24h48h 72h

133 0 ( ) d d ** 2 21d *** 1 21d / =0 =0 1 =0 1 ** *** d* ** *: : =0 =0 1 =0 ** 1 21d

134 2.0kg~2.5kg A B ~ ~ C D =A+B+C+D (1) 5 (2) 8cm 2ml (3) 4cm~5cm 2ml (4) h 134

135 5d (5) (6) 24h 10% 24h 3 HE (1) 2-16 (2) (3) 2-17 (4) ~5 5~9 9~ g300g (1) ( 24- ) (2) (3) 24h 3cm 3cm ( )0.5mlg 2cm 2cm 2 4 6h 7d 14d (4) 14d 0.5mlg 2cm 2cm 2 4 3cm 3cm 6h 24h 48h 135

136 2-17 (5) 24- (6) (1) (%) A : B : (%) % (1) 136

137 (2) (3 1 ) 10% ( ) LD 50 1/5~1/ ~5 2 LD mg/Kg 1000mg/Kg (1) (2) (3) 28d~30d 24h (1) (2) (3) (4) / 100% (5) L5178Y F 10P : Fischer RPMI % 220g/ml 100IU/ml 100g/ml (ph ) 4 137

138 2F 0P : Fischer RPMI g/ml 100 IU/ml 100g/ml (ph ) 4 3) : 5630min -20 4) :Fischer RPMI % 220g/ml 0.37% 5 ( PBSpH ): (KH 2 PO 4 ) 0.20g (Na 2 HPO 4.12H 2 O) 2.89g (KCl) 0.20g (NaCl) 8.00g ( ) 1000ml 6) : F 10P F 0P (DMSO) DMSO 1%(V/V) 7) : (EMS) C(MMC) (MNNG) (a)(bap) 8 (TFT): 100g/ml 3 9 (S9 ): SD Wistar 150g 5 6 (Aroclor 1254) 200mg/ml500mg/kg 5d 0.15mol/L ( )0.15mol/L 3ml (0 4) 9000g 10min S9 S S9 S9 10% S9 S9 0.10ml 1.65mo1/L mol/l 0.04ml -6-.2Na II (NADP) F 0P 1.0ml mg 3.1mg L5178Y [ (TK) (tk+/tk-)] TK THMG F 10P 24h (tk-/tk-) THG ( THMG ) 1d3d [THMG 4 : mol/l mol/l mol/l 138

139 mol/l] %20% 10mmol/L 5mg/ml S9 S : F 10P F 10P 100 ml /ml /ml 5% 37 L5178Y 10h11h 24h 5 F 10P 4 ( F 10P 24 ) F 10P F 0P 50% ( 5%) 2) : F 10P F 0P /ml 50ml 6ml S9 4ml( 10ml) S9 F 0P 5% 37 4h 200g 10min Hanks 20mlF 10P ( 0.3 l0 6 /ml) 5% 37 3 : 2d 24 48h /ml 4 : 10ml 1mlF 10P 100ml 3 l0 4 /ml 37 30min 0.5ml 1.0ml TFT 15min 3 10cm 33ml 1 l0 6 ( TFT ) 0.5ml 1:100 3 l0 2 /ml 15min 2.0ml 1:50 ( 6 /ml) 15min 3 100mm 33ml 200 ( VC ) (37) 10d (CFE) 5) ( ) 6) : CFE = ( / ) CFE = ( CFE / CFE) 100% (MF) = (TFT / VC ) 2 l L5178Y 20/ / MF ( ) 139

140 - L5178Y TK V Eagle (EMEM)RPMI % (100IU/ml) (100g/ml) 2) : 56 30min ( PBS): ) -EDTA : PBS EDTA 0.05%EDTA 0.02% 1:1-20 5) : (DMSO) DMSO 0.5%(V/V) 6) : (EMS) C(MMC) (MNNG) ()(BaP) 7)6- (6-TG): 0.5% 1.0mg/mL 4 8 (S9 ): : 3.8g 375ml 125ml 37 48h /15mol/L (ph6.8) (1/15mol/LpH6.8) : : 9.47g 1000ml 1/15mol/L : 49.07g 1000ml 1/15mol/L 49.5ml 50.5ml ph6.8 1/15mol/LPBS (V79) THMG( )MEM HGPRT MEM %20% 10mmol/L(5mg/ml) S : mm 140

141 2 13 (37) 24h (2) PBS 2 S9 S9 S9 2mlS9 S9 2ml 10ml CO 2 5h PBS 2 10ml CO 2 19h~22h ( ) S9 (3) -EDTA [ )] mm (CFE) (4) : (37) 7d CFE (5) : TG 5g/ml 7d10d (MF) (6) ( ) ( (7) : CFE = ( / ) CFE = ( CFE/ CFE) 100% (MF) = ( / ) 1/ CFE (1)V79 10/ /10 6 (2) MF ( ) - V79 HGPRT (1) : Eagle (EMEM)Dulbecco (DMEM) 10% (100IU/ml) (100g/ml) (2) : 56 30min -20 (3) [ PBSpH )] (4) -EDTA: (5) : (DMSO) DMSO 1.0%(V/V) 141

142 (6) S9 S9 C (7) (S9 ): ) (8) (0.04%) 40mg 100ml 0.85% (9) (0.075mol/L) (10) / (3:1V/V) : (11) : ) CHL V79 CHO CHL CHL 1 l mm %20% 10mmol/L(5mg/ml) ( ) S (1) S9 (10%) 2h Hanks 3 24h 2h4h ( 1g/ml) (2) -EDTA (1000r/min1200r/min 5min7min) 0.075mol/L 10min20min / 2 15min (3) ( ) (4) 100 ( ) : ( ) (1) : 0.5% 142

143 (2) : C (3) : (4) : g30g ( ) 1/2LD 50 1/5LD 50 1/20LD 50 - LD mg/kg 5000mg/kg (1) 30h 24h 6h (2) (3) 0.1ml (4) 5min10min 10min15min ph6.8pbs (5) (40 mg/kg ) (1mg/kg1.5mg/kg ) ( ) (6) PCEPCE [ (NCE) ] 1/201/5 (7) 1000 PCE 1 PCE 2 1 PCE/NCE 200 PCE NCE PCE/NCE % u (1) : C (2) (0.04%):40mg 100ml 0.85% (3) (0.075mol/L) (4) / (3:1V/V) : (5) [ )] (6) (PBS1/15mol/LpH7.4) 143

144 ( 25g30g) ( 180g220g) /2LD 50 1/5LD 50 1/20LD 50 LD mg/kg 5000mg/kg ( ) 6 (40mg/kg ) C(1.5mg/kg2mg/kg ) ( ) (1) 24h 6h 2h4h 0.04% 4mg/kg (2) (3) 5ml 10ml (4) (1000r/min5min7min) 0.075mol/L 7m1 37 7min (5) 2ml / (1000r/min5min7min) 7ml 7min (1000r/min7min) (6) 1 2 (7) (8) 100 : : (9) 100 (10) ( ) (40mg/kg ) (1.5mg/kg2.0mg/kg ) ( ) ( ) DNA DNA (1) :Eagle (EMEM)85 15 ( 100IU/ml) ( 100g/mL)pH (2 : EMEM 98 2 ( 100IU/ml) ( 100g/mL) 144

145 (3 : ) (4 ( PBS): (5 -EDTA : (6 / (3:1V/V) : (7 (HU) :250mmol/L (81% (9 3 H- (10NTB-2-4 (11 (S-9 ): (12) : (Kodak)D-196 F (2BS) %20% 10mmol/ml ( ) (2BS) (1) /ml /ml d3d 50% 2 3 (2) 3d (3) (HU) 10mmol/L 37 16h HU(10mmol/L) 3 H - (5Ci/ml10Ci/ml30Ci/mmol) 37 5h (4) ( ) (5) Hanks 3 1% 10min - 30min 2 (6) NTB-2 ( -4 ) min20 min 5s (7) 4 10d D-19 4min 30s F-5 10min (8) 100 " /" t " /" 145

146 ( ) - DNA DNA ( ) (1) : 0.5% (2) : C (3) (4)2.5% : 2.5g 100 ml g35g /2LD 50 1/5LD 50 1/20LD 50 LD mg/kg 5000mg/kg ( ) (1) 5d 1 (2) 35d (3) 2ml 3 (1000r/min5min) (4) 5min 1h (5) 1000 (6) ( 40mg/kg60mg/kg ) C( 1.0mg/kg1.5mg/kg ) ( ) (1) : 0.5% (2) : 146

147 (3) (0.04%):40mg 100ml 0.85% (4) / (3:1V/V) : (5) (6) : g30g ( ) (40mg/kg ) C(1.5mg/kg2mg/kg ) (1) 24h 6h 3.5h5.0h 0.04% 4mg/kg 1 5d 1 12d 14d 3.5h5.0h 0.04% (4mg/kg ) (2) 2.2% 2 (3) 2.2% 3ml4ml (1% ) 10min 25min ( / ) 10min 10min 3 30min 50% 5ml (1000r/min5min) (4) 1.0ml1.5ml 2 70% (5) 10min (6) 50 ( ) X-Y ( ) ) 2)

148 (3 1 ) 20 10% ( ) LD 50 1/20~1/5 3 3 ~ (90d) 24h ~2 2) 3) 4) ( ) 5) )1/1000 : 0.1g 10g 1000m1 2) A: 200ml 10g 790ml 3) B: 4) (Bouins ):

149 ( ) 200g250g 25g30g /10LD 50 1/100LD 50 (300mg/kg ) (1mg/kg ) A(40000IU) :1 2:1 ( ) 5d 2 6d15d 0d6d10d 15d 20d 3 20d 18d 4) ( ) 5 1/22/3 ( ) 2 3 A 1d2d B 2d3d 6) : 7) 1/31/2 2 4 : = ( LD 50 )/( )

150 ) 5% )

151 ( ) % ) = 100% 2 (WHO1969) (3) 3 50 (4-151

152 LD mg/kg LD mg/kg 5 LD mg/kg 2 LC mg/m mg/kg (mg/kg ) (mg/kg )

153 : : : 2 1 ( 10min15min) 102.9kPa(1.05kg/cm 2 ) 121 ( 20min30min) kPa(1.05kg/cm 2 ) 102.9kPa(1.05kg/cm 2 ) min30min kPa(2.1kg/cm 2 ) min 153

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