水产学报卷经过对该场实地调查和现场解剖结果, 选取临床症状不同的病鳖只和正常鳖只作组织病理研究. 病理解剖进行病理比较解剖观察研究, 根据病理解剖结果进一步确定该病的病程发展的典型症状, 并为正确选择石蜡切片和电镜切片的病料提供依据. 石蜡切片制作与观察参考病理解剖结果, 选择典型症状的

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璜馗堵
7 years ago
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1 第卷第期年月水产学报.,., 中华鳖非寄生性肝病组织病理研究潘连德 ( 上海水产大学渔业学院, ) 摘要运用病理解剖显微与亚显微组织病理学研究方法, 详细研究了温室养殖中华鳖非寄生性肝病的组织病理学特征, 结果表明, 肝脏是该病最严重的病灶, 按病程发展的病理变化和典型临床症状, 划分为 Ⅰ ~ Ⅳ 时期病鳖表现出肝损害所致的组织炎症反应肝细胞水样变性和脂肪变性肝性水肿和血肿肝细胞坏死肝组织硬变和腹水等病理特征随着病程的发展, 肝脏由功能不全到功能衰竭, 直至病鳖死亡文中还探讨了该病的致病原因和防治措施关键词中华鳖, 非寄生性肝病, 组织病理学自年月起, 我国中华鳖 ( ) 主产区的江浙沪闽粤等地相继发生了被称为腮腺炎腹水病肥胖病养殖综合症的疾病, 典型的临床症状为 : 停食活动迟缓四肢和脖颈肿大且不能伸缩体腔腹水肝脏肿大日死亡率在 %~ %, 严重场池达 %, 患病率 % 病鳖为养殖期个月以上的规格在 / 只 ~ / 只的幼鳖和成鳖, 损失严重年月我们对这次鳖病进行了诊断防治方面的系统研究查明了致病原因, 并诊断为中华鳖非寄生性肝病 ( 潘连德 ) 有关养殖鱼类肝损害 [,, ] 肝脏脂肪变性 [ 等, 朱雅珠等, 殷源洪等 ] 肝病 [ 姜礼燔 ] 肝癌 [ 姜礼燔和曹萃禾, 张永嘉 ] 的研究, 饵料中添加极低剂量的化学物质或黄曲霉素导致鲑科某些鱼类患肝变性和肿瘤 [ ] 的研究, 中华鳖肿瘤的危害 [ 和 ] 的研究已见报道关于中华鳖传染病寄生虫病研究报道较多, 并见有这些疾病对肝脏损害的一些病理研究台湾日本过去流行的鳖腮腺炎病 [ 川崎义一 ] 与非寄生性肝病有相似的临床症状对日本鳖 ( ) 的脂质代谢异常疾病 [ 福田博业和木村正雄,, 福田博业和黑木扬, ] 系统研究和中华鳖蜡样症的组织病理学和组织化学研究 [ 延东真等 ] 结果为非寄生性疾病病理和临床症状研究奠定基础, 而中华鳖日本鳖以及其它水产养殖动物的非寄生性肝病研究均未见报道本文报道了中华鳖非寄生性肝病肝组织细胞的显微与亚显微病理研究结果, 以及对该病病因危害和防治措施的探讨, 为温室养殖中华鳖非寄生性肝病的诊断和预防提供依据材料与方法. 病料来源江苏省吴江市某温室养鳖场年放养稚鳖万只, 年月发病, 同池并发腐皮病收稿日期 : - - ( ) 潘连德.. 温室养殖中华鳖非寄生性肝病的诊断研究.

2 水产学报卷经过对该场实地调查和现场解剖结果, 选取临床症状不同的病鳖只和正常鳖只作组织病理研究. 病理解剖进行病理比较解剖观察研究, 根据病理解剖结果进一步确定该病的病程发展的典型症状, 并为正确选择石蜡切片和电镜切片的病料提供依据. 石蜡切片制作与观察参考病理解剖结果, 选择典型症状的病理组织块, 氏液固定, 常规石蜡包埋, 切片厚度 ~ μ,.. 染色, ( - ) 显微镜观察拍片. 电镜切片制作与观察在摘取制作石蜡切片组织块时, 同步留取电镜切片组织块, 切成 ~ 小块,. % 戊二醛溶液前固定,. 磷酸缓冲液洗次, % 锇酸后固定,. 磷酸缓冲液洗次, 酒精梯度脱水, % 酒精 + 丙酮 ( ) 浸透, 丙酮 + 包埋剂 (. )( ) 再浸透, 包埋剂包埋, 模板固定, 烘干, - 超薄切片机切片, 醋酸铀 - 柠檬酸铅双重染色, -Ⅹ Ⅱ 透射电镜观察拍片结果通过对各地温室养殖患病中华鳖的现场调查, 并对大量的病鳖和濒死鳖临床解剖, 然后做显微与亚显微组织病理研究, 结果表明, 肝脏是该病最严重的病变组织和器官, 且病理变化明显临床症状典型按该病病程发展划分为 Ⅰ ~ Ⅳ 时期 : Ⅰ 期 : 肝静脉及其分支血管扩张肝细胞脂滴积累解剖见肝脏有红色淤血点斑块等病灶显微观察, 肝小叶汇管区肝细胞索基本正常, 白细胞在中央静脉贴壁, 窦状隙扩张 ( 图版 Ⅰ- ), 肝门静脉略膨胀, 内积血液红细胞减少, 白细胞数量增加 ( 图版 Ⅰ- ) 电镜观察, 肝细胞结构正常, 内有大量脂滴和空泡, 线粒体和内质网发达, 有少量血细胞在肝组织中 ( 图版 Ⅰ- ); Ⅱ 期 : 肝组织白细胞浸润并淤血解剖见肝脏变红色红紫色, 体积正常显微观察, 肝门静脉膨胀, 内积血液红细胞较少, 白细胞增多并占绝大部分 ( 图版 Ⅰ- ), 白细胞贴壁游出聚集 ( 图版 Ⅰ- ) 等浸润明显电镜观察, 肝细胞内脂滴增多增大连片, 核仁变形核靠边, 线粒体及其嵴体积膨胀 ( 图版 Ⅰ-, ), 白细胞浸润数量剧增, 嗜中性粒细胞个体大数量多, 且核型多变 ( 图版 Ⅰ- ), 溶酶体合胞体增多 ( 图版 Ⅰ- ); Ⅲ 期 : 肝血肿肝组织变性解剖见肝脏紫色褐色, 肝脏 ( 右叶 ) 体积增大 ~ 倍, 充塞体腔, 质地柔软, 刀切有淤血流出显微观察, 游出炎性细胞大量浸润肝组织, 充满白细胞的肝静脉管继续膨大管壁破裂, 大量血流出, 与游走的炎性细胞以及扩张的窦状隙门静脉及其分支充塞整个肝组织, 各种细胞混杂一体伴有渗出性出血 ( 图版 Ⅱ- ); 肝细胞空泡化, 细胞质淡染, 肝组织基本结构模糊, 表现严重血肿 ( 图版 Ⅱ- ) 所见肝细胞很少, 肝细胞膜不清, 白细胞聚集 ( 图版 Ⅱ- ) 电镜观察, 脂滴被大而多的空泡所取代, 内质网扩张而呈囊泡状, 线粒体膜破裂嵴溶解 ( 图版 Ⅱ- ), 合胞体增多, 炎性细胞浸润肝细胞内外遍及肝组织 ( 图版 Ⅱ- )

3 期潘连德 : 中华鳖非寄生性肝病组织病理研究图版 Ⅰ Ⅰ. 肝小叶门静脉窦状隙,.. 染色 ;. 电镜下肝静脉血细胞 ;. 电镜下肝细胞内脂滴和空泡 ;. 肝静脉中血细胞,.. 染色 ;. 肝组织炎性细胞游走聚集,.. 染色 ;. 电镜下肝细胞内大量脂滴 ;. 电镜下白细胞浸润肝细胞 ;. 电镜下浸润的嗜中性粒细胞 ;. 电镜下合胞体溶酶体 ;

4 水产学报卷图版 Ⅱ Ⅱ. 血肿肝组织,.. 染色 ;. 肝组织炎性细胞聚集,.. 染色 ;. 电镜下肝细胞核外膜皱缩线粒体破裂 ;. 电镜下白细胞浸润肝细胞 ;. 肝组织渗出性出血,.. 染色 ;. 肝小叶间静脉膨胀破裂,.. 染色 ;. 血肿肝组织,.. 染色 ;. 肝细胞空泡化线粒体和内质网破碎 ;. 肝细胞核膜皱缩核仁溶解 ; Ⅳ 期 : 肝硬变水肿肝细胞坏死病鳖体胖厚, 四肢和颈部肿大而伸缩困难解剖见肝脏颜色转淡粉色且表面散布白色粒状腊脂, 质地硬, 刀切有积水流出体腔内有大量血样腹水或尿样腹水或水样腹水, 濒危病鳖肝性水肿体腔和肢体腹水严重, 并逸出恶味显微观察, 炎性细胞大量聚集, 静脉破裂淤血流出肝细胞坏死 ( 图版 Ⅱ- ), 肝组织被这些炎性细胞扩张的

5 期潘连德 : 中华鳖非寄生性肝病组织病理研究窦状隙以及积满血液的门静脉及其分支分隔为束状团状 ( 图版 Ⅱ- ), 结缔组织纤维变性电镜观察, 肝细胞内布满空泡, 细胞核膨大, 线粒体溶解 ( 图版 Ⅱ- ), 膜裂解核仁溶解 ( 图版 Ⅱ- ) 综上结果, 中华鳖非寄生性肝病的组织病理和临床症状变化过程为 : 肝脏负担过重和肝中毒并造成严重肝损害肝组织脂肪变性和炎性细胞浸润的炎症反应肝脂肪变性和水样变性使肝组织细胞膨胀肝门静脉及其分支血液回流受阻窦状隙扩张而淤血血肿肝细胞变性坏死和空泡化结缔组织增生纤维变性形成肝硬变肝性水肿水肿液自肝被膜渗出滴入腹腔形成腹水腹水渗透四肢和颈部导致全身性水肿讨论. 肝组织病理变化的特征和病程发展的规律性组织病理结果表明, 该病为肝组织中毒性慢性代谢性疾病特点患病鳖的肝脏是主要的病灶, 病理解剖和组织病理显微观察未发现其他器官组织发生病变当疾病发展到后期方表现出外部临床症状 : 停食腹水四肢和颈部水肿活动缓慢的濒危状态由于病程较长, 前期临床症状不明显而不易发现, 早期诊断困难研究证实该病的病灶症状明显, 病程发展规律性强中华鳖的肝脏由初期的仅有少量的淤血点, 发展到淤血斑块全部肝脏变为紫色或褐色, 反映了肝脏淤血不断加重的典型症状 ; 肝脏的体积与颜色的变化是同步的, 因脂肪变性和淤血肿胀到 ~ 倍, 并挤压内脏器官 ; 血肿症状严重 ; 继续恶化为肝硬化肝性水肿等疾病的典型经过和结局肝脏由功能不全, 发展到功能衰竭, 直至死亡大量组织病理的显微和亚显微观察结果有力支持了这一结论该病病理变化同陆上动物中毒性肝病有相似之处 [ 伍喜林 ] 初期肝细胞的脂肪变性病理同日本鳖脂质代谢异常病 [ 福田博业和木村正雄 ] 具有相同点, 同团头鲂 [ 朱雅珠等 ] 虹鳟 [ 殷源洪等 ] 的脂肪肝病和鲤罗非鱼肝病 [ 姜礼燔 ] 组织病理也有共性中华鳖蜡样症 [ 延东真等 ] 同该病晚期症状相似. 致病原因和病理机制分析长期中毒性肝损害是致病原因 : 病鳖的组织病理显微与亚显微观察结果表明, 温室养殖中华鳖非寄生性肝病的致病原因是强度摄取食物造成肝负担过重和长期接受药物毒物所致中毒性肝损伤, 而引起脂肪变性水样变性, 造成肝组织坏死肝性血肿和水肿, 最后肝硬化肝性腹水, 与人类 [ 叶维法和钟振义 ] 和动物 [ 伍喜林, 朱雅珠等 ] 药源性食源性肝损害引起肝病而致死病因与病理相似病理机制分析 : 温室养殖中华鳖强化摄食使肝脏负担过重而体积增大和药物毒物使肝中毒一并造成严重肝损害, 引起肝组织炎性细胞游走的炎症反应, 脂质代谢异常使肝细胞脂肪变性, 毒物使细胞坏死致水样变性, 严重的脂肪变性和水样变性使肝细胞膨胀压迫静脉使血液回流受阻, 肝门静脉及其分支而淤血窦状隙扩张, 造成严重血肿和出血, 肿块膨胀, 再压迫肝细胞而加剧变性坏死和空泡化, 结缔组织增生并纤维化形成肝硬变, 发生肝性水肿, 水肿液自肝被膜渗出滴入腹腔形成腹水, 而后渗透四肢和颈部导致全身性水肿

6 水产学报卷. 中华鳖的非特异性细胞免疫水平组织病理研究发现, 中华鳖血液的细胞组成随着疾病的发展而剧烈改变, 具有免疫功能的白细胞受到细胞因子的激活后, 数量增加快种类多功能活跃肝组织中大量的游走白细胞在病变坏死组织处聚集的现象很普遍, 尤其是嗜中性粒细胞的数量多个体大, 且核大而变形复杂, 在细胞免疫中发挥主要作用电镜观察可见, 大量个体较小的白细胞浸润较大的肝细胞内吞噬坏死的细胞器及其碎片粒细胞和巨噬细胞分泌的溶酶体及其合胞体数量大消化机能强严重血肿的病灶可见各种各样的白细胞淋巴细胞遍部肝组织, 渗出和漏出的红细胞较少 ( 潘连德 ) 有关中华鳖肝组织中白细胞和淋巴细胞的演变机制和免疫功能问题, 有待进一步研究. 中华鳖非寄生性肝病的危害性患病初期因肝组织脂肪变性水样变性, 而肝功能不全, 表现食欲下降消化机能减弱饵料利用率降低, 生长缓慢或停滞后期肝性血肿肝性腹水肝硬化, 使肝功能衰竭, 表现停止摄食生命垂危, 无法治愈由于肝脏的解毒消化合成功能不全, 使中华鳖抗病力与免疫力下降, 腐皮病白板病红脖子病等细菌性和纤毛虫等寄生虫病继发此时, 应准确区分原发性和继发性疾病, 做到准确诊断和有效治疗患肝病继发或并发其它疾病时, 进行药物治疗一方面会加剧肝损伤, 使肝病恶化, 患病严重者大量死亡, 也因肝功能不全, 使药物的体内药效降低, 很难取得理想效果. 中华鳖非寄生性肝病防治的可行性根据温室养殖中华鳖非寄生性肝病病理特点和致病原因, 必须执行有效的预防措施, 注重疾病早期诊断早期治疗, 患病初期 (Ⅲ 期以前 ) 及时消除致病因素并采取药物治疗有效, 否则疾病进入晚期 (Ⅲ 期以后 ) 就无法可医建议从下面几个方面采取预防措施 : 合理用药, 避免药物性肝损害合理使用添加剂和饲料原粮, 避免肝中毒和脂质代谢紊乱等食源性肝损害饵料的不全价 [ 曹俊明等 ] 添加剂不合适乃至含有毒物, 是造成肝损害的主要原因不使用变质油脂霉变原粮和不合适的添加剂 ( 药物添加剂和 ), 是行之有效的预防非寄生性肝病的方法以往对海水鱼类肝脂肪变性和绿肝研究认为, 合理添加和胆碱, 有利于肝功能恢复, 但过量添加会导致性早熟, 还有损害作用 [ 孟庆显 ] ; 强化投饲, 过度摄食, 肝负担过重肝体积重量增大, 而防御能力下降, 成为病因的易感器官, 这就是单方面的追求快速生长的不良后果 ; 使用保肝健脾解毒等功效的中药添加剂, 可提高中华鳖的非特异性免疫水平, 预防非寄生性肝病效果好同时运用对肝损害较小的抗微生物药物 ( 抗生素化学合成药物 ), 控制继发感染的病原菌, 可取得温室养殖中华鳖疾病防治的理想效果本项目得到上海市教育委员会重点学科基金部分资助研究工作得到江苏省吴江市龙鑫集团公司董事长黄伟林, 上海水产批发商陈如江, 福建省涵江市商检局特种水产研究所所长翁国柱, 上海水产大学电镜室周孝康张敏等同行各方面的支持和帮助, 在此诚致谢忱 ( ) 潘连德.. 中华鳖肝组织炎性细胞的浸润及其结构研究.

7 期潘连德 : 中华鳖非寄生性肝病组织病理研究参考文献叶维法, 钟振义.. 肝炎学大典. 天津 : 天津科学技术出版社. ~. 伍喜林.. 动物脂肪肝与营养. 饲料与畜牧,( ): ~. 朱雅珠, 杨国华, 刘玉良.. 团头鲂的脂肪肝及防治研究. 水产科技情报, ( ): ~. 张永嘉.. 尼罗罗非鱼肝癌的病理组织学研究. 水产学报, ( ): ~. 孟庆显.. 海产动物疾病学. 北京 : 农业出版社. ~. 姜礼燔, 曹萃禾.. 中华鲟肝脏癌变的环境污染因初探. 水产科技情报,( ): ~. 姜礼燔.. 鱼类肝病的组织病理学研究. 淡水渔业,( ): ~,. 殷源洪, 杨琛, 刘静雯等.. 虹鳟肝脂肪变性病病理学的初步研究. 鲑鳟渔业,( ): ~. 曹俊明, 林鼎, 劳彩玲等.. 饲料中添加大豆磷脂对草鱼肝胰脏脂质脂肪酸组成的影响. 水产学报, ( ): ~. 川崎义一,. スッポン养殖讲座 9. 养殖, ( ): ~. 延东真, 宫崎照雄, 田三郎他.. スッポンのセロィィド症にづぃて -Ⅰ 自然发症例にづぃて. 鱼病研究, ( ): ~. 福田博业.. 养殖スッポンに发生した脂质代谢异常にっぃこ -Ⅰ. 日本水产学会志, ( ): ~. 福田博业, 木村正雄.. 养殖スッポンに发生した脂质代谢异常にっぃこ -Ⅱ. 日本水产学会志, ( ): ~. 福田博业, 黑木扬.. 养殖スッポンに发生した脂质代谢异常にっぃこ -Ⅲ. 日本水产学会志, ( ): ~. 福田博业, 木村正雄.. 养殖スッポンに发生した脂质代谢异常にっぃこ -Ⅳ. 日本水产学会志, ( ): ~..... ~.,,.. ( )., : ~.,.. -,.. : ~..... ~..... ~ , :. - - (,, ), -, -.,.. ( ) :,,,,.. -., -,