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1 生物工程学报 Chin J Biotech 2009, December 25; 25(12): journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN cjb@im.ac.cn 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved 综述 徐寒梅, 周长林, 郑珩, 吴梧桐, : 随着生物技术和现代药剂学研究的进展, 酶类药物的应用取得了快速发展, 已成为生物药物的一个重要门类 以下对治疗用酶的新品种 作用机理和新技术在治疗酶中的应用 酶作为药物靶点的应用等进行了回顾, 并对未来治疗酶的发展方向进行了讨论 : 治疗酶, 新品种, 作用机理, 新技术 Progress in the research of therapeutic enzyme Hanmei Xu, Changlin Zhou, Heng Zhen, and Wutong Wu Department of Life Science and Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing , China Abstract: With the development of the research on biotechnology and modern pharmacy, the application of enzyme drugs have grown rapidly and enzyme drugs have become an important branch of biopharmaceutics. In this article, some new varieties of therapeutic enzymes, enzyme targets, mechanisms and new technologies of application in therapeutic enzymes were reviewed, and the direction of development of therapeutic enzymes were discussed. Keywords: therapeutic enzyme, new varieties, mechanisms, new technologies,,,, 15 20, 100, : 1), β- α- ; 2) ; 3), ; 4), III (tpa) ; 5), ; 6),,,,,,,, Received: October 9, 2009; Accepted: November 6, 2009 Corresponding author: Wutong Wu. wuwtong@cpu.edu.cn

2 : 几种治疗酶的作用机理,,,, 1.1 治疗酶抗肿瘤的作用机制 - L-, L- L-, 3,, : ;, [1-2], -, cyc, cyc Apaf-1 Preocaspase-9, Caspase-9, ADP- (PARP), 1.1.2,,,,,,,,,,, (Ribozyme, Rz) RNA, mrna, 20 80, Kruger [3] (RNA), RNA,, RNA, mrna, : 1) :, 1~2 mm,, (VEGF), VEGF VEGF (VEGFR), VEGF VEGFR, Tokunaga [4] VEGF189 MIA PaCa2,, VEGF, Ciafrè [5] VEGF mrna,

3 1854 ISSN CN /Q Chin J Biotech December 25, 2009 Vol.25 No.12, VEGF 56% Ribozyme Chiron Angiozyme (Ribozyme), Ⅱ, [6-9] 2) :,, ( ras ) ( Bcl-2 Bcl-xl) ( Bcl-2, C-myc ),,,, [10-12] 3) : (Multidrug resistance gene, MDR) (P-glycoprotien, P-gp),, ATP, ATP, P-gp,,,, P-gp, 1994 Kiehntopf [13-14] 6 4 GUC, MDR1 mrna, MDR-1-, MDR-1-, MDR1 mrna, MDR1 mrna MDR, P-gp 1.2 治疗酶溶解血栓的作用机制 tpa γapc 1, ( ), 3 :, ;, t-pa,,,, C(γh-APC),, C C, C,, C TM( ),, C APC, APC S Ⅴ Ⅷ APC (PAI-1), PAI-1, APC

4 : (tpa) tpa, tpa, 2, tpa, 90 kd, tpa Arg561-Val562, -, N- Lys, C-, ( ), tpa, 1.3 胰酶制剂治疗慢性胰腺炎的作用机制, 图 1 凝血与纤溶过程 Fig. 1 Coagulation and fibrinolytic process. 图 2 t-pa 与纤溶过程 Fig. 2 t-pa and fibrinolytic process.

5 1856 ISSN CN /Q Chin J Biotech December 25, 2009 Vol.25 No ~8 g,, (CP) 10 10%,, A D E K CP, >15 g/d, 1.3.2, CCK, CCK CP, CCK,, CCK, CCK,, CCK, CCK, CCK,, 2 新技术在治疗酶中的应用,, ;,,, 2.1 重组 DNA 技术应用于治疗酶,,,,, - BM,,,, 700 d I Ⅱ, DNA, [15],,,, 2.2 治疗酶的分子设计, (Site directed mutagenesis) (In vitro molecular directed evolution) (Site-directed mutagenesis) (PCR) DNA, DNA,, (SBL),

6 : 1857 CMM K cat /K m, 22 [16] ; Ala L-, [17] 2.2.2,,,,, [18],,, [19], (MPEG),, X-, [20], - N- [17],, Cu(Phen) 2+ (Adipocyte lipid binding protein, ALBP), ALBP-Phen-Cu ( Ⅱ), 86%, 3 治疗酶的新品种和应用, : 1),, ; 2), ; 3),, PEG 3.1 研发中的溶栓酶 10, 3 (Urokinase) (Streptokinase),,,, ; (Tissue plasminogen activator, tpa) (Recombinant tissue plasminogen activator, rt-pa) (Scu-PA, u-pa ) tpa,,, ( 3 min),,, tpa,

7 1858 ISSN CN /Q Chin J Biotech December 25, 2009 Vol.25 No.12 : tpa tpa,,, (Lanoteplase, npa), tpa, npa, ;, Novartis AG tpa (scu-pa) cdna Amediplase(K1K2Pu ), [21-22] (Staphylokinase, Sak), sak 163, N , Sak42D SakΦC SakSTAR, 3 3,,, SakSTAR, Sak, rt-pa, Sak, Sak, : 1) 2, 73% IgG ; 2) Sak, 3 min Sak,, Sak Sak, [23-26] (rhpro-uk),, (Urokinase, UK) ; 411, ,, Lysl58-llel59 ; Argl56-Phel57 (Thromb-UK), tpa : 1),, tpa,, ; 2), [27] (Nattokinase, NK; Subtilisin NAT, Subtilisin BSP) (Bacilius subtilis var. natto), (Subtilisin) ,,,,,,, [28-29] (epa, lumbrokinase) (Earthworm plasminogen activator, EPA), (Lumbrokinase, LK), t-pa,, [30] 3.2 研发中的抗肿瘤酶,

8 : ,, L- [31-33] Wilm (Arginine deiminase, ADI, E.C ), (Ribonuclease, RNase) RNA, RNase, A(RNaseA) RNase(Onconase, ONC) RC-RNase RNase (BS-RNase) RNase(RNase I), RNA (Ribozyme, Rz) RNA, mrna, 3.3 开发中的其他酶类治疗药物,,,, : 1), 3 (MPS) : Aldurazymel( ) Aryplase( N-a -4- ); 2), Debrase MediWound,,, ⅡⅢ ; / Vibrilase( vibriolysin) Biomarin Pharm,, Ⅰ ; 3) Ⅰ [33] (Deoxyribonuclease I, DNase I), DNA, 5-3 -, DNaseⅠ, DNaseⅠ, DNaseⅠ, 4 酶作为药物靶点的研究, 500,,,,, - C, matriptase : matriptase, matriptase ( ) matriptase,,,

9 1860 ISSN CN /Q Chin J Biotech December 25, 2009 Vol.25 No.12, (camp)- 4(PDE4), (COPD),, - -ACP (Fab) Fab platensimycin [34-36] 5 治疗酶的增效作用, 5.1 治疗酶对抗生素的增效作用 1963 Seneca Peer [37], Seneca Peer :, 5.2 治疗酶对激素的增效作用 1969 Wohlman [38], 5 : 1) ; 2) ; 3) ; 4) ; 5),,, 5.3 治疗酶对细胞毒药物的增效作用,,, rhmnsod ADR,, [39], 6 结束语,,,, r-pa, DNA Fabry α- (α-galatosidaee) Gaucher s (Glulo cerebrosidaso) ;,,,,, (PEG) PEG-L, PEG ;,,, : SOD ;, FDA r-pa TNF-tPA t-pa,,,

10 : 1861, REFERENCES [1] Izzo F, Marra P, Beneduce G, et al. Pegylated arginine deiminase treatment of patients with unresectable hepatocellular carcinoma: results from phase I/II studies. J Clin Oncol, 2004, 22(10): [2] Holtsberg FW, Ensor CM, Steiner MR, et al. Poly (ethylene glycol) (PEG) conjugated arginine deiminase: effects of PEG formulations on its pharmacological properties. J Control Rel, 2002, 80: [3] Kruger K, Grabowski PJ, Zaug AJ, et al. Self-splicing RNA: autoexcision and autocyclization of the ribosomal RNA intervening sequence of tetrahymena. Cell, 1982, 31(1): [4] Tokunaga T, Abe Y, Tsuchida T, et al. Ribozyme mediated cleavage of cell-associated isoform of vascular endothelial growth factor inhibits liver metastasis of a pancreatic cancer cell line. Int J Oncol, 2002, 21(5): [5] Ciafrè SA, Niola F, Wannenes F, et al. An anti-vegf ribozyme embedded within the adenoviral VAI sequence inhibits glioblastoma cell angiogenic potential in vitro. J Vasc Res, 2004, 41(3): [6] Oshika Y, Nakamura M, Tokunaga T, et al. Ribozyme approach to down regulate vascular endothelial growth factor 189 expression in non-small cell lung cancer. Eur J Cancer, 2000, 36: [7] Tokunaga T, Abe Y, Tsuchida T, et al. Ribozyme mediated cleavage of cell-associated isoform of vascular endothelial growth factor inhibits liver metastasis of a pancreatic cancer cell line. Int J Oncol, 2002, 21(5): [8] Ciafre SA, Niola F, Wannenes F, et al. An anti-vegf ribozyme embedded within the adenoviral VAI sequence inhibits glioblastoma cell angiogenic potential in vitro. J Vasc Res, 2004, 41(3): [9] Kobayashi H, Eckhardt SG, Lockridge JA, et al. Safety and pharmacokinetic study of RPI. 4610(ANGIOZYME), an anti-vegfr-1 ribozyme, in combination with carboplatin and paclitaxel in patients with advanced solid tumors. Cancer Chemother Pharmacol, 2005, 56(4): [10] Gibson SA, Pellenz C, Hutchison RE, et al. Induction of apoptosis in oral cancer cells by an anti-bcl-2 ribozyme delivered by an adenovirus vector. Clin Cancer Res, 2000, 6(1): [11] Cheng J, Luo J, Zhang X, et al. Inhibition of cell proliferation in HCC-9204 hepatoma cells by a c-myc specific ribozyme. Cancer Gene Ther, 2000, 7(3): [12] Bi F, Fan D, Hui H, et al. Reversion of the malignant phenotype of gastric cancer cell SGC7901 by c-erbb-2-specific hammerhead ribozyme. Cancer Gene Ther, 2001, 8(11): [13] Kiehntopf M, Brach MA, Licht T, et al. Ribozyme-mediated cleavage of the MDR-1 transcript restores chemosensitivity in previously resistant cancer cells. EMBO J, 1994, 13(19): [14] McGrath BM, Walsh G. Directory of Therapeutic Enzymes. Baca Raton, Lonton, New York: Taylor & Francis Group, [15] Feng AJ, Yang TC, Liu G. Application and new progress of recombinant DNA technology. Pract Med J, 2005, 21(17): , 2005, 21(17): [16] Wu W, Jia Z, Liu P, et al. A novel PCR strategy for high-efficiency, automated site-directed mutagenesis. Nucleic Acids Res, 2005, 33(13): [17] Jia RB, Chen JH, Wu WT, et al. Construction and enzyme-activity assessment of L-asparaginase mutants. Pharm Biotechnol, 2005, 12(4): , 2005, 12(4): [18] Davis BG. Chemical modification of biocatalysts. Curr Opin Biotechnol, 2003, 14(4): [19] Liu JZ, Song HY, Weng LP, et al. Chemical modification of enzymes to improve their catalytic performance. J Mol Catal, 2002, 16(6): , 2002, 16(6): [20] Wang N, Ma RS. Advances in study on directed molecular evolution in vitro of enzyme. Biotechnol Bull, 2007, (2): ,.., 2007, (2): [21] Diaz-Ricart M, Bayes M, Bozzo J, et al. Lanoteplase. Drugs Fut, 2002, 27(1): 21. [22] Diaz-Ricart M, Bayes M. Amediplase. Drugs Fut, 2002, 27(6): 533. [23] Warmerdam PA, Plaisance S, Vanderlick K, et al. Elimination of a human T-cell region in staphylokinase by T-cell screening and computer modeling. Thromb Haemost, 2002, 87(4): [24] Vanwetswinkel S, Plaisance S, Zhi YZ, et al. Pharmacokinetic and thrombolytic properties of cysteine-linked polyethylene glycol derivatives of staphylokinase. Blood, 2000, 95(3): [25] Collen D, Sinnaeve P, Denarsin E, et al. Polyethylene glycol-derivatized cysteine-substitution variants of recombinant staphylokinase for single-bolus treatment of acute myocardial infarction. Circulation, 2000, 102(15): [26] Moreadith RW, Collen D. Clinical development of

11 1862 ISSN CN /Q Chin J Biotech December 25, 2009 Vol.25 No.12 PEGylated recombinant staphylokinase (PEG-Sak) for bolus thrombolytic treatment of patients with acute myocardial infarction. Adv Drug Deliv Rev, 2003, 55(10): [27] Ning RX, Wang R, Cui XY. A new thrombolytic drug:recombinant human prourokinase. Chin J New Drugs, 2008, 17(5): ,,.., 2008, 17(5): [28] Nie GJ, Yue WJ. Nattokinase. Chem Life, 2009, 29(1): ,.., 2009, 29(1): [29] Cao ZH. Nattokinase and its progress. China Food Addit, 2008, (4): , 2008, (4): [30] Sugimoto M, Nakajima N. Molecular cloning, sequencing, and expression of cdna encoding serine protease with fibrinolytic activity from earthworm. Biosci Biotechnol Biochem, 2001, 65(7): [31] Izzo F, Marra P, Beneduce G, et al. Pegylated arginine deiminase treatment of patients with unresectable hepatocellular carcinoma: results from phase I/II studies. J Clin Oncol, 2004, 22(10): [32] Holtsberg FW, Ensor CM, Steiner MR, et al. Poly(ethylene glycol) (PEG) conjugated arginine deiminase: effects of PEG formulations on its pharmacological properties. J Control Release, 2002, 80(1-3): [33] Wilm M, Shevchenko A, Houthaeve T, et al. Femtomole sequencing of proteins from polyacrylamide gels by nano-electrospray mass spectrometry. Nature, 1996, 379: [34] Guo JY, Wang JH, Niu B. Clinical applications of DNase I. J Int Pathol Clin Med, 2009, 29(2): ,,. DNase I., 2009, 29(2): [35] Chen J, Shi YP. Target enzyme for diabetes and antidiabetic agents. Chin J New Drugs, 2003, 12(7): ,.., 2003, 12(7): [36] Tang HF, Chen JQ, Wang P. Phosphodiesterase-4(PDE4) as a target for anti-inflammatory drug discovery: present and prospect. J China Pharm Univ, 2006, 37(1): 9 13.,,. 4., 2006, 37(1): [37] Seneca H, Peer P. Effect of antibacterials, antibiotics, enzymes and steroids on phagocytosis. J Am Geriatr Soc, 1966, 14(3): [38] Wohlman A, Syed M, Avakian S. Enhancement of drug activity by chymotrypsin. Cell Mol Life Sci, 1969, 25(9): [39] Chen CS, Zhao Q, Wang J, et al. Enhanced anti-tumor effects achieved in a murine tumor model using combination therapy of recombinant human manganese superoxide dismutase and adriamycin. Biochem Biophys Res Commun, 2008, 370:

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