出 色 的 real-time PCR Rotor-Gene Q 您 实 验 成 功 的 保 障 实 时 定 量 PCR 是 一 门 精 确 的 技 术, 它 对 仪 器 试 剂 和 软 件 都 有 极 高 的 要 求 高 度 的 温 度 和 光 学 均 一 性 短 时 间 内 的 温 度 平 衡,

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1 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 更 多 应 用 尽 在 其 中 Sample & Assay Technologies

2 出 色 的 real-time PCR Rotor-Gene Q 您 实 验 成 功 的 保 障 实 时 定 量 PCR 是 一 门 精 确 的 技 术, 它 对 仪 器 试 剂 和 软 件 都 有 极 高 的 要 求 高 度 的 温 度 和 光 学 均 一 性 短 时 间 内 的 温 度 平 衡, 以 及 快 速 的 升 降 温 对 于 精 确 和 快 速 的 定 量 分 析 都 是 极 其 重 要 的 同 样, 检 测 的 灵 敏 度 速 度 和 特 异 性 也 高 度 依 赖 于 DNA 聚 合 酶 和 反 应 组 份 QIAGEN 公 司 的 实 时 定 量 PCR 分 析 仪 Rotor-Gene Q 将 多 种 优 化 的 设 计 相 结 合, 为 您 精 密 的 研 究 需 求 提 供 出 色 而 可 靠 的 实 验 结 果 配 合 QIAGEN 专 为 定 量 PCR 而 优 化 的 试 剂 盒,Rotor-Gene Q 可 以 让 您 直 接 高 效 的 将 其 应 用 于 广 泛 的 研 究 领 域 Rotor-Gene Q 可 以 带 给 您 : 离 心 式 的 设 计 带 给 您 出 色 的 温 度 和 光 学 表 现 宽 广 的 光 谱 范 围, 从 紫 外 到 红 外 波 长 坚 固 耐 用 的 设 计, 确 保 低 维 护 和 高 度 方 便 性 HRM 遗 传 分 析 功 能 与 定 量 扩 增 相 结 合 配 合 QIAGEN 试 剂 盒, 在 多 种 应 用 方 向 都 有 出 色 表 现 广 泛 的 应 用 领 域 Rotor-Gene Q 与 QIAGEN 试 剂 盒 相 结 合, 实 现 所 有 定 量 PCR 的 应 用, 以 及 高 分 辨 率 熔 解 (HRM ) 分 析 : 基 因 表 达 分 析 基 因 分 型 病 原 体 检 测 基 因 扫 描 DNA 甲 基 化 分 析 mirna 研 究 物 种 品 种 鉴 定 HLA 配 型 分 析 详 细 应 用 参 见 第 8 页 访 问 并 浏 览 Rotor-Gene Q 模 拟 世 界, 体 验 超 过 20 个 仪 器 与 软 件 的 动 画 演 示 2 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

3 离 心 式 的 设 计, 出 色 的 表 现 Rotor-Gene Q 独 特 的 离 心 转 子 式 设 计 让 她 成 为 在 精 确 和 通 用 性 方 面 都 非 常 出 色 的 实 时 定 量 PCR 分 析 仪 ( 图 1) 每 个 PCR 管 在 反 应 仓 里 匀 速 旋 转, 空 气 不 断 高 速 流 动, 所 有 样 品 在 快 速 的 升 降 温 过 程 中 始 终 处 于 高 度 一 致 的 温 度 下 信 号 检 测 也 具 有 同 样 的 均 一 性 当 管 子 对 准 检 测 光 路 时, 样 品 就 被 激 发, 荧 光 信 号 快 速 通 过 单 一 的 短 光 路 被 PMT( 光 电 倍 增 管 ) 收 集 温 度 和 光 学 上 的 均 一 性 保 证 了 定 量 PCR 分 析 的 灵 敏 精 确 和 快 速 ( 图 2) 并 且 这 种 离 心 式 的 设 计 还 消 除 了 管 和 管 之 间 的 差 异 及 边 缘 效 应, 而 传 统 板 式 仪 器 由 于 板 块 内 部 温 度 的 差 异 和 复 杂 的 光 路 系 统 无 法 具 备 Rotor-Gene Q 的 这 些 出 色 性 能 离 心 式 的 设 计 保 证 了 : 孔 间 温 度 差 异 小 于 ±0.01 ( 比 板 式 设 计 小 20 倍 ) 均 一 的 检 测 无 需 使 用 ROX 校 正 染 料 加 样 后 直 接 上 机, 不 用 担 心 挂 壁 和 气 泡 快 速 的 升 降 温 和 可 忽 略 不 计 的 平 衡 时 间 缩 短 了 反 应 时 间 图 2. 精 确 的 定 量 PCR 分 析 na 30 ng (10,000 拷 贝 ) 人 基 因 组 DNA 两 倍 梯 度 稀 释 至 0.06 ng (20 拷 贝 ), 用 于 定 量 扩 增 每 个 梯 度 五 次 重 复, 使 用 自 己 设 计 的 TaqMan 方 法, 用 Rotor- Gene Probe PCR Kit 在 Rotor-Gene Q 上 分 析 IL1R2 基 因 各 稀 释 度 之 间 C T 值 的 平 均 差 异 为 1.07 个 循 环 nb 以 人 基 因 组 DNA 为 模 板, 重 复 72 次 定 量 扩 增, 使 用 自 己 设 计 的 TaqMan 方 法 在 Rotor-Gene Q 上 扩 增 BCL2 基 因, 不 用 ROX 校 正 平 均 C T 值 24.94, 标 准 偏 差 仅 为 0.05, 相 当 于 CV 值 0.2% 图 1. Rotor-Gene Q 的 剖 面 图 升 降 温 通 过 反 应 仓 内 快 速 的 空 气 流 实 现 PCR 管 每 150 毫 秒 通 过 激 发 / 检 测 光 路, 实 现 高 速 的 数 据 采 集 多 达 6 个 独 立 的 LED 可 与 6 个 不 同 的 检 测 滤 光 片 相 组 合, 检 测 元 件 使 用 高 灵 敏 度 光 电 倍 增 管 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 3

4 宽 广 的 光 学 范 围 和 灵 活 的 规 格 极 宽 的 光 学 范 围 允 许 更 多 的 应 用 不 论 您 的 应 用 是 基 于 SYBR Green 一 类 的 内 掺 染 料 诸 如 水 解 探 针 (TaqMan) 的 探 针 类 杂 交 探 针 (FRET), 或 其 它 复 杂 的 标 记 方 法,Rotor-Gene Q 都 能 满 足 您 的 要 求 有 了 从 紫 外 到 红 外 多 达 6 个 的 通 道,Rotor-Gene Q 为 您 提 供 了 极 为 宽 广 的 光 谱 范 围 ( 表 1) 并 且, 软 件 允 许 您 通 过 对 不 同 激 发 光 源 与 滤 光 片 的 组 合 而 建 立 新 的 通 道, 这 为 未 来 新 品 种 染 料 的 应 用 提 供 了 空 间 表 1. 光 学 检 测 通 道 通 道 激 发 (nm) 检 测 (nm) 可 检 测 的 荧 光 素 举 例 蓝 365±20 460±20 Marina Blue, Edans, Bothell Blue, Alexa Fluor 350, AMCA-X 绿 470±10 510±5 FAM, SYBR Green I, Fluorescein, EvaGreen, Alexa Fluor 488 黄 530±5 557±5 JOE, VIC, HEX, TET, MAX, CAL Fluor, Gold 540, Yakima Yellow 橙 585±5 610±5 ROX, CAL Fluor Red 610, Cy 3.5, Texas Red, Alexa Fluor 568 红 625±5 660±10 Cy5, Quasar 670, LightCycler, Red640, Alexa Fluor 633 深 红 680±5 712 high pass Quasar 705, LightCycler Red705, Alexa Fluor 680 HRM 460±20 510±5 SYBR Green I, SYTO 9, LC Green, LC Green Plus+, EvaGreen 灵 活 的 规 格 配 合 您 的 工 作 流 程 Rotor-Gene Q 支 持 多 种 PCR 管 以 满 足 不 同 的 需 求, 用 户 只 需 按 一 下 转 子 中 部 的 弹 簧 扭, 便 可 轻 松 更 换 承 载 管 子 的 转 子 同 时 还 可 配 置 Rotor-Disc, 提 供 更 快 的 反 应 体 系 构 建 和 更 高 的 通 量 Rotor-Disc 是 一 类 整 合 的 盘 管, 最 多 可 达 每 盘 100 个 孔, 相 比 96 孔 板 更 增 加 了 4 个 可 用 作 对 照 的 额 外 的 孔 Rotor-Disc 可 以 很 方 便 的 在 Rotor-Disc 热 封 口 仪 上 用 塑 料 膜 密 封 你 可 以 手 工 进 行 反 应 体 系 构 建, 或 利 用 QIAGEN 的 自 动 化 解 决 方 案 进 行 自 动 化 构 建 QIAgility 是 一 台 经 济 的 自 动 化 移 液 设 备, 可 以 进 行 快 速 高 精 度 的 PCR 体 系 构 建 ; 而 QIAsymphony AS 则 是 每 天 都 进 行 PCR 检 测 的 实 验 室 的 理 想 选 择 两 台 仪 器 都 可 以 为 Rotor-Gene 进 行 自 动 化 的 反 应 体 系 构 建, 可 以 直 接 进 行 样 品 列 表 的 传 输, 并 都 配 有 经 过 验 证 的 定 量 PCR 反 应 体 系 构 建 程 序 很 少 的 维 护, 高 度 的 方 便 性 Rotor-Gene Q 在 机 械 设 计 方 面 尽 可 能 地 减 少 了 对 维 护 的 需 求, 并 不 断 提 高 使 用 的 方 便 性 这 一 特 性 为 使 用 者 节 约 了 时 间 和 成 本, 用 户 只 需 专 注 于 研 究, 而 无 需 担 心 如 何 维 持 仪 器 的 性 能 举 例 而 言, Rotor-Gene Q 配 备 了 高 度 稳 定 的 LED 激 发 光 源, 并 有 终 身 质 保, 用 户 无 需 为 需 要 定 期 购 买 及 更 新 光 源 和 烦 恼 Rotor-Gene Q 的 特 性 包 括 : 更 少 的 运 动 组 件, 短 且 固 定 的 光 路 以 提 高 耐 用 性 无 需 进 行 光 路 对 齐 校 准 或 光 源 更 换 的 操 作 仪 器 小 而 轻, 易 于 运 输, 更 高 的 灵 活 性 4 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

5 方 便 的 常 规 验 证 有 些 实 验 室 可 能 需 要 对 温 度 的 准 确 性 进 行 经 常 性 的 验 证 对 于 大 多 数 的 热 循 环 仪 而 言, 这 需 要 工 程 师 的 介 入 Rotor-Gene Q 是 唯 一 一 台 可 以 提 供 Rotor-Disc OTV( 光 学 温 度 校 验 ) 试 剂 盒 的 热 循 环 仪, 它 无 需 工 程 师, 用 户 自 己 就 可 以 自 动 化 的 检 验 温 度 的 准 确 性 试 剂 盒 包 括 一 个 特 殊 的 Rotor-Disc, 预 装 有 热 敏 液 态 晶 体, 和 专 用 的 分 析 软 件 整 个 操 作 步 骤 只 需 不 到 30 分 钟 可 靠 的 支 持 同 时 作 为 仪 器 和 试 剂 的 生 产 商,QIAGEN 的 技 术 支 持 部 门 不 仅 为 您 提 供 仪 器 方 面 的 支 持 服 务, 还 为 您 提 供 试 剂 方 面 的 咨 询, 一 站 式 的 服 务 让 您 的 PCR 实 验 后 顾 无 忧 QIAGEN 售 后 服 务 提 供 多 种 灵 活 的 支 持 协 议, 使 您 能 享 受 全 方 位 的 服 务 并 更 好 的 控 制 成 本 我 们 的 售 后 服 务 和 培 训 计 划 能 够 让 您 灵 活 地 使 用 您 的 设 备 拓 展 应 用 我 们 拥 有 ISO 9001/ISO 认 证 及 大 批 资 深 的 经 验 丰 富 的 技 术 支 持 专 员, 作 为 QIAGEN 的 用 户, 您 可 以 享 受 到 最 高 水 平 的 服 务 Rotor-Gene Q 的 参 数 看 一 看 Rotor-Gene Q 出 众 的 技 术 性 能 ( 表 2) 表 2. Rotor-Gene Q 参 数 尺 寸 和 重 量 宽 370 mm (14.6 in.) x 深 420 mm (16.5 in.) x 高 286 mm (11.3 in.) 深 ( 开 门 时 ): 538 mm (21.2 in.) 重 : 12.5 kg (27.6 lb) 温 度 表 现 温 度 均 一 性 :±0.02 C( 标 准 偏 差 ) 温 度 分 辨 率 :±0.02 C 温 度 范 围 :35 99 C 光 学 系 统 多 达 6 个 通 道 ( nm 激 发, nm 检 测 ) 固 定 光 路, 每 个 通 道 独 立 的 高 强 度 激 发 LED 和 滤 光 片 高 度 灵 敏 的 光 电 倍 增 管 (PMT) 检 测 器, 带 有 增 益 设 定 ( 灵 敏 度 控 制 ) 动 态 范 围 :10 个 数 量 级 ( 依 赖 于 实 验 ) 转 子 和 孔 规 格 Rotor-Disc 100: 30 μl x 100 孔, 推 荐 反 应 体 积 μl Rotor-Disc 72: 0.1 ml x 72 孔, 推 荐 反 应 体 积 μl 排 管 0.1 ml: 0.1 ml x 72 孔, 推 荐 反 应 体 积 μl,4 联 管 及 盖 PCR 管 0.2 ml: 0.2 ml x 36 孔, 推 荐 反 应 体 积 μl, 单 个 带 盖 管 子 典 型 运 行 时 间 用 QIAGEN Rotor-Gene 试 剂 盒,40 个 循 环 分 钟 ( 依 赖 于 检 测 方 法 ) 电 源 要 求 V AC, 50/60 Hz; 560 VA ( 峰 ) 质 保 仪 器 1 年 质 保,LED 激 发 光 源 终 身 质 保 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 5

6 功 能 全 面 的 软 件, 安 全 的 数 据 功 能 全 面 的 Rotor-Gene Q 软 件 包 支 持 所 有 最 先 进 的 从 基 础 到 高 级 算 法 的 实 时 定 量 分 析 功 能 它 为 您 自 如 的 分 析 宝 贵 的 数 据 提 供 了 高 度 的 方 便 性 和 可 靠 的 保 障 从 运 行 开 始 到 结 果 输 出, 全 程 的 操 作 均 可 追 踪, 为 数 据 提 供 了 高 度 的 安 全 保 障 Rotor-Gene 软 件 支 持 的 分 析 步 骤 易 于 使 用 的 软 件 可 为 您 提 供 : 无 限 制 的 安 装 拷 贝 次 数, 可 进 行 个 人 化 管 理 每 个 结 果 文 件 都 有 数 字 签 名, 确 保 数 据 安 全 可 靠 对 文 件 的 每 一 次 操 作 修 改 都 可 进 行 追 踪 提 供 多 种 结 果 报 告 模 式 和 输 出 功 能 可 输 出 原 始 数 据, 以 备 查 询 确 认 HRM CT Rotor-Gene Screen Clust HRM LinRegPCR REST * REST 利 用 不 同 的 PCR 效 率 和 多 组 内 参 基 因 进 行 标 准 化, 可 以 在 网 站 上 免 费 下 载 软 件 需 另 行 购 买 6 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

7 出 色 的 HRM 分 析 HRM 高 分 辨 率 熔 解, 拓 展 您 的 应 用 高 分 辨 率 熔 解 分 析 (HRM) 是 一 种 新 兴 的 PCR 后 分 析 技 术 该 技 术 以 其 简 单 快 速 灵 敏 低 成 本 真 正 实 现 闭 管 操 作 和 在 基 因 分 型 领 域 的 应 用 而 引 起 了 广 泛 的 关 注 HRM 根 据 双 链 PCR 产 物 解 链 ( 熔 解 ) 时 的 表 现 来 分 析 样 品, 它 与 传 统 的 熔 解 曲 线 类 似, 却 能 提 供 更 多 的 信 息, 因 而 具 有 更 广 泛 的 应 用 HRM 根 据 PCR 产 物 的 序 列 长 度 GC 含 量 区 分 样 品, 其 灵 敏 度 可 区 分 单 个 碱 基 的 差 别 以 前 未 知 的 甚 至 复 杂 的 序 列 现 在 都 可 以 通 过 这 种 高 效 直 接 的 方 法 进 行 检 测 和 分 析 HRM 因 其 检 测 方 法 简 单 速 度 快 通 量 大 成 本 低 不 受 检 测 位 点 局 限 既 可 分 析 已 知 突 变 又 可 对 未 知 突 变 进 行 扫 描, 成 为 近 年 来 最 受 关 注 的 SNP 及 突 变 检 测 新 方 法 Rotor-Gene Q 离 心 式 的 设 计, 以 及 其 卓 越 的 温 度 和 光 学 表 现 令 其 成 为 HRM 分 析 的 理 想 选 择 Rotor-Gene Q 具 备 HRM 应 用 所 要 求 的 性 能 : 特 殊 调 校 的 高 强 度 HRM 光 学 通 道 0.02 的 温 度 分 辨 率 高 速 的 数 据 采 集 速 率 全 面 的 HRM 软 件 在 Rotor-Gene Q 上 应 用 HRM 技 术 可 以 实 现 对 极 小 的 遗 传 差 异 的 分 辨, 比 如 在 熔 解 点 上 的 差 异 小 于 0.2 的 A/T 第 IV 类 SNP( 图 3 和 4) 图 3. 成 功 的 A/T 第 IV 类 SNP 的 基 因 分 型 用 Type-it HRM Kit 对 人 GYS1 基 因 的 SNP(rs ) 分 型 得 到 了 高 度 重 复 和 准 确 的 结 果 标 准 化 熔 解 曲 线 和 差 异 视 图 显 示 出 对 全 部 三 种 基 因 型 ( 蓝 : 野 生 型 ; 绿 : 杂 合 型 ; 红 : 突 变 型 ) 的 成 功 与 可 靠 的 分 辨 na 标 准 化 熔 解 曲 线 nb 用 野 生 型 样 品 进 行 标 准 化 的 差 异 视 图 HRM 应 用 包 括 如 : 基 因 分 型 病 原 体 分 型 基 因 扫 描 定 量 熔 解 分 析 图 4. 用 HRM 分 析 纯 合 子 等 位 基 因 之 间 差 异 不 到 0.1 的 第 IV 类 SNP 用 野 生 型 ( 蓝 ), 纯 合 突 变 型 ( 绿 ) 和 杂 合 子 ( 红 ) 样 品 的 基 因 组 DNA 分 析 AHRR 基 因 上 的 一 个 人 类 A/T SNP 实 验 采 用 Type-it HRM Kits,Rotor-Gene Q HRM 仪 器 及 Rotor- Gene ScreenClust HRM 软 件 na 标 准 化 溶 解 曲 线 : 纯 合 子 的 曲 线 几 乎 一 致 nb ScreenClust HRM 聚 类 图 : 所 有 的 假 - 末 知 样 品, 包 括 纯 合 等 位 基 因 均 准 确 无 误 地 被 归 类, 聚 类 结 果 完 全 符 合 真 实 的 基 因 型 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 7

8 针 对 您 的 各 种 应 用 而 优 化 的 试 剂 QIAGEN 为 您 提 供 一 系 列 针 对 Rotor-Gene Q 的 试 剂 盒, 让 您 无 需 对 反 应 体 系 进 行 任 何 优 化, 便 可 得 到 可 靠 的 定 量 PCR 实 验 结 果 QIAGEN 实 时 荧 光 定 量 PCR 试 剂 盒 的 特 点 和 优 点 K + 和 NH 4 + 的 平 衡 组 合 减 少 了 非 特 异 性 的 引 物 退 火, 保 证 扩 增 的 高 度 特 异 性 通 过 使 用 一 种 全 新 的 PCR 添 加 剂 Q-Bond, 在 有 效 缩 短 反 应 时 间 至 45 分 钟 的 同 时 保 持 同 样 出 色 的 结 果, 对 于 极 具 挑 战 性 的 多 重 PCR, 合 成 的 MP 因 子 能 够 让 不 同 的 扩 增 子 都 能 以 同 等 的 高 效 率 进 行 扩 增 MP 因 子 是 一 种 创 新 的 PCR 添 加 剂, 能 够 在 模 板 的 区 域 提 高 引 物 的 浓 度 并 稳 定 特 异 性 结 合 的 引 物, 从 而 让 DNA 聚 合 酶 得 以 有 效 地 延 伸 引 物 表 3. 针 对 各 种 应 用 的 检 测 试 剂 应 用 检 测 方 法 步 骤 QIAGEN 试 剂 盒 数 据 基 因 表 达 分 析 SYBR Green PCR 和 2-step RT-PCR Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit 表 4 SYBR Green 1-step RT-PCR Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit 图 5 SYBR Green 2-step RT-PCR array Pathway-Focused RT 2 Profiler PCR Arrays 图 9 探 针 ( 单 重 ) PCR 和 2-step RT-PCR Rotor-Gene Probe PCR Kit 图 2 探 针 ( 单 重 ) 1-step RT-PCR Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit 探 针 ( 多 重 ) PCR 和 2-step RT-PCR Rotor-Gene Multiplex PCR Kit 图 7 探 针 ( 多 重 ) 1-step RT-PCR Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit 图 8 探 针 ( 双 重 ) 2-step RT-PCR 和 1-step RT-PCR QuantiFast Probe Assays and Kits 图 6 mirna 检 测 SYBR Green Two-step RT-PCR miscript SYBR Green PCR Kit 图 10 病 原 体 检 测 探 针 ( 多 重 ) PCR, 2-step RT-PCR 和 1-step RT-PCR QuantiTect Virus +ROX Vial Kit 探 针 ( 双 重 ) PCR 或 1-step RT-PCR 包 括 通 用 内 质 控 QuantiFast Pathogen +IC Kits 图 11 食 品 安 全 检 测 探 针 Real-time PCR assays mericon food testing portfolio 图 12 病 原 体 分 型 EvaGreen HRM Type-it HRM PCR Kit 图 13 基 因 分 型 探 针 PCR Type-it Fast SNP Probe PCR Kit 图 14 EvaGreen HRM Type-it HRM PCR Kit 图 15, 3 甲 基 化 分 析 探 针 PCR EpiTect MethyLight PCR Kit 表 5 EvaGreen HRM EpiTect HRM PCR Kit 图 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

9 基 因 表 达 分 析 Rotor-Gene SYBR Green 试 剂 盒 QuantiTect Primer Assays 和 Rotor- Gene Q 的 组 合 为 基 因 表 达 分 析 提 供 了 一 套 完 整 的 可 直 接 使 用 的 解 决 方 案 QuantiTect Primer Assays 是 经 生 物 信 息 学 方 法 验 证 的 引 物 组, 覆 盖 人 小 鼠 大 鼠 及 许 多 其 它 物 种 的 所 有 基 因 用 户 可 以 在 GeneGlobe 上 ( 进 行 查 找 当 其 与 Rotor-Gene SYBR Green 试 剂 盒 配 合 使 用 时, 您 无 需 任 何 优 化 即 可 得 到 高 灵 敏 度 和 特 异 性 的 扩 增 结 果 ( 图 5 和 表 4) 表 4. 用 SYBR Green 法 进 行 RT-PCR 分 析 的 出 色 表 现 Amplification plot (Supplier R) QIAGEN Supplier A II C T 平 均 偏 差 C T 平 均 偏 差 BAX ( 与 BCL2 相 关 的 X 蛋 白 ) BCL2( 凋 亡 基 因 ) MYC( 原 癌 基 因 ) β-action( 看 家 基 因 ) 以 人 白 细 胞 cdna(1 ng) 作 为 模 板 用 基 于 SYBR Green 方 法 的 两 步 法 RT-PCR 实 时 扩 增 用 QuantiTect Primer Assays 对 4 个 不 同 目 标 (BAX BCL2 MYC 和 β-actin ) 进 行 扩 增, 每 个 重 复 3 次 Rotor-Gene Q 和 Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit 表 现 出 了 很 高 的 检 测 灵 敏 度, 比 厂 家 A ll 的 仪 器 和 试 剂 有 更 小 的 C T 值 和 平 均 偏 差 Fluorescence (530) df/dt Temperature ( ) Cycle 当 用 探 针 进 行 基 因 表 达 分 析 检 测 时,QuantiFast Probe Assays 带 有 一 组 预 混 引 物 及 双 标 记 探 针 (TaqMan 探 针 ), 可 以 与 专 用 于 Rotor-Gene Q 的 预 混 试 剂 共 同 使 用, 进 行 快 速 和 高 灵 敏 度 的 定 量 分 析 QuantiFast Probe Assay 采 用 专 利 算 法 进 行 设 计, 可 以 对 小 于 100 bp 的 RNA 和 cdna 的 进 行 高 效 可 靠 的 扩 增 与 检 测, 并 高 度 适 用 于 有 降 解 的 起 始 样 本, 如 福 尔 马 林 固 定, 石 蜡 包 埋 (FFPE) 的 样 品 ( 图 6) 图 5. 用 SYBR Green 进 行 特 异 灵 敏 的 检 测 人 白 细 胞 RNA(100 ng 到 10 ng)10 倍 梯 度 稀 释, 在 基 于 SYBR Green 的 实 时 RT-PCR 中 用 作 模 板 用 QuantiTect Primer Assays 检 测 BCL2(B-cell CLL/lymphoma 2),nA 每 个 重 复 两 次 Rotor-Gene Q 和 Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit 可 以 高 灵 敏 度 的 检 测 10 pg 的 RNA, 得 到 特 异 的 扩 增 产 物 ( 如 图 内 熔 解 曲 线 所 示 ) nb 相 反, 厂 家 R 的 仪 器 和 试 剂 仅 在 优 化 过 Mg 2+ 浓 度 后 才 能 检 测 到 模 板 而 检 测 的 下 限 为 100 pg RNA, 并 可 观 察 到 非 特 异 性 的 产 物 ( 如 图 内 熔 解 曲 线 所 示 ) 图 6. 高 效 定 量 RT-PCR 检 测 FFPE 样 本 RNA 用 RNeasy FFPE 试 剂 盒 从 FFPE 样 本 中 纯 化 总 RNA(1 ng,100 pg, 10 pg 和 1 pg) 扩 增 得 到 人 MUC1 基 因 的 转 录 本, 并 在 Rotor-Gene Q 上 用 QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit 和 QuantiFast Probe Assay( 蓝 色 曲 线 ) 或 厂 家 A ll ( 红 色 曲 线 ) 预 设 计 的 引 物 探 针 组 进 行 检 测 相 比 厂 家 A ll 的 结 果, QuantiFast Probe Assay 有 较 小 的 C T 值 和 较 高 的 灵 敏 度 即 使 是 低 至 1 pg 的 样 本 也 被 QuantiFast Probe Assay 检 测 到 ( 厂 家 A ll 无 法 检 测 到 1 pg 的 样 品 ) Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 9

10 Rotor-Gene Multiplex PCR Kit 和 Rotor-Gene Q 为 快 速 可 靠 的 基 因 表 达 分 析 提 供 了 最 终 解 决 方 案 多 达 4 个 cdna 目 标 可 以 在 一 个 管 子 里 同 时 快 速 的 定 量, 增 加 了 通 量 并 节 约 了 宝 贵 的 样 品 ( 图 7 和 8) 不 同 表 达 水 平 的 基 因 在 同 一 个 管 子 内 以 同 等 的 高 效 率 得 到 扩 增, 保 障 了 可 靠 的 基 因 表 达 相 对 定 量 图 7. 可 靠 的 多 重 分 析 人 白 细 胞 cdna(10 ng 至 10 pg)10 倍 梯 度 稀 释, 在 4 重 实 时 定 量 PCR 中 用 作 模 板 用 Rotor- Gene Q 和 Rotor-Gene Multiplex PCR Kit 及 厂 家 S 的 仪 器 和 试 剂 进 行 扩 增, 每 个 重 复 三 次 目 标 基 因 :TNF( 肿 瘤 坏 死 因 子 ), IFNG( 干 扰 素,gamma),MYC(v-myc 髓 细 胞 瘤 病 毒 原 癌 基 因 同 系 物 ( 鸟 类 )),HSP90AA1( 热 休 克 蛋 白 90 kda alpha ( 细 胞 溶 质 ),class A member 1) na 4 个 目 标 均 得 到 了 C T 值 ( 厂 家 S 的 仪 器 和 试 剂 没 有 成 功 的 检 测 到 IFNG;N.D.) Rotor- Gene Q 上 的 较 小 的 C T 值 说 明 了 更 高 的 检 测 灵 敏 度 nb IFNG 的 扩 增 曲 线 ( 内 部 小 图 显 示 为 厂 家 S 的 扩 增 曲 线 ) 图 8. 高 效 的 4 重 分 析 用 Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit 和 自 己 设 计 的 TaqMan assays 对 目 标 进 行 4 重 实 时 定 量 一 步 法 RT-PCR 检 测 样 本 为 100, 10, 1, 或 0.1 ng 的 HeLa 细 胞 RNA, 反 应 在 Rotor-Gene Q 上 进 行 CT 值 比 模 板 量 对 数 值 的 曲 线 相 互 平 等, 说 明 所 有 4 个 目 标 均 以 同 等 的 效 率 得 到 扩 增 GAPDH:3- 磷 酸 甘 油 醛 脱 氢 酶 ;RPS27A: 核 糖 体 蛋 白 S27a; NFKB:B 细 胞 K 轻 链 多 肽 基 因 增 强 子 的 核 因 子 10 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

11 专 注 于 通 路 和 疾 病 的 PCR array 专 注 于 通 路 的 RT 2 Profiler PCR Arrays 是 研 究 特 定 基 因 群 表 达 的 非 常 可 靠 的 工 具 每 个 100 孔 Rotor-Disc PCR Array 包 含 了 经 优 化 的 SYBR Green 引 物 组 ( 经 过 实 验 验 证 ), 这 些 引 物 组 针 对 已 经 经 过 充 分 研 究 的 一 组 相 关 的 专 注 于 通 路 的 或 专 注 于 疾 病 的 基 因 群, 用 于 在 Rotor-Gene Q 上 进 行 检 测 RT 2 profiler PCR Array 也 可 进 行 客 户 订 制, 以 覆 盖 与 您 特 殊 研 究 兴 趣 相 关 的 一 组 基 因 我 们 高 质 量 的 引 物 合 成 和 反 应 液 组 份, 可 以 让 RT 2 profiler PCR Array 在 同 样 的 循 环 条 件 下 同 时 扩 增 96 个 不 同 的 基 因 特 异 性 产 物 这 一 组 合 使 RT 2 profiler PCR Array 具 备 了 准 确 的 SYBR 定 量 PCR 实 验 ( 见 图 9)* 所 要 求 的 特 异 性 和 高 扩 增 效 率 RT 2 Profiler PCR Array 的 易 用 性 使 每 个 实 验 室 都 可 以 将 它 应 用 到 日 常 工 作 中 PCR array 技 术 的 新 发 展 使 RT 2 Profiler PCR Array 针 对 不 同 来 源 的 样 本 均 有 优 异 的 表 现 包 括 从 常 规 样 本 (0.1 5 μg RNA) FFPE 样 本 和 微 量 样 本 (1 100 ng RNA) 中 获 得 的 RNA 参 见 PCR Array 操 作 手 册 获 取 更 多 信 息 图 9. 正 常 和 癌 性 结 肠 组 织 的 基 因 表 达 谱 使 用 Human Apoptosis RT 2 Profiler PCR Array, 在 Rotor-Gene Q 上 对 正 常 ( 成 人 升 结 肠 ) 和 肿 瘤 ( 成 人 结 肠 恶 性 肿 瘤 ) 结 肠 进 行 基 因 表 达 分 析 na 用 正 常 和 肿 瘤 组 织 的 ΔC T 值 ( 数 据 用 5 个 看 家 基 因 的 几 何 平 均 数 进 行 标 准 化 ) 绘 图 nb 对 所 选 取 的 基 因 中 具 有 显 著 性 ( 大 于 2 倍 ) 表 达 ( 肿 瘤 相 对 于 正 常 组 织 ) 变 化 的 基 因 进 行 制 图 肿 瘤 相 对 正 常 组 织 进 行 比 较, 总 共 有 36 个 基 因 具 有 差 异 的 表 达 模 式, 其 中 30 个 基 因 表 现 为 下 调,6 个 基 因 表 现 为 上 调 这 些 数 据 显 示 了 用 RT 2 Profiler PCR Array 在 Rotor-Gene Q 上 对 肿 瘤 与 正 常 组 织 的 差 异 基 因 表 达 谱 研 究 的 强 大 能 力 * 专 注 于 通 路 的 RT 2 Profiler PCR Array 的 数 据 分 析 软 件 可 以 在 上 免 费 获 得 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 11

12 mirna 检 测 mirna 在 不 同 的 生 物 学 过 程 中 扮 演 了 很 重 要 的 角 色,miRNA 的 表 达 失 调 与 一 些 癌 症 和 疾 病 相 关 对 这 一 令 人 兴 奋 的 新 兴 领 域,QIAGEN 为 您 的 研 究 提 供 了 miscript PCR System 这 样 一 个 三 组 份 系 统, 它 包 含 了 将 mirna mrna 及 其 它 非 编 码 RNA 转 录 为 cdna 以 及 之 后 用 SYBR Green 法 进 行 mirna 定 量 检 测 的 各 个 步 骤 用 miscript Reverse Transcription Kit 快 速 简 单 的 逆 转 录 之 后 用 miscript SYBR Green Kit 和 miscript Primer Assay 在 Rotor-Gene Q 上 对 mirna 进 行 高 灵 敏 度 和 特 异 的 检 测 使 用 正 确 的 assay 可 以 检 测 到 成 熟 的 mirna 或 mirna 前 体 ( 图 10) 关 于 miscript PCR System 的 更 多 信 息, 请 访 问 图 10. 用 miscript PCR 系 统 在 Rotor-Gene Q 上 对 mir-15 和 RNU6B 进 行 定 量 na 对 宽 广 范 围 模 板 量 的 灵 敏 与 特 异 的 定 量 用 miscript Reverse Transcription Kit 合 成 HeLa S3 细 胞 的 cdna 用 miscript PCR 系 统 和 一 个 检 测 RNU6B 的 miscript Primer Assay 对 从 1 pg 到 10 ng 范 围 的 cdna 进 行 检 测 定 量 PCR 扩 增 在 Rotor-Gene Q 上 进 行 扩 增 曲 线 显 示 低 浓 度 到 高 浓 度 的 模 板 均 得 到 了 灵 敏 和 准 确 的 扩 增 熔 解 曲 线 ( 内 插 图 ) 表 现 为 单 峰, 说 明 了 特 异 的 检 测 nb 准 确 检 测 低 至 10 个 拷 贝 的 mirna 合 成 的 mir-15 用 miscript Reverse Trasnscription Kit 合 成 cdna 从 10 个 拷 贝 到 10 6 拷 贝 的 不 同 数 量 的 模 板 用 miscript PCR 系 统 进 行 实 时 定 量 PCR 扩 增 实 时 定 量 PCR 扩 增 在 Rotor-Gene Q 上 进 行 C T 值 随 着 mirna 拷 贝 数 的 增 加 而 呈 线 性 降 低, 说 明 能 从 宽 广 范 围 的 模 板 量 中 进 行 灵 敏 的 检 测 C T 值 与 拷 贝 数 的 对 数 做 图, 显 示 对 不 同 起 始 量 的 模 板 的 灵 敏 和 线 性 的 检 测 病 毒 检 测 不 论 被 检 测 的 是 病 原 体 或 是 其 它 材 料, 标 准 病 原 体 的 检 测 都 是 从 一 个 简 单 的 判 断 目 标 物 有 或 无 的 筛 查 实 验 开 始 的 如 果 筛 查 结 果 显 示 病 原 体 的 存 在, 那 么 进 一 步 地 对 病 原 体 的 分 型 可 能 是 非 常 有 必 要 的 实 时 定 量 PCR 的 方 法 是 准 确 可 靠 检 测 病 原 体 的 一 种 选 择, 并 且 QIAGEN 的 技 术 和 方 案 使 筛 查 步 骤 更 加 便 利 为 了 加 速 检 测 流 程,QIAGEN 提 供 经 验 证 的, 可 直 接 使 用 的 引 物 与 探 针 组, 以 及 QuantiTect Virus 和 QuantiFast Pathogen +IC RT-PCR Kits, 它 们 可 以 在 同 一 个 反 应 管 中 通 过 多 重 PCR 检 测 多 个 目 标 物 12 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

13 高 度 灵 敏 地 检 测 病 毒 RNA 和 / 或 DNA QuantiTect Virus +ROX Viral Kit 与 Rotor-Gene Q 相 结 合 可 以 高 度 灵 敏 与 快 速 的 同 时 检 测 多 达 4 种 病 毒 的 DNA 和 RNA 高 度 浓 缩 的 预 混 液 允 许 在 反 应 中 加 入 大 体 积 的 模 板, 降 低 检 测 的 下 限 病 毒 核 酸 可 以 通 过 单 重 检 测 被 单 个 的 检 测, 亦 可 在 带 有 内 对 照 的 多 重 检 测 中 被 同 时 检 测 QuantiFast Pathogen +IC Kits 与 QuantiTect Virus Kits 有 同 样 的 表 现, 但 它 同 时 提 供 一 个 通 用 内 在 质 控, 以 通 过 正 确 解 析 阴 性 结 果 ( 如 检 测 到 PCR 抑 制 物 ) 来 确 保 高 度 的 流 程 安 全 可 靠 性 与 Rotor-Gene Q 相 结 合,QuantiFast Pathogen Kits 的 多 重 检 测 可 以 在 很 宽 的 线 性 范 围 内 同 时 检 测 多 个 DNA 和 / 或 RNA 目 标 及 内 对 照, 而 不 降 低 检 测 的 灵 敏 度 ( 图 11) 图 11. 在 Rotor-Gene 上 灵 敏 精 确 地 检 测 Norovirus na Norovirus 的 转 录 本 经 梯 度 稀 释, 用 单 重 实 时 定 量 RT-PCR 检 测 或 用 平 行 检 测 QIAGEN 国 际 对 照 的 双 重 RT-PCR 进 行 检 测 实 时 定 量 PCR 在 Rotor-Gene Q 上 运 行, 使 用 QuantiFast Pathogen +IC RT-PCR Kit, 未 经 任 何 PCR 优 化 两 个 反 应 包 含 了 一 个 固 定 量 的 IC 对 照 每 个 稀 释 度 都 进 行 三 次 重 复 分 析, 这 里 选 取 了 每 个 稀 释 度 的 两 次 重 复 的 结 果 nb 6-log 范 围 的 Norovirus RNA 单 重 检 测 和 Norovirus/IC 双 重 检 测 均 显 示 了 高 度 的 准 确 性 和 线 性 三 个 实 时 定 量 PCR 重 复 子 的 误 差 棒 每 个 为 ±1 SD 在 Rotor-Gene Q 上 快 速 鉴 定 动 物 病 原 体 QIAGEN 为 您 提 供 了 病 原 体 鉴 定 与 分 型 的 全 部 所 需 试 剂, 酶 和 仪 器 cador 实 时 定 量 PCR 试 剂 用 于 在 Rotor-Gene Q 上 用 PCR 的 方 法 灵 敏 鉴 定 特 定 的 动 物 病 原 体 ( 病 毒 和 细 菌 ) 例 如,cador TKP PCR Reagent 包 含 了 试 剂 和 酶, 用 于 同 时 对 Taylorella equigenitalis, Klebsiella pneumoniae 和 Pseudomonas aeruginosa 基 因 组 的 保 守 区 进 行 多 重 扩 增 在 Rotor-Gene Q 上 检 测 同 一 管 内 扩 增 子 的 绿 色, 橙 色 和 深 红 色 荧 光 值 同 时 每 管 内 还 包 含 一 个 内 置 质 控 用 于 监 测 DNA 的 纯 化 和 / 或 是 否 存 在 PCR 抑 制 物 QIAGEN 是 极 少 的 几 家 拥 有 针 对 动 物 检 测 的 全 球 通 用 的 PCR 许 可 证 的, 对 于 用 户 来 说 无 需 增 加 额 外 的 许 可 费 用 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 13

14 食 品 安 全 检 测 的 整 体 解 决 方 案 mericon 食 品 检 测 系 列 是 一 套 从 样 品 制 备 到 检 测 试 剂 的 完 整 系 统, 它 满 足 了 日 益 增 长 的 对 食 品 研 究 和 监 测 的 需 求 检 测 采 用 实 时 定 量 PCR 的 方 法, 可 以 对 广 泛 的 病 原 体 遗 传 修 饰 生 物 食 品 中 的 植 物 和 动 物 成 份, 动 物 饲 料 或 制 药 产 品 进 行 灵 敏 而 准 确 地 检 测 采 用 mericon 样 品 制 备 试 剂 盒 和 mericon PCR Assasy 对 食 品 安 全 检 测 的 整 个 工 作 流 程 都 是 经 过 验 证 的 mericon PCR Assays 在 Rotor-Gene Q 上 自 动 进 行 ( 图 12) 图 12. 对 于 诸 如 花 生 酱 一 类 的 高 难 度 的 食 品 基 质 的 高 灵 敏 度 的 病 原 体 检 测 花 生 酱 在 缓 冲 蛋 白 胨 水 中 匀 浆, 接 种 < 5 cfu 的 沙 门 氏 菌, 在 37 增 生 20 小 时 用 mericon DNA Bacteria Kits 从 梯 度 稀 释 的 富 集 培 养 物 中 抽 提 DNA, 然 后 在 Rotor-Gene Q 上 用 mericon Salmonella Kit 进 行 检 测 虽 然 最 初 的 接 种 体 很 小, 但 仍 然 在 1:100,000 的 稀 释 样 本 中 检 出 了 沙 门 氏 菌 超 越 病 原 体 检 测 HRM 技 术 对 病 原 体 分 型 在 病 原 体 研 究 中, 通 常 需 要 对 各 种 病 原 体 的 亚 型 进 行 鉴 定 病 原 体 的 分 型 可 以 鉴 定 出 不 同 的 菌 株, 比 如 鉴 定 耐 药 性 的 突 变 或 高 度 致 病 性 的 变 异 HRM 的 分 辨 率 与 灵 活 性, 结 合 Type-it HRM PCR Kit 在 Rotor-Gene Q 上 的 使 用, 使 该 方 法 在 很 多 应 用 领 域 成 为 病 原 体 分 型 的 一 个 选 择 ( 图 13) 图 13. 用 HRM 进 行 高 效 病 原 体 分 析 设 计 HRM 引 物, 用 于 区 分 8 种 不 同 细 菌 菌 株 的 16S 核 糖 体 DNA 每 个 菌 株 的 微 生 物 DNA(10 pg) 作 为 模 板, 用 Type-it HRM PCR Kit 进 行 扩 增 PCR 产 物 用 测 序 方 法 来 验 证 HRM 检 测 方 法 在 这 一 应 用 上 的 高 效 性 14 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

15 基 因 分 型 分 析 个 体 之 间 DNA 的 差 异 在 生 物 学 和 医 学 研 究 的 所 有 领 域 已 日 渐 重 要 基 因 分 型 这 个 术 语 已 成 为 与 人 类 动 物 植 物 微 生 物 或 病 毒 样 品 相 关 的 广 泛 应 用 的 同 义 词 QIAGEN 开 发 了 高 度 特 异 和 准 确 的 PCR 解 决 方 案 以 及 多 种 多 样 的 检 测 方 法 来 满 足 基 因 分 型 研 究 在 准 确 性 速 度 可 靠 性, 和 标 准 化 方 面 的 需 求 基 于 PCR 的 基 因 分 型 分 析 使 用 Type-it Fast Probe PCR Kit 可 以 在 Rotor-Gene Q 上 准 确 的 对 即 使 是 高 难 度 的 模 板 或 SNP, 及 低 浓 度 的 模 板 进 行 准 确 的 分 型 出 色 的 分 离 和 紧 密 的 等 位 基 因 聚 类 保 障 了 高 度 的 识 别 率 准 确 性 重 复 性 和 可 靠 的 分 型 结 果 ( 图 14) 试 剂 盒 均 经 商 业 化 的 SNP 分 型 试 剂 验 证, 它 与 TaqMan MGB 探 针 以 及 客 户 定 制 的 TaqMan MGB TaqMan 或 其 它 双 标 记 探 针 相 兼 容 用 Type-it HRM PCR Kit 进 行 准 确 的 基 因 分 型 优 化 的 Type-it HRM PCR Kit 确 保 了 序 列 变 异 分 析 的 准 确 分 辨 率, 毫 无 疑 问 是 用 HRM 技 术 进 行 等 位 基 因 区 分 的 理 想 工 具 与 Rotor-Gene Q 相 结 合, 用 Type-it HRM PCR Kit 建 立 一 个 新 的 HRM 检 测 时, 无 需 进 行 优 化 由 于 采 用 了 独 特 的 预 混 试 剂 和 优 化 的 HRM 缓 冲 液, 即 使 在 分 析 第 IV 类 SNP 时 ( 图 3 和 4) 也 可 以 保 证 扩 增 产 物 的 特 异 性 和 结 果 的 可 靠 性 不 同 于 其 它 厂 家 生 产 的 HRM 试 剂 盒,Type-it HRM PCR Kit 所 独 具 的 特 性, 使 其 能 够 扩 增 最 具 挑 战 性 的 微 小 序 列 差 异, 即 使 是 肿 瘤 相 关 基 因 中 高 难 度 的 基 因 变 异 ( 图 15) 图 15. 用 Type-it HRM PCR Kit 成 功 地 对 KRAS 基 因 中 的 突 变 进 行 分 析 na 差 异 视 图 显 示 了 对 野 生 型 序 列 ( 蓝 ),c.35 G>C 突 变 ( 棕 ) 和 c.37g>t 突 变 ( 粉 ) 的 可 靠 的 区 分 高 度 可 靠 和 可 重 复 的 区 分 无 需 优 化 即 可 获 得 nb 在 用 生 产 厂 家 R 的 HRM 预 混 试 剂 扩 增 时, 即 使 在 经 过 广 泛 的 镁 离 子 浓 度 优 化 和 循 环 参 数 优 化 后 仍 无 法 区 分 c.35 G>C 的 突 变 突 变 影 响 了 第 12 位 的 氨 基 酸, 导 致 了 p.g12a, 以 及 13 位 氨 基 酸, 导 致 p.g13c 图 14. 即 使 在 低 模 板 浓 度 下 也 能 可 靠 地 对 SNP 分 型 用 Type-it Fast SNP Probe PCR Kit 对 一 组 70 个 不 同 的 基 因 组 DNA( 每 种 1 ng) 进 行 等 位 基 因 区 分 的 结 果 图 用 TaqMan SNP genotyping assay 在 Rotor-Gene Q 上 扩 增 rs 和 两 个 无 模 板 对 照 (NTC) 黑 色 : NTC 绿 色 : 杂 合 样 品 红 色 :VIC 荧 光 素 标 记 的 同 源 基 因 (A 等 位 基 因 ) 即 使 使 用 低 浓 度 的 模 板 仍 然 可 以 得 到 紧 密 的 聚 类 和 可 靠 的 分 型 结 果 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 15

16 DNA 甲 基 化 分 析 EpiTect HRM PCR Kit 利 用 HRM 技 术 可 靠 筛 查 甲 基 化 状 态 的 变 化 EpiTect HRM PCR Kit 利 用 高 分 辨 率 熔 解 (HRM) 技 术 对 亚 硫 酸 氢 盐 转 化 后 DNA 的 CpG 甲 基 化 状 态 的 变 化 进 行 快 速 的 筛 查 与 准 确 检 测 EpiTect HRM PCR Kit 提 供 : 高 度 特 异 的 PCR 扩 增, 无 需 优 化 基 于 EvaGreen 荧 光 染 料 的 清 晰 熔 解 曲 线 方 便 的 预 混 试 剂 和 优 化 的 程 序 快 速 方 便 地 开 发 新 的 HRM 甲 基 化 检 测 用 HRM 进 行 CpG 甲 基 化 分 析 时,DNA 必 需 经 过 完 全 的 亚 硫 酸 氢 盐 转 化 才 能 在 HRM 分 析 时 检 测 到 DNA 熔 解 状 态 的 变 化 未 知 样 品 可 以 与 标 准 对 照 的 熔 解 特 征 进 行 比 对 EpiTect HRM PCR Kit 所 保 证 的 灵 敏 度 配 合 Rotor-Gene Q 就 可 以 实 现 对 即 使 是 低 含 量 的 甲 基 化 DNA 的 检 测 ( 图 16) EpiTect MethyLight PCR Kits 用 于 基 于 探 针 的 实 时 定 量 PCR 方 法 检 测 甲 基 化 状 态 图 16. 高 灵 敏 度 的 结 果 甚 至 在 检 测 低 含 量 的 甲 基 化 DNA 时 按 照 不 同 比 例 将 甲 基 化 与 未 甲 基 化 的 DNA 混 合, 作 为 模 板 在 Rotor-Gene Q 上 用 EpiTect HRM PCR Kit 扩 增 APC 基 因 (adenomatosis polyposis coli) 启 动 子 区 域 的 一 个 CpG 岛, 甲 基 化 程 度 通 过 HRM 甲 基 化 分 析 获 得 na 标 准 化 的 熔 解 曲 线 nb 以 50% 甲 基 化 样 品 为 标 准 的 差 异 视 图 一 旦 确 定 了 甲 基 化 位 点, 基 于 探 针 的 方 法 就 可 以 用 于 高 灵 敏 度 的 CpG 位 点 定 量 分 析 EpiTect MethyLight PCR Kit 在 Rotor-Gene Q 上 可 以 用 TaqMan 或 其 它 双 标 记 探 针 对 甲 基 化 状 态 进 行 高 灵 敏 度 和 可 靠 的 分 析 当 此 试 剂 盒 与 基 于 探 针 的 甲 基 化 检 测 试 剂 ( 如 EpiTect MethyLight Assay) 相 结 合 时, 可 以 得 到 高 度 准 确 的 甲 基 化 定 量 分 析 结 果 EpiTect MethyLight Assay 包 括 了 PCR 引 物 和 两 条 探 针, 其 中 一 条 为 甲 基 化 特 异 探 针, 另 一 条 为 非 甲 基 化 特 异 探 针, 它 们 可 以 在 同 一 反 应 中 同 时 检 测 甲 基 化 和 未 甲 基 化 位 点 ( 表 5) 表 5. 灵 敏 检 测 微 小 的 甲 基 化 变 化 设 定 的 试 验 甲 基 化 程 度 平 均 C T(CG) 值 (FAM 探 针 ) 平 均 C T(TG) 值 (VIC 探 针 ) 计 算 所 得 每 个 样 品 的 甲 基 水 平 % 0% 甲 基 化 % 甲 基 化 % 甲 基 化 % 甲 基 化 % 甲 基 化 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

17 定 购 信 息 产 品 规 格 货 号 Rotor-Gene Q 2plex Rotor-Gene Q 2plex HRM Rotor-Gene Q 5plex Rotor-Gene Q 5plex HRM Rotor-Gene Q 6plex Warranty PLUS 1 Basic, Rotor-Gene Q Rotor-Disc 100 Starter Kit Real-time PCR cycler with 2 channels (green, yellow), laptop computer, software, accessories, 1-year warranty on parts and labor, optional installation and training Real-time PCR cycler and HRM instrument with 2 channels (green, yellow) plus HRM channel, laptop computer, software, accessories, 1-year warranty on parts and labor, optional installation and training Real-time PCR cycler with 5 channels (green, yellow, orange, red, crimson), laptop computer, software, accessories, 1-year warranty on parts and labor, optional installation and training Real-time PCR cycler and HRM instrument with 5 channels (green, yellow, orange, red, crimson) plus HRM channel, laptop computer, software, accessories, 1-year warranty on parts and labor, optional installation and training Real-time PCR cycler with six channels (blue, green, yellow, orange, red, crimson), laptop computer, software, accessories, 1-year warranty on parts and labor, optional installation and training Inquire Inquire Inquire Inquire Inquire 2-year warranty, all labor, travel, and parts Kit includes: 2 Rotor-Disc 100 packs, Rotor-Disc Heat Sealer, Rotor-Disc Heat Sealing Film, Rotor-Disc 100 Rotor and Locking Ring, Rotor-Disc 100 Loading Block, Rotor-Disc Pipetting Aid Inquire Rotor-Disc 100 (30) Pack of 30 individually wrapped discs for 3000 reactions Rotor-Disc 72 Starter Kit Rotor-Gene Probe PCR Kit (400)* Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit (400) QuantiFast Probe Assay (400)* Rotor-Gene Multiplex PCR Kit (400)* Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit (400)* QuantiTect Primer Assay (200)* Kit includes: 3 Rotor-Disc 72 packs, Rotor-Disc Heat Sealer, Rotor-Disc Heat Sealing Film, Rotor-Disc 72 Rotor and Locking Ring, Rotor-Disc 72 Loading Block, Rotor-Disc Pipetting Aid Inquire For 400 x 25 μl reactions: 2x Master Mix, RNase-Free Water For 400 x 25 μl reactions: 2x Master Mix, RT Mix, RNase-Free Water For 400 x 25 μl reactions: dual-labeled, probe-based, predesigned 20x lyophilized assays; includes master mix and reagents for real-time one-step or two-step RT-PCR Varies For 400 x 25 μl reactions: 2x Master Mix, RNase-Free Water For 400 x 25 μl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Master Mix, 100 μl Rotor-Gene RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water For 200 x 50 μl reactions: 10x QuantiTect Primer Assay (lyophilized) Varies * 可 提 供 不 同 包 装 大 小 的 试 剂 盒 ; 详 情 请 咨 询 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 17

18 定 购 信 息 产 品 规 格 货 号 QuantiTect Reverse Transcription Kit (50)* miscript SYBR Green PCR Kit (200)* QuantiTect Virus +ROX Vial Kit (200)* QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit (400)* QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit (400)* Type-it Fast SNP Probe PCR Kit (800)* EpiTect MethyLight PCR Kit (200)* For 50 x 20 μl reactions: Buffers, Quantiscript Reverse Transcriptase, RT Primer Mix, RNase-Free Water For 200 x 50 μl reactions: 2x Master Mix, Universal Primer, RNase-Free Water For 200 x 50 μl reactions: 5x Master Mix, RT Mix, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer For 400 x 25 μl reactions: Master Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control DNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE For 400 x 25 μl reactions: Master Mix, RT Mix, lyophilized Internal Control Assay, lyophilized Internal Control RNA, ROX Dye Solution, High-ROX Dye Solution, RNase-Free Water, Nucleic Acid Dilution Buffer, Buffer TE For 800 x 25 μl reactions: 2x Master Mix, RNase-Free Water, Q-Solution For 200 x 50 μl reactions: 2x Master Mix, RNase-Free Water EpiTect HRM PCR Kit (100) For 100 x 25 μl reactions: 2x Master Mix, RNase-Free Water Type-it HRM PCR Kit (100) For 100 x 25 μl reactions: 2x Master Mix, RNase-Free Water Pathway-Powered RT 2 Profiler PCR Arrays Custom RT 2 Profiler PCR Arrays RT 2 SYBR Green ROX FAST Mastermix PCR Array includes SYBR Green-optimized primer assays for a panel of relevant pathway- or disease-focused genes Custom PCR Arrays containing any set of human, mouse, rat, dog, rhesus macaque, or fruit fly genes For 200 x 20 μl reactions: 2x SYBR Green ROX FAST qpcr Mastermix, HotStart DNA Taq Polymerase, dntp mix, dyes * 可 提 供 不 同 包 装 大 小 的 试 剂 盒 ; 详 情 请 咨 询 该 试 剂 盒 是 miscript PCR 系 统 的 一 部 份 ; 详 情 请 访 问 Rotor-Gene Q 实 时 荧 光 定 量 PCR 分 析 仪 11/2011

19 关于最新的许可信息或产品特定申明 请参见相应的 QIAGEN 试剂盒说明书或用户操作手册 QIAGEN 试剂盒说明书及用 户操作手册可以在 获取 或向 QIAGEN 技术服务部门或当地经销商索取 访问 了解更多关于 Rotor-Gene Q 的信息 Trademarks: QIAGEN, QIAgility, QIAsymphony, cador, EpiTect, GeneGlobe, mericon, HRM, Q-Bond, Q-Solution, Quantiscript, QuantiTect, QuantiFast, Rotor-Disc, Rotor-Gene, ScreenClust, Type-it (QIAGEN Group); Alexa Fluor, Marina Blue, SYBR, SYTO Texas Red (Life Technologies); CAL Fluor (Biosearch Technologies, Inc.); Cy (GE Healthcare); EvaGreen (Biotium, Inc.); FAM, JOE, ROX, TET,VIC (Applera Corporation or its subsidiaries); LC Green (Idaho Technology, Inc.); LightCycler, TaqMan (Roche Group); Quasar (Biosearch Technologies, Inc.); Yakima Yellow (Nanogen, Inc.); MAX (Integrated DNA Technologies, Inc.). Rotor-Gene Q 实时荧光定量 PCR 分析仪 11/2011 Sample & Assay Technologies 19

20 凯 杰 企 业 管 理 ( 上 海 ) 有 限 公 司 电 话 : 技 术 支 持 热 线 : TechService-CN@qiagen.com /2011 Sample & Assay Technologies