胞, 在 各 种 获 得 性 免 疫 反 应 包 括 多 种 炎 症 反 应 性 疾 病 中 相 互 作 用, 活 化 的 效 应 T 细 胞 激 活 肥 大 细 胞, 导 致 其 脱 颗 粒 和 释 放 多 种 细 胞 因 子 包 括 组 织 胺 ( histamine,ha) 白 三 烯 血 小

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1 肥 大 细 胞 在 慢 性 根 尖 周 炎 中 的 作 用 及 其 机 制 冼 雪 红 谢 倩 宁 冯 怡 丘 佳 玉 苏 瑜 邢 维 婷 ( 暨 南 大 学 口 腔 医 学 系 2010 级 口 腔 医 学, 广 东 广 州 ) 摘 要 肥 大 细 胞 除 在 超 敏 反 应 中 起 重 要 作 用 外, 还 参 与 急 慢 性 炎 性 反 应, 发 挥 防 御 作 用 并 能 加 工 递 呈 抗 原, 是 重 要 的 效 应 和 调 节 性 免 疫 细 胞 肥 大 细 胞 激 活 后 能 合 成 和 释 放 多 种 介 质 和 细 胞 因 子, 介 导 机 体 的 诸 多 生 理 病 理 和 免 疫 反 应 [1] 近 年, 有 学 者 对 肥 大 细 胞 在 慢 性 根 尖 周 炎 中 的 作 用 进 行 了 研 究, 认 为 根 尖 周 病 变 的 炎 症 反 应 与 肥 大 细 胞 的 参 与 密 切 相 关, 并 提 出 了 新 的 观 点 : 肥 大 细 胞 可 能 通 过 释 放 活 性 介 质 刺 激 成 纤 维 细 胞 增 殖 和 胶 原 沉 积, 导 致 牙 周 组 织 纤 维 化 本 文 就 肥 大 细 胞 在 慢 性 根 尖 周 炎 中 的 作 用 作 一 综 述 关 键 词 肥 大 细 胞 慢 性 根 尖 周 炎 脱 颗 粒 纤 维 化 1 慢 性 根 尖 周 炎 概 述 [2] 慢 性 根 尖 周 炎 (chronic periapical periodontitis) 是 指 由 于 根 管 内 的 感 染 或 病 原 刺 激 物 长 期 缓 慢 刺 激 而 导 致 的 根 尖 周 组 织 的 慢 性 炎 症 反 应, 常 表 现 为 增 生 为 主 的 炎 症 当 机 体 抵 抗 力 下 降 或 病 原 刺 激 增 强 时, 可 急 性 发 作, 慢 性 增 生 为 主 的 炎 症 则 转 为 急 性 化 脓 性 炎 症, 当 机 体 抵 抗 力 增 强 或 病 原 刺 激 减 弱 时, 急 性 炎 症 向 慢 性 炎 症 转 化, 受 损 的 根 尖 周 组 织 又 可 以 不 同 程 度 的 增 生 修 复 因 此 慢 性 根 尖 周 炎 时 根 尖 周 组 织 是 破 坏 和 修 复 交 错 进 行 的 常 见 类 型 包 括 根 尖 周 肉 芽 肿 慢 性 根 尖 脓 肿 和 根 尖 周 囊 肿 根 尖 周 病 变 中 含 有 各 类 抗 原 和 免 疫 成 分, 相 互 作 用 可 引 起 根 尖 周 组 织 病 变 性 免 疫 应 答, 可 能 是 一 种 或 几 种 超 敏 反 应 的 联 合, 包 括 Ⅰ 型 超 敏 反 应 Ⅱ 型 超 敏 反 应 Ⅲ 型 超 敏 反 应 Ⅳ 型 超 敏 反 应, 其 中 肥 大 细 胞 在 Ⅰ 型 超 敏 反 应 中 起 重 要 作 用 2 肥 大 细 胞 概 述 肥 大 细 胞 (mast cell,mc) 是 起 源 于 骨 髓 造 血 干 细 胞 的 多 功 能 且 生 命 期 较 长 的 分 泌 期 细 胞, 以 胞 浆 内 含 有 大 量 的 异 染 颗 粒 为 其 特 征 成 熟 的 肥 大 细 胞 主 要 分 布 于 组 织 的 血 管 和 纤 维 周 围, 尤 其 是 与 外 界 相 通 的 体 腔 组 织 的 纤 维 结 缔 组 织 内 不 同 机 体 和 机 体 部 位 的 肥 大 细 胞 表 现 很 大 的 异 质 性 (Kovarova 2005.Galli 1990) 肥 大 细 胞 和 免 疫 反 应 的 其 他 细 胞 之 间 存 在 潜 在 的 功 能 性 联 系 [3], 激 活 的 肥 大 细 胞 紧 邻 浆 细 胞 和 淋 巴 细

2 胞, 在 各 种 获 得 性 免 疫 反 应 包 括 多 种 炎 症 反 应 性 疾 病 中 相 互 作 用, 活 化 的 效 应 T 细 胞 激 活 肥 大 细 胞, 导 致 其 脱 颗 粒 和 释 放 多 种 细 胞 因 子 包 括 组 织 胺 ( histamine,ha) 白 三 烯 血 小 板 活 化 因 子 碱 性 成 纤 维 细 胞 生 长 因 子 ( basic fibroblast growth factor,bfgf) 肿 瘤 坏 死 因 子 -α( tumor necrosis factor-α,tnf-α) 和 一 氧 化 氮 等 肥 大 细 胞 可 通 过 IgE 和 非 IgE 依 赖 性 方 式 活 化 后 通 过 多 种 途 径 参 与 机 体 的 免 疫 反 应 外 伤 修 复 及 炎 症 反 应 等 3 肥 大 细 胞 在 慢 性 根 尖 周 炎 中 的 作 用 早 在 1973 年 Mathiesen 和 1978 年 Pulver 等 就 先 后 证 实 了 根 尖 周 病 变 中 含 有 合 成 IgE 的 浆 细 胞 和 肥 大 细 胞 而 通 过 组 织 病 理 学 方 法 和 免 疫 组 织 化 学 方 法 观 察 发 现 [4], 在 根 尖 周 病 的 病 变 区 域 主 要 为 浆 细 胞 淋 巴 细 胞 成 纤 维 细 胞 巨 噬 细 胞 等 浸 润 在 急 性 炎 症 期 以 中 性 粒 细 胞 浸 润 为 主 ; 在 慢 性 炎 症 期, 以 纤 维 沉 积 浆 细 胞 和 肥 大 细 胞 浸 润 为 主 [9] Radojica Drazˇic' 等 通 过 收 集 The Register of Institute of Pathology 年 间 经 根 尖 周 手 术 或 拔 牙 后 送 检 的 标 本, 对 96 例 根 尖 周 病 变 行 苏 木 精 - 伊 红 染 色 姬 姆 萨 染 色 和 免 疫 标 记 CD117(KIT C), 通 过 免 疫 标 记 CD117 定 性 和 半 定 量 分 析 肥 大 细 胞 在 根 尖 病 损 的 分 布, 并 对 根 尖 囊 肿 和 根 尖 肉 芽 肿 表 达 CD117 的 情 况 进 行 比 较 Giemsa 染 色 可 除 观 察 到 淋 巴 细 胞 浆 细 胞 中 性 粒 细 胞 和 巨 噬 细 胞 浸 润 外, 还 可 见 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 ( 图 1) 此 外 发 现 虽 然 肥 大 细 胞 在 炎 症 浸 润 区 和 纤 维 增 生 区 均 有 浸 润, 但 炎 症 浸 润 区 中 的 肥 大 细 胞 数 目 较 少, 纤 维 增 生 区 的 肥 大 细 胞 数 目 较 多 ( 图 2) 由 此 可 见, 一 方 面 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 参 与 慢 性 根 尖 周 炎 免 疫 应 答 中 的 Ⅰ 型 超 敏 反 应, 另 一 方 面 肥 大 细 胞 可 能 参 与 慢 性 根 尖 周 炎 修 复 过 程 中 的 纤 维 增 生 图 1

3 图 肥 大 细 胞 参 与 慢 性 根 尖 周 炎 免 疫 应 答 中 的 Ⅰ 型 超 敏 反 应 [5] 现 在 普 遍 认 为 根 尖 周 病 的 发 病 可 能 有 IgE 介 导 的 变 态 反 应, 即 在 抗 原 刺 激 下 抗 原 作 用 于 结 合 于 肥 大 细 胞 或 嗜 碱 性 粒 细 胞 表 面 的 IgE 抗 体 后, 可 脱 颗 粒, 释 放 组 胺 5- 羟 色 胺 等 介 质, 从 而 导 致 根 尖 周 炎 症 和 损 伤 研 究 表 明 [4], 聚 集 于 感 染 根 管 内 活 的 或 死 的 细 菌 细 菌 毒 素 细 菌 代 谢 产 物 感 染 变 性 坏 死 的 牙 髓 组 织 及 其 分 解 产 物, 或 者 是 半 抗 原 性 牙 髓 治 疗 药 物 与 牙 髓 组 织 中 蛋 白 质 结 合 而 成 的 抗 原 物 质 等, 通 过 根 尖 孔 进 入 根 尖 周 组 织, 可 引 起 机 体 的 免 疫 应 答 [4] 初 次 接 触 到 由 根 管 来 的 抗 原 物 质 后, 局 部 产 生 相 应 的 IgE( 一 种 亲 细 胞 性 抗 体 ), 并 吸 附 于 肥 大 细 胞 表 面, 使 机 体 处 于 致 敏 状 态 致 敏 的 机 体 再 次 接 触 到 相 同 的 抗 原 时, 抗 原 即 与 细 胞 表 面 的 IgE 结 合, 引 起 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 用 过 氧 化 物 酶 和 抗 过 氧 化 物 酶 检 测 慢 性 根 尖 周 病 组 织, 发 现 [4] 7% 以 上 被 检 组 织 中 含 有 IgE, 表 明 慢 性 根 尖 周 炎 发 病 过 程 中 IgE 介 导 的 免 疫 反 应 即 Ⅰ 型 超 敏 反 应 起 重 要 作 用 而 IgE 的 释 放 是 通 过 肥 大 细 胞 脱 颗 粒, 因 此 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 在 慢 性 根 尖 周 炎 发 病 过 程 中 的 Ⅰ 型 超 敏 反 应 中 起 重 要 作 用 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 的 机 制 主 要 涉 及 蛋 白 酪 氨 酸 激 酶 (PTK) 的 激 活 Ca 2+ / 钙 调 蛋 白 (calmodulin,cam) 和 钙 调 磷 酸 酶 (calcineurin,rcan)1 的 作 用 蛋 白 激 酶 C(PKC) 的 作 用 G 蛋 白 的 作 用 c AMP 浓 度 降 低 的 作 用 PTK 的 激 活 致 敏 状 态 的 肥 大 细 胞 在 抗 原 再 次 进 入 机 体 时, 膜 表 面 的 IgE 受 体 交 联 活 化, 活 化 的 受 体 通 过 磷 酸 化 作 用 时, 使 蛋 白 酪 氨 酸 激 酶 (PTK) 活 化, 形 成 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 的 起 始 信 号 Ca 2+ / 钙 调 蛋 白 和 钙 调 磷 酸 酶 1 的 作 用

4 Ca 2+ /CaM 激 酶 系 统 是 公 认 的 细 胞 内 信 息 传 递 系 统, 抗 原 诱 导 的 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 反 应 依 赖 于 Ca 2+ 的 作 用 早 在 1972 年 就 有 学 者 通 过 提 高 细 胞 外 Ca 2+ 浓 度, 发 现 组 胺 释 放 量 增 加 之 后 的 研 究 证 实, 细 胞 外 液 Ca 2+ 的 浓 度 增 加 后, 可 有 颗 粒 囊 泡 与 细 胞 膜 融 合 及 胞 裂 外 排 等 典 型 的 脱 颗 粒 反 应 由 抗 原 导 致 的 肥 大 细 胞 膜 表 面 的 IgE 交 联 搭 桥 后, 可 使 钙 通 道 开 放,Ca 2+ 内 流, 并 将 激 活 信 号 传 入 胞 内, 激 活 胞 内 的 酶 系 列, 触 发 后 续 的 脱 颗 粒 反 应 [6] PKC 的 作 用 早 年 的 研 究 表 明 [6],PKC 在 控 制 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 过 程 中 起 着 重 要 作 用, 除 了 Ca 2+ 浓 度 升 高 和 PTK 的 激 活, 还 涉 及 PKC 的 激 活 及 其 底 物 丝 氨 酸 和 苏 氨 酸 的 磷 酸 化 此 外 PKC-α 还 可 介 导 肥 大 细 胞 中 TNF 的 释 放 过 程 PKC 的 激 活 机 制 比 较 复 杂 [7], 与 细 胞 膜 的 磷 脂 酰 肌 醇 代 谢 密 切 相 关 细 胞 膜 胞 浆 侧 主 要 有 3 种 含 肌 醇 结 构 的 磷 脂 : 磷 脂 酰 肌 醇 (PI) 4- 磷 酸 磷 脂 酰 肌 醇 (PIP) 和 4, 5- 二 磷 酸 磷 脂 酰 肌 醇 (PIP2) 其 中 PIP2 的 水 解 产 物 1, 2 二 酰 基 甘 油 (DAG) 的 第 二 信 使 的 作 用 已 被 许 多 实 验 所 证 实 DAG 能 与 胞 浆 内 非 活 化 型 蛋 白 激 酶 C(PKC) 结 合, 并 在 膜 磷 脂 和 Ca 2+ 协 同 作 用 下 使 之 活 化 激 活 PKC 能 磷 酸 化 细 胞 膜 蛋 白 ( 包 括 离 子 通 道 或 受 体 等 ) 细 胞 骨 架 蛋 白 ( 微 管 蛋 白 微 丝 蛋 白 以 及 肌 球 蛋 白 轻 链 ), 从 而 触 发 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 由 此 可 见, 细 胞 内 Ca 2+ 浓 度 高 时,CaM 激 酶 和 PKC 在 激 活 肥 大 细 胞 活 化 过 程 中, 既 各 自 独 立, 又 相 互 协 调 不 可 分 割 G 蛋 白 的 作 用 Rho 是 小 分 子 G 蛋 白 中 的 一 个 亚 家 族, 主 要 调 节 肌 动 蛋 白 骨 架, 在 基 因 转 录 和 膜 泡 运 输 中 起 着 重 要 作 用 有 人 用 可 待 因 等 作 用 于 人 肥 大 细 胞 的 试 验 证 实, 可 待 因 激 活 人 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 以 及 趋 化 因 子 的 释 放 是 通 过 活 化 蛋 白 激 酶 A 和 磷 酸 肌 醇 3 激 酶 而 实 现, 从 而 说 明 G 蛋 白 可 能 参 与 了 肥 大 细 胞 的 脱 颗 粒 过 程 近 来 Kuehn 等 还 发 现,G 蛋 白 上 可 能 存 在 1 种 新 的 肥 大 细 胞 释 放 介 质 的 机 制, 即 通 过 协 同 激 活 磷 脂 酶 C(PLCβ 和 PLCγ) 相 继 促 进 1,4,5- 三 磷 酸 肌 醇 的 产 生,Ca 2+ 内 流, 以 及 PKC 的 活 化, 从 而 增 强 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 的 信 号 [6] camp 的 浓 度 降 低 致 敏 的 机 体 再 次 接 触 到 相 同 的 抗 原 时, 抗 原 即 与 细 胞 表 面 的 IgE 结 合, 细 胞 膜 上 的 腺 苷 酸 环 化 酶 会 受 到 抑 制, 从 而 导 致 细 胞 中 环 磷 酸 腺 苷 (camp) 合 成 减 少 camp 具 有 控 制 活 性 介 质 释 放 的 作 用, 因 此, 当 camp 浓 度 降 低 时, 细 胞 内 的 嗜 碱 性 颗 粒 便 释 放 组 胺 缓 激 肽 等 生 物 活 性 介 质 这 些 物 质 可 使 毛 细 血 管 扩 张 和 通 透 性 增 加, 结 果 导 致 或 加 剧 根 尖 周 组 织 局 部 炎 症 反 应, 如 组 织 水 肿 疼 痛 患 牙 伸 长 感 咬 合 痛 等 [4]

5 3.2 肥 大 细 胞 在 慢 性 根 尖 周 炎 中 与 成 纤 维 细 胞 的 相 互 作 用 [9] Radojica Drazˇic 和 Marton and Kiss 等 发 现 肥 大 细 胞 在 根 尖 周 病 损 的 炎 症 浸 润 区 和 纤 维 增 生 区 均 存 在, [8] 推 测 肥 大 细 胞 在 一 定 程 度 上 有 积 极 作 用 许 多 研 究 发 现 肥 大 细 胞 促 成 了 各 种 纤 维 化 的 条 件, 并 提 出 一 些 肥 大 细 胞 合 成 和 分 泌 的 活 性 介 质 和 细 胞 因 子, 如 类 胰 蛋 白 酶 糜 蛋 白 酶 组 胺 肝 素 和 细 胞 因 子 如 肿 瘤 坏 死 因 子 (TNF) - α 等, 可 以 刺 激 成 纤 维 细 胞 (fibroblast,fb) 增 多 和 细 胞 外 基 质 过 度 积 聚, 进 而 在 组 织 纤 维 化 中 起 到 不 容 忽 视 的 作 用 同 时 成 纤 维 细 胞 可 以 特 定 表 达 肥 大 细 胞 生 长 因 子 促 进 肥 大 细 胞 释 放 组 胺 等 物 质, 促 进 肥 大 细 胞 释 放 组 胺 等 介 质, 使 得 慢 性 根 尖 周 炎 时 根 尖 周 组 织 破 坏 和 修 复 交 错 进 行 肥 大 细 胞 对 成 纤 维 细 胞 的 作 用 如 前 所 述, 肥 大 细 胞 可 合 成 和 分 泌 类 胰 蛋 白 酶 和 糜 蛋 白 酶 [10] 类 胰 蛋 白 酶 通 过 刺 激 成 纤 维 细 胞 增 生, 胶 原 合 成, 使 基 质 沉 积 和 重 建, 也 能 通 过 活 化 基 质 中 的 金 属 蛋 白 酶 和 胶 原 酶, 降 解 纤 维 蛋 白 原 和 数 种 基 质 成 分, 从 而 促 进 结 缔 组 织 的 溶 解 [10] 糜 蛋 白 酶 对 胶 原 纤 维 的 合 成 及 降 解 具 有 双 重 作 用, 通 过 金 属 蛋 白 酶 促 进 胶 原 和 其 他 细 胞 外 基 质 蛋 白 裂 解 ; 反 过 来, 又 可 以 直 接 促 进 原 胶 原 形 成 胶 原 纤 维, 通 过 刺 激 转 化 生 长 因 子 TGF-β 释 放 而 促 进 成 纤 维 细 胞 增 生 此 外, 还 可 以 促 使 血 管 紧 张 素 Ⅰ 转 化 成 血 管 紧 张 素 Ⅱ, 通 过 后 者 促 进 纤 维 组 织 重 建 成 纤 维 细 胞 对 肥 大 细 胞 的 作 用 成 纤 维 细 胞 可 以 特 定 表 达 肥 大 细 胞 生 长 因 子, 如 干 细 胞 因 子 (SCF) 和 神 经 生 长 因 子 (nerve growth factor, NGF) 等, 促 进 肥 大 细 胞 生 长 发 育 和 增 殖 NGF 不 仅 能 诱 导 CD34+ 造 血 祖 现 分 化 成 肥 大 细 胞, 还 能 抑 制 肥 大 细 胞 凋 亡, 从 而 通 过 增 加 幸 存 率 使 组 织 中 肥 大 细 胞 数 量 的 增 加 成 纤 维 细 胞 来 源 的 肥 大 细 胞 生 长 因 子 是 可 溶 性 的 热 敏 感 性 分 子, 通 过 与 肥 大 细 胞 表 面 的 CD117 受 体 结 合, 维 持 肥 大 细 胞 前 体 存 活, 影 响 肥 大 细 胞 的 增 殖 与 分 化, 并 可 促 进 肥 大 细 胞 释 放 组 胺 等 介 质 4 展 望 通 过 调 节 肥 大 细 胞 的 功 能 活 动 将 为 根 尖 周 的 治 疗 提 供 有 价 值 的 依 据 制 订 更 好 的 治 疗 措 施 近 年 来 许 多 研 究 报 道 认 为 根 尖 周 病 的 发 生 发 展 转 归 与 根 尖 周 局 部 免 疫 反 应 有 密 切 关 系 对 免 疫 活 性 细 胞 的 研 究 是 探 讨 根 尖 周 病 免 疫 发 病 机 制 的 前 提 肥 大 细 胞 是 重 要 的 效 应 和 调 节 性 免 疫 细 胞, 其 脱 颗 粒 的 分 子 机 制 是 一 个 由 多 种 蛋 白 质 分 子 介 导 的, 各 个 环 节 受 到 精 确 调 控 的 复 杂 过 程 ; 对 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 分 子 机 制 的 深 入 研 究 将 给 根 尖 周 病 的 防 治 与 治 疗 提 供 有 价 值 的 依 据

6 参 考 文 献 [1] 杨 岚, 李 蕾, 陈 国 千. 肥 大 细 胞 功 能 和 介 质 释 放 机 制 的 研 究 进 展 [J]. 国 际 检 验 医 学 杂 志,2010 8,31(8): [2] 于 世 凤. 口 腔 组 织 病 理 学, 第 7 版, 人 民 卫 生 出 版 社,2012 年 [3] 潘 倩 茹, 吕 芳 丽, 黄 博, 陈 莹, 刘 曼, 黄 世 光. 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 在 牙 周 炎 病 理 中 的 作 用 [J] 实 用 口 腔 医 学 杂 志 2012 May,28 (3): [4] 郭 伟. 口 腔 临 床 免 疫 学 [M] 上 海 : 复 旦 大 学 出 版 社,2003 [5] 陈 万 涛. 口 腔 临 床 免 疫 学 [M] 上 海 : 上 海 交 通 大 学 出 版 社,2010 [6] 杨 岚, 李 蕾, 陈 国 千. 肥 大 细 胞 功 能 和 介 质 释 放 机 制 的 研 究 进 展 [J]. 国 际 检 验 医 学 杂 志,2010 8,31(8): [7] 刘 东 方. 肥 大 细 胞 脱 颗 粒 机 制 研 究 进 展 [Z]. 审 国 外 医 学 临 床 生 物 化 学 与 检 验 学 分 册 ,(2) [8]Gruber BL,Kew RR,Jelaska A,et al. Human mast cells activate fibroblasts: Tryptaseis a fibrogenic factor stimulating collagen messenger ribonucleic acid synthesis and fibroblast chemotaxis[j]. J Immunol,1997,158( 5) : [9] Radojica. D& J.Sopta& A.J.Minić, Mast cells in periapical lesions: potential role in their pathogenesis[j]. Journal of Oral Pathology & Medicine,2010, (39): [10] 吴 景 良, 张 理 涛. 肥 大 细 胞 免 疫 生 物 学 研 究 进 展 [J], 中 国 中 西 医 结 合 皮 肤 性 病 学 杂 志 2008,7(1):60-63

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