中国药师 年第 卷第 期 C P m V N 左金丸源自元代 丹溪心法 的火方 由黄连和 型在线脱气机 S L A型自动进样器 CTO A型 吴茱萸两味药按照 的比例组成 近年来的现 柱温箱 日本 S m 公司 BPD型电子天平 代药理学研究表明 左金丸具有调节中枢 抑杀幽门 德国赛多利斯集团 BR

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1 研究论文 www 基于细胞色素 P 的左金丸体外药物相互作用研究 龚睿林 吕春明 石美智 郭澄 韩永龙 上海交通大学附属第六人民医院药剂科 上海 摘 要 目的 探讨左金丸对人肝细胞色素 P 的 CYPA C C C D A亚型的体外抑制作用 方法 左金丸 黄连和吴茱萸的水提物分别与 CYPA C C C D A A亚型的 种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育后 串联质谱法 LC MS MS同时测定这 种代谢产物 对乙酰氨基酚 α 羟基紫杉醇 羟基双氯芬酸 羟基美 采用液相色谱 芬妥英 右啡烷 羟基咪达唑仑 β 羟基睾酮的浓度 计算其 C值表示对该亚型的抑制程度 结果 在人肝微粒体体外孵 育体系中 左金丸提取物对 CYPD的 C值为 μ m 对 CYPA和 CYPA的 C值分别为 μ m 和 m 对 其 他 亚 型 的 C值 从 μ m 到 μ m 黄 连 提 取 物 对 CYPD的 C值 为 μ m 对 μ CYPA和 CYPA的 C值分别为 μ m 和 μ m 对其他亚型的 C值从 μ m 到 μ m 吴茱萸提取物对 CYP的 C值均大于 μ m 结论 左金丸在体外对人肝微粒体 CYPD活性有抑制作用 对 CYPA和 CYPA活性有弱的抑制作用 其君药黄连在该抑制作用中起到了主要作用 在联合用药时应注意左金丸与 CYPD相关的药物相互作用 关键词 左金丸 黄连 吴茱萸 细胞色素 P 药物相互作用 中图分类号 R 文献标识码 A 文章编号 X S H Z P B C mp G R LC m M G C H Y D m P m J U A S P H C ABSTRACT O T Z mp m CYPA CYPC CYPC CYPC CYPD CYPA m m m M T w Z C R m E F w w m m m CYP m m mp m CYPA α CYPC m CYPC CYPD β CYPA CYPC m m CYPAw m m LC MS MS w w C R T C Z CYPD CYPA CYPA Tw μ m T C w m μ m CYPC CYPC CYPC CYPA M m T C C R m CYPD CYPA CYPA Tw μ m T C w m μ m CYPC CYPC CYPC CYPA M m T C E F CYPw μ m C Z w CYPD w CYPA CYPA TC R m m CYP m m m m T m m Z m m CYPD KEYWORDS Z C R m E F C mp H 细胞色素 P mp CYP是人体 回 近年来的相关研究发现一些中药对 CYP 最重要的药物代谢酶之一 据研究有 以上的临 也有抑制作用 如毛玉昌等 研究发现虎杖和黄芩 床药物是通过代谢途径进行消除 这些药物中大约 对 CYPA具有较强的抑制 M 等 发现小青 有 是通过 CYPA C D和 A 进 龙汤可通过对 CYPA的抑制作用影响硝苯地平在 行代谢 诱导或抑制任何一种 CYP亚型 都有 大鼠体内被吸收利用的程度 徐斌等 发现六神丸 可能导致药物相互作用 引起联用药物暴露量的改 和丹参片对 CYPA有明显抑制作用 肝苏颗粒对 变 从而影响药物的安全性或有效性 至今 由于 CYPC有明显抑制作用 这些研究显示中药也 CYP被抑制已出现了不少严重的药物不良反应 致 会抑制 CYP的活性 与中药相关的药物相互作用 使特非那定 溴芬酸和西立伐他汀等多种药物被召 研究应该受到更多的关注 基金项目 上海市进一步加快中医药事业发展三年行动计划 年资助项目 编号 ZY RCPY 通讯作者 韩永龙 T E m m

2 中国药师 年第 卷第 期 C P m V N 左金丸源自元代 丹溪心法 的火方 由黄连和 型在线脱气机 S L A型自动进样器 CTO A型 吴茱萸两味药按照 的比例组成 近年来的现 柱温箱 日本 S m 公司 BPD型电子天平 代药理学研究表明 左金丸具有调节中枢 抑杀幽门 德国赛多利斯集团 BR高速冷冻离心机 法国 螺杆菌 调节体温 调节胃肠蠕动 抑制胃酸分泌 抗 J 公 司 MDF U V 型 超 低 温 冰 箱 日 本 左金 S ANYO公司 M Q纯水系统 美国 M 公 丸在临床应用上主要集中在反流性食管炎 胆汁反 司 DKZ 电热恒温振荡水槽 上海一恒科技有限 流性胃炎 消化性溃疡以及慢性胃炎等消化系统疾 公司 TC 套 式 恒 温 器 海 宁 市 新 华 医 疗 仪 器 病 也有用于治疗失眠 化疗不良反应和小儿口腔炎 型水浴锅 N 型旋转蒸发仪 上 厂 SB 等方面的报道 在我国中西药经常联合使用 海爱朗仪器有限公司 FD A 型冷冻干燥机 北 左金丸也存在会与一些易受 CYP影响的消化系统 京博医康实验仪器有限公司 常用西药 如奥美拉唑 雷尼替丁 诺氟沙星和克拉 方法与结果 霉素等联合使用的现象 本实验室在前期的研究 左金丸等水提物的制备 溃疡 抗炎镇痛 抗癌和降压等药理作用 中发现左金丸对鼠肝微粒 CYPA有一定抑制作 左金丸提取物按 丹溪心法 中经典方剂比例 用 进而较为系统地研究了左金丸对人肝微粒体中 取黄连 吴茱萸 共 生药 制备方 主要 的 种 参 与 药 物 代 谢 的 CYPA CYPC 法采用实验室前期摸索的最优提取方法 即加 倍 CYPC CYPC CYPD和 CYPA亚型的体外 m 双蒸水 浸泡 m 煎开后微沸 量 即 抑制作用 以期为左金丸提供一些基础研究数据 这 过滤 残渣再加 m双蒸水 煎开后 微沸 对促进临床合理用药 降低药物相互作用的风险都 过滤 合并两次滤液 用旋转蒸发仪浓缩回收到一 有重要的意义 定体积后 置入冷冻干燥机进行冷冻干燥 成冻干粉 材料 后称重 记录 按此法先后制备 批 三批样品的出 试药 膏率分别为 和 即 冻干 黄连 吴茱萸 吴江上海蔡同德堂中药饮片有限 粉相当于约 原生药材 黄连和吴茱萸提取物 公司 产地均为四川 非那西丁 双氯芬酸 咪达唑 制法同左金丸提取物 黄连的三批样品 分别取 羟 仑 右美沙芬 对乙酰氨基酚 呋拉茶碱 奎尼丁 和 即 冻 的出膏率分别为 基咪达唑仑 右啡烷 磺胺苯吡唑 吉非贝齐 丁螺环 干粉相当于约 原生药材 吴茱萸的三批样品的 酮 美国 S m公司 紫杉醇 S 美芬妥英 羟基美 出膏率分别为 和 即 冻干 芬妥英 S N 孟鲁司特 酮 康 唑 公司 β 加拿大 TRC公司 睾酮 比利时 A 羟基睾酮 美国 L公司 羟基紫杉醇 美国 C 羟 基 双 氯 芬 酸 美 国 BD G 公 m公司 司 葡萄糖 磷酸脱氢酶 美国 C m公司 磷酸葡萄糖 氧化型辅酶 Ⅱ 二钠 上海美季生物 混合人肝微粒体 批号 供体信息见表 美国 BDG 公司 其他无机盐均为分析纯 有机溶剂 均为色谱纯 实验用水为超纯水 数量 年龄 岁 左金丸水提物等测试样品的的配制 精密称定黄连 吴茱萸和左金丸的水提物适量 用 mm L 的磷酸盐缓冲液 配制成储 备液 依次用 mm L 的 溶液稀释 使 其在孵 化 体 系 中 的 终 浓 度 依 次 为 m m 黄连 吴 茱萸和左金丸等样品的配制见表 人肝微粒体体外孵育体系 该人肝微粒体体外孵育体系同以往成熟的孵育 表 混合人肝微粒体的 个供体简要信息 项目 性别 男性 女性 种族 高加索人 美国黑人 粉相当于约 原生药材 数量 方法 即终体积为 μ的体外孵化体系包括 表 左金丸水提物等测试样品的储备液 和测试终浓度 样品 储备液浓度 m m 稀释 溶媒 测试终浓度 m m 左金丸 ZJ W 配有电喷雾离子化源 ES源 A 软件 加 黄连 HLS 拿大 AB公司 软件编码 LC A型液相 吴茱萸 WZY 主要仪器 AP 型液相色谱 三重四极杆质谱联用仪 色谱系统 包含 LC AB型二元梯度泵 DGU A

3 研究论文 www 人微粒体蛋白 m m 氯化镁 mm L 葡萄糖 磷酸脱氢酶 m 磷酸 葡萄糖 mm L 水 H为 的磷酸缓冲 ZJ W HLS和 WZY分别与上述混合底物共同孵化 对照组加入等体积的纯化水代替 每个样品平行操 作 次 余下孵育处理程序同上述 测定方法 液 mm L 混合探针底物 非那西丁 紫 同上述 使用 G P P m 软件按照 双氯芬酸 S 美芬妥英 右美沙芬 咪达唑仑 杉醇 非线性回归 作图并计算 C值 睾酮及其最终浓度分别为 μm 结果 L 不同浓度的左金丸等测试样品或阳性对照 该实验在课题组以往一系列成熟技术 的支 药 呋 拉 茶 碱 孟鲁司特 磺胺苯吡唑 S N 撑 下 进 行 选 用 的 CYPA CYPC CYPC 奎尼丁 酮康唑 在 水浴中预孵 CYPC CYPD和 CYPA的底物 非那西丁 紫 化 m 后加入氧化型辅酶Ⅱ二钠 mm L 双氯芬酸 S 美芬妥英 右美沙芬 咪达唑仑和 杉醇 启动反应 孵化 m 整个孵育体系中有机溶剂的 睾酮合适 建立的 LC MS MS检测方法灵敏可靠 阳 μ的冰乙腈 体积百分浓度控制在 以内 用 性对照药 呋拉茶碱 孟鲁司特 磺胺苯吡唑 S 含内标吉非贝齐 丁螺环酮终止反应 然后 N 奎尼丁 酮康唑的 C值也与 FDA m 离心 m 取等体积上清液和甲醇水混 合物 混匀后 取混合液 μ进样 用 LC 的指南及相关文献接近 保证实验结果的可靠性 结果表明左金丸对人肝微粒体 CYPD的抑制 MS MS定量分析生成的 种代谢产物 对乙酰氨基 C 值 为 μ m 其 次 是 作 用 最 强 α 羟基紫杉醇 羟基双氯芬酸 羟基美芬妥 酚 CYPA和 CYPA T C值分别为 μ m 英 右啡烷 羟基咪达唑仑 β 羟基睾酮 和 μ m 对 CYPC CYPC CYPC 色谱条件及质谱条件 CYPA M 的 抑 制 作 用 较 弱 C值 从 μ 色谱 柱 W N P C柱 mm mm μm 流动相 A 乙腈 甲醇 甲酸 m 到 μ m 黄连对人肝微粒体 CYP的 作 用 趋 势 与 左 金 丸 一 致 也 是 对 人 肝 微 粒 体 流动相 B mm L 醋酸铵 采用梯度 CYPD的抑制作用最强 C值为 μ m 洗脱 条 件 m A C值分 别 为 其次是 CYPA和 CYPA T A m A m μ m 对 CYPC μ m 和 CYPC CYPC CYPA M 的 抑 制 作 用 较 弱 A m A 流 C值从 μ m 到 μ m 吴茱萸 速 m m 柱温 质谱采用 ES源 人肝微粒体 CYP的 抑 制 作 用 较 弱 C值 均 大 于 选择极性切换方式进行正负离子同时扫描 电喷雾 μ m 测试样品和阳性对照药的具体数值 电压正离子模式为 V 负离子模式为 V 见表 测试样品的代表性抑制作用曲线见图 雾化气为高纯度氮气 雾 加热毛细管温度为 讨论 m A m 化压力为 采用多级反应监测 MRM模式对 各个代谢产物及内标浓度进行测定 具体代谢参数 参照以往文献设定 w 等 研究了 种生药水提物的甲醇可 溶性成份对人肝微粒体 CYPA 以红霉素为底物 和 CYPD 以右美沙芬为底物的抑制作用 发现 左金丸水提物等的半数抑制浓度 C测定 m m 黄连提取物对 CYPA抑制作用在 将 个不同浓度 见表 的左金丸水提物 黄 之间 对 CYPD抑制作用超过 连水提物和吴茱萸水提物 对应图 中缩写分别为 对 CYPD的 C为 μ m m m 表 左金丸水提物等测试样品和阳性对照药的半数抑制浓度 酶型 底物 左金丸 ZJ W μ m 黄连 HLS μ m 吴茱萸 WZY μ m 阳性对照药 药品名称 μ L CYPA 非那西丁 CYPC 紫杉醇 呋拉茶碱 孟鲁司特 CYPC 双氯芬酸 磺胺苯吡唑 CYPC S 美芬妥英 S N CYPD 右美沙芬 奎尼丁 CYPA T 睾酮 酮康唑 CYPA M 咪达唑仑 酮康唑

4 中国药师 年第 卷第 期 C P m V N 图 左金丸水提物 ZJ W 黄连水提物 HLS和吴茱萸水提物 WZY分别 对人肝微粒体 CYPA CYPD和 CYPA T的体外抑制作用 吴茱萸提取物对 CYPA和 CYPD的抑制作用均 超过 C值分别为 μ m 和 μ m 这些文献报道的研究结果与本文结果基本一 致 数值上的差异可能与本文所选用的底物不一样 有关 此外 H 等 的关于黄连及其生物碱的研 究也表明 黄连中黄连碱 C值为 μm L 和表小檗碱 C值为 μm L 是对 CYPD 产生抑制作用的主要生物碱 药根碱 C值为 配 查阅资料发现已有不少文献报道 黄连水 煎液和吴茱萸水煎液配伍后吴茱萸中主要组分的未 见明显变化 黄连生物碱的随吴茱萸水煎液配比的 增加呈线性下降 即吴茱萸组分存在时可使黄连生 物碱 如药根碱 黄连碱 巴马汀和小檗碱的提取 率 下 降 而 在 左 金 丸 提 取 物 中 黄 连 碱 这 样 对 CYPD有明显抑制作用 C为 μm L 的 成 分 含 量 减 少 必 然 会 影 响 左 金 丸 提 取 物 对 L 对 CYPA有明显的抑制作用 U μm 等 的 研 究 也 证 明 吴 茱 萸 中 吴 茱 萸 次 碱 对 CYPA有抑制作用 曹亚杰等 的研究进一步发 CYPE 现吴 茱 萸 次 碱 对 碱 对 CYPA CYPC CYPD的 C值 和 CYPD的活性有显著抑制作用 而对 CYPC 作用中起到了主要作用 联合用药时应注意左金丸 和 CYPA的活性无显著影响 这些研究也提示 与 CYPD 相 关 的 药 物 相 互 作 用 一 些 通 过 黄连和吴茱萸中生物碱成分可能是其对 CYP产生 CYPD代谢的药物要尽可能不与左金丸联 合 使 总之 研究发现左金丸水提物在体外对人肝微 粒 体 CYPD活 性 有 抑 制 作 用 对 CYPA和 CYPA的一定的抑制作用 其君药黄连在该抑制 抑制作用的有效成份 用 以避免产生代谢性药物相互作用而导致药物不 本研究中 左金丸 黄连 吴茱萸的比例为 而 黄 连 的 C μm 中黄连占到了 良反应 下转第 页 L 和左金丸的 C μm L 并不完全匹

5 中国药师 年第 卷第 期 C P m V N 激性 安全性好 相关安全性试验还在进行中 因此 本文设置了 品中 用量一般为 尿素软膏或乳膏治疗手足皲裂的作用机制是通 高 中 低 浓 度 的 银 杏 叶 提 取 物 组 的 浓 度 分 别 为 过增加角质层的水合作用 促进角化正常 使皮肤润 实验结果表明高 中剂量组对手足 泽 银杏叶提取物 EG临床多用于治疗心血管疾 皲裂症有一定的疗效 病 有关其外用 相关文献报道很少 因此 本文通 综上所述 本文从药效学方面研究 发现银杏叶 过实验 证实了银杏叶提取物乳膏对大鼠背部皮肤 提取物对于大鼠皮肤皲裂模型有一定的疗效 为扩 皲裂模型有较好的疗效 能达到尿素的治疗效果 但 大银杏叶提取物的用途 进一步在临床上治疗手足 其作用机制与尿素不同 这与银杏叶提取物具有以 皲裂提供理论基础和实验依据 下几个方面的作用有关 ① 清除自由基 抗脂质 过氧化作用 手足皲裂症发生时 皮肤会出现裂隙 严重者导致出血 此时 EG能清除自由基 保护血 管内皮 细 胞 ② 抗 PAF 血 小 板 活 化 因 子作 用 PAF与增加血管通透性有关 防止血栓形成 促进皲 裂部位的微循环 从而改善皲裂 ③抗菌作用 在伤口愈合过程中 胶原蛋白由肉芽组织中的 成纤维细胞合成和分泌 能帮助修复组织的结构 改 善组织的强度 除弹性蛋白含少量 H H 主要 存在于 胶 原 蛋 白 中 且 含 量 稳 定 国 外 研 究 报 道 加速大鼠局部皮肤损伤的愈合与 H 含量 有 关 可通过测定组织中 H 含量变化来检测胶 原蛋白的 合 成 能 力 从 而 间 接 反 映 创 面 愈 合 的 情 况 在研究中 银杏中 高剂量组 H 含量明显 比银杏低剂量组和模型组高 可以推断银杏中 高剂 量组的创面愈合情况良好 参 考 文 献 李兆龙 虞杏英银杏叶提取物在化妆品中的应 用 今 日 科 技 王 艳一 种 治 疗 手 足 皲 裂 的 药 物 组 合 物 P 中 国 专 利 顾丽贞 王彦云 李多娇 等清热暗疮片对兔耳痤疮模型抗角化 中成药 作用及血流变的影响 樊慧杰 柴智 闫润红 等补中益气汤对脾气虚症大鼠伤口肌肉 组织 H VEGF α SMA表达的影响 中国实验方剂学杂志 吴宗群 李广平 冷爱晶银杏叶提取物的药理作用研究 中 国药师 P J A A G m T A P J T A w mm m m BMCC m m A M S m Y w K M m F E P H m w mm JA F C m 李兆龙银杏叶与化妆品 植物杂志 收稿 修回 通过查阅文献 可知 银杏叶提取物用在护肤 櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊 上接第 页 参 考 文 献 M G wj W DC mp E O D M T W LC H TGP m N R D D 陈冠容 年 FDA公布从美国市场撤消的药品 药 物流行病学杂志 毛玉昌 王军 孙易 等艾滋病中药和化学药通过 CYPA的代 谢性相互作用的体 外研究 中国 新药 杂志 M T M F M mhd m m m B P mb 徐斌 赵刚 位华 等 味中药对 个人肝微粒体酶活性的影响 药学实践杂志 赵平 许浚 张铁军 等 病 证 方 药 结合探析左金丸配伍的 科学内涵 中国中药杂志 孔维军 赵艳玲 山丽梅 等左金丸的研究进展 中国实验 方剂学杂志 鲍晨汝 潘宗海左金丸的药理作用及临床研究进展 上海中 医药杂志 张保国 刘庆左金丸现代临床新用 中成药 韩永龙 孟祥乐 李丹 等清开灵注射液及其主要成分黄芩苷和 酶 种亚型的体外抑制作用研究 栀子苷对人肝微粒体 CYP 中国药学杂志 H YL YHL M XL R m L m P R P m m m m H YL LD Y QJ m mp m P M w H T Y U T m m m CYP A CYP D m m JT M U YF J WC L LC T mp A m m m m D M D 曹亚杰 曹伟 余奇 等吴茱萸次碱在人肝微粒体中对细胞色素 P 酶的抑制作用 中南药学 潘浪胜 徐晓梅 吕秀阳 等黄连与吴茱萸分煎后配伍时主要组 分含量变化规律研究 中国药学杂志 潘浪胜 吕秀阳 许海丹 等高效液相色谱法研究黄连生物碱与 吴茱萸黄酮配伍时成分含量的变化 色谱 彭明兴 吴永江 程翼宇黄连与吴茱萸配伍时黄连中主要化学 组分溶出率变化规律研究 中国中药杂志 收稿 修回

Ph m V N 中国药师 年第 卷第 期 Ch 学基础首先是开放性药物可直接经口 鼻给予 其次是应 连整个产品设计紧凑携带使用方便此外减速网也被认为 答性它富含的感受器和药物受体能对体内外刺激作出应答 是可用于降低药物微粒速度从而减少其惯性嵌顿的一种结 反射从而对调节气道的张力有重要作用 第三是吸

Ph m V N 中国药师 年第 卷第 期 Ch 学基础首先是开放性药物可直接经口 鼻给予 其次是应 连整个产品设计紧凑携带使用方便此外减速网也被认为 答性它富含的感受器和药物受体能对体内外刺激作出应答 是可用于降低药物微粒速度从而减少其惯性嵌顿的一种结 反射从而对调节气道的张力有重要作用 第三是吸 www 综 述 h C d H bpg V Bu M d H D h mb w h m u h d m d A D m ASFT SHT hhc A h d m d d b w h d d h u m AmJC O MWD KM A h M m k DSS h d m d w h u m d G w h b m k O G u ud G O L M u F Th d m d du d F C A u

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