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1 中 央 研 究 院 高 中 生 命 科 學 資 優 生 培 育 計 畫 專 題 研 究 報 告 高 溫 選 殖 對 EV71 基 因 與 毒 性 的 研 究 老 北 女 女

2 流 行 兩 度 度 兩 異 度 異 來 利 行 流 行 例 流 行 度 不 來 列 什 不 類 錄 錄 錄 若 度 異 3 - 若 5 - 糖 2

3 列 類 類 惡 劣 類 力 便 數 力 狀 狀 數 錄 讀 列 量 例 兩 度 易 列 異 聯 3

4 料 異 離 冷 連 4

5 離 來 年 流 行 錄 錄 連 異 烈 度 離 度 離 度 離 錄 錄 µ 5

6 µ µ µ µ µ µ 行 行 錄 行 量 µ µ µ µ µ µ 6

7 行 行 µ µ µ 行 行 行 度 m 度 量 率 µ 量 µµ 7

8 論 列 兩 列 EV71 列 pev-inf7-89a strain 利 行 列 度 列 異 YN3-T10a YN3-4a-4 不 1 參 錄 15 - 異 列 YN3-T10a GTT EV71 YN3-4a-4 ACC 2VP2 異 1400 YN3-T10a T EV71 YN3-4a-4 A1400 類 Iisoleucine 33D 異 YN3-T10a YN3-4a-4 類 Daspartic acid Eglutamic acid 論 異 VP D 6929 來 異 列 異 錄 異 YN3-T10a 異 IYN3-4a-4 異 I 兩 異 列 異 異 YN3-T10a 異 DYN3-4a-4 異 E 兩 異 D E 錄 8

9 D E 量 量 量 [6] 異 不 來 論 5-5 -UTR 異 5-5 -UTR 料 5 -UTRuntranslation region 兩 六 錄 葉 cloverleaf-like 錄 六 3CDPCBPpoli-C binding protein PABP poli-a binding protein 糖 列 IRES, internal ribosome entry site 不 A IRES poliovirus EV71 類 IRES 來 nt 2-88 葉 nt nt nt nt 六 錄 5 -UTR 葉 5 -UTR 料 率 異 力 力 論 異 異 料 若 度 異 YN3-T10a 5 - 異 來 利 來 9

10 論 YN3-T10a YN3-4a-a 異 5 - VP2 3D VP2 3D 異 不 度 異 5-5 UTR IRES 了 錄 力 YN3-T10a 力 立 infectious clone 來 10

11 六 參 [1] p [2] David M. Kinpe and Peter M.Howley Fields Virology fourth edition. Chapter 24 Enteroviruses: Polioviruses, Coxsachieviruses, Echoviruses, and Newer Enteroviruses. [3] Murray, Rosenthac, Kobayashi and Pfaller Medical Microbiology, Third Edition..Chapter 54. [4] Ya-Ching Lin, Cheng-Nan Wu, Shin-Ru Shih, Mei-Shang Ho Characterization of a vero cell-adapted virulent strain of entervirus 71 suitable for use as a vaccine candidate. [5] 立. [6] Joseph Sambrook and David W. Russell Molecular Cloning a laboratory manual volume 3. CSHL PRESS. p.a7.6- A7.9. [7] David M. Kinpe and Peter M.Howley Fields Virology fourth edition. Chapter 23 Picornaviridae: The Viruses and Their Replication. 11

12 錄 錄 12

13 錄 13

14 錄 YN neu.( 藍 ) Spinal cord cultured in MRC5 cells Neu1 (10 10 TCID 50 /ml) 1 st round of passage in Vero cells Neu2 2 nd round of passage in Vero cells Neu3 3 rd round of passage in Vero cells 3 rounds in Plaque cloning Vero cells P4 Neu4 (10 2 TCID 50 /ml) YN3 YN4 YN5 P5 Neu5 2 rounds in 2 rounds in 2 rounds in Vero cells Vero cells Vero cells P6 Neu6 P3 YN3-3 YN4-3 YN5-3 P7 Neu7 P4 YN3-4 YN3-4a YN3-5 (released virus ) (cell associated virus) 3 rounds in 2 rounds at 38 vero cells YN3-T2 YN3-4a-4 7 rounds at 39 7 rounds in YN3-T10 Vero cells P12 YN3-4a-12 YN3-T10a 14

15 錄 葉 錄 六 15

16 錄 T C A G T C A G TTTTTC F TCTTCC S TATTAC Y TGTTGC C TTATTG L TCATCG S TAATAG TGATGG W CTTCTC L CCTCCC P CATCAC H CGTCGC R CTACTG L CCACCG P CAACAG Q CGACGG R ATTATC I ACTACC T AATAAC N AGTAGC S ATAATG M ACAACG T AAAAAG K AGAAGG R GTTGTC V GCTGCC A GATGAC D GGTGGC G GTAGTG V GCAGCG A GAAGAG E GGAGGG G 錄 見 16

17 錄 M.W. OF RESIDUE IN pka HYDROPATHY AMINO ACID SYMBOL PROTEIN AT ph 7.0 FW -COOH -NH 2 R-GROUP INDEX STRUCTURE Alanine A Arginine R Asparagine N Aspartic Acid D Cysteine C Glutamic Acid E Glutamine Q Glycine G Histidine H Isoleucine I Leucine L Lysine K Methionine M Phenylalanine F Proline P

18 Serine S Threonine T Tryptophan W Tyrosine Y Valine V 異 5 - VP2 3D / 異 類 6929 類 EV71 G T T T ATT I G GAG E YN3-T10a G T T T ATT I T GAT D YN3-4a-4 A C C A ATA I A GAA E 18