第 12 期孙凯,% 等.% 缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护效应 2481 盒由南京建成生物工程公司提供 ; 抗大鼠 Bcl-2 蛋白单克隆抗体及链霉菌抗生物素蛋白 - 过氧化物酶

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范慎
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1 2480 %%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 南方医科大学学报 (J%South%Med%Univ)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%2009;29(12) 缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护效应孙凯 1, 刘志苏 2, 孙权 2 ( 1 南方医科大学南方医院普通外科, 广东广州 ; 2 武汉大学中南医院普通外科, 湖北武汉 ) 摘要 : 目的探讨缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤 (IRI) 的保护效应方法建立大鼠局部肝脏 IRI 模型, 将 24 只健康雄性 Wistar 大鼠随机分为假手术缺血再灌注缺血后处理 3 组, 以缺血再灌前反复多次的短暂预再灌停灌作后处理 ; 观察肝组织中丙二醛 (MDA) 超氧化物歧化酶 (SOD) 过氧化氢酶 (CAT) 及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX) 水平变化, 采用免疫组化法检测肝组织中 Bcl-2 蛋白含量, TUNEL 法检测肝细胞凋亡状态, 透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化, 并以图象分析仪对线粒体立体形态进行定量分析结果与缺血再灌注组相比, 缺血后处理组肝组织中 MDA 含量及肝细胞凋亡指数明显下降 (P<0.05), 而 SOD CAT GSH-PX 水平和 Bcl-2 蛋白表达的光密度值则显著升高 (P<0.05), 线粒体超微结构损伤亦明显减轻结论缺血后处理可通过抑制再灌注后肝实质细胞凋亡, 减轻肝脏 IRI 关键词 : 肝脏 ; 缺血再灌注损伤 ; 缺血后处理 ; 凋亡 ; 线粒体 ;Bcl-2 中图分类号 :R657.3 文献标识码 :A 文章编号 : (2009) Protective effect of ischemic postconditioning on hepatic ischemia-reperfusion injury SUN%Kai 1,%LIU%Zhi-su 2,%SUN%Quan 2 1 Department%of%General%Surgery,%Nanfang%Hospital,%Southern%Medical%University,%Guangzhou%510515,%China;% 2 Department%of%General% Surgery,%Zhongnan%Hospital,%Wuhan%University,%Wuhan%430071,%China Abstract: Objective To% investigate% the% protective% effect% of% ischemic% postconditioning% (IPC) % against% hepatic% ischemia-reperfusion%injury.%methods Twenty-four%normal%male%Wistar%rats%were%randomly%divided%into%sham-operated%group,% ischemia-reperfusion% group% (IR) % and% IPC% group, % and% in% the% latter% two% groups, % the% rats% were% subjected% to% acute% hepatic% ischemia-reperfusion. %IPC%was%achieved%by%several%brief%pre-reperfusion%and%withdrawn%before%persistent%reperfusion. %The% concentration%of%malondialdehyde% (MDA) %and%activity%of%several%antioxidant%enzymes%in%the%hepatic%tissue%were%measured.% The%cell%apoptosis%was%detected%by%TdT-mediated%dUTP-biotin%nick%end%labeling%(TUNEL)%and%the%expression%of%Bcl-2%protein% measured%by%immunohistochemistry. %The%mitochondrial%ultrastructural%and%morphological%changes%of%the%hepatic%cells%were% observed%by%electron%microscopy.%results Compared%with%IR%group,%IPC%group%showed%significantly%reduced%concentration%of% MDA%and%the%hepatocellular%apoptotic%index%(P<0.05)%with%markedly%enhanced%activity%of%the%antioxidant%enzymes%and%Bcl-2% protein%expression%(p<0.05).the%mitochondrial%ultrastructural%damage%was%also%relieved%obviously%in%ipc%group.%conclusions IPC%can%reduce%the%hepatocellular%apoptosis%after%reperfusion%and%offers%protection%against%hepatic%IR%injury. Key words: liver;%ischemia-reperfusion%injury;%ischemic%postconditioning;%apoptosis;%mitochondria;%bcl-2 肝脏缺血再灌注损伤 (ischemia-reperfusion% injury,iri) 是临床广泛关注的问题, 常见于许多临床病理过程和肝脏手术过程, 如出血性休克肝切除和肝移植等业已证实, 凋亡作为细胞死亡的一种基本方式, 对于维持细胞正常发育和稳定具有重要意义, 与临床上许多疾病的发生发展密切相关, 亦参与组织器官的 IRI [1] 线粒体作为细胞关键的细胞器之一, 其在供能调节渗透压钙稳态 PH 值以及细胞信号传 %%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 收稿日期 : 基金项目 : 广东省自然科学基金博士启动项目 ( 编号 : ) 作者简介 : 孙凯 (1978-), 男, 博士, 电话 : , % sunkai9602@sina.com 通讯作者 : 刘志苏, 武汉大学中南医院普通外科导中起重要作用, 而线粒体 / 细胞色素 C 凋亡途径亦日益受到学者关注本实验通过建立在体大鼠局部肝脏 IRI 模型, 观察缺血后处理 (ischemic% postconditioning,ipc) 对肝脏 IRI 中细胞凋亡的影响及线粒体在其中的调控作用, 为临床上入肝血流阻断, 采取更合理的复流方式提供理论依据 1%% 材料与方法 1.1%% 实验动物本实验选用健康雄性 Wistar 大鼠 24 只, 体质量 200~250%g, 由武汉大学医学院动物实验中心提供 1.2%% 主要试剂丙二醛 (MDA) 超氧化物歧化酶 (SOD) 过氧化氢酶 (CAT) 及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX) 试剂

型, 将 24 只健康雄性 Wistar 大鼠随机分为假手术缺血再灌注缺血后处理 3 组, 以缺血再灌前反复多次的短暂预再灌停灌作后处理 ; 观察肝组织中丙二醛 (MDA) 超氧化物歧化酶 (SOD) 过氧化氢酶 (CAT) 及谷胱甘肽过氧化物酶

2 第 12 期孙凯,% 等.% 缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护效应 2481 盒由南京建成生物工程公司提供 ; 抗大鼠 Bcl-2 蛋白单克隆抗体及链霉菌抗生物素蛋白 - 过氧化物酶 (S-P) 免疫组化试剂盒购自北京中山生物技术有限公司 ; 末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dutp 缺口末端标记法 (TUNEL) 原位细胞凋亡检测试剂盒为美国 Boehringer%Mannhein 公司产品 1.3%% 动物分组及模型制备实验动物术前 12%h 禁食, 自由进水,0.3% 戊巴比妥钠 30%mg/kg 腹腔内注射麻醉, 取上腹正中切口, 入腹后分离肝十二指肠韧带, 充分显露第一肝门部, 参照 Nauta [2] 法建立大鼠肝脏局部缺血再灌注模型, 用无创小血管夹阻断尾状叶及左肝叶血流, 造成 70% 肝脏缺血, 但不阻断右肝叶血流, 以防门静脉和胃肠道淤血将动物随机分为 3 组, 每组 8 只 :(1) 假手术组 (S 组 ): 入腹后仅分离肝十二指肠韧带, 但不阻断肝门血供 ;(2) 缺血再灌注组 (IR 组 ): 肝脏缺血 60% min, 再灌注 120%min;(3) 缺血后处理组 (IPC 组 ): 缺血 60%min 后, 再灌注 2%min, 缺血 2%min, 再灌注 3% 的凋亡细胞每例标本的切片随机选取 5 个 400 倍视野, 计算出平均每 100 个细胞中的凋亡细胞数, 并以百分数表示作为凋亡指数 (apoptotic%index,ai) 凋亡细胞形态符合以下 4 点 : 单个细胞周围无炎症反应胞膜皱缩胞核致密深染呈棕黄色颗粒或碎片 1.7%% 肝组织超微结构的病理形态学观察切取新鲜左叶肝组织约 1%mm 3, 用容积分数 2.5% % 戊二醛作前固定,1%% 锇酸后固定, 梯度乙醇脱水后氧化丙烯浸透, 环氧树脂包埋, 超薄切片, 铅 - 铀染色, 在 H-600 透射电镜下观察超微结构改变, 用美国 Image%Pro%Plus 图象分析系统测定线粒体截面面积 (A) 截面周长 (P), 并计算线粒体比表面 δ=4p/(πa) 1.8%% 统计学分析实验所得数据用均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 采用完全随机设计的单因素方差分析, 多个样本均数间的两两比较采用 Student-Newman-Keuls%q 检验, 以 P<0.05 为差异有显著性, 所有操作均以 SPSS%11.0 统计软件完成 min, 缺血 2%min, 再灌注 5%min, 缺血 2%min, 再灌注 7% min, 缺血 2%min, 再全面恢复血液灌注 95%min 1.4%% 肝组织 MDA 含量及 SOD CAT GSH-PX 活性测定切取新鲜左叶肝组织 100%mg, 加入 1%mol/L%HCL% 1%mL 混匀研磨, 制备 10% 肝组织匀浆,4% 3%000% r/min 离心 10%min, 取上清液于 -70% 液氮保存至检测 ; 测定前将标本置于冷水中复融, 再次离心, 取上清液按试剂盒说明用比色法检测 2%% 结果 2.1%% 肝组织 MDA 含量及 SOD CAT GSH-PX 活性变化再灌注后,IR IPC 组肝组织中 MDA 含量迅速升高, 而 SOD CAT GSH-PX 活性减弱, 与 S 组相比差异均具有显著性 (P<0.05); 与 IR 组相比,IPC 组肝组织中 MDA 含量下降, 而 SOD CAT GSH-PX 活性升高, 其差异亦具有显著性 ( 表 1,P<0.05) 1.5%%Bcl-2 蛋白免疫组化检测切取新鲜左叶肝组织, 中性福尔马林固定 12~24%h, 常规石蜡包埋并作肝组织切片 (4% μm), 切片经常规二甲苯脱蜡及梯度乙醇脱水表 1%% 肝组织 MDA 含量及 SOD CAT GSH-PX 活性变化 Tab.1 Measurement of MDA concentration and antioxidant enzymes activity(mean±sd,n=8) 后,0.01%mmol/L%PBS 漂洗, 分别加入 3% 过氧 Group MDA(nmol/mg) SOD(U/mg%prot) CAT(U/mg%prot) GSH-Px(U/mg%prot) Sham 3.42± ± ± ±24.37 化氢液和 1% 小牛血清各孵育 10 分钟, 以消除 IR 17.56±4.80 %%132.99±22.11 %%%40.24±7.73 %%%%51.75±16.43 内源性过氧化酶影响和封闭非特异性反应切 IPC %%10.18±3.56 %%%%176.84±20.50 %%%%%64.81±7.19 %%%%%%89.70±28.15 片加入小鼠抗大鼠 Bcl-2 单克隆抗体孵育 1%h P<0.05%vs sham%group;% P<0.05%vs IR%group 并经 PBS 漂洗后, 采用 S-P 免疫组化法检测 Bcl-2 蛋白表达,HAIPS-2%000 高清晰图象分析系统测定每组中 Bcl-2 平均光密度值 (OD 值 ) 作为 Bcl-2 2.2%%Bcl-2 蛋白表达状况 IR 组 Bcl-2% OD 值为 ±0.011, 与 S 组蛋白含量评定 1.6%% 原位细胞凋亡检测肝组织石蜡切片制作方法同上, 在末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 介导下, 使生物素化的三磷酸脱氧尿苷 (dutp) 标记至 DNA 断裂后形成的 3,-OH 末端, 借助生物素与亲和素的特异结合, 使过氧化物酶连接至 DNA 断点, 最后加入底物, 通过 3,3- 二胺基联苯胺 (DAB) 显色, 可在光镜下观察到细胞核棕黄着色 (0.096±0.017) 相比差异具有显著性 (P<0.05);IPC 组 Bcl-2%OD 值为 0.138±0.016, 与 IR 组相比差异亦具有显著性 (P<0.05)( 图 1) 2.3%% 肝细胞凋亡状况光镜下 TUNEL 法染色显示再灌注早期, 细胞损伤主要是以凋亡的形式出现, 凋亡细胞主要位于中央静脉周围 ( 图 2); 电镜观察下, 从凋亡的最初表现如细胞肿胀变圆脱落和染色质边聚到典型的凋亡表现

转移酶介导的 dutp 缺口末端标记法 (TUNEL) 原位细胞凋亡检测试剂盒为美国 Boehringer%Mannhein 公司产品 1.3%% 动物分组及模型制备实验动物术前 12%h 禁食, 自由进水,0.

3 南方医科大学学报 (J%South%Med%Univ)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 第 29 卷 2482%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 如胞质和核浓缩凋亡小体形成等均可见到图 3 比差异具有显著性 P<0.05 IPC 组凋亡指数为 IR 组凋亡指数为 46.53±3.47 与 S 组 2.05±0.83 相 23.16±2.67 与 IR 组相比差异亦具有显著性 P<0.05 A B C 图 1%% 肝组织 Bcl-2 免疫组化结果 Fig.1 Immunohistochemical staining of Bcl-2 protein in liver tissues(sp,%original%magnification:% 200) A B C 图 2%% 肝组织原位细胞凋亡检测 Fig.2 In situ TUNEL assay for apoptosis detection in the liver tissues in each group (Original%magnification:% 200) 再灌注后 IR IPC 组线粒体平均截面面积周长增加而比表面缩小与 S 组相比其差异均具有显著性 P<0.05 IPC 组与 IR 组比较线粒体截面面积周长减小而比表面增大其差异亦具有显著性表 2 P<0.05 3%% 讨论图 3%% 肝细胞凋亡的超微结构改变在多种应激因素如活性氧 Ca2+ 超载毒素等作 Fig.3 Morphological change of 用下线粒体超微结构和功能受损使得原先位于线 hepatocellular apoptosis in IR group 粒体内的某些与凋亡相关的活性物质包括细胞色素 (Original%magnification:% 15%000) C 被释放入胞质 3 一旦细胞色素 C 释放细胞将通 2.4%%线粒体超微结构变化 S 组正常线粒体结构线粒体呈圆形或椭圆形整过两条途径死亡一是通过快速凋亡机制释放的细齐排列无肿胀线粒体膜完整嵴呈同心圆或纵形排列密集清晰 IR 组线粒体肿胀明显膜模糊不清部分膜破裂线粒体嵴明显疏松溶解大量空泡形成 IPC 组线粒体结构基本正常排列整齐膜基本完整线粒体嵴密集无空泡形成图 4 2.5%%线粒体立体形态的定量分析胞色素 C 与凋亡蛋白酶激活因子 -1 Apaf-1 caspase-9 结合形成 CytC-Apaf-1-caspase-9 复合物亦称凋亡体导致 caspase-9 活化继而顺序激活下游的 caspase-3 启动凋亡的瀑布级联反应同时仍有部分未释放的细胞色素 C 牢固地结合于细胞色素 b-c1 和细胞色素 C 氧化酶维持电子传递和有氧呼吸产生足够的 ATP 为凋亡进程提供能量保障 4 二是细

1 Immunohistochemical staining of Bcl-2 protein in liver tissues(sp,%original%magnification:% 200) A B C 图 2%% 肝组织原位细胞凋亡检测 Fig.

4 第 12 期孙凯,% 等.% 缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护效应 2483 A B C 图 4%% 肝细胞内线粒体超微结构改变 Fig.4 Changes of mitochondrial ultrastructure in liver cells(original%magnification:% 15%000) 表 2%% 线粒体形态特征参数的变化 Tab.2 Changes of parameters of mitochondrial morphology(mean±sd,n=8) Group Area(μm 2 ) Perimeter(μm) Surface(μm -1 ) Sham 76.2± ± ±0.04 IR %%278.3±22.2 %%60.9±5.9 %%0.17±0.05 IPC %%%%150.9±16.4 %%%%42.1±4.3 %%%%0.26±0.05 P<0.05%vs sham%group;% P<0.05%vs IR%group 胞进入一种慢速的坏死过程, 通透性转化孔 (permeability%transition%pore,ptp) 开放, 线粒体基质由于高渗而膨胀破裂, 原先存在的线粒体内膜跨膜电位 ( ψm) 迅速崩溃, 细胞色素 C 大量释放, 电子传递呼吸链受阻,ATP 含量骤减, 无法维持有效供能, 细胞走向坏死由此可见, 线粒体结构和功能的改变 [5] 可决定细胞是凋亡还是坏死本实验证实, 再灌注早期细胞损伤主要是以凋亡的形式出现再灌注后肝组织中脂质过氧化物的终产物 MDA 含量增加, 而 SOD CAT 及 GSH-PX 作为细胞内主要的抗氧化酶和自由基清除剂, 其水平却显著降低, 表明其保护组织细胞免受活性氧损伤的效能减弱, 过量的氧自由基可直接与线粒体膜表面多不饱和脂肪酸反应, 造成其结构和功能破坏, 细胞色素 C 等促凋亡物质大量释放, 触发细胞凋亡的发生线粒体立体形态的定量分析表明, 线粒体损伤的主要形态学改变是肿胀既往认为凋亡细胞主要表现为染色质固缩而线粒体几乎未受触动, 近来越来越多的证据表明在凋亡细胞中线粒体呈现肿胀体积巨 [6] 增固缩外膜崩解等显著改变比表面是指颗粒表面膜的平均面积与其体积之比, 是反应线粒体肿胀程度的客观指标再灌注后, 线粒体截面面积周长显著增大, 而比表面明显降低, 线粒体肿胀明显, 这亦与电镜观察下线粒体超微结构的变化趋势相一致 ; 而经后处理后线粒体肿胀损伤程度明显减轻, 肝细胞凋亡指数亦随之下降, 说明线粒体结构和功能变化与再灌注后细胞凋亡的发生发展密切相关, 线粒体功能障碍可能是细胞凋亡的早期关键事件, 而 IPC 对线粒体超微结构和功能具有显著的保护效应本实验中 IPC 所采用的预再灌停灌的处理方法虽与缺血预处理 (ischemic%preconditioning,ip) 相似, 但两者最根本的不同之处在于处理时机的差异预处理发生在缺血前, 系通过启动组织细胞自身内源性保护机制, 而使其能够耐受随后长时间的缺血损伤 ; 后处理面对的则是已缺血组织, 是从建立一种更有效的再灌注方法出发, 旨在处理和挽救缺血组织, 最大程度的减轻再灌注损伤本实验证实,IPC 对缺血肝脏确具有明显的保护作用我们推测, 缺血再灌前反复短暂的预再灌在某种意义上相当于有控制的缓慢间歇性复氧, 可减少突然复氧时氧自由基的爆发性产生, 并刺激胞内抗氧化酶和自由基清除剂的释放而发挥保护效应表现为 IPC 组与 IR 组相比, 肝组织中 MDA 含量下降, 而 SOD CAT 及 GSH-PX 等抗氧化酶活性则显著升高, 从而减轻了毒性氧自由基对线粒体膜脂质过氧化反应的损伤作用, 维持线粒体超微结构和功能的完整性, 拮抗肝实质细胞凋亡的发生 [7] Cave 等证实, 缓慢再灌注 ( 缓慢松开微米缩窄器 ) 比突然再灌注 ( 突然解除动脉夹 ) 的心肌梗死范围缩小室颤发生率降低, 这可能与本实验的 IPC 在本质上相似, 两者亦可能具有相同或相似的作用途径, 但其确切作用机制尚需进一步研究另外, 为了解线粒体在凋亡调节通路中作用, 我们在实验中还测定了肝组织中 Bcl-2 蛋白含量的变化 Bcl-2 蛋白作为 Bcl-2 家族中凋亡抑制蛋白的主要代表, 通过其羧基端的信号锚定序列横跨线粒体膜 [8] 而发挥作用 Bcl-2 蛋白在线粒体上可通过调节膜表面 PTP 的通透性或直接参与形成专一性通道, 而维持线粒体内膜跨膜电位的稳定并抑制细胞色素 C 等促凋亡物质的释放, 从而抑制胞质中 caspase 的激活, 阻断了细胞凋亡的瀑布级联反应本实验证实, 经过 IPC 后肝组织中 Bcl-2 蛋白光密度值明显高于 IR 组, 而凋亡指数亦显著下降, 说明 IPC 可通过上调跨

2 Changes of parameters of mitochondrial morphology(mean±sd,n=8) Group Area(μm 2 ) Perimeter(μm) Surface(μm -1 ) Sham 76.2±8.1 22.7±4.6 0.39±0.04 IR %%278.3±22.2 %%60.9±5.9 %%0.17±0.05 IPC %%%%150.

5 2484%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 南方医科大学学报 (J%South%Med%Univ)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 第 29 卷线粒体膜 Bcl-2 蛋白表达而减少肝脏 IRI 中细胞凋亡的发生综上所述, 肝脏 IRI 中多种应激因素可激活线粒体介导的凋亡通路, 导致细胞凋亡增加, 实质细胞总数减少, 肝组织结构和肝功能严重受损线粒体凋亡途径参与了肝脏 IRI, 是这一复杂机制的一个环节 IPC 可通过抑制再灌注后氧自由基的过量生成而保护线粒体超微结构和功能, 并上调跨线粒体膜 Bcl-2 蛋白表达从而抑制细胞凋亡, 减轻肝脏 IRI; 而且 IPC 是在手术完成后恢复全面血液灌注之前施与, 方法简单, 时间从容, 无疑具有直接的临床应用价值参考文献 : [1] Sun%K,%Liu%ZS,%Sun%Q.%Role%of%mitochondria%in%cell%apoptosis%during% hepatic% ischemia-reperfusion% injury% and% protective% effect% of% ischemic%postconditioning[j].%world%j%gastroenterol,%2004,%10(13):% [2] Nauta% RJ, % Tsimoyiannis% E, % Uribe% M, % et% al. % Oxygen-derived% free% radicals% in% hepatic% ischemia% and% reperfusion% injury% in% the% rat [J].% Surg%Gynecol%Obstet,%1990,%171%(2):% [3] Lee%WY,%Lee%SM.%Ischemic%preconditioning%protects%post-ischemic% oxidative%damage%to%mitochondria%in%rat%liver[j].%shock,%2005,%24 (4):% [4] Liu%Y,%Sercombe%R,%Xie%D,%et%al.%Inhibition%of%caspase-9%activation% and% apoptosis% is% involved% in% ischemic% preconditioning-induced% neuroprotection%in%rat%brain[j].%neurol%res,%2007,%29(8):% [5] Anderson%CD,%Pierce%J,%Nicoud%I,%et%al.%Modulation%of%mitochondrial% calcium%management%attenuates%hepatic%warm%ischemia-reperfusion% injury[j].%liver%transpl,%2005,%11(6):% [6] Ofluoglu%E,%Kerem%M,%Pasaoglu%H,%et%al.%Delayed%energy%protection% of%ischemic%preconditioning%on%hepatic%ischemia/reperfusion% injury% in%rats[j].%eur%surg%res,%2006,%38(2):% [7] Cave% AC, % Collis% CS, % Downey% JM, % et% al. % Improved% functional% recovery%by%ischaemic%preconditioning%is%not%mediated%by%adenosine% in% the% globally% ischaemic% isolated% rat% heart [J]. % Cardiovasc% Res,% 1993,%27(4):% [8] Oshiro%T,%Shiraishi%M,%Muto%Y.%Adenovirus%mediated%gene%transfer% of%antiapoptotic%protein%in%hepatic%ischemia-reperfusion%injury: %the% paradoxical%effect%of%bcl-2%expression%in%the%reperfused%liver [J].%J% Surg%Res,%2002,%103(1):%30-6. ( 上接 2479 页 ) [3] 国家药典委员会.% 中华人民共和国药典 [M].%2000 年版.% 二部 : 附录 85. [4] Leyland%JB.%Maximizing%the%response%to%Herceptin%therapy%through% optical% use% and% patient% selection [J]. % Anticancer% Drugs, % 2001, % 12 (suppl%4):%s11-s17. [5] Ewer%MS,%Gibbs%HR,% Swafford% J,% et% al.% Cardiotoxicity% in% patients% receiving% trastuzumab (Herceptin): % primary% toxicity, % synergistic% or% sequential%stress,%or%surveillance%artifact[j]?%semin%oncol,%1999,%26 (4%suppl%12):% [6] Suter% TM, % Cook% B, % Barton% C. % Cardiotoxicity% associated% with% trastuzumab% (Herceptin) % therapy% in% the% treatment% of% metastatic% breast%cancer[j].%breast,%2004,%13(3):% [7] Albanell%J,%Codony%J,%Rovira%A,%et%al.%Mechanism%of%action%of%anti-% HER2%monoclonal%antibodies:%scientific%update%on%trastuzumab%and% 2C4[J].%Adv%Exp%Med%Biol,%2003,%532:% [8] Fushs%IB,%Lands%S,%Buehler%H,%et%al.%Analysis%of%HER2%AND%HER1% in%the%heart%to%clarity%the%cardiotoxicity%of%herceptin [J]. %Proc%Am% Soc%Clin%Oncol,%2001,%20:%45. [9] Barton%C,%Suter%TM,%Cook%B,%et%al.%Cardiotoxicity%associated%with% Herceptin% in% the% therapy% of% metastatic% breast% cancer [J]. % Breast,% 2003,%12(4):% [10] Lefrak%E,%Pitha%J,%Tosenheim%S,%et%al.%Aclinicopathologic%analysis%of% adriamycin%cardiotoxocity[j].%cancer,%1973,%32:% [11] Chien % KR. % Myocyte % survival % pathways % and % cardiomyopathy : implications%for%tratuzumab%cardiotoxicity[j].%semin%oncol,%2000,% 27(6%Suppl%11):%9-14.

过抑制再灌注后氧自由基的过量生成而保护线粒体超微结构和功能, 并上调跨线粒体膜 Bcl-2 蛋白表达从而抑制细胞凋亡, 减轻肝脏 IRI; 而且 IPC 是在手术完成后恢复全面血液灌注之前施与, 方法简单, 时间从容, 无疑具有直接的临

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