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1 R 保 密 中 药 学 李 恩 彬 陈 建 伟 硕 士 2006 年 6 月 医 学 科 学

2 分 类 号 :R2 单 位 代 码 :10315 密 级 : 保 密 学 号 : 级 硕 士 学 位 论 文 明 党 参 有 效 成 分 累 积 规 律 及 其 栽 培 基 地 环 境 质 量 分 析 学 科 : 中 药 学 研 究 方 向 : 中 药 品 质 评 价 学 位 类 型 : 医 学 科 学 研 究 生 : 李 恩 彬 导 师 : 陈 建 伟 指 导 小 组 导 师 : 李 祥 教 授 巢 建 国 教 授 论 文 工 作 起 止 时 间 :2004 年 9 月 至 2006 年 5 月 南 京 中 医 药 大 学 二 00 六 年 六 月

3 Studies on the Law of the Effective Constituent Cumulated in Changium smyrnioides Wolff and on the Environment Quality of the Cultivation Base M.S.Dissertation Specialty: Chinese Materia Medica Research Orientation: Qulity Evaluation of Chinese Materia Medica Candidate: Li Enbin Supervisor: Professor Chen Jianwei Members of Tutor Group: Professor Li Xiang Professor Chao Jianguo Nanjing University of TCM

4 目 录 摘 要 1 Abstract 2 前 言 3 第 一 部 分 : 明 党 参 研 究 概 述 4 第 二 部 分 : 明 党 参 化 学 成 分 研 究 17 一 明 党 参 甲 醇 提 取 物 化 学 成 分 研 究 18 二 江 苏 栽 培 明 党 参 中 无 机 元 素 分 析 20 第 三 部 分 : 明 党 参 有 效 成 分 累 积 规 律 研 究 23 一 江 苏 栽 培 明 党 参 中 甘 露 醇 累 积 规 律 研 究 25 二 江 苏 栽 培 明 党 参 中 γ- 氨 基 丁 酸 累 积 规 律 研 究 36 三 江 苏 栽 培 明 党 参 中 L- 天 门 冬 酰 胺 累 积 规 律 研 究 47 四 研 究 小 结 56 第 四 部 分 : 明 党 参 栽 培 基 地 环 境 因 子 分 析 58 一 江 苏 栽 培 明 党 参 土 壤 中 六 六 六 DDT 含 量 的 测 定 60 二 江 苏 栽 培 明 党 参 土 壤 中 重 金 属 含 量 的 测 定 63 三 江 苏 栽 培 明 党 参 灌 溉 水 中 六 六 六 DDT 含 量 的 测 定 66 四 江 苏 栽 培 明 党 参 灌 溉 水 中 重 金 属 含 量 的 测 定 6 五 江 苏 栽 培 明 党 参 灌 溉 水 氟 化 物 氯 化 物 硝 酸 盐 和 硫 酸 盐 含 量 的 测 定 71 六 江 苏 栽 培 明 党 参 灌 溉 水 中 挥 发 酚 含 量 的 测 定 73 七 研 究 小 结 75

5 第 五 部 分 : 栽 培 明 党 参 有 害 物 质 检 测 77 一 江 苏 栽 培 明 党 参 中 六 六 六 DDT 农 药 残 留 量 的 测 定 78 二 江 苏 栽 培 明 党 参 中 重 金 属 含 量 的 测 定 81 结 语 84 附 录 致 谢

6 摘 要 本 文 从 明 党 参 传 统 汤 剂 应 用 入 手, 对 明 党 参 的 水 溶 性 化 学 成 分 进 行 了 分 离 鉴 定 根 据 明 党 参 润 肺 化 痰 的 中 医 功 效 以 及 对 心 脑 血 管 的 药 理 活 性 作 用, 选 择 明 党 参 中 含 量 较 高 的 甘 露 醇 γ- 氨 基 丁 酸 L- 天 门 冬 酰 胺 作 为 含 量 测 定 的 指 标, 进 行 了 江 苏 栽 培 明 党 参 有 效 成 分 累 积 规 律 的 研 究 按 照 中 药 材 生 产 质 量 管 理 规 范 (GAP) 对 中 药 材 栽 培 基 地 的 环 境 要 求, 对 明 党 参 栽 培 基 地 环 境 质 量 进 行 了 评 价 结 果 如 下 : 采 用 硅 胶 柱 层 析 法 对 明 党 参 甲 醇 提 取 物 进 行 化 学 成 分 的 分 离, 从 明 党 参 甲 醇 提 取 部 位 分 得 3 个 化 合 物, 鉴 定 出 1 个, 确 定 为 D- 甘 露 醇 采 用 原 子 吸 收 和 原 子 荧 光 法 对 明 党 参 中 重 金 属 进 行 了 分 析 ICP 法 测 定 了 栽 培 明 党 参 中 无 机 元 素, 表 明 含 有 钠 钾 钙 锰 钼 等 多 种 人 体 必 需 和 有 益 的 元 素 采 用 比 色 法 和 OPA 柱 前 衍 生 HPLC 法 分 别 测 定 了 不 同 采 收 期 明 党 参 中 甘 露 醇 γ- 氨 基 丁 酸 天 门 冬 酰 胺 的 含 量, 结 果 表 明, 一 年 之 中 江 苏 栽 培 明 党 参 中 甘 露 醇 的 含 量 变 化 范 围 为 0.57%~2.36%;γ- 氨 基 丁 酸 为 0.034%~0.116%;L- 天 门 冬 酰 胺 为 0.26%~1.87%, 并 且 伴 随 着 明 党 参 生 长 周 期 的 变 化, 呈 现 出 一 定 相 关 的 规 律 采 用 气 相 色 谱 法 对 江 苏 栽 培 明 党 参 及 其 栽 培 基 地 土 壤 水 体 中 六 六 六 DDT 的 含 量 进 行 了 测 定 ; 采 用 原 子 吸 收 及 原 子 荧 光 法 对 江 苏 栽 培 明 党 参 及 其 产 地 土 壤 水 体 中 重 金 属 的 含 量 进 行 了 测 定 ; 采 用 离 子 色 谱 法 对 水 样 中 氟 化 物 氯 化 物 硝 酸 盐 和 硫 酸 盐 的 含 量 进 行 了 测 定 结 果 显 示, 江 苏 栽 培 明 党 参 产 地 土 壤 和 水 体 中 有 害 物 质 残 留 均 符 合 中 药 材 生 产 质 量 管 理 规 范 的 标 准, 江 苏 栽 培 明 党 参 中 重 金 属 农 药 残 留 量 均 符 合 安 全 用 药 的 要 求 关 键 词 : 明 党 参, 甘 露 醇,γ- 氨 基 丁 酸, 天 门 冬 酰 胺, 重 金 属, 农 药 残 留, 有 效 成 分 累 积 规 律, 环 境 质 量 分 析 1

7 Abstract The disquisition separate and identify the water-solubility compounds of Changium smyrnioides Wolff based on its traditional usage. By the traditional efficacy of relieving a cough and pharmacological active to cardiovascular, we choose the mannitol,γ-aminobutyric acid and asparagine as the target to study the law how they cumulate in Changium smyrnioides Wolff. According to Good Agriculture Practice, we appraise the environment quality of the base where Changiums myrnioides Wolff are planted. The result is as follows: Separate the substance distilled from Changium smyrnioides Wolff by methanol, gained three compounds and identify one as D-mannitol. Measured the heavy metal and other inorganic elements in Changiums myrnioides Wolff by ICP, atomic-absorption spectroscopy and atomic -fluorescence spectrometry; The results show that the quality of the Changium smyrnioides Wolff accord with the standard of GAP, and there are many necessary and salutary element in Changium smyrnioides Wolff such as Na, K, Ca, Mn etc. Measure the mannitol content by colorimetry and theγ-aminobutyric acid and Asparagine content by HPLC. The result shows the content of mannitol is from 0.57% to 2.36%, 0.034%-0.116% asγ-aminic acid and 0.26%-1.87% as asparagine, and the contents present some relationship when Changiums myrnioides Wolff grows. By GC we mensurated the content of DDT,666 of Changium smyrnioides Wolff and of the soil and water where it grows; measured the heavy metal in water and soil by atomic-absorption spectroscopy and atomic-fluorescence spectrometry; analyze the fluorid, chloride, nitrate and sulfate by ion chromatography. The results show that the quality of the soil and water accord with the standard of GAP. Key words: Changium smyrnioides Wolff, mannitol,γ-aminic acid, asparagines, heavy metal, remained pesticide, low of efficiency component cumulated, analyse of entironment quality 2

8 前 言 明 党 参 Changium smyrnioides Wolff 是 我 国 特 有 的 伞 形 科 (Umbelliferae) 明 党 参 属 (Changium) 的 单 种 属 植 物, 在 伞 形 科 系 统 分 类 中, 隶 属 于 芹 亚 科 (Apioideac Drude) 美 味 芹 族 (Smyrnieae Koch),1984 年 被 列 入 国 家 三 级 濒 危 保 护 植 物, 现 为 江 苏 特 产 道 地 药 材 之 一 具 有 补 气 生 津, 润 肺 化 痰, 平 肝 和 胃, 消 肿 解 毒 的 功 效 本 次 研 究 旨 在 探 索 明 党 参 有 效 成 分 累 积 规 律, 为 明 党 参 的 合 理 采 收 提 供 指 导 ; 评 价 明 党 参 中 的 有 害 物 质 及 其 生 长 环 境 质 量 ; 分 析 分 离 和 鉴 定 明 党 参 中 的 化 学 成 分 具 体 内 容 如 下 : 1 文 献 研 究 : 通 过 查 阅 相 关 文 献, 对 明 党 参 本 草 及 药 用 历 史 沿 革 生 物 学 特 性 化 学 成 分 以 及 药 理 作 用 进 行 了 综 述, 跟 踪 明 党 参 的 研 究 进 展 2 化 学 成 分 研 究 : 采 用 硅 胶 柱 层 析 法 对 明 党 参 甲 醇 提 取 部 位 进 行 化 合 物 分 离, 采 用 等 离 子 体 发 射 光 谱 原 子 吸 收 及 原 子 荧 光 法 对 明 党 参 中 的 无 机 元 素 进 行 测 量 3 明 党 参 有 效 成 分 累 积 规 律 研 究 : 采 用 比 色 法 测 定 明 党 参 中 甘 露 醇 的 含 量, 高 效 液 相 法 测 定 明 党 参 中 γ- 氨 基 丁 酸 和 L- 天 门 冬 酰 胺 的 含 量, 探 索 其 累 积 的 规 律 4 明 党 参 栽 培 基 地 环 境 因 子 分 析 : 采 用 气 相 色 谱 法 分 析 土 壤 水 体 中 的 农 残 ; 采 用 原 子 吸 收 及 原 子 荧 光 法 分 析 土 壤 水 体 中 的 重 金 属 ; 采 用 离 子 色 谱 法 分 析 水 样 中 的 氟 化 物 氯 化 物 硝 酸 盐 和 硫 酸 盐 并 进 行 挥 发 性 酚 的 测 定, 在 此 基 础 上 对 环 境 质 量 进 行 评 价 5 明 党 参 有 害 物 质 检 测 : 采 用 气 相 色 谱 法 分 析 对 栽 培 明 党 参 中 农 药 残 留 量 进 行 分 析 ; 采 用 原 子 吸 收 及 原 子 荧 光 法 对 栽 培 明 党 参 中 重 金 属 进 行 分 析 3

9 第 一 部 分 明 党 参 研 究 概 述 4

10 明 党 参 研 究 概 述 明 党 参 Changium smyrnioides Wolff 是 我 国 特 有 的 伞 形 科 (Umbelliferae) 明 党 参 属 (Changium) 的 单 种 属 植 物, 在 伞 形 科 系 统 分 类 中, 隶 属 于 芹 亚 科 (Apioideac Drude) 美 味 芹 族 (Smyrnieae Koch) 1924 年, 德 国 植 物 学 家 H.Wolff 根 据 张 宗 绪 在 浙 江 吴 兴 ( 湖 州 ) 所 得 标 本 而 立 此 名 明 党 参 分 布 在 亚 热 带 的 长 江 流 域, 我 国 华 东 地 区 的 浙 皖 苏 鄂 等 省 的 局 部 地 区, 为 我 国 著 名 的 特 产 药 材 之 一 由 于 人 类 挖 掘 和 生 境 的 破 坏, 其 分 布 区 和 个 体 数 量 正 日 益 减 少, 近 年 来 其 种 群 呈 现 明 显 衰 退 倾 向,1984 年 被 列 入 国 家 三 级 濒 危 保 护 植 物 [1], 现 为 江 苏 特 产 道 地 药 材 之 一 1 本 草 文 献 及 药 用 历 史 沿 革 明 党 参 是 名 贵 中 药 材, 具 有 滋 补 强 壮 润 肺 化 痰 平 肝 解 毒 安 中 和 胃 的 功 效 明 党 参 自 古 以 来 别 名 繁 多, 有 百 丈 光, 天 瓠 红 萝 卜 草 山 胡 萝 卜 南 沙 参, 土 人 参 粉 沙 参 红 党 参, 明 沙 参 红 党 参 明 党 牙 党 银 牙 党 山 花 山 萝 卜 金 鸡 爪 山 荷 宝 野 荽 菜 狗 尿 秸 等 名 称 在 众 多 的 称 谓 之 中, 有 些 名 称 所 指 的 并 非 真 正 的 明 党 参 例 如 明 党 这 一 名 称, 据 考 证 是 人 参 的 别 名 早 在 百 年 前, 医 方 中 所 用 的 明 党, 并 非 是 属 于 伞 形 科 植 物 的 明 党 参, 而 是 经 过 煮 后 糖 化 的 透 明 人 参, 中 国 医 学 大 辞 典 中 已 指 出 : 明 党 人 参 也 中 国 药 学 大 辞 典 中 也 说 明 党 即 人 参 中 实 透 明 者 之 别 名 [2] 也 有 与 桔 梗 科 同 名 异 物 的 南 沙 参 相 混 赵 学 敏 在 本 草 纲 目 拾 遗 中 说, 南 沙 参 产 于 浙 地 者, 鲜 明 如 萝 卜, 土 人 去 皮 煮 熟 如 熟 山 药, 晒 干 如 天 花 粉, 而 无 粉 性, 本 名 粉 沙 参, 功 专 散 毒, 消 肿 排 脓, 非 南 沙 参 也 ; 其 南 沙 参 形 如 桔 梗, 而 中 空 松, 味 谈, 味 甘 [3] 由 此 可 知 同 名 异 物 的 南 沙 参, 前 者 是 伞 形 科 植 物 的 明 党 参, 后 者 是 桔 梗 科 植 物 的 南 沙 参 经 过 多 年 的 野 外 调 查, 在 浙 江 杭 州 及 湖 州 一 带 的 药 农 把 明 党 参 称 为 南 沙 参 粉 沙 参 土 人 参 红 萝 卜 草, 有 的 叫 野 胡 萝 卜 草 在 江 苏 和 安 徽 一 带 叫 明 党 参 或 山 花, 但 根 据 药 材 加 工 方 法 不 同, 明 党 参 不 经 煮 沸, 剥 去 外 皮, 直 接 晒 干, 若 外 表 呈 牙 白 色 叫 牙 党, 而 色 白 微 黄, 白 多 黄 少 叫 银 牙 党 而 将 其 称 之 为 明 党 参 则 始 出 于 饮 片 新 参, 沿 用 至 今 所 谓 明 党 参, 其 意 是 指 蒸 煮 干 后, 中 实 透 明, 外 形 和 疗 效 近 似 人 参 虽 然 明 党 参 在 本 草 纲 目 和 植 物 名 实 图 考 内 尚 无 记 载, 但 作 为 明 党 参 的 别 名 百 5

11 丈 光 土 人 参, 红 萝 卜 草, 红 党 参 粉 沙 参 等, 在 我 国 医 方 中. 早 巳 被 人 们 所 应 用, 治 疗 各 种 疾 病, 也 有 三 百 多 年 的 历 史, 依 文 献 先 后 出 现 来 定 名 的 话, 明 党 参 应 正 名 为 百 丈 光, 始 载 于 明 代 王 肯 堂 所 著 证 治 准 绳 (1605 年 ) 疡 医 卷, 作 为 劫 瘴 败 毒 散 和 七 神 散 的 主 药, 主 治 瘴 气 肿 痛 发 热 [4] 清 吴 仪 洛 本 草 从 新 (1757 年 ) 称 为 土 人 参, 列 入 草 部 补 益 药, 用 作 补 肺 气 通 下 行, 谓 其 甘 微 寒, 蒸 之 极 透 则 寒 性 去, 气 香 味 淡, 性 善 下 降, 能 伸 肺 经, 治 节 使 清 肃 下 行, 补 气 生 津 治 咳 嗽 喘 逆 痰 壅 火 升 久 疟 淋 沥, 难 产 经 闭 泻 痢 由 于 肺 热 反 胃, 噎 膈 由 于 燥 濇 凡 有 升 无 降 之 证, 每 见 奇 效 其 参 一 直 下 行, 入 土 最 深 脾 虚 下 陷, 滑 精 梦 遗, 俱 禁 用 以 其 下 行 而 滑 窍 也, 孕 妇 亦 忌 出 江 浙 俗 名 粉 沙 参, 红 党 参 即 将 此 参 去 皮 净, 煮 极 熟, 阴 干 而 成 者, 味 淡 无 用 [5] 赵 学 敏 编 著 的 本 草 纲 目 拾 遗 (1765 年 ) 一 书 中, 曾 引 述 了 张 觐 斋 语 道 : 红 党 参 即 红 萝 卜 草 所 造, 张 氏 所 指 的 红 萝 卜 草 就 是 本 草 纲 目 拾 遗 中 所 说 的 土 人 参 赵 学 敏 于 书 中 云 土 人 参 各 地 皆 产, 钱 塘 西 湖 南 山 尤 多, 春 二 三 月 发 苗 如 蒿 艾, 而 叶 续 小. 本 长 二 三 寸, 作 石 绿 色, 映 日 有 光, 土 人 候 夏 日 采 其 根 以 人 药, 俗 名 粉 沙 参 [3] 赵 其 光 本 草 求 原 (1848) 谓 其 养 血 生 津, 消 热 解 毒 姜 汁 炒 则 补 气 生 肌 托 疮 疡 [6] 王 一 仁 饮 片 新 参 (1935) 谓 温 脾, 化 痰 湿, 平 肝 风 治 头 晕 泛 恶 中 风 昏 仆 中 药 志 (1959) 记 载 其 润 肺 化 痰 止 咳, 和 胃 止 呕 治 咳 嗽 呕 吐 ; 又 能 解 毒 治 疔 疮 四 川 中 药 志 谓 祛 风, 解 热, 补 肺 镇 咳 治 肺 虚 咳 嗽 有 痰, 头 昏 目 眩 风 热 目 赤 及 口 干 江 苏 植 物 药 材 志 载 根 为 滋 养 强 壮 剂, 主 要 供 食 品, 南 方 民 间 一 般 作 补 血 或 防 瘴 用 [7] 明 党 参 的 加 工 炮 制 始 见 于 清 代 吴 仪 洛 所 著 的 本 草 从 新, 即 去 皮 净, 燀 制 得 红 党 参 所 谓 燀 制 即 将 明 党 参 挖 根 洗 净, 放 入 沸 水 中 烫 3~5 分 钟 其 后 赵 其 光 将 其 用 姜 汁 制, 作 补 气 生 肌 之 用 综 上 所 述, 明 党 参 具 有 补 气 生 津, 润 肺 化 痰, 平 肝 和 胃, 消 肿 解 毒 之 功 效 近 代 临 床 研 究 认 为, 明 党 参 味 甘 微 苦, 性 微 寒, 归 肺 脾 肝 经 有 补 气 生 津 润 肺 化 痰 养 阴 和 胃 平 肝 解 毒 的 功 效, 主 治 肺 燥 咳 嗽 呕 吐 反 胃 食 欲 不 振 消 化 不 良 病 后 体 虚 及 疔 毒 疮 疡 民 间 用 作 补 血 或 防 瘴 药 近 年 来 的 研 究 发 现, 明 党 参 在 降 低 胆 固 醇 调 节 免 疫 功 能 方 面 亦 有 活 性 2 生 物 学 研 究 6

12 2.1 生 态 地 理 分 布 明 党 参 分 布 区 位 于 我 国 北 亚 热 带 和 中 亚 热 带 地 区, 经 数 年 来 的 调 查, 主 要 分 布 在 浙 江 的 西 北 部, 江 苏 的 西 南 部, 安 徽 的 东 南 部, 即 东 经 约 ~122, 北 纬 29 ~32 18, 为 本 属 植 物 的 自 然 分 布 中 心, 向 西 可 延 伸 到 江 西 北 部 及 湖 北 的 东 南 部, 邻 近 的 省 区 亦 有 栽 培 和 野 生 ( 见 表 1-1) [8] 表 1-1 明 党 参 在 我 国 地 理 分 布 省 份 浙 江 江 苏 市 县 湖 州 长 兴 杭 州 余 杭 临 安 于 潜 淳 安 兰 溪 及 舟 山 群 岛 一 带 六 合 南 京 镇 江 江 宁 句 容 丹 阳 溧 水 溧 阳 金 坛 宜 兴 无 锡 苏 州 青 浦 安 徽 滁 州 全 椒 含 山 和 县 繁 昌 芜 湖 南 陵 铜 陵 青 阳 安 庆 广 德 祁 门 歙 县 屯 溪 金 寨 江 西 湖 北 瑞 昌 湖 口 彭 泽 都 昌 通 山 咸 宁 阳 新 广 济 大 冶 鄂 城 本 区 的 气 候 属 亚 热 带 温 暖 湿 润 气 候, 历 年 冬 季 1 月 是 全 年 最 冷 月, 月 平 均 气 温 为 1.6~3.3, 极 端 最 低 温 为 ( ), 极 端 最 高 温 达 43 (1934), 年 平 均 气 温 为 14.5 ~16.2, 年 雨 量 1200~1600 毫 米, 无 霜 期 200~250 天 ; 全 年 70% 的 降 雨 量 集 中 在 4~7 月 份 植 被 为 北 亚 热 带 常 绿 阔 叶 林 及 常 绿 与 落 叶 阔 叶 混 交 林 明 党 参 呈 散 生 或 成 片 状 分 布, 垂 直 分 布 主 要 见 于 海 拔 50~350m 的 丘 陵 山 地, 多 生 长 在 排 水 良 好 的 石 灰 岩 山 坡, 坡 度 一 般 在 10~40 度, 生 长 的 土 壤 为 由 石 灰 岩 发 育 而 成 的 石 灰 土 壤 黄 棕 壤 及 砂 壤 土, 土 壤 质 地 疏 松 潮 湿,pH 值 为 6.0~6.5 [9] 分 布 以 落 叶 树 下 灌 草 丛 中 或 竹 林 下 为 主, 路 边 靠 林 缘 较 近 处 也 有 分 布 2.2 生 物 学 特 性 研 究 明 党 参 幼 苗 必 需 经 历 两 年 营 养 生 长, 至 第 三 年 才 能 抽 苔, 并 分 化 花 芽 进 行 生 殖 生 长 明 党 参 以 种 子 秋 播 繁 殖, 生 活 周 期 较 长, 幼 苗 生 长 缓 慢, 后 期 生 长 迅 速, 每 年 都 有 生 长 和 休 眠 两 个 时 期, 通 常 12 月 至 翌 年 1 月 开 始 萌 发,2 月 左 右 幼 苗 出 土,3 至 4 月 中 旬 拍 苔 孕 蕾,4 月 下 旬 至 6 月 开 花,6 月 中 旬 为 果 熟 期, 夏 至 前 后 随 着 气 温 升 高, 植 株 开 始 变 黄 枯 萎 进 入 休 眠, 休 眠 期 达 6-7 个 月 [8] 7

13 种 群 存 活 过 程 野 外 样 方 的 Deevey 曲 线 显 示 明 党 参 种 群 的 存 活 曲 线 基 本 属 于 Deevey-I 型, 即 直 线 型, 只 是 在 早 期 ( 特 别 是 1 年 龄 ) 死 亡 率 极 高, 一 旦 活 到 某 一 年 龄 后, 死 亡 率 就 很 低, 在 整 个 生 活 史 中 还 有 其 它 两 个 波 动 明 党 参 种 群 在 种 子 苗 期 中 受 到 强 烈 的 环 境 筛 的 过 滤 作 用, 标 准 存 活 数 骤 降,1 年 龄 幼 苗 的 存 活 率 很 低, 野 外 平 均 存 活 率 只 有 10.9% 明 党 参 主 要 生 境 为 中 亚 热 带 - 北 亚 热 带 光 照 较 充 足 的 冬 季 林 窗 或 林 缘 该 生 境 中 微 环 境 因 子 ( 主 要 是 水 分 和 光 照 ) 波 动 较 大, 导 致 其 种 子 萌 发 率 和 幼 苗 成 长 为 成 熟 植 株 的 机 率 下 降 除 此 以 外, 明 党 参 种 群 还 有 两 个 较 高 致 死 压 力 时 期, 分 别 是 成 熟 期 和 老 年 期 成 熟 期 的 致 死 压 力 与 生 境 被 破 坏 和 挖 掘 有 关 ; 而 老 年 期 还 与 生 理 寿 命 及 光 照 条 件 有 关, 因 为 老 年 植 株 需 要 更 多 的 光 能 来 保 证 自 身 的 营 养 生 长 与 生 殖 生 长 [10] 明 党 参 在 种 群 内 为 集 群 分 布, 生 境 片 断 化 使 种 群 的 地 理 分 布 呈 间 断 的 岛 屿 状, 种 群 的 有 效 规 模 变 小 传 粉 媒 介 活 动 范 围 有 限 ; 种 子 靠 重 力 传 播, 距 离 仅 在 3~5m 虽 然 明 党 参 的 繁 育 系 统 以 异 交 为 主, 但 其 特 定 的 地 理 分 布 集 群 型 分 布 格 局 及 短 距 离 的 传 粉 昆 虫 和 种 子 传 播 限 制 了 种 群 内 植 株 间 随 机 交 配, 使 近 交 频 繁 发 生 等 位 酶 实 验 估 计 的 异 交 率 T(0.21) 也 证 实 了 这 一 点 根 据 F 值 计 算 出 的 明 党 参 的 基 因 流 Nm=0.18 Wright(1965) 指 出, 如 果 Nm<1, 则 遗 传 漂 变 导 致 了 种 群 间 分 化, 而 遗 传 漂 变 作 用 加 剧 和 遗 传 变 异 的 减 少 会 导 致 种 群 适 合 度 的 下 降 明 党 参 群 体 间 变 异 量 接 近 60%, 群 内 难 以 建 立 和 保 持 稳 定 的 多 态 性 当 环 境 条 件 不 利 时, 种 群 会 急 剧 缩 小 甚 至 灭 绝 [9] 明 党 参 没 有 高 生 长, 茎 生 叶 严 重 退 化, 主 茎 基 本 上 相 当 于 花 葶, 因 而 整 个 生 长 期 几 乎 只 有 基 生 叶, 一 直 分 布 在 地 表 0~20cm 的 高 度 内, 基 生 叶 一 旦 受 到 破 坏, 这 一 生 长 季 很 难 再 长 出 新 叶 补 偿 ; 叶 片 伏 生 于 地 表, 减 少 了 支 持 组 织 的 比 例, 使 其 获 得 了 较 高 的 地 上 叶 面 积 比 率 (LARa), 单 位 地 上 生 物 量 的 光 截 获 效 率 高 这 种 近 地 面 植 物 可 以 在 较 低 光 下 通 过 扩 展 叶 片 获 取 更 多 的 光 能, 具 有 较 高 的 获 取 光 资 源 的 能 力 明 党 参 有 两 种 类 型 的 储 藏 根, 即 细 长 的 肉 质 直 根 和 纺 锤 状 的 肉 质 根, 借 助 深 根 可 以 利 用 较 深 土 层 中 的 水 分, 故 明 党 参 可 以 从 林 缘 一 直 分 布 到 山 坡 的 林 下 [11] 对 明 党 参 双 悬 果 的 解 剖 观 察 发 现, 该 种 果 皮 与 种 皮 是 愈 合 的, 胚 乳 非 常 发 达 并 含 有 大 量 淀 粉 种 子 成 熟 时, 胚 仍 处 于 球 形 或 心 形 胚 时 期, 由 此 可 见, 种 子 成 8

14 熟 时 胚 未 分 化 成 熟 种 子 萌 发 实 验 也 发 现 需 经 一 定 时 期 的 形 态 和 生 理 后 熟 阶 段, 种 子 才 能 萌 发, 休 眠 时 间 长 达 4~5 个 月 左 右 2.3 显 微 鉴 定 研 究 1 明 党 参 根 横 切 面 的 显 微 特 征 为 : 木 栓 层 为 10~25 列 扁 平 的 木 栓 细 胞, 拴 内 层 较 薄, 分 布 有 少 数 分 泌 道 韧 皮 部 较 厚, 分 泌 道 多 数, 由 5~7 个 分 泌 细 胞 围 绕 而 成, 直 径 30~48μm, 内 含 黄 棕 色 树 脂 状 物 质 形 成 层 环 状 次 生 木 质 部 导 管 单 生 或 数 个 集 合 成 放 射 状, 导 管 圆 形 或 带 多 角 形 直 径 10~40μm, 初 生 木 质 部 二 原 型 薄 壁 细 胞 中 含 大 量 淀 粉 粒, 单 粒 圆 形 或 不 规 则 多 角 形, 直 径 3~5μm, 脐 点 点 状 复 粒 由 2~4 粒 组 成, 卵 形 或 长 圆 形, 直 径 8~10μm [12] 2 茎 : 最 外 为 一 层 细 小 扁 平 薄 壁 细 胞, 外 被 角 质 层 皮 层 由 5~6 列 薄 壁 细 胞 组 成, 其 间 分 布 一 圈 纤 维 群, 每 组 纤 维 群 下 方 具 有 一 分 泌 管 皮 层 内 方 为 维 管 组 织 维 管 束 由 木 化 细 胞 包 围 韧 皮 部 皱 缩 不 易 辨 认, 基 本 组 织 的 薄 壁 细 胞 呈 类 圆 形 外 层 细 胞 均 为 木 化 薄 壁 细 胞 或 木 化 网 纹 细 胞, 其 间 散 布 多 数 类 圆 形 分 泌 管, 直 径 38~ 51μm, 中 部 为 髓 腔 [8] 3 粉 末 : 呈 黄 白 色 淀 粉 粒 多 数, 网 纹 导 管 多 见 分 泌 道 碎 片 棕 色, 周 围 细 胞 呈 长 方 形, 纵 向 排 列, 微 带 黄 棕 色 分 泌 物 木 栓 细 胞 表 面 呈 多 角 形, 棕 色 块 状 物 易 见 [12] 4 果 实 横 切 面 : 外 果 皮 为 一 列 扁 平 长 方 形 薄 壁 性 细 胞, 中 果 皮 为 7~8 列 细 胞, 棱 槽 内 油 管 数 为 4~7 个, 合 生 油 管 数 为 7~8, 油 管 切 向 直 径 50~105μm, 以 小 型 者 为 常 见 胚 乳 合 生 面 显 著 内 凹, 胚 乳 呈 马 蹄 形 [8] 3 化 学 成 分 研 究 3.1 果 实 脂 肪 油 采 用 GC/MSD 联 用 技 术 对 其 果 实 脂 肪 油 的 成 分 进 行 了 分 析 明 党 参 果 实 中 游 离 脂 肪 油 含 (Z)9- 十 八 碳 烯 酸 [9-Octadecenoic acid(z)] (Z,Z)9,11- 十 八 碳 二 烯 酸 [9,11-Octadecenoic acid(z,z)] 棕 榈 酸 (Palmitic acid) 等 ; 结 合 脂 肪 油 中 主 含 棕 榈 酸 (Z,Z)9,12- 十 八 碳 二 烯 酸 [9,12-Octadecenoic acid(z,z)] (Z)9- 十 八 碳 烯 酸 [9-Octadecenoic acid(z)] 硬 脂 酸 (Stearic acid) 油 酸 (Oleic acid) 等 研 究 结 果 表 明, 明 党 参 果 实 含 有 有 益 健 康 的 游 离 和 结 合 脂 肪 酸, 总 量 达 51.83% GC/MSD 测 定 结 果 表 明 游 离 脂 肪 酸 与 结 合 脂 肪 酸 所 含 成 分 并 不 完 全 一 致 结 合 脂 肪 酸 中 以 不 饱 和 脂 肪 酸 为 主, 含 量 达 %, 游 离 脂 肪 酸 中 除 一 结 构 待 鉴 定 成 分 含 量 高 达 % 外, 另 含 不 饱 和 脂 肪 酸 % [13] 3.2 茎 叶 挥 发 油 采 用 毛 细 管 气 相 色 谱 - 质 谱 - 计 算 机 联 用 技 术 对 明 党 参 嫩 茎 叶 挥 发 油 的 化 学 成 分 进 行 研 究 从 挥 发 油 中 鉴 定 出 27 种 成 分, 占 总 油 量 的 %, 9

15 其 主 要 成 分 是 牻 牛 儿 醇 乙 酸 酯 (46.636%) 明 党 参 炔 (11.483%) β- 金 合 欢 烯 (10.986%) 茎 叶 挥 发 油 中 大 多 数 成 分 为 单 萜 倍 半 萜 及 其 衍 生 物 含 量 最 高 的 组 分 是 牻 牛 儿 醇 乙 酸 酯 (46.636%), 可 用 作 香 料 及 昆 虫 诱 引 剂 [14] β- 金 合 欢 烯 (β- Farnesene) 为 其 主 成 分 之 一, 含 量 为 %, 其 药 理 活 性 不 详 ; 牻 牛 儿 醇 (Geraniol) 含 量 为 5.725%, 系 作 用 于 循 环 系 统 的 活 性 成 分, 家 兔 静 注 本 品, 可 使 血 压 迅 速 下 降, 并 反 射 性 兴 奋 呼 吸 还 具 有 抗 细 菌 和 真 菌 防 腐 驱 虫 等 作 用 β- 石 竹 烯 (Beta-Caryophyllene) 具 有 平 喘 镇 咳 祛 痰 活 性, 临 床 上 用 于 治 疗 气 管 炎, 亦 可 作 香 料 明 党 参 炔 为 首 次 自 该 植 物 中 分 得 的 炔 类 化 合 物, 其 化 学 性 质 活 泼, 初 步 药 理 试 验 表 明 具 有 很 强 的 生 理 活 性 该 化 合 物 的 发 现 为 明 党 参 属 特 征 性 化 学 提 供 了 新 的 证 据, 具 有 重 要 意 义 [14] 3.3 明 党 参 根 挥 发 油 采 用 毛 细 管 气 相 色 谱 - 质 谱 - 计 算 机 联 用 方 法 分 析 了 明 党 参 加 工 炮 制 前 后 的 顶 空 气 体 成 分, 探 讨 其 是 否 与 明 党 参 的 致 敏 性 有 关 初 步 鉴 定 出 24 个 化 合 物, 炮 制 前 的 主 要 成 分 是 :8 羟 基 - 对 伞 花 烃 (7.72%) 4- 甲 基 -2,6- 二 叔 丁 基 苯 酚 (7.48%) 1,2- 二 苯 乙 烯 (8.12%) 炮 制 过 程 中 的 主 要 成 分 是 : 联 苯 (13.44%) 十 五 烷 (9.64%) β- 乙 基 萘 (8.37%) 炮 制 后 的 主 要 成 分 是 :β- 蒎 烯 (52.17%) α- 蒎 烯 (22.09%) 柠 檬 烯 (13.04%) α- 异 松 油 烯 (8.69%) 发 现 三 者 顶 空 气 体 成 分 的 化 学 组 成 呈 明 显 差 异 [15] 3.4 氨 基 酸 采 用 氨 基 酸 自 动 分 析 仪 测 定 了 明 党 参 鲜 根 和 炮 制 品 中 游 离 氨 基 酸 的 含 量, 结 果 表 明, 明 党 参 新 鲜 根 及 其 炮 制 品 中 都 至 少 含 有 十 六 种 以 上 的 氨 基 酸 其 中 以 精 氨 酸 丝 氨 酸 天 冬 氨 酸 脯 氨 酸 等 为 主, 其 中 七 种 为 人 体 所 必 需 的 氨 基 酸, 分 别 占 鲜 品 和 炮 制 品 游 离 总 氨 基 酸 的 6.1% 和 9.1% 明 党 参 氨 基 酸 中 以 精 氨 酸 含 量 最 高, 分 别 占 鲜 品 和 炮 品 游 离 总 氨 基 酸 的 43.3% 和 63.8% 而 炮 制 品 与 鲜 品 比 较, 游 离 总 氨 基 酸 下 降 了 68.9%, 人 体 所 必 需 的 氨 基 酸 下 降 了 58.3%, 精 氨 酸 下 降 了 78.9% [16] 3.5 多 糖 采 用 水 提 醇 沉 法 提 取, 三 氯 醋 酸 处 理, 逆 向 透 析,DEAE 纤 维 素 SephadexG-100 柱 层 析 等 技 术 分 离, 精 制 ; 以 钠 溶 法 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 凝 胶 柱 层 析 旋 光 UV IR 酸 水 解 产 物 纸 层 析 糖 醇 乙 酰 化 衍 生 物 气 相 色 谱 等 技 术 确 定 多 糖 的 元 素 纯 度 分 子 量 比 旋 光 度 甙 键 构 型 及 单 糖 的 组 成 经 上 述 技 术 分 离 得 纯 品 明 党 参 多 糖, 不 含 氮, 分 子 量 52000, 具 有 845cm -1 红 外 吸 收 峰, 10

16 表 明 其 糖 甙 键 构 型 为 α 型 经 水 解, 纸 层 析 和 乙 酰 化 气 相 色 谱 分 析, 证 明 由 鼠 李 糖 阿 拉 伯 糖 木 糖 甘 露 糖 半 乳 糖 和 葡 萄 糖 六 种 单 糖 组 成 [17] 采 用 蒽 酮 比 色 法 分 析 不 同 制 品 明 党 参, 结 果 表 明 明 党 参 含 可 溶 性 糖 8.64~11.75%, 栽 培 品 高 于 野 生 品, 生 品 高 于 煮 制 品 薄 层 色 谱 鉴 定, 明 党 参 主 含 蔗 糖 果 糖 和 葡 萄 糖 [18] 3.6 磷 脂 明 党 参 尚 含 有 磷 脂, 主 要 为 卵 磷 脂 类 成 分, 组 成 磷 脂 的 脂 肪 酸 主 要 为 棕 榈 酸 ( 占 47.92%); 而 粉 沙 参 ( 明 党 参 生 品 ) 磷 脂 构 成 主 要 以 磷 脂 酸 的 形 式 存 在, 卵 磷 脂 含 量 低 于 明 党 参, 首 次 提 出 明 党 参 经 煮 制 加 热 可 抑 制 卵 磷 脂 酶 的 活 性, 阻 止 磷 脂 分 解, 提 示 明 党 参 的 滋 补 作 用 好 于 粉 沙 参 [19] 3.7 胆 碱 用 雷 纳 克 盐 法 从 明 党 参 中 首 次 分 得 胆 碱, 用 红 外 光 谱 进 行 了 鉴 定 并 测 定 了 含 量 八 月 采 收 的 明 党 参 中 胆 碱 的 含 量 最 高 达 mg/100g, 粉 沙 参 为 mg/100g, 九 月 采 收 者 为 mg/100g, 而 七 月 采 收 者 胆 碱 含 量 较 低, 为 mg/100g 胆 碱 可 预 防 脂 质 沉 积 于 肝 中, 有 调 节 肝 和 胆 囊 的 功 能, 推 测 其 与 明 党 参 的 平 肝 作 用 有 一 定 联 系 [20] 3.8 系 统 分 离 研 究 以 系 统 溶 剂 法 分 出 明 党 参 饮 片 的 石 油 醚 乙 醚 乙 酸 乙 酯 提 取 部 位, 剩 余 残 渣 加 水 煎 煮, 过 滤, 浓 缩 至 适 量, 加 二 倍 量 乙 醇 静 置 过 夜, 过 滤 后 回 收 乙 醇 浓 缩 并 于 冰 箱 中 冷 置 5~10 天, 析 出 柱 状 结 晶, 经 重 结 晶 后 的 无 色 结 晶, 经 理 化 色 谱 光 谱 和 X- 衍 射 分 析, 确 定 其 为 L- 天 门 冬 酰 胺 [21] 周 萍 等 从 明 党 参 75% 的 乙 醇 提 取 物 中 分 离 得 三 个 结 晶 成 分, 是 β- 谷 甾 醇 豆 甾 醇 和 丁 二 酸 [22] 3.9 微 量 元 素 对 明 党 参 微 量 元 素 的 研 究 表 明, 明 党 参 野 生 及 栽 培 品 中 均 含 有 5 种 常 量 元 素 和 24 种 微 量 元 素 常 量 元 素 以 K 的 含 量 最 为 丰 富,Na 的 含 量 较 低, 仅 为 K 的 1/60~1/80 含 有 多 种 有 益 微 量 元 素 如 铜 铬 铁 锗 锂 锰 钼 镍 锡 钒 锌 等 野 生 品 种 的 有 益 微 量 元 素 的 含 量 普 遍 高 于 栽 培 品 [23] 4 药 理 作 用 研 究 4.1 改 善 微 循 环 作 用 采 用 微 循 环 生 物 显 微 镜, 观 察 用 药 前 后 小 鼠 耳 廓 微 循 环 的 变 化, 包 括 动 静 脉 血 管 口 径 血 流 速 度 及 血 细 胞 流 态 实 验 结 果 表 明, 明 党 参 晶 ⅪⅤ 能 使 小 鼠 耳 廓 动 静 脉 口 径 显 著 增 加, 并 显 著 加 快 耳 廓 静 脉 的 血 流 速 度, 药 效 可 持 续 1h 以 上, 提 示 明 党 参 晶 ⅪⅤ 可 以 改 善 微 循 环 党 参 晶 ⅪⅤ 有 扩 张 细 动 静 脉, 加 速 微 血 管 血 流 速 度 的 作 用, 有 利 于 改 善 微 循 环 障 碍 所 致 血 流 瘀 滞 现 象, 11

17 消 除 血 瘀 症 状 明 党 参 晶 ⅪⅤ 经 鉴 定 为 肌 - 肌 醇, 文 献 报 道 肌 醇 的 菸 酸 酯 为 外 周 血 管 扩 张 剂, 本 实 验 结 果 显 示 肌 - 肌 醇 是 明 党 参 改 善 微 循 环 水 溶 性 有 效 成 分 之 一 [24] 4.2 对 凝 血 时 间 血 小 板 聚 集 的 影 响 观 察 明 党 参 炮 制 品 的 不 同 提 取 物 体 外 对 家 兔 凝 血 时 间 凝 血 酶 原 时 间 的 影 响, 应 用 比 浊 法 测 定 了 对 ADP 诱 导 家 兔 血 小 板 聚 集 的 影 响 毛 细 管 玻 管 法 测 定 了 明 党 参 炮 制 品 对 小 鼠 凝 血 时 间 的 影 响, 同 时 还 测 定 的 明 党 参 炮 制 品 对 小 鼠 出 血 时 间 的 影 响 结 果 表 明, 除 乙 酸 乙 酯 提 取 物 外, 明 党 参 炮 制 品 各 提 取 物 能 延 长 家 兔 血 浆 PT 时 间, 并 能 显 著 抑 制 ADP 诱 导 的 家 兔 血 小 板 聚 集 各 提 取 物 均 能 显 著 延 长 家 兔 TT 时 间, 甲 醇 提 取 物 及 水 煎 液 能 显 著 延 长 小 白 鼠 凝 血 时 间 [25] 4.3 抗 血 栓 形 成 明 党 参 醇 提 物 20mg 60mg 120mg/kg, 给 大 鼠 连 续 灌 胃 10d, 能 显 著 减 少 大 鼠 体 外 颈 总 动 脉 - 颈 外 静 脉 血 流 旁 路 法 形 成 的 血 栓 重 量, 抑 制 了 大 鼠 血 栓 的 形 成 同 时 体 外 给 药 还 可 明 显 延 长 家 兔 的 血 浆 复 钙 时 间 4.4 降 血 脂 作 用 实 验 性 高 脂 血 症 大 鼠 喂 饲 明 党 参 水 提 液 (2.5g 5g 10g/kg/d) 和 醇 提 物 (125mg 250mg 500mg/kg/d), 以 降 血 脂 药 物 安 妥 明 作 阳 性 对 照, 连 续 给 药 四 周, 结 果 表 明, 各 给 药 组 均 有 不 同 程 度 的 降 血 胆 固 醇 作 用, 水 提 液 优 于 安 妥 明, 而 降 低 血 清 甘 油 三 脂 作 用 较 弱, 但 可 提 高 高 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 / 总 胆 固 醇 的 比 值 由 此 推 测, 明 党 参 降 血 脂 作 用 主 要 是 通 过 抑 制 HMGCoA 还 原 酶 合 成 胆 固 醇, 使 血 胆 固 醇 浓 度 下 降, 起 到 降 血 脂 作 用 [26] 4.5 免 疫 调 节 作 用 明 党 参 及 其 多 糖 一 方 面 显 示 出 显 著 的 免 疫 促 进 作 用, 可 以 增 加 正 常 小 鼠 的 胸 腺 指 数 和 脾 指 数, 增 加 小 鼠 外 周 血 白 细 胞 数 淋 巴 细 胞 数 及 AENE + 淋 巴 细 胞 数 的 百 分 率, 促 进 网 状 内 皮 系 统 的 吞 噬 功 能, 拮 抗 免 疫 抑 制 剂 氢 化 可 的 松 对 小 鼠 外 周 血 白 细 胞 和 淋 巴 细 胞 的 减 少 作 用 ; 另 一 方 面, 对 二 硝 基 氯 苯 所 致 的 小 鼠 迟 发 性 变 态 反 应 又 显 示 出 显 著 的 抑 制 作 用 抗 应 激 能 力 方 面, 明 党 参 及 其 多 糖 不 仅 能 显 著 延 长 常 压 下 缺 血 动 物 的 生 存 时 间, 还 能 显 著 延 长 氯 化 钾 所 致 化 学 性 缺 氧 动 物 的 生 存 时 间 及 小 鼠 在 高 温 下 的 存 活 时 间 [27] 对 NF-kB 结 合 活 性 的 影 响 上,NF-kB 是 一 具 有 多 向 性 调 节 的 蛋 白 质 分 子, 它 广 泛 参 与 基 因 转 录 的 调 节, 特 别 是 与 机 体 免 疫 应 答 反 应 密 切 相 关 基 因 的 转 录 调 控 是 一 种 非 常 重 要 的 具 有 多 向 性 转 录 调 控 作 用 蛋 白 质 因 子 明 党 参 多 糖 可 降 低 LPS 刺 激 引 起 的 NF-kB 结 合 活 12

18 性 一 方 面 进 一 步 验 证 了 明 党 参 多 糖 的 免 疫 调 节 作 用 ; 另 一 方 面, 提 示 明 党 参 多 糖 对 心 肌 缺 血 性 损 伤 可 能 有 保 护 作 用 [28] 4.6 镇 咳 祛 痰 平 喘 作 用 动 物 实 验 结 果 表 明, 明 党 参 水 提 液 及 其 活 性 成 分 之 一 的 天 门 冬 酰 胺 对 氨 水 雾 化 刺 激 引 起 的 小 鼠 咳 嗽 有 显 著 的 抑 制 作 用, 而 且 随 剂 量 增 加 作 用 增 强 并 能 增 加 小 鼠 呼 吸 道 酚 红 排 出 量, 使 气 管 分 泌 液 增 多 又 可 加 速 纤 毛 运 动, 这 有 利 于 排 痰, 达 到 祛 痰 作 用 对 乙 酰 胆 碱 和 组 胺 引 起 的 豚 鼠 哮 喘 有 显 著 的 抑 制 作 用, 表 明 其 能 对 抗 乙 酰 胆 碱 和 组 胺 等 过 敏 介 质 引 起 的 支 气 管 收 缩 [29] 4.7 抗 脂 质 过 氧 化 保 护 作 用 在 明 党 参 不 同 提 取 物 抑 制 大 鼠 肝 匀 浆 上 清 液 脂 质 过 氧 化 物 生 成 体 外 实 验 的 基 础 上, 进 一 步 对 大 鼠 高 胆 固 醇 血 症 模 型 进 行 观 察, 对 大 鼠 血 清 总 胆 固 醇 全 血 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 血 清 超 氧 化 物 歧 化 酶 及 血 清 丙 二 醛 的 含 量 进 行 了 测 定, 结 果 表 明 明 党 参 醇 提 物 对 实 验 性 大 鼠 高 胆 固 醇 血 症 伴 随 脂 质 过 氧 化 物 的 增 加 具 有 明 显 的 抑 制 作 用 这 与 其 提 高 血 清 SOD 和 全 血 GSH-Px 的 活 性 密 切 相 关 明 党 参 的 补 益 作 用 与 降 低 血 清 总 胆 固 醇, 提 高 总 体 的 抗 氧 化 能 力, 避 免 自 由 基 对 内 皮 细 胞 的 损 伤 防 止 动 脉 粥 样 硬 化 有 关 [30] 4.8 抗 疲 劳 和 耐 缺 氧 作 用 明 党 参 根 提 取 物 对 小 鼠 游 泳 时 间 缺 氧 条 件 下 存 活 时 间 对 小 鼠 脾 系 数 和 胸 腺 系 数 的 影 响 实 验 研 究 表 明, 明 党 参 根 提 取 物 具 有 非 常 明 显 的 抗 疲 劳 作 用 和 比 较 显 著 的 耐 缺 氧 作 用, 实 验 也 表 明 其 可 能 有 一 定 的 免 疫 增 强 作 用 实 验 观 察 过 程 中 也 发 现, 给 以 明 党 参 根 提 取 液 的 各 组 小 鼠, 其 活 动 能 力 食 量 精 神 状 态 明 显 优 于 对 照 组, 证 实 明 党 参 确 实 具 有 滋 补 强 壮 作 用 尤 其 是 其 抗 疲 劳 作 用 明 显 优 于 人 参, 作 用 也 较 缓 和, 因 此 在 一 定 程 度 上 有 人 参 不 可 比 拟 的 优 点 在 抗 疲 劳 作 用 和 耐 缺 氧 作 用 方 面, 野 生 明 党 参 和 栽 培 明 党 参 之 间 存 在 显 著 差 异, 野 生 品 明 显 优 于 栽 培 品 这 可 能 与 明 党 参 根 野 生 品 含 有 丰 富 的 氨 基 酸 尤 其 是 高 含 量 的 精 氨 酸 有 关 [31] 4.9 抗 突 变 作 用 给 C 57 小 鼠 灌 胃 明 党 参 水 提 液 (40g/kg ) 和 甲 醇 提 取 物 (100mg/kg 200mg/kg 300mg/kg), 结 果 表 明, 明 党 参 对 环 磷 酰 胺 诱 发 升 高 的 姐 妹 染 色 单 体 互 换 (SCE) 频 率 具 有 抑 制 作 用, 对 环 磷 酰 胺 诱 发 升 高 的 微 核 (MN) 频 率, 除 300mg/kg 的 甲 醇 提 取 物 外, 均 具 有 抑 制 作 用 [32] 采 用 YC- 花 环 技 术, 以 YC- 花 环 形 成 百 分 率 作 为 免 疫 检 测 指 标, 人 参 煎 液 为 阳 性 对 照, 口 服 明 党 参 煎 液 及 多 糖 对 小 鼠 腹 腔 巨 噬 细 胞 表 面 C3b 受 体 功 能 有 显 著 影 响 YC- 花 环 形 13

19 成 率 明 党 参 多 糖 组 为 (P<0.001), 人 参 煎 液 组 为 (P<0.001), 人 参 组 为 (P<0.001), 初 步 阐 明 了 人 参 的 滋 补 强 壮 机 制 [33] 4.10 致 过 敏 作 用 经 对 明 党 参 挥 发 油 鲜 明 党 参 液 汁 分 别 以 皮 肤 涂 敷 和 雾 化 吸 入 两 种 方 法, 在 豚 鼠 身 上 进 行 过 敏 反 应 实 验, 结 果 挥 发 油 (10mg/ml) 未 见 动 物 过 敏, 而 给 以 鲜 明 党 参 液 汁 的 动 物 则 出 现 了 明 显 的 皮 肤 赤 红 丘 疹 呼 吸 急 促 眼 部 红 肿 流 泪 等 过 敏 性 刺 激 反 应 参 考 文 献 [1] 国 家 环 保 局, 中 国 科 学 院 植 物 研 究 所. 稀 有 濒 危 植 物 的 保 护 和 研 究 [M]. 北 京 : 环 境 科 学 出 版 社,1991: [2] 世 界 书 局. 中 国 药 学 大 辞 典 [M]. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,1956:699. [3] 清 赵 学 敏. 本 草 纲 目 拾 遗. 卷 三. 草 部 上 [M]. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,1963: [4] 明 王 肯 堂. 证 治 准 绳 ( 四 ). 疡 医. 卷 之 二 [M]. 上 海 : 上 海 卫 生 出 版 社,1957:172. [5] 清 吴 仪 洛. 本 草 从 新. 卷 一 [M]. 山 草 五. 清 同 治 九 年 庚 午 (1870) 瓶 花 书 屋 校 刻 本. [6] 清 赵 其 光 寅 谷 氏 著. 本 草 求 原. 卷 之 一 [M]. 山 草 部. 清 道 光 二 十 八 年 戊 申 (1848) 养 和 堂 刻 本. [7] 南 京 中 山 植 物 园 药 物 组. 江 苏 植 物 药 材 志 [M]. 北 京 : 北 京 科 学 出 版 社,1959:194. [8] 刘 守 炉, 叶 锦 生, 陈 重 明, 等. 中 国 明 党 参 属 植 物 综 合 研 究 [J]. 木 本 植 物 研 究, 1991,11(2):78. [9] 邱 英 雄, 傅 承 新. 明 党 参 的 濒 危 机 制 及 其 保 护 对 策 的 研 究 [J]. 生 物 多 样 性,2001, 9(2):152. [10] 李 伟 成, 葛 滢, 盛 海 燕, 等. 濒 危 植 物 明 党 参 种 群 生 存 过 程 研 究 [J]. 生 态 学 报, 2004,24(6): [11] 常 杰, 关 保 华, 葛 滢, 等. 濒 危 种 明 党 参 和 非 濒 危 种 峨 参 生 态 策 略 的 比 较 研 究 [J]. 生 态 学 报,2004,24(1):24. [12] 金 蓉 鸾. 明 党 参 标 准 规 格 的 研 究 [J]. 南 京 药 学 院 学 报,1964(10)35. [13] 吴 志 平, 李 祥, 陈 建 伟, 等. 明 党 参 果 实 脂 肪 油 成 分 GC/MSD 分 析 [J]. 南 京 中 医 14

20 药 大 学 学 报,2002,18(5):293. [14] 陈 建 伟, 李 祥, 武 露 凌, 等. 中 国 珍 稀 植 物 明 党 参 嫩 茎 叶 挥 发 油 化 学 成 分 研 究 [J]. 天 然 产 物 研 究 与 开 发,1999,12(3):48. [15] 李 祥, 陈 建 伟, 叶 定 江, 等. 炮 制 对 明 党 参 顶 空 气 体 成 分 的 影 响 [J]. 中 成 药, 2000,22(8):550. [16] 黄 康 泰, 郑 汉 臣, 王 忠 壮. 明 党 参 鲜 根 及 炮 制 品 氨 基 酸 含 量 分 析 [J]. 海 军 医 高 专 学 报,1995,17(1):44. [17] 王 亚 淑, 陈 建 伟. 明 党 参 多 糖 的 分 离 纯 化 及 理 化 性 质 [J]. 中 国 野 生 植 物,1992, (3):35. [18] 王 宇 环, 李 祥. 明 党 参 中 可 溶 性 糖 的 分 析 [J]. 江 苏 中 医,1994: 特 刊. [19] 王 亚 淑, 陈 建 伟, 许 益 民. 明 党 参 炮 制 品 中 磷 脂 成 分 的 研 究 [J]. 中 成 药,1992, 14(9):21. [20] 李 祥, 陈 建 伟, 孙 长 华. 明 党 参 中 胆 碱 的 分 离 鉴 定 和 不 同 采 收 期 的 含 量 测 定 [J]. 中 国 野 生 植 物 资 源,1994(2):37. [21] 李 祥, 陈 建 伟, 孙 骏, 等. 明 党 参 中 水 溶 性 活 性 成 分 的 分 离 鉴 定 及 定 量 分 析 [J]. 天 然 产 物 研 究 与 开 发,1995,7(2):1. [22] 周 萍. 明 党 参 化 学 成 分 研 究 [J]. 第 二 军 医 大 学 学 报,1993,14(6):572. [23] 陈 建 伟, 李 祥, 王 亚 淑. 不 同 产 地 明 党 参 及 其 生 制 品 中 微 量 元 素 的 比 较 分 析 [J]. 广 东 微 量 元 素 科 学,1995,2(5):61. [24] 石 荣 火, 陈 建 伟, 李 祥, 等. 明 党 参 晶 ⅪⅤ 对 小 鼠 耳 廓 微 循 环 的 影 响 [J]. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,2001,17(3):168. [25] 李 祥, 陈 建 伟, 黄 玉 宇. 明 党 参 炮 制 品 对 凝 血 时 间 血 小 板 聚 集 的 影 响 [J]. 中 成 药,1998,20(7):17. [26] 华 一 莉, 陈 建 伟, 吴 慧 平, 等. 明 党 参 降 血 脂 作 用 的 实 验 研 究 [J]. 南 京 中 医 学 院 学 报,1994,10(4):31. [27] 黄 泰 康, 李 祥, 陆 平 成, 等. 明 党 参 水 煎 液 及 其 多 糖 的 药 理 研 究 [J]. 中 成 药, 1994,16(7):31. [28] 陈 建 伟, 李 祥, 吴 慧 平, 等. 明 党 参 多 糖 对 NF-kB 结 合 活 性 的 影 响 [J]. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,1991,15(6):

21 [29] 胡 小 鹰, 陈 建 伟, 陈 汝 炎, 等. 明 党 参 水 提 液 及 结 晶 VI 的 镇 咳 祛 痰 平 喘 作 用 [J]. 南 京 中 医 药 大 学 学 报,1995,11(6):28. [30] 吴 慧 平, 华 一 莉, 席 蓓 莉, 等. 明 党 参 在 大 鼠 高 胆 固 醇 血 症 中 抗 氧 化 作 用 [J]. 南 京 中 医 学 院 报,1994,10(4):33. [31] 黄 宝 康, 胡 淑 雅, 郑 汉 臣, 等. 野 生 与 栽 培 明 党 参 抗 疲 劳 和 耐 缺 氧 作 用 比 较 [J]. 解 放 军 医 学 高 等 专 科 学 校 学 报,1996,24(4):19. [32] 陈 建 伟. 明 党 参 及 其 制 剂 致 变 和 抗 变 效 应 [A]. 中 成 药 研 究 荟 萃 ( 全 国 首 届 中 成 药 学 术 研 讨 会 论 文 集 )[C],1992:342. [33] 陈 建 伟, 赵 智 强, 许 益 民, 等. 明 党 参 煎 液 及 多 糖 对 小 鼠 腹 腔 巨 噬 细 胞 C3b 受 体 功 能 的 影 响 ( 简 报 )[J]. 中 国 中 药 杂 志,1992,17(9):

22 第 二 部 分 明 党 参 化 学 成 分 研 究 17

23 一 明 党 参 甲 醇 提 取 物 化 学 成 分 研 究 摘 要 : 目 的 对 明 党 参 甲 醇 提 取 部 位 的 化 学 成 分 进 行 分 离 鉴 定 方 法 以 硅 胶 柱 层 析 法 分 离, 红 外 核 磁 共 振 等 方 法 鉴 定 结 果 从 明 党 参 甲 醇 提 取 物 中 分 得 3 个 化 合 物, 鉴 定 了 1 个 成 分, 确 定 为 D- 甘 露 醇 关 键 词 : 明 党 参, 甲 醇 提 取 物, 化 学 成 分 明 党 参 Changiums myrnioides Wolff 是 我 国 特 有 的 伞 形 科 (Umbelliferae) 明 党 参 属 (Changium) 的 单 种 属 植 物, 为 江 苏 特 产 道 地 药 材 之 一 明 党 参 味 甘 微 苦, 性 微 寒, 归 肺 脾 肝 经 有 补 气 生 津 润 肺 化 痰 养 阴 和 胃 平 肝 解 毒 的 功 效, 主 治 肺 燥 咳 嗽 呕 吐 反 胃 食 欲 不 振 消 化 不 良 病 后 体 虚 及 疔 毒 疮 疡 近 年 来 的 研 究 发 现, 明 党 参 在 心 脑 血 管 方 面 亦 有 活 性, 本 文 对 活 性 较 显 著 的 明 党 参 甲 醇 提 取 物 进 行 了 分 离 鉴 定 1 仪 器 与 试 剂 1.1 材 料 明 党 参 样 品 取 自 江 苏 省 句 容, 柱 层 析 硅 胶 ( 目 ) 薄 层 层 析 硅 胶 H( 青 岛 海 洋 化 工 厂 ), 氯 仿 甲 醇 ( 上 海 久 亿 ) 1.2 仪 器 Bruker 核 磁 共 振 仪,SP3-300 型 红 外 分 光 光 度 计 2 方 法 2.1 提 取 明 党 参 15kg, 粉 碎, 过 40 目 筛,90% 乙 醇 回 流 提 取, 减 压 回 收 乙 醇, 60 真 空 干 燥 将 明 党 参 干 浸 膏 加 乙 醇 热 溶, 拌 入 等 量 硅 藻 土, 过 16 目 筛,60 干 燥 后, 分 别 依 次 用 石 油 醚 氯 仿 乙 酸 乙 酯 丙 酮 甲 醇 提 取, 提 取 物 分 别 减 压 浓 缩, 得 到 各 部 分 浸 膏 2.2 分 离 取 甲 醇 提 取 物 45g 加 适 量 甲 醇 溶 解, 拌 入 200~300 目 硅 胶 250g,60 真 空 干 燥 除 去 甲 醇, 湿 法 装 柱, 依 次 用 氯 仿 及 不 同 比 例 的 氯 仿 - 甲 醇 混 合 溶 剂 梯 度 洗 脱, 每 300ml 一 份, 结 合 硅 胶 H 薄 层 层 析, 观 察 荧 光 斑 点 或 10% 硫 酸 显 色 或 碘 蒸 汽 显 色, 相 同 流 份 合 并 流 份 38~74 合 并, 浓 缩 后 拌 入 硅 胶 10g, 装 柱, 以 氯 仿 - 甲 醇 洗 脱, 每 200ml 一 份, 流 份 25~26 合 并 后 滤 出 粗 晶, 氯 仿 重 结 晶, 得 无 色 针 晶 L1.8mg 18

24 流 份 495~601 合 并 后 放 置, 滤 出 粗 晶, 甲 醇 重 结 晶, 得 白 色 针 状 簇 晶 I27.6mg 流 份 756~868 合 并 后 放 置, 析 出 无 色 方 晶 K33.5mg 3 结 果 化 合 物 I 白 色 针 状 簇 晶, 熔 点 165~166,10% 硫 酸 碘 蒸 汽 显 色 均 为 阴 性,IRυ KBr : 3292(OH),2936(CH 2 ),1427(OH),1262( 伯 仲 OH),1084( 仲 OH) 1 H-NMR: 3.38,1H,m;3.46,1H,m;3.54,1H,d;3.63,2H,m;4.15,1H,d;4.35, 1H,t;4.42,1H,d 13 C-NMR:64.0,69.9,71.5 化 合 物 I 的 13 C-NMR 显 示 其 具 有 3 峰, 且 均 在 较 低 场, 参 考 IR 数 据, 这 3 个 C 均 应 连 有 -OH, 的 H 在 双 键 H 醚 键 H 和 羟 基 H 的 范 围 内, 根 据 IR 和 13 C-NMR 的 数 据, 可 以 排 除 前 两 者, 这 3 个 H 均 为 羟 基 H, 通 过 与 D- 甘 露 醇 标 准 品 的 IR 13 C-NMR 1 H-NMR 比 较, 谱 图 一 致, 故 鉴 定 化 合 物 I 为 D- 甘 露 醇, 结 构 式 如 下 : 19

25 二 江 苏 栽 培 明 党 参 中 无 机 元 素 分 析 摘 要 : 目 的 分 析 江 苏 栽 培 明 党 参 中 无 机 元 素 方 法 采 用 等 离 子 体 发 射 光 谱 原 子 吸 收 及 原 子 荧 光 法 对 明 党 参 中 的 无 机 元 素 进 行 测 量 结 果 明 党 参 中 含 有 多 种 无 机 元 素 结 论 江 苏 栽 培 明 党 参 药 材 含 有 多 种 对 人 体 有 益 或 必 需 的 微 量 元 素, 重 金 属 含 量 符 合 安 全 要 求 关 键 词 : 明 党 参, 无 机 元 素 明 党 参 Changium smyrnioides Wolff 是 我 国 特 有 的 伞 形 科 明 党 参 属 的 单 种 属 植 物, 分 布 在 亚 热 带 的 长 江 流 域, 我 国 华 东 地 区 的 浙 皖 苏 鄂 等 省 的 局 部 地 区,1984 年 被 列 入 国 家 三 级 濒 危 保 护 植 物, 现 为 江 苏 特 产 道 地 药 材 之 一 近 代 研 究 认 为 明 党 参 根 味 甘 微 苦, 性 微 寒, 归 肺 脾 肝 经 有 补 气 生 津 润 肺 化 痰 养 阴 和 胃 平 肝 解 毒 的 功 效 [1] 主 治 肺 燥 咳 嗽 呕 吐 反 胃 食 欲 不 振 消 化 不 良 病 后 体 虚 及 疔 毒 疮 疡 本 文 采 用 等 离 子 体 发 射 光 谱 原 子 吸 收 光 谱 及 原 子 荧 光 光 谱 对 江 苏 栽 培 明 党 参 中 无 机 元 素 的 含 量 进 行 了 初 步 研 究 1 仪 器 与 试 剂 1.1 仪 器 SpectrAA-640 型 原 子 吸 收 分 光 光 度 计 及 空 心 阴 极 灯 ( 美 国 瓦 里 安 公 司 ),MK-2 型 自 控 微 波 溶 样 系 统 及 CDR 敞 开 式 电 加 热 炉 ( 上 海 新 科 微 波 技 术 应 用 研 究 所 ),AFSA-230a 型 双 道 原 子 荧 光 光 度 计 ( 北 京 万 拓 仪 器 有 限 公 司 ), AtomScan Advantage 电 感 耦 合 等 离 子 体 发 射 光 谱 仪 ( 美 国 热 电 公 司 ) 1.2 试 剂 明 党 参 样 品 ( 江 苏 句 容 ), 各 标 准 储 备 液 ( 国 家 标 准 物 质 研 究 中 心 ), 硝 酸, 过 氧 化 氢 ( 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯, 实 验 用 水 均 为 超 纯 水, 所 用 的 器 皿 均 用 10% 硝 酸 浸 泡 过 夜 处 理 ) 2 方 法 与 结 果 2.1 样 品 处 理 精 确 称 取 明 党 参 样 品 1.000g, 置 于 微 波 消 解 内 罐 中, 加 入 10ml 硝 酸, 将 消 解 内 罐 置 入 敞 开 式 电 加 热 炉 内,80 消 解 10min 后 取 出, 冷 却 至 室 温 后 加 入 1ml30% 过 氧 化 氢, 盖 上 消 解 内 罐 盖 并 将 其 放 入 消 解 外 罐 中, 置 于 微 波 溶 样 系 统 内 设 定 微 波 加 热 时 间 为 8min, 逐 级 提 高 罐 内 压 力 至 4 档 (2.0MPa), 消 20

26 解 结 束 后 在 消 解 液 中 加 入 5ml 超 纯 水, 于 80 赶 酸 1 小 时, 然 后 将 样 液 转 移 至 25ml 容 量 瓶, 超 纯 水 定 容, 同 时 做 试 剂 空 白 2.2 测 定 方 法 Pb Cd 用 石 墨 炉 原 子 吸 收 法 [2],As Hg Sn 用 原 子 荧 光 法 [2], [2] Cu 用 火 焰 原 子 吸 收 法 测 定, 其 它 元 素 用 ICP 法 测 定, 各 元 素 测 定 参 数 按 仪 器 既 有 的 方 法 设 定 2.3 结 果 见 表 讨 论 表 2-1 明 党 参 中 微 量 元 素 的 含 量 (mg/kg) n=3 元 素 含 量 元 素 含 量 元 素 含 量 Al Fe Pd As Hg Re - B K S Ba Li Sb - Be - Mg Si Bi Mn Sn Ca Mo Sr Cd Na Ti - Co Ni V - Cr - P - W Cu Pb Zn - 人 体 内 含 量 甚 微, 低 于 体 重 0.01% 的 那 些 元 素, 称 为 微 量 元 素 人 体 内 的 微 量 元 素 虽 然 含 量 很 少, 但 对 人 体 健 康 却 起 着 重 要 的 作 用 它 们 做 为 酶 激 素 维 生 素 核 酸 的 成 分, 参 与 生 命 的 代 谢 过 程 人 体 内 必 需 的 微 量 元 素 有 铁 锌 铜 锰 铬 钼 钴 硒 镍 钒 锡 氟 碘 硅 ; 非 必 需 的 微 量 元 素 中 属 于 可 能 必 需 的 有 铷 砷 锶 硼 锗 ; 属 于 无 害 的 则 有 钡 钛 铌 锆 等 ; 有 害 的 微 量 元 素 有 铋 锑 铍 镉 汞 铅 铝 等 微 量 元 素 与 机 体 的 生 命 活 动 关 系 密 切, 从 某 种 意 义 上 说, 微 量 元 素 比 维 生 素 对 机 体 更 需 要 实 验 表 明 明 党 参 中 含 有 多 种 宏 量 元 素 及 对 人 体 有 益 的 必 需 微 量 元 素, 其 中 [3] 钠 钾 钙 镁 硫 等 含 量 较 高, 并 含 有 具 补 血 作 用 的 铁 抗 衰 老 作 用 的 锰 [4] 抗 21

27 高 血 压 作 用 的 铜 [5], 构 成 维 生 素 B 12 和 造 血 功 能 的 钴, 构 成 葡 萄 糖 耐 量 因 子 的 铬 [6], 有 抗 癌 作 用 钼, 促 红 细 胞 再 生 的 镍 等 有 益 微 量 元 素, 为 明 党 参 补 益 作 用 的 机 理 提 供 了 一 定 的 依 据 重 金 属 对 人 体 危 害 极 大, 它 可 以 导 致 人 体 致 癌 慢 性 中 毒 致 突 变 致 畸 形 等 如 汞 可 伤 及 神 经 系 统, 使 脑 部 受 损 ; 镉 可 在 人 体 中 积 累 引 起 急 慢 性 中 毒 ; 砷 能 破 坏 人 体 细 胞 的 代 谢 系 统 等 等 江 苏 栽 培 明 党 参 中 有 害 微 量 元 素 的 含 量 甚 低, 其 中 重 金 属 铜 铅 镉 砷 汞 的 含 量 均 低 于 WM 药 用 植 物 及 制 剂 进 出 口 绿 色 行 业 标 准 [7], 也 为 明 党 参 进 一 步 走 向 国 际 市 场 提 供 了 保 证 参 考 文 献 [1] 江 苏 新 医 学 院. 中 药 大 辞 典 [M]. 上 册. 上 海 科 技 出 版 社.1977:1341. [2] 中 国 国 家 标 准 管 理 委 员 会. 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准. 食 品 卫 生 检 验 方 法 理 化 部 分 ( 一 )[S]. 北 京 : 中 国 标 准 出 版 社,2004. [3] 文 志 高. 铁 与 人 体 健 康. 世 界 元 素 医 学,2003,10(3):1-4. [4] 张 青 云, 微 量 元 素 与 老 年 疾 病 [J]. 微 量 元 素 与 健 康 研 究,2001,18(1):65. [5] 陈 兆 和, 杨 德 忠. 微 量 元 素 与 衰 老 长 寿 老 年 人 常 见 疾 病 的 关 系 [J]. 世 界 元 素 医 学,2002,9(4):15. [6] 李 青 仁, 王 春 光. 人 体 必 需 超 微 量 元 素 铬 的 研 究 [J]. 世 界 元 素 医 学,2003, 10(3): [7] 中 华 人 民 共 和 国 对 外 贸 易 经 济 合 作 部. 中 华 人 民 共 和 国 外 经 贸 行 业 标 准 (WM2-2001): 药 用 植 物 及 制 剂 进 出 口 绿 色 行 业 标 准

28 第 三 部 分 明 党 参 有 效 成 分 累 积 规 律 研 究 23

29 第 三 部 分 明 党 参 有 效 成 分 积 累 规 律 研 究 明 党 参 Changium smyrnioides Wolff 是 我 国 特 有 的 伞 形 科 明 党 参 属 的 单 种 属 植 物,1984 年 被 列 入 国 家 三 级 濒 危 保 护 植 物, 现 为 江 苏 特 产 道 地 药 材 之 一 其 应 用 始 于 明 末 清 初, 近 代 临 床 研 究 认 为 明 党 参 味 甘 微 苦, 性 微 寒, 归 肺 脾 肝 经 有 补 气 生 津 润 肺 化 痰 养 阴 和 胃 平 肝 解 毒 的 功 效 主 治 肺 燥 咳 嗽 呕 吐 反 胃 食 欲 不 振 消 化 不 良 病 后 体 虚 及 疔 毒 疮 疡 为 了 有 效 提 高 药 材 的 质 量, 国 家 药 品 监 督 管 理 局 颁 布 了 中 药 材 生 产 质 量 管 理 规 范 ( 试 行 ) 旨 在 规 范 中 药 材 生 产 全 过 程, 达 到 药 材 真 实 优 质 稳 定 可 控 的 目 的 中 药 材 的 采 收 时 间 是 其 中 的 一 个 重 要 组 成 部 分, 合 理 的 采 收 时 间 与 药 材 的 有 效 成 分 含 量 及 药 效 有 着 密 切 的 关 系 明 党 参 中 含 有 具 利 尿 脱 水 镇 咳 祛 痰 和 平 喘 之 功 效 的 甘 露 醇, 具 有 镇 静 神 经 抗 焦 虑 降 血 压 作 用 的 γ- 氨 基 丁 酸 以 及 止 咳 平 喘 祛 痰 作 用 的 L- 天 门 冬 酰 胺, 这 些 成 分 与 明 党 参 的 润 肺 化 痰 止 咳 平 喘 等 功 效 有 着 密 切 的 关 系, 掌 握 这 些 成 分 在 明 党 参 中 含 量 变 化 的 规 律, 对 于 提 高 明 党 参 药 效 及 药 材 的 质 量, 合 理 采 收 明 党 参, 充 分 利 用 明 党 参 药 材 资 源 有 着 重 要 的 意 义 本 部 分 研 究 采 用 比 色 法 及 高 效 液 相 法 分 析 了 江 苏 栽 培 明 党 参 中 甘 露 醇 γ- 氨 基 丁 酸 和 L- 天 门 冬 酰 胺 的 含 量, 通 过 对 一 年 中 各 个 月 份 明 党 参 样 品 的 分 析, 初 步 掌 握 了 上 述 成 分 在 明 党 参 中 的 累 积 变 化 规 律, 为 明 党 参 的 合 理 采 收 时 间 提 供 了 有 益 的 参 考 24

30 一 江 苏 栽 培 明 党 参 中 甘 露 醇 累 积 规 律 研 究 摘 要 : 目 的 用 比 色 法 测 定 不 同 月 份 明 党 参 中 甘 露 醇 的 含 量, 探 寻 甘 露 醇 含 量 与 明 党 参 生 长 时 间 的 关 系 方 法 在 供 试 品 中 依 次 分 别 加 入 氧 化 剂 高 碘 酸 钾 L- 鼠 李 糖 与 Nash 试 剂,53 水 浴 加 热 15min 使 呈 色, 在 412nm 处 测 定 吸 光 度, 用 比 色 法 测 定 其 中 甘 露 醇 的 含 量 结 果 在 10~50μg/ml 范 围 内 对 不 同 月 份 采 收 的 样 品 在 实 验 条 件 下 测 定, 其 平 均 含 量 为 0.57%~2.36% 结 论 甘 露 醇 含 量 在 9~ 11 月 较 高,12~8 月 较 低,10 月 份 达 到 峰 值 关 键 词 : 明 党 参, 甘 露 醇, 比 色 法 明 党 参 是 我 国 特 有 的 伞 形 科 明 党 参 属 的 单 种 属 植 物, 仅 分 布 于 我 国 浙 江 安 徽 江 苏 江 西 河 南 等 省, 在 中 国 珍 稀 濒 危 植 物 红 皮 书 中 被 列 为 国 家 三 级 重 点 保 护 植 物 其 根 经 烫 煮, 刮 皮 晒 干 后 供 药 用, 是 名 贵 中 药 材 之 一, 具 润 肺 化 痰 养 阴 和 胃 平 肝 解 毒 之 功 效 近 来 的 临 床 药 理 研 究 报 道, 甘 露 醇 不 但 具 有 利 尿 脱 水 镇 咳 祛 痰 和 平 喘 之 功 效, 而 且 能 清 除 人 体 内 毒 性 最 强 的 羟 自 由 基, 并 对 众 多 疾 病 具 有 明 显 疗 效 其 临 床 应 用 非 常 广 泛, 是 治 疗 脑 水 肿 降 低 颅 内 压 预 防 急 性 肾 功 能 衰 竭 的 常 用 药 首 选 药 目 前, 中 药 材 质 量 是 影 响 中 药 现 代 化 的 瓶 颈 为 从 源 头 上 控 制 中 药 质 量, 推 进 中 药 现 代 化 的 进 程, 国 家 药 品 监 督 管 理 局 于 2002 年 3 月 颁 布 了 中 药 材 生 产 质 量 管 理 规 范,Good Agricultural Practice of Medicinal Plants and Animals,GAP 并 已 于 2002 年 6 月 1 日 试 行 其 中, 制 定 药 材 活 性 成 分 或 指 标 成 分 的 动 态 积 累 以 确 定 采 收 期 是 GAP 明 确 规 定 的 内 容 本 文 采 用 比 色 法 对 不 同 时 间 采 收 的 明 党 参 中 甘 露 醇 的 含 量 进 行 了 测 定, 以 期 对 明 党 参 的 最 佳 采 收 时 间 提 供 有 益 的 参 考 1 仪 器 与 试 药 1.1 仪 器 Tu-1800 紫 外 分 光 光 度 计 ( 北 京 普 通 分 析 用 仪 器 有 限 责 任 公 司 ) 小 型 三 用 水 箱 ( 北 京 医 疗 设 备 厂 ) LD25-Z 型 离 心 机 ( 北 京 医 用 离 心 机 厂 ) KQ-500DE 型 医 用 数 控 超 声 波 清 洗 器 ( 昆 山 市 超 声 仪 器 有 限 公 司 ) 1.2 试 药 明 党 参 药 材 ( 购 自 句 容 市 医 药 公 司 ) 明 党 参 鲜 品 ( 取 自 句 容 天 王 镇 25

31 红 山 ) 甘 露 醇 对 照 品 ( 上 海 试 剂 二 厂 ) L- 鼠 李 糖 ( 上 海 试 剂 二 厂 ) 高 碘 酸 钾 ( 北 京 化 工 厂 ) 盐 酸 ( 上 海 久 億 化 学 试 剂 有 限 公 司 ) 醋 酸 铵 ( 上 海 久 億 化 学 试 剂 有 限 公 司 ) 冰 醋 酸 ( 南 京 化 学 试 剂 厂 ) 乙 酰 丙 酮 ( 天 津 科 密 欧 化 学 试 剂 开 发 中 心 ) 1.3 试 液 的 配 制 L- 鼠 李 糖 溶 液 : 取 L- 鼠 李 糖 适 量 用 蒸 馏 水 稀 释 至 0.1% 待 用 高 碘 酸 钾 溶 液 : 0.015mol 高 碘 酸 钾 于 1000ml0.12mol/L 盐 酸 溶 液 中, 混 匀 Nash 试 剂 :150g 醋 酸 铵 +2ml 冰 醋 酸 +2ml 乙 酰 丙 酮, 用 蒸 馏 水 稀 释 至 1000ml, 须 用 时 时 新 鲜 配 制 2 方 法 与 结 果 2.1 标 准 品 溶 液 的 制 备 精 密 称 取 干 燥 至 恒 重 的 甘 露 醇 标 准 品 100mg, 加 蒸 馏 水 100ml 配 制 成 浓 度 1mg/ml 的 甘 露 醇 母 液, 然 后 分 别 精 密 量 取 1.0,2.0,3.0,4.0, 5.0ml 各 置 100ml 容 量 瓶 中, 加 水 稀 释 至 刻 度, 得 到 浓 度 分 别 为 10,20,30,40, 50μg/ml 的 甘 露 醇 标 准 品 溶 液 2.2 线 性 范 围 与 标 准 曲 线 的 制 作 取 上 述 浓 度 为 50,40,30,20,10μg/ml 标 准 品 甘 露 醇 溶 液 各 1ml, 分 置 5 个 10ml 刻 度 试 管 中, 分 别 加 入 1ml 高 碘 酸 钾 溶 液, 混 匀, 室 温 放 置 10min, 加 2ml0.1%L- 鼠 李 糖 溶 液 以 除 去 过 多 的 高 碘 酸 盐, 混 合 后 加 4ml 新 鲜 配 制 的 Nash 试 剂,53 水 浴 加 热 15min 使 其 呈 色, 冷 却, 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度, 用 分 光 光 度 计 在 412nm 波 长 处 分 别 测 定 其 吸 光 度, 蒸 馏 水 同 法 操 作 作 为 空 白, 所 得 结 果 见 表 3-1 以 浓 度 C 为 横 坐 标, 吸 光 度 A 为 纵 坐 标, 得 回 归 方 程 :A=0.0799C (γ=0.9999) 结 果 表 明, 甘 露 醇 在 10~50μg/ml 范 围 内 呈 现 良 好 线 性 表 3-1 比 色 法 测 定 甘 露 醇 标 准 品 的 吸 光 度 值 标 准 品 浓 度 吸 光 度 (A) 平 均 吸 光 度

32 2.3 样 品 提 取 的 方 法 学 考 察 样 品 提 取 方 法 的 正 交 设 计 甘 露 醇 具 有 易 溶 于 水 难 溶 于 醇 不 溶 于 醚 酯 的 化 学 特 性, 以 往 的 报 道 多 使 用 95% 乙 醇 提 取 今 拟 采 用 30% 乙 醇 95% 乙 醇 和 水 为 提 取 溶 剂, 以 实 际 测 得 的 甘 露 醇 含 量 为 指 标, 考 察 回 流 提 取 法 与 超 声 提 取 法 之 优 劣 具 体 方 法 如 下 : 分 别 对 回 流 法 和 超 声 法 进 行 正 交 设 计 ( 见 表 ), 考 察 不 同 溶 剂 回 流 时 间 及 溶 剂 的 量 对 回 流 法 的 影 响 ; 考 察 不 同 溶 剂 超 声 时 间 超 声 强 度 温 度 对 超 声 法 的 影 响 优 选 出 回 流 法 和 超 声 法 的 最 佳 方 案, 两 者 再 作 比 较 从 而 确 定 最 佳 提 取 方 法 表 3-2 L9(3 4 ) 正 交 表 列 号 因 素 A B C D 表 3-3 回 流 法 因 素 水 平 表 因 素 A B C D 水 平 乙 醇 浓 度 /% 回 流 时 间 /h 溶 剂 量 / 倍

33 表 3-4 超 声 法 因 素 水 平 表 因 素 A B C D 水 平 乙 醇 浓 度 /% 时 间 /min 超 声 强 度 /% 温 度 / 供 试 样 品 溶 液 的 制 备 取 明 党 参 约 2.5g, 按 上 述 正 交 设 计 方 案 提 取 所 得 的 明 党 参 样 品 溶 液 用 3000 转 / 分 钟 离 心 15 分 钟, 将 上 清 液 无 损 的 转 移 至 50ml 容 量 瓶 中, 用 相 同 的 提 取 溶 剂 定 容 至 刻 度 再 精 密 移 取 5ml 溶 液 至 25ml 容 量 瓶 中, 同 法 定 容 至 刻 度, 待 用 供 试 样 品 甘 露 醇 含 量 的 测 定 取 供 试 样 品 溶 液 1ml, 置 于 10ml 刻 度 试 管 中, 加 入 1ml 高 碘 酸 钾 溶 液, 混 匀, 室 温 放 置 10min,2ml0.1%L- 鼠 李 糖 溶 液 以 除 去 过 多 的 高 碘 酸 盐, 混 合 后 加 4ml 新 鲜 配 制 的 Nash 试 剂,53 水 浴 加 热 15min 使 其 呈 色, 冷 却, 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度, 在 412nm 波 长 处 测 定 其 吸 光 度, 测 定 结 果 及 其 方 差 分 析 结 果 见 表 从 方 差 分 析 的 结 果 可 知, 溶 剂 因 素 对 回 流 法 的 影 响 显 著, 而 提 取 时 间 和 溶 剂 的 量 则 无 显 著 影 响 而 在 超 声 法 中, 溶 剂 超 声 时 间 超 声 强 度 都 对 结 果 有 着 极 显 著 的 影 响, 温 度 对 结 果 也 有 显 著 影 响 综 合 以 上 分 析 结 果, 并 结 合 以 往 文 献 报 道, 优 化 出 回 流 法 与 超 声 法 的 最 佳 因 素 组 合, 分 别 是 : 回 流 法 采 用 20 倍 量 水 为 溶 剂, 提 取 1.5 小 时 ; 超 声 法 采 用 水 为 溶 剂, 温 度 100, 超 声 强 度 100%, 提 取 45 分 钟 表 3-5 回 流 法 正 交 设 计 结 果 编 号 A B C D Y 1 % Y 2 % Y 3 % Yi%

34 Ⅰ Y=7.914 Ⅱ Y 2 = Ⅲ 表 3-6 回 流 法 正 交 结 果 方 差 分 析 变 异 源 SS V MS F P 总 变 异 A <0.05 B >0.05 C >0.05 误 差 表 3-7 超 声 法 正 交 设 计 结 果 编 号 A B C D Y1% Y2% Y3% Yi% Ⅰ Y=6.097 Ⅱ Y 2 = Ⅲ

35 表 3-8 超 声 法 正 交 结 果 方 差 分 析 变 异 源 SS V MS F P 总 变 异 A <0.01 B <0.01 C <0.01 D <0.05 误 差 最 优 提 取 方 法 的 确 定 取 明 党 参 样 品 2.5g, 分 别 用 回 流 法 与 超 声 法 提 取, 回 流 条 件 为 20 倍 水 为 溶 剂 提 取 1.5 小 时 ; 超 声 条 件 为 20 倍 水 为 溶 剂, 温 度 100, 超 声 强 度 100%, 提 取 45 分 钟 将 提 取 所 得 的 明 党 参 样 品 溶 液 以 3000 转 / 分 钟 离 心 15 分 钟, 将 上 清 液 无 损 的 转 移 至 50ml 容 量 瓶 中, 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度 再 精 密 移 取 5ml 溶 液 至 25ml 容 量 瓶 中, 定 容 至 刻 度 分 别 取 此 供 试 样 品 溶 液 1ml, 置 于 10ml 刻 度 试 管 中, 加 入 1ml 高 碘 酸 钾 溶 液, 混 匀, 室 温 放 置 10min, 加 2ml0.1%L- 鼠 李 糖 溶 液 以 除 去 过 多 的 高 碘 酸 盐, 混 合 后 加 4ml 新 鲜 配 制 的 Nash 试 剂,53 水 浴 加 热 15min 使 其 呈 色, 冷 却, 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度, 在 412nm 波 长 处 测 定 其 吸 光 度, 结 果 见 表 3-9 结 果 表 明, 回 流 法 较 超 声 法 对 明 党 参 中 的 甘 露 醇 的 提 取 更 为 完 全, 最 优 提 取 方 法 为,20 倍 水 为 溶 剂, 回 流 提 取 1.5 小 时 表 3-9 回 流 法 与 超 声 法 的 比 较 方 法 样 1 含 量 样 2 含 量 样 3 含 量 平 均 含 量 RSD 回 流 0.222% 0.238% 0.231% 0.230% 3.50% 超 声 0.208% 0.198% 0.228% 0.211% 7.23% 2.4 呈 色 稳 定 性 试 验 为 考 察 显 色 反 应 产 物 稳 定 性, 作 呈 色 稳 定 性 试 验 取 供 试 品 溶 液 1ml 依 上 标 准 曲 线 制 备 项 操 作, 每 间 隔 10 分 钟 测 定 一 次 其 吸 光 度, 结 果 见 表 3-10 实 验 结 果 表 明, 明 党 参 样 品 水 提 液 及 30% 乙 醇 提 取 液 的 显 色 反 应 产 物 在 30

36 1 小 时 内 可 以 维 持 稳 定, 而 95% 乙 醇 提 取 液 的 反 应 产 物 的 显 色 稳 定 时 间 大 约 在 30 分 钟 以 内 表 3-10 显 色 反 应 产 物 稳 定 性 样 品 号 10min 20min 30min 40min 50min 60min 水 提 水 提 % 醇 % 醇 % 醇 % 醇 精 密 度 试 验 取 同 一 供 试 样 品 溶 液 6 份 各 1ml, 依 标 准 曲 线 制 备 项 操 作, 呈 色 后 在 412nm 处 分 别 测 其 吸 光 度 值, 结 果 见 表 3-11 表 3-11 精 密 度 试 验 编 号 平 均 RSD% A 值 加 样 回 收 率 试 验 取 已 知 浓 度 的 样 品 溶 液 6 份 各 1ml, 分 别 置 于 10ml 刻 度 试 管 中, 精 密 加 入 一 定 浓 度 的 甘 露 醇 标 准 品 溶 液 若 干, 依 标 准 曲 线 制 备 项 操 作, 呈 色 后 在 412nm 处 分 别 测 其 吸 光 度 值, 结 果 见 表 3-12 表 3-12 加 样 回 收 率 试 验 加 入 量 (μg) 测 得 量 (μg) 回 收 率 (%) 平 均 (%) RSD%

37 2.7 甘 露 醇 含 量 测 定 将 04.9~05.8 月 采 集 的 明 党 参 样 品 60 干 燥 至 恒 重, 精 密 称 取 样 品 1.5g, 加 蒸 馏 水 50ml 回 流 提 取 1.5 小 时 冷 却 后 将 明 党 参 样 品 溶 液 以 3000 转 / 分 钟 离 心 15 分 钟, 将 上 清 液 无 损 的 转 移 至 50ml 容 量 瓶 中, 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度 再 精 密 移 取 2ml 溶 液 至 25ml 容 量 瓶 中, 定 容 至 刻 度 分 别 取 此 供 试 样 品 溶 液 1ml, 置 于 10ml 刻 度 试 管 中, 加 入 1ml 高 碘 酸 钾 溶 液, 混 匀, 室 温 放 置 10min, 加 2ml0.1%L- 鼠 李 糖 溶 液 以 除 去 过 多 的 高 碘 酸 盐, 混 合 后 加 4ml 新 鲜 配 制 的 Nash 试 剂,53 水 浴 加 热 15min 使 其 呈 色, 冷 却, 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度, 在 412nm 波 长 处 测 定 其 吸 光 度, 结 果 见 表 3-13 图 1 表 3-13 不 同 月 份 明 党 参 中 甘 露 醇 含 量 采 收 时 间 平 均 (%) RSD%

38 图 1 明 党 参 中 甘 露 醇 含 量 变 化 趋 势 含 量 % 月 3 讨 论 关 于 含 量 测 定 的 方 法 甘 露 醇 含 量 测 定 有 多 种 方 法, 一 般 采 用 容 量 法, 该 法 根 据 甘 露 醇 的 还 原 性 用 氧 化 剂 进 行 滴 定, 适 用 于 较 纯 的 甘 露 醇 制 剂, 但 对 于 含 有 其 它 还 原 性 物 质 ( 如 单 糖 等 ) 的 中 草 药 制 剂 来 说, 因 其 含 有 的 其 他 还 原 性 物 质 也 可 被 高 碘 酸 氧 化, 结 果 使 测 得 的 含 量 偏 高, 且 操 作 较 为 繁 琐 比 色 法 的 原 理 是 甘 露 醇 与 高 碘 酸 钠 反 应 产 生 甲 醛, 然 后 甲 醛 再 与 Nash 试 剂 反 应 产 生 黄 色 的 3,5- 二 乙 酰 -1,4 脱 氢 二 甲 基 吡 啶, 此 化 合 物 在 412nm 时 吸 收 作 用 最 大 且 在 温 度 为 25 左 右, 第 一 步 反 应 时 间 为 10 分 钟 时 高 碘 酸 钠 与 甘 露 醇 反 应 产 生 甲 醛 比 与 醛 式 糖 反 应 产 生 甲 醛 要 容 易 得 多, 从 而 把 干 扰 减 少 到 最 小 李 雪 芹 等 曾 用 一 些 单 糖 ( 如 半 乳 糖 葡 萄 糖 甘 露 糖 等 ) 用 比 色 法 测 其 吸 光 度 值 均 接 近 零 证 明 这 些 单 糖 对 甘 露 醇 的 干 扰 很 小, 与 文 献 报 道 一 致 [1] 李 雪 芹 等 比 较 了 测 定 比 色 法 和 容 量 法 的 优 缺 点, 分 别 采 用 这 两 种 方 法 测 定 标 准 品 甘 露 醇 和 三 种 天 然 虫 草 及 金 水 宝 原 料 粉 的 甘 露 醇 含 量, 并 进 行 比 较 结 果 表 明, 比 色 法 与 容 量 法 测 定 标 准 品 甘 露 醇 含 量 准 确 度 高, 重 现 性 好 ; 测 定 不 同 天 然 虫 草 和 金 水 宝 原 料 中 甘 露 醇 含 量, 容 量 法 测 定 值 高 于 比 色 法 ; 但 各 种 样 品 用 两 法 测 定 值 之 比 接 近, 说 明 两 种 方 法 都 能 反 映 虫 草 的 甘 露 醇 的 含 量, 但 比 色 法 由 于 其 它 物 质 ( 如 单 糖 等 ) 的 干 扰 少, 其 测 定 值 更 能 代 表 甘 露 醇 的 实 际 含 量 因 而 比 33

39 色 法 比 容 量 法 更 可 靠, 且 快 速 简 捷, 故 本 次 实 验 采 用 比 色 法 测 定 明 党 参 中 甘 露 醇 的 含 量 关 于 提 取 的 方 法 甘 露 醇 易 溶 于 水 难 溶 于 醇 不 溶 于 醚 酯, 且 以 往 文 献 中 对 含 有 甘 露 醇 的 中 药 多 有 使 用 95% 乙 醇 提 取, 所 以 本 次 实 验 选 择 的 提 取 溶 剂 为 水 30% 乙 醇 和 95% 乙 醇, 旨 在 考 察 水 高 浓 度 醇 和 低 浓 度 醇 对 明 党 参 中 甘 露 醇 的 提 取 效 果 正 交 实 验 的 结 果 表 明, 在 超 声 提 取 法 当 中, 以 水 为 溶 剂 提 取 效 果 最 佳, 30% 醇 次 之,95% 醇 再 次 之 而 在 回 流 提 取 法 中 却 出 现 了 完 全 相 反 的 情 况,95% 醇 的 提 取 效 果 最 好,30% 醇 次 之, 水 再 次 之 且 单 从 实 验 结 果 来 看, 回 流 法 的 提 取 效 果 全 面 优 于 超 声 法, 按 理 应 以 95% 乙 醇 为 溶 剂 回 流 提 取 然 而 同 样 的 溶 剂 在 不 同 的 提 取 方 法 中 截 然 不 同 的 表 现 不 能 不 让 人 产 生 疑 惑, 而 且 我 们 还 注 意 到 以 下 [2] 事 实 : 一 蔡 仲 军 等 对 冬 虫 夏 草 中 甘 露 醇 含 量 测 定 前 常 用 的 两 种 预 处 理 方 法 ( 水 提 取 法 和 95% 醇 提 取 法 ), 以 经 典 的 氧 化 还 原 滴 定 法 为 基 础, 进 行 了 直 接 比 较, 交 叉 比 较, 综 合 比 较, 相 对 误 差 分 析 结 果 表 明, 水 提 取 法 的 测 出 量 达 到 冬 虫 夏 草 甘 露 醇 实 际 含 量 的 95% 以 上, 且 相 对 误 差 很 小 ; 醇 提 取 法 的 测 出 量 则 不 足 其 实 际 含 量 的 70%, 且 相 对 误 差 较 大 在 冬 虫 夏 草 甘 露 醇 含 量 的 测 定 中, 样 品 预 处 理 采 用 水 提 取 法 的 准 确 性 和 精 确 性 均 高 于 醇 提 取 法 虽 然 明 党 参 与 虫 草 是 两 种 不 同 的 中 药, 但 是 这 里 应 当 也 有 较 强 的 借 鉴 意 义 二 比 色 法 中 的 各 种 显 色 试 剂 均 以 蒸 馏 水 配 制, 而 95% 乙 醇 的 提 取 液 中 成 分 复 杂, 各 提 出 物 的 极 性 差 别 也 较 大, 特 别 是 对 一 些 极 性 较 小 的 物 质 也 有 较 强 的 溶 出 作 用 这 种 情 况 直 接 导 致 了 在 最 后 显 色 的 过 程 中, 当 往 95% 醇 的 提 取 液 中 加 入 显 色 剂 时, 不 可 避 免 的 出 现 了 浑 浊 现 象, 这 对 于 比 色 法 来 说 是 严 重 的 干 扰 三 反 应 产 物 的 呈 色 稳 定 性 试 验 表 明, 水 提 及 30% 醇 提 物 的 显 色 反 应 产 物 在 1 小 时 内 可 以 保 持 稳 定, 而 95% 醇 的 提 取 物 其 显 色 反 应 产 物 的 稳 定 性 只 有 分 钟 左 右, 由 于 实 际 情 况 的 限 制, 未 必 能 够 做 到 在 相 应 的 时 间 内 完 成 最 后 的 测 定 工 作 综 合 以 上 述 及 的 情 况, 我 们 认 为 用 乙 醇 特 别 是 高 浓 度 的 乙 醇 为 溶 剂, 用 比 色 法 测 定 其 提 取 物 中 甘 露 醇 含 量 其 结 果 的 可 信 程 度 有 待 商 榷, 所 以 在 经 过 比 较 后 确 定 了 以 水 为 溶 剂 进 行 回 流 提 取 的 方 案 关 于 甘 露 醇 的 含 量 通 过 对 ~ 采 收 的 明 党 参 样 品 的 分 析 结 果 来 看, 一 年 中 其 甘 露 醇 的 含 量 在 0.57%~2.36% 之 间 变 化, 在 12 月 以 前 较 高, 从 12 月 至 翌 年 4 月 含 量 逐 渐 走 低, 并 在 3 月 份 时 略 有 回 升, 甘 露 醇 的 含 量 在 入 冬 前 的 10 月 达 34

40 到 最 高 值 结 合 明 党 参 的 生 长 特 点 来 看, 明 党 参 是 以 种 子 秋 播 繁 殖, 生 活 周 期 较 长, 幼 苗 生 长 缓 慢, 后 期 生 长 迅 速, 每 年 都 有 生 长 和 休 眠 两 个 时 期, 通 常 12 月 至 翌 年 1 月 开 始 萌 发,2 月 左 右 幼 苗 出 土,3~4 月 中 旬 抽 苔 孕 蕾,4 月 下 旬 至 5 月 开 花, 6 月 中 旬 为 果 熟 期, 夏 至 前 后 随 着 气 温 升 高 植 株 开 始 变 黄 枯 萎 进 入 休 眠, 休 眠 期 达 6~7 个 月 从 目 前 我 们 所 得 到 的 结 果 来 看, 明 党 参 中 的 甘 露 醇 含 量 和 其 生 长 规 律 似 乎 有 着 一 定 的 相 关 性, 即 在 明 党 参 的 生 长 期 时, 各 月 采 集 的 样 品 中 甘 露 醇 的 含 量 普 遍 较 低, 平 均 只 有 0.63%~1.03%, 而 在 休 眠 期 各 月 样 品 的 含 量 相 对 较 高, 平 均 达 1.35%~2.36%, 并 且 在 生 长 期 即 将 开 始 前 达 到 峰 值 另 一 个 值 得 注 意 的 地 方 是, 在 以 炮 制 品 明 党 参 作 为 供 试 品 时, 测 得 其 甘 露 醇 的 含 量 均 只 有 0.2~0.3%, 而 从 田 间 直 接 挖 取 的 明 党 参 样 品, 其 甘 露 醇 含 量 最 低 也 为 0.63%, 最 高 可 达 2.36% 其 中 的 原 因 试 推 断 如 下 : 一 明 党 参 的 采 收 一 般 来 说 是 在 每 年 的 4~5 月, 这 一 时 期 从 目 前 我 们 所 得 出 的 结 果 来 看 正 好 处 于 明 党 参 中 甘 露 醇 含 量 相 对 较 低 的 时 期 ; 二 从 明 党 参 的 炮 制 加 工 来 看, 明 党 参 在 采 收 后 将 其 根 洗 净, 放 入 沸 水 中 烫 3~5 分 钟, 是 谓 燀 制 然 后 捞 起, 放 入 凉 水 中 冷 却, 然 后 用 竹 刀 去 外 皮, 捞 起 晒 干 即 得 其 过 程 多 次 用 水 处 理, 而 甘 露 醇 是 易 溶 于 水 的 物 质, 这 一 炮 制 加 工 过 程 难 免 会 造 成 甘 露 醇 的 损 失 ; 三 我 们 手 中 的 明 党 参 样 品 是 三 年 生 的, 各 种 试 验 结 果 也 是 基 于 这 一 点, 对 于 其 它 各 年 份 采 收 的 明 党 参 来 说, 其 甘 露 醇 含 量 变 化 的 趋 势 或 许 与 我 们 目 前 所 得 的 结 论 一 致, 但 其 甘 露 醇 的 绝 对 含 量 尚 未 可 知 以 上 几 点 看 法, 或 可 作 为 解 释 商 品 明 党 参 与 鲜 明 党 参 甘 露 醇 含 量 差 异 巨 大 的 原 因 参 考 文 献 [1] 李 雪 芹, 张 磊, 熊 功 友. 比 色 法 与 容 量 法 测 定 冬 虫 夏 草 中 甘 露 醇 含 量 比 较 研 究 [J]. 九 江 医 学,1998,13(4): [2] 蔡 仲 军, 尹 定 华, 秦 松 云. 不 同 预 处 理 对 冬 虫 夏 草 甘 露 醇 含 量 测 定 的 影 响 [J]. 广 西 中 医 学 院 学 报,2002,5(4):

41 二 江 苏 栽 培 明 党 参 中 γ- 氨 基 丁 酸 累 积 规 律 研 究 摘 要 : 目 的 用 OPA 柱 前 衍 生 HPLC 法 测 定 明 党 参 中 γ- 氨 基 丁 酸 的 含 量, 探 寻 γ- 氨 基 丁 酸 含 量 与 明 党 参 生 长 时 间 的 关 系 方 法 取 样 品 试 液 1ml,OPA 衍 生 试 剂 1ml, 硼 酸 缓 冲 液 (0.2mol/L,pH8.5)5ml, 定 容 至 10ml, 反 应 时 间 45min; 流 动 相 : 流 动 相 A 为 1.35% 醋 酸 钠 缓 冲 液 (ph7.3), 流 动 相 B 为 1.35% 醋 酸 钠 (ph7.2): 甲 醇 ( ), 洗 脱 梯 度 及 流 速 :0~20minB 相 30%,20~25minB 相 增 至 100%, 维 持 8min; 检 测 波 长 :336nm 柱 温 :40 结 果 在 10~50μg/ml 范 围 内 对 不 同 月 份 采 收 的 样 品 在 实 验 条 件 下 测 定, 其 平 均 含 量 为 0.034%~ 0.116% 结 论 γ- 氨 基 丁 酸 含 量 在 5 月 至 8 月 及 1 月 较 高,9 月 至 次 年 4 月 较 低 关 键 词 : 明 党 参,γ- 氨 基 丁 酸,OPA 柱 前 衍 生 HPLC 法, 含 量 明 党 参 Changium smyrnioides Wolff 是 我 国 特 有 的 伞 形 科 (Umbelliferae) 明 党 参 属 的 单 种 属 植 物, 为 我 国 著 名 的 特 产 药 材 之 一 1984 年 被 列 入 国 家 三 级 濒 危 保 护 植 物 [1], 现 为 江 苏 特 产 道 地 药 材 之 一 明 党 参 的 应 用 始 载 于 王 肯 堂 的 证 治 准 绳, 具 有 补 气 生 津, 润 肺 化 痰, 平 肝 和 胃, 消 肿 解 毒 之 功 效 近 代 临 床 研 究 认 为, 明 党 参 味 甘 微 苦, 性 微 寒, 归 肺 脾 肝 经 有 补 气 生 津 润 肺 化 痰 养 阴 和 胃 平 肝 解 毒 的 功 效, 主 治 肺 燥 咳 嗽 呕 吐 反 胃 食 欲 不 振 消 化 不 良 病 后 体 虚 及 疔 毒 疮 疡 近 年 来 的 研 究 发 现, 明 党 参 在 降 低 胆 固 醇 调 节 免 疫 功 能 方 面 亦 有 活 性 陈 建 伟 等 在 明 党 参 中 首 次 发 现 γ- 氨 基 丁 酸 (GABA) [2],GABA 是 一 种 非 蛋 白 质 氨 基 酸, 为 哺 乳 动 物 中 枢 神 经 系 统 内 重 要 的 氨 基 酸 类 神 经 递 质, 同 时, 它 广 泛 地 存 在 于 植 物 以 及 植 物 的 各 个 部 分 中, 在 植 物 的 抗 逆 境 中 起 着 一 定 的 作 用 GABA 是 脑 组 织 中 最 重 要 的 神 经 递 质 之 一, 其 作 用 是 降 低 神 经 元 活 性, 防 止 神 经 细 胞 过 热 GABA 能 结 合 抗 焦 虑 的 脑 受 体 并 使 之 激 活, 然 后 与 另 外 一 些 物 质 协 同 作 用, 阻 止 与 焦 虑 相 关 的 信 息 抵 达 脑 指 示 中 枢, 因 此,GABA 可 从 根 本 上 镇 静 神 经, 从 而 起 到 抗 焦 虑 的 效 果 [3] 此 外,GABA 还 具 有 降 血 压 作 用, 其 主 要 作 用 机 制 是 通 过 调 节 中 枢 神 经 系 统 达 到 降 压 效 果,GABA 能 作 用 于 脊 髓 的 血 管 运 动 中 枢, 有 效 促 进 血 管 扩 张, 达 到 降 低 血 压 的 目 的 36

42 由 于 GABA 对 电 化 学 和 紫 外 可 见 光 的 不 灵 敏 性, 导 致 用 直 接 方 法 对 它 进 行 测 定 比 较 困 难 本 文 采 用 OPA 柱 前 衍 生 HPLC 法 对 江 苏 产 明 党 参 中 的 GABA 含 量 进 行 了 测 定, 并 初 步 探 讨 了 GABA 在 明 党 参 中 的 累 积 规 律 1 仪 器 与 试 剂 1.1 仪 器 Tu-1800 紫 外 分 光 光 度 计 ( 北 京 普 通 分 析 用 仪 器 有 限 责 任 公 司 ) Waters515 高 效 液 相 色 谱 仪 Waters2487 检 测 器 Lichrospher C18 柱 mm ( 汉 邦 科 技 ) 1.2 试 剂 试 剂 邻 苯 二 甲 醛 (OPA) 3- 巯 基 丙 酸 (3-MPA) 硼 酸 氢 氧 化 钠 醋 酸 钠 三 乙 胺 冰 醋 酸 乙 腈 甲 醇 衍 生 试 剂 的 制 备 OPA 衍 生 试 剂 :OPA1000mg,3-MPA1ml, 甲 醇 ( 或 乙 腈 ) 定 容 至 250ml, 临 用 时 配 制 硼 酸 缓 冲 液 : 取 硼 酸 适 量, 加 水 溶 解 并 稀 释 至 0.2mol/L( 用 氢 氧 化 钠 调 ph 值 为 8.5) 2 方 法 与 结 果 2.1 样 品 溶 液 的 制 备 取 明 党 参 样 品 2g, 粉 碎 后 置 入 150ml 圆 底 烧 瓶 内, 加 50ml 蒸 馏 水 回 流 提 取 1 小 时, 提 取 完 毕 后 将 烧 瓶 内 的 提 取 液 无 损 的 转 移 至 离 心 筒 内, 以 4800 转 /min 离 心 20min, 定 容 至 50ml 待 用 2.2 收 波 长 的 确 定 取 GABA 对 照 品 适 量, 用 蒸 馏 水 配 成 50μg /ml 浓 度 的 试 液, 取 该 标 准 品 试 液 2ml OPA 衍 生 试 剂 2ml 硼 酸 缓 冲 液 10ml, 混 合 反 应 45min, 反 应 完 毕 后 进 行 紫 外 扫 描, 确 定 最 佳 检 测 波 长 结 果 显 示,GABA 在 267nm 和 335.5nm 有 较 为 明 显 的 两 个 吸 收 峰, 其 中 267nm 的 吸 收 峰 峰 形 较 尖 锐, 而 335.5nm 的 吸 收 峰 峰 形 相 对 平 缓, 故 选 择 335.5nm 作 为 GABA 检 测 波 长 考 虑 到 紫 外 检 测 器 的 数 值 为 整 数, 因 而 将 GABA 的 检 测 波 长 定 为 336nm 2.3 反 应 条 件 的 优 化 2.3.1pH 值 对 GABA 衍 生 化 反 应 的 影 响 将 0.4mol/L 的 硼 酸 溶 液 分 别 用 NaoH 调 节 至 ph 为 的 6 种 缓 冲 液, 取 浓 度 50μg /ml 的 标 准 品 试 液 1ml OPA 衍 生 试 剂 1ml 硼 37

43 酸 缓 冲 液 5ml, 混 合 反 应 45min, 于 336nm 处 测 定 紫 外 吸 收 值 结 果 见 表 3-14 实 验 结 果 表 明, 当 硼 酸 缓 冲 液 的 ph 值 为 小 于 7.0 时, 衍 生 物 吸 收 值 较 小, 当 ph 值 为 8.5 时, 吸 收 值 达 到 峰 值, 并 且 随 着 缓 冲 液 ph 值 的 增 加, 吸 收 值 逐 渐 减 小, 因 此 选 择 ph8.5 作 为 GABA 衍 生 反 应 中 缓 冲 液 的 最 佳 ph 值 表 3-14 缓 冲 溶 液 ph 值 对 GABA 衍 生 反 应 的 影 响 ph 值 A 1 A 2 A 3 平 均 值 A 衍 生 反 应 时 间 对 衍 生 化 反 应 的 影 响 将 0.2mol/L 的 硼 酸 缓 冲 溶 液 调 节 至 ph8.5, 取 浓 度 50μg /ml 的 标 准 品 试 液 1ml OPA 衍 生 试 剂 1ml 硼 酸 缓 冲 液 5ml, 混 合 使 其 反 应, 于 336nm 处 测 定 其 紫 外 吸 收 值 自 反 应 开 始 计, 分 别 于 第 2min 5min 10min 20min 30min 45min 60min 75min 观 察 衍 生 产 物 的 吸 收 值, 结 果 见 表 3-15 实 验 结 果 表 明,GABA 的 衍 生 化 反 应 与 时 间 有 着 密 切 的 关 系, 随 着 反 应 时 间 的 延 长, 衍 生 物 的 吸 光 度 也 随 之 增 大, 至 45min 左 右 达 到 稳 定, 因 此 选 择 衍 生 反 应 的 时 间 为 45min 表 3-15 反 应 时 间 对 GABA 衍 生 反 应 的 影 响 时 间 (min) A 1 A 2 A 3 平 均 值 A

44 2.3.3 硼 酸 缓 冲 液 的 浓 度 对 衍 生 化 反 应 的 影 响 分 别 配 制 mol/L6 种 浓 度 的 硼 酸 溶 液, 调 节 ph 至 8.5 取 浓 度 50μg /ml 的 标 准 品 试 液 1ml OPA 衍 生 试 剂 1ml 不 同 浓 度 的 硼 酸 缓 冲 液 各 5ml, 分 别 混 合 使 其 反 应, 反 应 45min 后, 于 336nm 处 测 定 其 紫 外 吸 收 值 结 果 见 表 3-16 实 验 结 果 表 明, 硼 酸 缓 冲 液 的 浓 度 对 衍 生 反 应 有 着 重 要 的 影 响 硼 酸 浓 度 低 时, 衍 生 化 产 物 的 紫 外 吸 收 值 也 低, 硼 酸 浓 度 高 时, 衍 生 化 产 物 的 紫 外 吸 收 值 也 高, 并 且 当 硼 酸 浓 度 达 到 0.2 mol/l 时 基 本 稳 定, 因 此 实 验 选 择 硼 酸 缓 冲 液 的 浓 度 为 0.2 mol/l 表 3-16 硼 酸 缓 冲 液 的 浓 度 对 衍 生 反 应 的 影 响 硼 酸 浓 度 A 1 A 2 A 3 平 均 值 A OPA 衍 生 试 剂 对 衍 生 化 反 应 的 影 响 将 0.2mol/L 的 硼 酸 缓 冲 溶 液 调 节 至 ph8.5, 取 浓 度 样 品 溶 液 (2.2)1ml 硼 酸 缓 冲 液 5ml, 分 别 加 入 OPA 衍 生 试 剂 0.1ml 0.2ml 0.4ml 0.6ml 0.8ml 1.0ml, 并 定 容 至 10ml, 混 合 使 其 反 应,45min 后, 于 336nm 处 测 定 其 紫 外 吸 收 值 结 果 见 表 3-17 实 验 结 果 表 明, 衍 生 试 剂 的 用 量 对 衍 生 反 应 有 明 显 影 响, 衍 生 产 物 的 吸 收 值 随 衍 生 试 剂 用 量 的 增 加 而 增 大, 并 且 在 当 衍 生 试 剂 用 量 为 0.6ml 时 趋 于 稳 定 表 明 在 按 2.2 项 操 作 制 备 样 品 试 液 时, 衍 生 试 剂 用 量 为 0.6ml 即 可 使 反 应 趋 于 完 全 39

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