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1 苏 州 农 业 职 业 技 术 学 院 生 物 技 术 及 应 用 专 业 专 业 实 训 课 指 导 书 生 物 技 术 教 研 室 编

2 目 录 实 训 1 酸 碱 溶 液 的 配 制 及 浓 度 确 定 2 实 训 2 重 铬 酸 钾 标 准 溶 液 的 配 制 及 Fe2+ 测 定 5 实 训 3 高 锰 酸 钾 溶 液 的 标 定 及 过 氧 化 氢 含 量 的 测 定 7 实 训 4 海 波 含 量 的 测 定 10 实 训 5 EDTA 溶 液 的 标 定 及 钙 镁 含 量 的 测 定 13 实 训 6 铅 铋 含 量 的 连 续 测 定 16 实 训 7 AgNO 3 标 准 溶 液 的 标 定 及 Cl - 含 量 的 测 定 18 实 训 8 溴 化 钾 含 量 的 测 定 ( 法 扬 司 法 ) 20 实 训 9 化 妆 品 中 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 22 实 训 10 腐 烂 食 品 中 微 生 物 的 分 离 培 养 和 鉴 定 25 实 训 11 蔗 糖 酶 的 分 离 提 取 28 实 训 12 水 质 中 磷 的 测 定 33 实 训 13 植 物 组 织 培 养 基 本 技 能 训 练 35 1

3 实 训 1 酸 碱 溶 液 的 配 制 及 浓 度 确 定 训 练 要 求 1. 理 解 滴 定 分 析 中 基 准 物 质 的 概 念 ; 2. 掌 握 玻 璃 仪 器 及 实 验 室 常 规 仪 器 的 使 用 规 范 ; 3. 掌 握 分 析 天 平 的 使 用 和 以 差 减 法 为 主 的 药 品 称 量 技 术 ; 4. 掌 握 容 量 分 析 仪 器 的 规 范 使 用 技 术 理 论 知 识 概 要 滴 定 分 析 法 是 理 化 分 析 中 常 用 的 方 法, 滴 定 分 析 中 的 标 准 滴 定 溶 液 通 常 是 已 知 准 确 浓 度 的 标 准 溶 液 进 行 滴 定 分 析 操 作 时, 溶 液 的 准 备 是 一 项 基 础 工 作 滴 定 分 析 中 标 准 溶 液 的 准 备 依 据 物 质 的 性 质 不 同 而 有 所 不 同 纯 度 高 性 质 稳 定 的 基 准 物 质 可 以 用 准 确 称 量 后 准 确 定 容 的 方 法 直 接 配 制 标 准 滴 定 溶 液, 而 非 基 准 物 质 的 溶 液 还 需 用 基 准 物 质 进 行 标 定 盐 酸 溶 液 和 氢 氧 化 钠 溶 液 是 酸 碱 滴 定 中 常 用 的 滴 定 液, 但 由 于 两 者 都 不 是 基 准 物 质, 因 此 溶 液 配 制 后 需 用 基 准 物 质 进 行 标 定, 测 知 其 准 确 浓 度 标 定 盐 酸 溶 液 可 用 无 水 碳 酸 钠 硼 砂 等 基 准 物 质, 由 于 硼 砂 的 摩 尔 质 量 较 大, 所 以 选 用 硼 砂 更 好 些 ; 标 定 氢 氧 化 钠 溶 液 可 用 草 酸 邻 苯 二 甲 酸 氢 钾 等 基 准 物 质, 常 用 邻 苯 二 甲 酸 氢 钾 硼 砂 标 定 盐 酸 的 反 应 式 为 : Na 2 BB4O 7 10H 2 O + 2HCl 2NaCl +4H 3 BO 3 + 5H 2 O 达 到 化 学 计 量 点 时, 产 物 有 氯 化 钠 和 硼 酸, 溶 液 的 ph 约 为 5, 选 择 甲 基 橙 或 甲 基 红 作 指 示 剂 邻 苯 二 甲 酸 氢 钾 和 氢 氧 化 钠 溶 液 反 应 的 反 应 式 为 : KHC 8 H 4 O 4 + NaOH KNaC 8 H 4 O 4 + H 2 O 标 定 时 选 用 酚 酞 作 指 示 剂 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 分 析 天 平 2.600mL 烧 杯 3.50mL 烧 杯 2

4 4.150mL 锥 形 瓶 5. 称 量 瓶 6.250mL 容 量 瓶 7. 酸 式 碱 式 滴 定 管 8.20mL 移 液 管 9. 锥 形 瓶 10. 玻 棒 量 筒 洗 瓶 等 二 试 剂 1.6mol L -1 的 盐 酸 溶 液 和 6mol L -1 的 氢 氧 化 钠 溶 液 2. 甲 基 橙 指 示 剂 (0.02% 水 溶 液 ) 3. 酚 酞 指 示 剂 (0.04% 的 乙 醇 溶 液 ) 4. 硼 砂 ( 分 析 纯 ) 5. 邻 苯 二 甲 酸 氢 钾 (100~125 烘 干 后 备 用, 干 燥 温 度 不 宜 过 高, 否 则 脱 水 成 为 邻 苯 二 甲 酸 酐 ) 训 练 内 容 一 玻 璃 仪 器 的 规 范 洗 涤 将 所 需 用 的 玻 璃 仪 器 按 规 范 洗 涤 干 净, 需 要 时 可 烘 干 备 用 二 0.1mol L -1 盐 酸 溶 液 (500mL) 的 配 制 及 浓 度 标 定 1. 计 算 配 制 0.1mol L -1 盐 酸 溶 液 需 用 6mol L -1 盐 酸 溶 液 的 体 积 ; 2. 用 量 筒 量 取 所 需 体 积 的 6mol L -1 盐 酸 溶 液, 倒 入 烧 杯 中 ( 烧 杯 中 可 预 先 加 少 量 蒸 馏 水 ), 稀 释 至 500mL, 用 玻 棒 搅 匀, 倒 入 试 剂 瓶 中, 贴 上 标 签, 备 用 ; 3. 硼 砂 标 准 溶 液 的 配 制 ( 直 接 法 ): 用 差 减 法 准 确 称 取 5g 左 右 的 硼 砂, 放 入 50mL 烧 杯 中, 加 约 10mL 热 蒸 馏 水 溶 解, 冷 却 后 转 入 250mL 容 量 瓶 中, 按 操 作 规 范 准 确 定 容 配 成 250mL 硼 砂 标 准 溶 液 ; mol L -1 盐 酸 溶 液 的 标 定 : 按 规 范 操 作 准 备 好 酸 式 滴 定 管 和 移 液 管 将 0.1mol L -1 盐 酸 溶 液 装 入 酸 式 滴 定 管, 排 出 气 泡 调 好 零 刻 度, 备 用 用 移 液 管 吸 取 配 好 的 硼 砂 溶 液 20mL 于 150mL 锥 形 瓶 中, 加 3 滴 甲 基 橙 指 示 剂, 用 0.1mol L -1 盐 酸 溶 液 滴 定 至 恰 变 橙 色 时 为 终 点, 记 录 消 耗 盐 酸 溶 液 的 体 积 3

5 平 行 滴 定 2~3 次 计 算 盐 酸 溶 液 的 准 确 浓 度 三 0.1mol L -1 氢 氧 化 钠 溶 液 (500mL) 的 配 制 及 浓 度 标 定 1. 计 算 配 制 0.1mol L -1 氢 氧 化 钠 溶 液 需 用 6mol L -1 氢 氧 化 钠 溶 液 的 体 积 ; 2. 用 量 筒 量 取 所 需 体 积 的 6mol L -1 氢 氧 化 钠 溶 液, 倒 入 烧 杯 中, 稀 释 至 500mL, 用 玻 棒 搅 匀, 倒 入 试 剂 瓶 中, 贴 上 标 签, 静 置 备 用 ; 3.0.1mol L -1 氢 氧 化 钠 溶 液 的 标 定 : 碱 式 滴 定 管 按 规 范 操 作 准 备 好, 装 入 待 标 定 的 氢 氧 化 钠 溶 液, 排 出 气 泡, 调 好 零 刻 度, 备 用 用 差 减 法 准 确 称 取 邻 苯 二 甲 酸 氢 钾 三 份, 每 份 重 约 0.3~0.4g( 称 准 至 小 数 点 后 四 位 ), 置 于 锥 形 瓶 中, 加 20mL 蒸 馏 水 使 之 溶 解, 滴 入 酚 酞 指 示 剂 2 滴, 用 欲 标 定 的 氢 氢 化 钠 溶 液 滴 定 至 溶 液 呈 浅 红 色, 在 30s 内 不 褪 色 为 终 点 记 录 每 次 消 耗 的 氢 氧 化 钠 溶 液 的 体 积 计 算 氢 氧 化 钠 溶 液 的 准 确 浓 度 说 明 1. 硼 砂 的 摩 尔 质 量 为 g mol -1 ; 2. 邻 苯 二 甲 酸 氢 钾 的 摩 尔 质 量 为 g mol -1 ; 3. 学 生 自 拟 数 据 记 录 处 理 表 及 结 果 评 价 分 析 报 告 4

6 实 训 2 重 铬 酸 钾 标 准 溶 液 的 配 制 及 Fe 2+ 测 定 训 练 要 求 1. 进 一 步 掌 握 玻 璃 仪 器 及 实 验 室 常 规 仪 器 的 使 用 规 范 ; 2. 进 一 步 掌 握 分 析 天 平 的 使 用 和 以 差 减 法 为 主 的 药 品 称 量 技 术 ; 3. 进 一 步 掌 握 容 量 分 析 仪 器 的 规 范 使 用 技 术 ; 4. 训 练 滴 定 分 析 中 的 计 算 能 力 ; 5. 培 养 在 实 验 室 测 定 工 作 中 合 理 分 配 时 间 的 能 力 理 论 知 识 概 要 氧 化 - 还 原 滴 定 法 是 以 氧 化 还 原 反 应 为 基 础 的 滴 定 分 析 法, 依 据 所 用 氧 化 剂 的 不 同, 可 以 分 为 重 铬 酸 钾 法 高 锰 酸 钾 法 碘 量 法 等, 其 中 重 铬 酸 钾 法 是 以 重 铬 酸 钾 为 氧 化 剂, 配 成 标 准 溶 液, 测 定 还 原 性 物 质 的 一 种 氧 化 还 原 滴 定 法 重 铬 酸 钾 易 提 纯 性 质 稳 定, 是 基 准 物 质, 可 以 用 直 接 法 配 制 标 准 溶 液 在 酸 性 溶 液 中 重 铬 酸 钾 的 氧 化 性 较 强, 所 以 重 铬 酸 钾 法 的 测 定 反 应 通 常 在 酸 性 介 质 中 进 行 如 : 6Fe 2+ + Cr 2 O H + 6Fe Cr H 2 O 滴 定 采 用 氧 化 还 原 指 示 剂 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 分 析 天 平 2.150mL 烧 杯 3.500mL 烧 杯 4. 称 量 瓶 mL 容 量 瓶 6. 20mL 移 液 管 7. 酸 式 滴 定 管 8. 锥 形 瓶 9. 玻 棒 量 筒 洗 瓶 等 二 试 剂 5

7 1. 重 铬 酸 钾 ( 分 析 纯,140~150 干 燥 2h) 2. 硫 酸 亚 铁 样 品 3.3mol L -1 的 硫 酸 溶 液 4.85% 磷 酸 5. 二 苯 胺 磺 酸 钠 指 示 剂 (0.05% 水 溶 液 ) 训 练 内 容 一 玻 璃 仪 器 的 规 范 洗 涤 将 所 需 用 的 玻 璃 仪 器 按 规 范 洗 涤 干 净, 需 要 时 可 烘 干 备 用 二 重 铬 酸 钾 标 准 溶 液 的 配 制 及 硫 酸 亚 铁 试 样 溶 液 的 准 备 1. 配 制 0.02mol L -1 的 重 铬 酸 钾 标 准 溶 液 ( 直 接 法 )250mL 计 算 所 需 称 取 的 重 铬 酸 钾 的 质 量 然 后 用 分 析 天 平 以 差 减 称 量 法 称 取 所 需 质 量 ( 保 留 四 位 有 效 数 字 ) 的 重 铬 酸 钾 置 于 小 烧 杯 中, 加 少 量 蒸 馏 水 溶 解 后 定 量 转 移 入 250mL 的 容 量 瓶 中, 定 容, 摇 匀, 备 用 计 算 精 确 浓 度 2. 准 确 称 取 硫 酸 亚 铁 样 品 一 份 约 5g( 保 留 四 位 有 效 数 字 ), 置 于 小 烧 杯 中, 加 入 3 mol L -1 的 硫 酸 溶 液 8mL 以 防 水 解, 再 加 蒸 馏 水 少 量, 稍 加 热 使 之 溶 解, 然 后 定 容 于 200mL 容 量 瓶 中 定 容, 充 分 摇 匀 备 用 三 亚 铁 盐 中 铁 的 测 定 酸 式 滴 定 管 按 规 范 准 备 好, 装 入 重 铬 酸 钾 溶 液 待 用 用 20mL 移 液 管 准 确 吸 取 上 述 硫 酸 亚 铁 试 样 溶 液 于 大 烧 杯 中, 加 蒸 馏 水 100mL 3mol L -1 的 硫 酸 溶 液 20mL, 再 加 二 苯 胺 磺 酸 钠 指 示 剂 6~8 滴, 用 重 铬 酸 钾 标 准 溶 液 滴 定, 至 溶 液 出 现 较 深 绿 色 时, 加 入 85% 磷 酸 5mL,, 继 续 滴 定 至 溶 液 恰 呈 紫 色 或 蓝 紫 色 即 为 终 点, 记 录 消 耗 的 重 铬 酸 钾 溶 液 的 体 积 平 行 测 定 2~3 次, 计 算 硫 酸 亚 铁 样 品 中 亚 铁 离 子 的 含 量 说 明 1. 重 铬 酸 钾 的 摩 尔 质 量 为 g mol -1 ; 2. 计 算 时 注 意 所 用 硫 酸 亚 铁 样 品 的 组 成 ; 3. 学 生 自 拟 数 据 记 录 处 理 表 及 结 果 评 价 分 析 报 告 6

8 实 训 3 高 锰 酸 钾 溶 液 的 标 定 及 过 氧 化 氢 含 量 的 测 定 训 练 要 求 1. 进 一 步 掌 握 玻 璃 仪 器 及 实 验 室 常 规 仪 器 的 使 用 规 范 ; 2. 进 一 步 掌 握 分 析 天 平 的 使 用 和 以 差 减 法 为 主 的 药 品 称 量 技 术 ; 3. 进 一 步 掌 握 容 量 分 析 仪 器 的 规 范 使 用 技 术 ; 4. 训 练 滴 定 分 析 中 的 计 算 分 析 能 力 ; 5. 进 一 步 理 解 氧 化 还 原 滴 定 的 原 理 ; 6. 培 养 在 实 验 室 测 定 工 作 中 合 理 分 配 时 间 的 能 力 理 论 知 识 概 要 高 锰 酸 钾 法 也 是 重 要 的 氧 化 还 原 滴 定 法 之 一, 所 用 的 标 准 溶 液 为 高 锰 酸 钾 在 酸 性 介 质 中 高 锰 酸 钾 的 氧 化 能 力 很 强, 而 且 高 锰 酸 钾 在 水 中 的 着 色 力 很 强, 浓 度 很 小 即 可 观 察 到 粉 红 色, 而 被 还 原 后 几 近 无 色, 因 此 滴 定 到 达 终 点 时 无 须 另 加 指 示 剂 即 可 指 示 终 点 因 而 此 法 应 用 较 广 但 市 售 的 高 锰 酸 钾 纯 度 仅 在 质 量 分 数 99% 左 右, 其 中 含 有 少 量 的 二 氧 化 锰 和 其 他 杂 质 同 时, 蒸 馏 水 中 也 常 含 有 还 原 性 物 质, 都 能 使 高 锰 酸 钾 还 原 因 此 高 锰 酸 钾 的 标 准 滴 定 溶 液 不 能 直 接 配 制, 必 须 先 配 成 近 似 浓 度 的 溶 液, 再 用 基 准 物 质 标 定 一 般 配 制 时 先 称 取 稍 高 于 计 算 用 量 的 高 锰 酸 钾, 溶 于 一 定 量 的 蒸 馏 水 中, 将 溶 液 加 热 煮 沸, 保 持 微 沸 15min, 放 置 2~3 天, 使 可 能 含 有 的 还 原 性 物 质 被 完 全 氧 化 然 后 用 微 孔 玻 璃 漏 斗 过 滤, 除 去 二 氧 化 锰 沉 淀, 滤 液 移 入 棕 色 瓶 中 保 存, 以 避 免 高 锰 酸 钾 见 光 分 解 标 定 高 锰 酸 钾 溶 液 的 基 准 物 质 很 多, 如 草 酸 钠 草 酸 硫 酸 亚 铁 铵 纯 铁 丝 等 由 于 草 酸 钠 易 提 纯 不 含 结 晶 水, 性 质 稳 定, 所 以 常 被 使 用 在 105~110 烘 至 恒 重, 即 可 使 用 标 定 反 应 为 : 2MnO C 2 O H + 2Mn CO 2 + 8H 2 O 由 反 应 式 可 知, 如 果 计 量 时, 高 锰 酸 钾 的 基 本 单 元 为 (1/5 KMnO 4 ), 草 酸 钠 的 基 本 单 元 为 (1/2 NaC 2 O 4 ) 时, 两 者 反 应 时 以 1 1 的 比 例 进 行, 可 以 简 化 结 果 计 算 即 : C(1/5 KMnO 4 ) V( KMnO 4 ) = C(1/2 NaC 2 O 4 ) V(NaC 2 O 4 ) 利 用 高 锰 酸 钾 标 准 溶 液 测 定 过 氧 化 氢 试 样 中 过 氧 化 氢 含 量 依 据 的 原 理 为 : 2KMnO 4 + 5H 2 O H 2 SO 4 2MnSO 4 + 5O 2 + K 2 SO 4 + 8H 2 O 7

9 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 分 析 天 平 2. 称 量 瓶 3. 锥 形 瓶 (250mL) 4. 酸 式 滴 定 管 5.250mL 容 量 瓶 6. 1mL 或 2mL 25mL 移 液 管 7. 玻 棒 量 筒 洗 瓶 等 二 试 剂 1. 高 锰 酸 钾 溶 液 : 称 取 3.3g 高 锰 酸 钾, 溶 于 1050mL 水 中, 缓 缓 煮 沸 15min, 冷 却 后 置 于 暗 处 保 存 两 周 以 G4 玻 璃 砂 芯 漏 斗 或 玻 璃 纤 维 过 滤, 除 去 MnO 2 等 杂 质, 溶 液 保 存 于 干 燥 棕 色 瓶 中, 待 标 定 如 果 溶 液 经 煮 沸 并 在 水 浴 上 保 温 1h, 冷 却 后 过 滤 则 不 必 长 时 间 放 置 就 可 以 标 定 其 浓 度 ( 浓 度 约 为 C(1/5 KMnO 4 ) = 0.1mol/L) 2. 草 酸 钠 ( 分 析 纯, 于 105~110 烘 至 恒 重 ) 3.3mol L -1 的 硫 酸 溶 液 4. 硫 酸 溶 液 (2+8) 5. 过 氧 化 氢 试 样 训 练 内 容 一 玻 璃 仪 器 的 规 范 洗 涤 将 所 需 用 的 玻 璃 仪 器 按 规 范 洗 涤 干 净, 需 要 时 可 烘 干 备 用 二 高 锰 酸 钾 溶 液 的 标 定 准 确 称 取 0.15~0.20g 已 于 105~110 烘 至 恒 重 的 基 准 物 无 水 草 酸 钠 2~3 份, 分 别 放 于 250mL 锥 形 瓶 中, 加 30mL 蒸 馏 水 使 其 溶 解, 加 入 10mL3mol/L 的 硫 酸, 加 热 到 75~ - 85 ( 开 始 冒 蒸 气 ), 趁 热 用 待 标 定 的 高 锰 酸 钾 溶 液 滴 定 开 始 滴 定 时,MnO 4 离 子 的 颜 色 消 失 较 慢, 待 前 一 滴 溶 液 褪 色 后, 再 加 第 2 滴 继 续 滴 定 至 溶 液 呈 粉 红 色, 并 保 持 30s 不 褪 色, 即 为 终 点 ( 滴 定 结 束 时 的 温 度 不 应 低 于 65 ) 记 下 消 耗 高 锰 酸 钾 溶 液 的 体 积 根 据 每 份 草 酸 钠 的 质 量 和 消 耗 的 高 锰 酸 钾 溶 液 的 体 积, 计 算 高 锰 酸 钾 溶 液 的 准 确 浓 8

10 度 C(1/5 KMnO 4 ) = m(nac 2 O 4 )/[ V( KMnO 4 )M(1/2 NaC 2 O 4 )] C(1/5 KMnO 4 ) KMnO 4 标 准 溶 液 的 浓 度 (mol/l)( 以 1/5 KMnO 4 为 基 本 单 元 ) V( KMnO 4 ) 滴 定 时 消 耗 KMnO 4 标 准 溶 液 的 体 积 (L) m(nac 2 O 4 ) NaC 2 O 4 的 质 量 (g) M(1/2 NaC 2 O 4 ) 基 本 单 元 (1/2 NaC 2 O 4 ) 的 摩 尔 质 量 (g/mol) 三 过 氧 化 氢 含 量 的 测 定 准 确 移 取 过 氧 化 氢 样 品 1mL, 置 于 250mL 锥 形 瓶 中, 加 入 20mL 去 离 子 水, 加 稀 硫 酸 (2+8)20mL, 用 C(1/5 KMnO 4 ) = 0.1mol/L 的 高 锰 酸 钾 标 准 溶 液 滴 定 至 溶 液 呈 浅 粉 红 色 为 终 点, 记 录 高 锰 酸 钾 溶 液 的 体 积 平 行 滴 定 2 至 3 次 计 算 每 毫 升 过 氧 化 氢 样 品 溶 液 中 所 含 过 氧 化 氢 的 质 量 ( 如 果 计 量 时, 高 锰 酸 钾 的 基 本 单 元 为 (1/5 KMnO 4 ), 过 氧 化 氢 的 基 本 单 元 为 (1/2 H 2 O 2 ) 时, 两 者 反 应 时 以 1 1 的 比 例 进 行, 可 以 使 计 算 简 化 ) 说 明 1. M(1/2 NaC 2 O 4 ) 草 酸 钠 基 本 单 元 (1/2 NaC 2 O 4 ) 的 摩 尔 质 量 (66.999g/mol); 2. M(1/2 H 2 O 2 ) 过 氧 化 氢 基 本 单 元 (1/2 H 2 O 2 ) 的 毫 摩 尔 质 量 (0.017g/mmol); 3. 也 可 以 下 法 将 过 氧 化 氢 试 样 配 成 测 定 时 用 的 溶 液 : 移 取 1.8mL 体 积 分 数 约 为 30% 的 过 氧 化 氢 溶 液 于 250mL 容 量 瓶 中, 稀 释 至 刻 度, 充 分 摇 匀 测 定 时 用 移 液 管 移 取 25.00mL 样 品 溶 液 于 250mL 锥 形 瓶 中, 再 以 上 述 步 骤 同 样 进 行 滴 定 4. 学 生 自 拟 数 据 记 录 处 理 表 及 结 果 评 价 分 析 报 告 实 训 4 硫 代 硫 酸 钠 ( 海 波 ) 标 准 溶 液 的 配 制 和 标 定 9

11 训 练 要 求 1 掌 握 硫 代 硫 酸 钠 标 准 滴 定 溶 液 的 配 制 标 定 和 保 存 方 法 2 掌 握 以 碘 酸 钾 为 基 准 物 间 接 碘 量 法 标 定 硫 代 硫 酸 钠 的 基 本 原 理 反 应 条 件 操 作 方 法 和 计 算 理 论 知 识 概 要 Na 2 S 2 O 3 5H 2 O 容 易 风 化 潮 解, 且 易 受 空 气 和 微 生 物 的 作 用 而 分 解, 因 此 不 能 直 接 配 制 成 准 确 浓 度 的 溶 液 但 其 在 微 碱 性 的 溶 液 中 较 稳 定 当 标 准 溶 液 配 制 后 亦 要 妥 善 保 存 标 定 Na 2 S 2 O 3 溶 液 通 常 是 选 用 KIO 3 KBrO 3 或 K 2 Cr 2 O 7 等 氧 化 剂 作 为 基 准 物, 定 量 地 将 I 氧 化 为 I 2, 再 用 Na 2 S 2 O 3 溶 液 滴 定, 其 反 应 如 下 ; 上 述 几 种 基 准 物 中 一 般 使 用 KIO 3 和 KBrO 3 较 多, 因 为 不 会 污 染 环 境 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 容 量 瓶 1000ml 200ml 2. 烧 杯 50ml 100ml 200ml 3. 移 液 管 10ml 20ml 4. 锥 形 瓶 250ml 50ml 5. 酸 式 滴 定 管 6. 分 析 天 平 7. 镊 子 石 棉 网 玻 棒 量 筒 酒 精 灯 滤 纸 等 二 试 剂 1 基 准 试 剂 KIO 3 ; 2 20%KI 溶 液 ; mol/lh 2 SO 4 溶 液 ; 4 5g/L 淀 粉 溶 液 :0.5g 可 溶 性 淀 粉 放 入 小 烧 杯 中, 加 水 10mL, 使 成 糊 状, 在 搅 拌 下 倒 10

12 入 90 ml 沸 水 中, 继 续 微 沸 2min, 冷 却 后 转 移 至 试 剂 瓶 中 训 练 内 容 一 0.l mol/l Na 2 S 2 O 3 标 准 溶 液 的 配 制 称 取 13 克 Na 2 S 2 O 3 5H 2 O 置 于 400 ml 烧 怀 中, 加 入 200 ml 新 煮 沸 的 冷 却 的 蒸 馏 水, 待 完 全 溶 解 后, 加 入 0.1g Na 2 CO 3, 然 后 用 新 煮 沸 经 冷 却 的 蒸 馏 水 稀 释 至 500 ml, 保 存 于 棕 色 瓶 中, 在 暗 处 放 置 7 14 天 后 标 定 ; 二 Na 2 S 2 O 3 标 准 溶 液 的 标 定 准 确 称 取 基 准 试 剂 KIO 3 约 0.9 克 于 250 ml 烧 杯 中, 加 入 少 量 蒸 馏 水 溶 解 后, 移 入 250 ml 容 量 瓶 中, 用 蒸 馏 水 稀 释 至 刻 度, 摇 匀 用 移 液 管 吸 取 上 述 KIO 3 标 准 溶 液 25 ml 置 于 250mL 锥 形 瓶 中, 加 入 KI 溶 液 5 ml 和 H 2 SO 4 溶 液 5 ml, 以 水 稀 释 至 100mL, 立 即 用 待 标 定 的 Na 2 S 2 O 3 溶 液 滴 定 至 淡 黄 色 ; 再 加 入 5 ml 淀 粉 溶 液, 继 续 用 Na 2 S 2 O 3 溶 液 滴 定 至 蓝 色 恰 好 消 失, 即 为 终 点 根 据 消 耗 的 Na 2 S 2 O 3 溶 液 的 毫 升 数 及 KIO 3 的 量, 计 算 Na 2 S 2 O 3 溶 液 的 准 确 浓 度 若 选 用 KBrO 3 作 基 准 物 时 其 反 应 较 慢, 为 加 速 反 应 需 增 加 酸 度, 因 而 改 为 取 1mol/LH 2 SO 4 溶 液 溶 液 5mL, 井 需 在 暗 处 放 置 5 min, 使 反 应 进 行 完 全, 并 且 改 用 碘 量 瓶 说 明 1 配 制 Na 2 S 2 O 3 溶 液 时, 需 要 用 新 煮 沸 ( 除 去 CO 2 和 杀 死 细 菌 ) 并 冷 却 了 的 蒸 馏 水, 或 将 Na 2 S 2 O 3 试 剂 溶 于 蒸 馏 水 中, 煮 沸 10min 后 冷 却, 加 入 少 量 Na 2 CO 3 使 溶 液 呈 碱 性, 以 抑 制 细 菌 生 长 2 配 好 的 Na 2 S 2 O 3 溶 液 贮 存 于 棕 色 试 剂 瓶 中, 放 置 两 周 后 进 行 标 定 硫 代 硫 酸 钠 标 准 溶 液 不 宜 长 期 贮 存, 使 用 一 段 时 间 后 要 重 新 标 定, 如 果 发 现 溶 液 变 浑 浊 或 析 出 硫, 应 过 滤 后 重 新 标 定, 或 弃 去 再 重 新 配 制 溶 液 3 用 Na 2 S 2 O 3 滴 定 生 成 I 2 时 应 保 持 溶 液 呈 中 性 或 弱 酸 性 所 以 常 在 滴 定 前 用 蒸 馏 水 稀 释, 降 低 酸 度 用 基 准 物 K 2 Cr 2 O 7 标 定 时, 通 过 稀 释, 还 可 以 减 少 Cr 3+ 绿 色 对 终 点 的 影 响 4 滴 定 至 终 点 后, 经 过 5~10min, 溶 液 又 会 出 现 蓝 色, 这 是 由 于 空 气 氧 化 I - 所 引 起 的, 属 正 常 现 象 若 滴 定 到 终 点 后, 很 快 又 转 变 为 I 2 一 淀 粉 的 蓝 色, 则 可 能 是 由 于 酸 度 不 足 或 放 置 时 间 不 够 使 KBrO 3 或 K 2 Cr 2 O 7 与 KI 的 反 应 未 完 全, 此 时 应 弃 去 重 做 11

13 5 Na 2 S 2 O 3 标 准 滴 定 溶 液 浓 度 按 下 式 计 算 : 6m(KIO 3 ) 25/250 C(Na 2 S 2 O 3 ) = M(KIO 3 )V(Na 2 S 2 O 3 ) 10-3 实 训 5 EDTA 溶 液 的 标 定 及 钙 镁 含 量 的 测 定 测 定 钙 镁 12

14 训 练 要 求 1 掌 握 配 位 滴 定 法 的 基 本 原 理 与 操 作 方 法 2 掌 握 以 配 位 滴 定 法 测 定 钙 镁 的 基 本 原 理 反 应 条 件 操 作 方 法 和 计 算 理 论 知 识 概 要 EDTA 滴 定,Ca 2+,Mg 2+ 的 方 法 很 多, 通 常 根 据 被 测 物 质 复 杂 程 度 的 不 同 而 采 用 不 同 的 分 析 方 法 本 实 验 采 用 直 接 滴 定 法 调 节 试 液 的 ph 10, 用 EDTA 滴 定 Ca 2+,Mg 2+ 总 量, 此 时 Ca 2+,Mg 2+ 均 与 EDTA 形 式 1:1 配 合 物 H 2 Y 2- + Ca 2+ == CaY H + H 2 Y 2- + Mg 2+ == MgY H + 滴 定 时 以 铬 黑 T 为 指 示 剂, 在 ph 10 的 缓 冲 溶 液 中, 指 示 剂 与 Ca 2+,Mg 2+ 生 成 紫 红 色 配 合 物, 当 用 EDTA 滴 定 到 化 学 计 量 点 时, 游 离 出 指 示 剂 溶 液 显 蓝 色 另 取 一 份 试 液, 调 节 ph 12, 此 时 Mg 2+ 生 成 Mg(OH) 2 沉 淀, 故 可 以 用 EDTA 单 独 滴 定 Ca 2+ 当 试 液 中 Mg 2+ 的 含 量 较 高 时, 形 成 大 量 的 Mg(OH) 2 沉 淀 吸 附 钙, 从 而 使 钙 的 结 果 偏 低, 镁 的 结 果 偏 高, 加 入 糊 精 可 基 本 消 除 吸 附 现 象 滴 定 时 溶 液 中 Fe 3+,Al 3+ 等 干 扰 测 定, 可 用 三 乙 醇 胺 掩 蔽 Cu 2+,Zn 2+,Pb 2+ 等 的 干 扰 可 用 Na 2 S 或 KCN 掩 蔽 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 分 析 天 平 2. 烧 杯 50ml 100ml 200ml 3. 移 液 管 10ml 20ml 4. 锥 形 瓶 250ml 50ml 5. 容 量 瓶 1000ml 200ml 6. 滴 定 管 铁 架 台 7. 玻 棒 量 筒 滤 纸 等 试 剂 二 试 剂 1.EDTA 溶 液 :0.02mol/L 称 取 EDTA 二 钠 盐 (Na 2 H 2 Y 2H 2 O)4g 于 250mL 烧 杯 中, 用 50mL 水 微 热 溶 解 后 稀 释 至 500mL 如 溶 液 需 久 置, 最 好 将 溶 液 存 于 聚 乙 烯 瓶 中 13

15 2. 氨 氯 化 铵 缓 冲 溶 液 : 称 取 固 体 氯 化 铵 67g, 溶 于 少 量 水 中, 加 浓 氨 水 570mL, 用 水 稀 释 至 1L 3. 盐 酸 溶 液 :1:1 4. 氢 氧 化 钠 溶 液 :20% 5. 铬 黑 T 指 示 剂 :0.5g 铬 黑 T 和 50g 氯 化 钠 研 细 混 匀 6. 钙 指 示 剂 :0.5g 钙 指 示 剂 和 50g 氯 化 钠 研 细 混 匀 训 练 内 容 一 0.02mol/L EDTA 溶 液 的 标 定 标 定 EDTA 溶 液 的 基 准 物 质 很 多, 为 了 减 少 方 法 误 差, 故 选 用 基 准 CaCO 3 进 行 标 定, 其 方 法 如 下 : 准 确 称 取 基 准 CaCO 3 (110 烘 2 小 时 )0.5~0.6g( 准 确 到 0.1mg) 于 250mL 烧 杯 中, 用 少 量 水 润 湿, 盖 上 表 皿, 由 烧 杯 口 慢 慢 加 入 10mL1:1 盐 酸 溶 液 溶 解 后, 将 溶 液 定 量 转 入 250mL 容 量 瓶 中, 用 水 稀 至 刻 度, 摇 匀 移 取 25.00mL 上 述 溶 液 于 250mL 锥 形 瓶 中, 加 入 70~80mL 水, 加 20% 的 NaOH 溶 液 5mL, 加 少 量 钙 指 示 剂, 用 0.02mol/LEDTA 标 准 溶 液 滴 定 至 溶 液 由 紫 红 色 变 为 纯 蓝 色 即 为 终 点 平 行 标 定 三 份, 计 算 出 EDTA 溶 液 的 浓 度 二 试 液 分 析 移 取 试 液 25.00mL 于 250mL 锥 形 瓶 中, 加 水 70~80mL, 摇 匀 加 入 ph 10 的 氨 性 缓 冲 溶 液 10mL, 加 少 量 铬 黑 T 指 示 剂, 用 EDTA 标 准 溶 液 滴 定 至 溶 液 由 紫 红 色 变 为 纯 蓝 色, 即 为 终 点 平 行 测 定 三 份, 计 算 出 25mL 试 液 中 钙 镁 合 量 的 毫 摩 尔 数 另 取 一 份 25.00mL 于 250mL 锥 形 瓶 中, 加 水 70~80mL,20% NaOH 5mL, 少 量 钙 指 示 剂, 用 EDTA 标 准 溶 液 滴 定 至 溶 液 由 紫 红 色 变 为 纯 蓝 色 即 为 终 点 平 行 测 定 三 份, 根 据 所 消 耗 的 EDTA 的 毫 升 数 计 算 试 样 中 钙 的 含 量 三 白 云 石 中 钙 镁 的 分 析 称 取 0.5~0.6g 白 云 石 ( 视 试 样 中 钙 镁 含 量 多 少 而 定 ) 试 样 于 250mL 烧 杯 中, 用 1:1 HCl 10~20mL 加 热 溶 解 至 只 剩 下 白 色 硅 渣, 冷 却 后 定 量 转 移 至 250mL 容 量 瓶 中, 用 水 稀 释 至 刻 度, 摇 匀, 再 各 取 25.00mL 此 溶 液 分 别 滴 定 Ca 2+,Mg 2+ 含 量 及 Ca 2+ 含 量, 平 行 滴 定 三 份, 并 分 别 计 算 钙 镁 的 百 分 含 量 若 白 云 石 中 含 有 铁 铝, 需 先 在 酸 性 时 加 入 5mL 1:2 三 乙 醇 胺, 再 按 分 析 步 骤 分 别 滴 定 Ca 2+,Mg 2+ 合 量 及 Ca 2+ 的 含 量 14

16 若 试 样 中 镁 的 含 量 较 高, 在 滴 定 Ca + 时 先 加 入 10~15mL 5% 糊 精 溶 液, 再 调 节 酸 度 至 ph 12 按 其 分 析 步 骤 进 行 滴 定 说 明 1. 加 入 指 示 剂 的 量 要 适 宜, 过 多 或 过 少 都 不 易 辨 认 终 点 2. 滴 Ca 2+ 时 接 近 终 点 要 缓 慢, 并 充 分 摇 动 溶 液, 避 免 Mg(OH) 2 沉 淀 吸 附 Ca 2+ 而 引 起 钙 结 果 偏 低 实 训 6 铅 铋 含 量 的 连 续 测 定 15

17 训 练 要 求 1. 学 习 通 过 控 制 酸 度 对 Bi 3+.Pb 2+ 进 行 连 续 滴 定 的 原 理 和 方 法 2. 掌 握 二 甲 基 酚 成 橙 (XO) 指 示 剂 的 使 用 条 件 和 终 点 的 确 定 理 论 知 识 概 要 Bi 3+.Pb 2+ 都 能 和 EDTA 形 成 稳 定 的 配 合 物, 且 它 们 的 稳 定 性 差 异 很 大 二 甲 基 酚 橙 与 Bi 3+.Pb 2+ 都 能 生 成 紫 红 色 的 配 合 物 但 是 前 者 稳 定 因 此, 可 通 过 控 制 酸 度, 在 同 一 份 试 液 中 对 Bi 3+.Pb 2+ 进 行 连 续 测 定 在 PH=1 的 酸 性 介 质 中, 由 于 EDTA 酸 效 应 大,EDTA 不 和 Pb 2+ 反 应 因 此 Pb 2+ 不 干 扰, 可 用 EDTA 滴 定 Bi 3+ 达 到 第 一 个 终 点 终 点 Bi 3+ 被 滴 定 后, 加 六 亚 甲 基 四 胺 调 节 试 液 的 PH 为 5~6, 用 EDTA 继 续 滴 定 Pb 2+ 到 第 二 个 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 分 析 天 平 2. 烧 杯 50ml 100ml 3. 移 液 管 10ml 4. 锥 形 瓶 100ml 50ml 5. 容 量 瓶 250ml 6. 滴 定 管 铁 架 台 7. 玻 棒 量 筒 滤 纸 等 二 试 剂 mol L -1 EDTA EDTA 2.ZnO 固 体, 配 置 250ml 0.02mol l -1 锌 标 准 液 3. 六 亚 甲 基 四 胺 溶 液 指 示 剂 4. 盐 酸 5.NaOH 溶 液, 6. 二 甲 酚 橙 溶 液 16

18 训 练 内 容 一 配 置 0.02mol L -1 EDTA 溶 液 在 天 平 上 称 量 4.0 克 EDTA 于 烧 杯 中 加 水 溶 解 转 入 试 剂 瓶 中 加 水 稀 释 到 500ml 摇 匀 二 配 置 250ml 0.02mol l -1 锌 标 准 液 准 确 称 克 氧 化 锌 于 小 烧 杯 中 加 10mL 盐 酸 溶 解 后 转 入 250mL 容 量 瓶 中 加 水 定 容 三 标 定 EDTA 的 浓 度 准 确 移 取 25mLZn 2+ 标 准 液 于 锥 形 瓶 中, 加 1-2 滴 指 示 剂, 加 六 亚 甲 基 四 胺 至 试 液 呈 紫 红 色 用 EDTA 滴 定 至 终 点 四 Bi 3+. Pb 2+ 的 连 续 测 定 移 取 10mL 合 金 溶 液 于 锥 形 瓶 中, 加 指 示 剂 2 滴 用 EDTA 滴 定 到 第 一 个 终 点 记 下 消 耗 EDTA 的 量 再 在 试 液 中 加 六 亚 甲 基 四 胺 溶 液 调 ph 补 加 指 示 剂 2 滴, 用 EDTA 滴 到 第 二 个 终 点 记 录 下 消 耗 EDTA 的 体 积 这 样 平 行 测 定 三 次 实 训 7 AgNO 3 标 准 溶 液 的 标 定 及 Cl - 含 量 的 测 定 17

19 训 练 要 求 1. 掌 握 硝 酸 银 标 准 滴 定 溶 液 的 配 制 标 定 和 保 存 方 法 2. 掌 握 以 氯 化 钠 为 基 准 物 标 定 硝 酸 银 的 基 本 原 理 反 应 条 件 操 作 方 法 和 计 算 3. 学 会 以 K 2 CrO 4 为 指 示 剂 判 断 滴 定 终 点 的 方 法 理 论 知 识 概 要 AgNO 3 标 准 滴 定 溶 液 可 以 用 经 过 预 处 理 的 基 准 试 剂 AgNO 3 直 接 配 制 但 非 基 准 试 剂 AgNO 3 中 常 含 有 杂 质, 如 金 属 银 氧 化 银 游 离 硝 酸 亚 硝 酸 盐 等, 因 此 用 间 接 法 配 制 先 配 成 近 似 浓 度 的 溶 液 后, 用 基 准 物 质 NaCl 标 定 以 NaCl 作 为 基 准 物 质, 溶 样 后, 在 中 性 或 弱 碱 性 溶 液 中, 用 AgNO 3 溶 液 滴 定, 以 K 2 CrO 4 作 为 指 示 剂, 其 反 应 如 下 ; 点 达 到 化 学 计 量 点 时, 微 过 量 的 Ag + 2- 与 CrO 4 反 应 析 出 砖 红 色 Ag 2 CrO 4 沉 淀, 指 示 滴 定 终 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 分 析 天 平 2. 烧 杯 50ml 100ml 200ml 3. 移 液 管 10ml 20ml 4. 锥 形 瓶 250ml 50ml 5. 容 量 瓶 1000ml 200ml 6. 滴 定 管 7. 玻 棒 量 筒 滤 纸 等 二 试 剂 1 固 体 试 剂 AgNO 3 ( 分 析 纯 ) 2 固 体 试 剂 NaCl( 基 准 物 质, 在 500~600 灼 烧 至 恒 重 ); 3 K 2 CrO 4 指 示 液 (50g/L, 即 5%) 配 制 : 称 取 5g K 2 CrO 4 溶 于 少 量 水 中, 滴 加 AgNO 3 溶 液 至 红 色 不 褪, 混 匀 放 置 过 夜 后 过 滤, 将 滤 液 稀 释 至 100mL 18

20 训 练 内 容 一 配 制 0.1mol/LAgNO 3 溶 液 称 取 8.5g AgNO 3 溶 于 500mL 不 含 Cl - 的 蒸 馏 水 中, 贮 存 于 带 玻 璃 塞 的 棕 色 试 剂 瓶 中, 摇 匀, 置 于 暗 处, 待 标 定 二 标 定 AgNO 3 溶 液 准 确 称 取 基 准 试 剂 NaCl 0.12~0.159, 放 于 锥 形 瓶 中, 加 50mL 不 含 Cl - 的 蒸 馏 水 溶 解, 加 K 2 CrO 4 指 示 液 lml, 在 充 分 摇 动 下, 用 配 好 的 AgNO 3 溶 液 滴 定 至 溶 液 呈 微 红 色 即 为 终 点 记 录 消 耗 AgNO 3 标 准 滴 定 溶 液 的 体 积 平 行 测 定 3 次 结 果 计 算 AgNO 3 标 准 滴 定 溶 液 浓 度 按 下 式 计 算 : 说 明 1 AgNO 3 试 剂 及 其 溶 液 具 有 腐 蚀 性, 破 坏 皮 肤 组 织, 注 意 切 勿 接 触 皮 肤 及 衣 服 2 配 制 AgNO 3 标 准 溶 液 的 蒸 馏 水 应 无 Cl -, 否 则 配 成 的 AgNO 3 溶 液 会 出 现 白 色 浑 浊, 不 能 使 用 3 实 验 完 毕 后, 盛 装 AgNO 3 溶 液 的 滴 定 管 应 先 用 蒸 馏 水 洗 涤 2~3 次 后, 再 用 自 来 水 洗 净, 以 免 AgCl 沉 淀 残 留 于 滴 定 管 内 壁 实 训 8 溴 化 钾 含 量 的 测 定 ( 法 扬 司 法 ) 19

21 训 练 要 求 1. 掌 握 硝 酸 银 标 准 滴 定 溶 液 的 配 制 标 定 2. 掌 握 用 法 扬 司 法 测 定 可 溶 性 溴 化 物 中 溴 的 含 量 理 论 知 识 概 要 KBr 的 含 量 可 以 用 法 扬 司 法 来 测 定, 即 在 酸 性 条 件 下, 用 署 红 作 指 示 剂, 用 AgNO 3 标 准 滴 定 溶 液 滴 定 溶 液 由 橙 黄 色 至 深 红 色 为 终 点 (AgBr )Br + EO + AgNO (AgBr )AgEO + NO 3 计 量 点 胶 粒 ( 溶 液 橙 色 ) 曙 红 阴 离 子 计 量 点 后 ( 深 红 色 凝 乳 状 沉 淀 ) 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 分 析 天 平 2. 烧 杯 50ml 100ml 3. 移 液 管 10ml 20ml 4. 锥 形 瓶 250ml 50ml 5. 容 量 瓶 1000ml 200ml 6. 滴 定 管 7. 玻 棒 量 筒 滤 纸 等 二 试 剂 1 固 体 试 剂 AgNO 3 ( 分 析 纯 ) 2 固 体 试 剂 NaCl( 基 准 物 质, 在 500~600 灼 烧 至 恒 重 ); 3 K 2 CrO 4 指 示 液 (50g/L, 即 5%) 配 制 : 称 取 5g K 2 CrO 4 溶 于 少 量 水 中, 滴 加 AgNO 3 溶 液 至 红 色 不 褪, 混 匀 放 置 过 夜 后 过 滤, 将 滤 液 稀 释 至 100mL 4. 固 体 试 剂 KBr 5. 1% 淀 粉 溶 液 训 练 内 容 一 0.1mol/L AgNO 3 溶 液 的 配 制 与 标 定 1. 称 取 8.5g AgNO 3 溶 于 500mL 不 含 Cl - 的 蒸 馏 水 中, 贮 存 于 带 玻 璃 塞 的 棕 色 试 剂 瓶 20

22 中, 摇 匀, 置 于 暗 处, 待 标 定 2. 标 定 AgNO 3 溶 液 准 确 称 取 基 准 试 剂 NaCl 0.12~0.159, 放 于 锥 形 瓶 中, 加 50mL 不 含 Cl - 的 蒸 馏 水 溶 解, 加 K 2 CrO 4 指 示 液 lml, 在 充 分 摇 动 下, 用 配 好 的 AgNO 3 溶 液 滴 定 至 溶 液 呈 微 红 色 即 为 终 点 记 录 消 耗 AgNO 3 标 准 滴 定 溶 液 的 体 积 平 行 测 定 3 次 AgNO 3 标 准 滴 定 溶 液 浓 度 按 下 式 计 算 : 二.Br 含 量 的 测 定 1. 吸 取 未 知 样 10mL 三 份, 分 别 放 置 三 个 250mL 锥 形 瓶 中, 加 100mL 蒸 馏 水,1% 淀 粉 溶 液 2 ml, 淀 粉 作 保 护 胶 体, 防 止 AgBr 沉 淀 凝 聚, 因 为 AgBr 沉 淀 呈 胶 体 状 态 时, 表 面 积 大, 有 利 吸 附 2. 加 曙 红 指 示 剂 2--4 滴, 用 AgNO 3 标 准 溶 液 滴 定, 试 液 从 由 橙 黄 色 至 深 红 色 为 终 点 说 明 1 AgNO 3 试 剂 及 其 溶 液 具 有 腐 蚀 性, 破 坏 皮 肤 组 织, 注 意 切 勿 接 触 皮 肤 及 衣 服 2 配 制 AgNO 3 标 准 溶 液 的 蒸 馏 水 应 无 Cl -, 否 则 配 成 的 AgNO 3 溶 液 会 出 现 白 色 浑 浊, 不 能 使 用 3 实 验 完 毕 后, 盛 装 AgNO 3 溶 液 的 滴 定 管 应 先 用 蒸 馏 水 洗 涤 2~3 次 后, 再 用 自 来 水 洗 净, 以 免 AgCl 沉 淀 残 留 于 滴 定 管 内 壁 实 训 9 化 妆 品 中 粪 大 肠 杆 菌 的 测 定 训 练 要 求 21

23 1. 了 解 测 定 大 肠 杆 菌 的 原 理 2. 熟 练 掌 握 培 养 基 配 置 方 法 3. 熟 练 掌 握 革 兰 氏 染 色 法 理 论 知 识 概 要 粪 大 肠 菌 群 细 菌 来 源 于 人 和 温 血 动 物 的 粪 便 检 出 粪 大 肠 菌 群 表 明 该 化 妆 品 已 被 粪 便 污 染, 有 可 能 存 在 其 他 肠 道 致 病 菌 或 寄 生 虫 等 病 原 体 的 危 险 因 此 粪 大 肠 菌 被 列 为 重 要 的 卫 生 指 标 菌 根 据 粪 大 肠 菌 群 所 具 有 的 生 物 特 性, 如 革 兰 氏 阴 性 无 芽 孢 杆 菌 在 44 培 养 24~48h 能 发 酵 乳 糖 产 酸 并 产 气, 能 在 选 择 性 培 养 基 上 产 生 典 型 菌 群, 能 分 解 色 氨 酸 产 生 靛 基 质 等 特 征 对 大 肠 杆 菌 进 行 测 定 主 要 仪 器 及 材 料 一 仪 器 1. 恒 温 水 浴 或 隔 水 式 恒 温 箱 温 度 计 3. 显 微 镜 4. 载 玻 片 5. 接 种 环 6. 电 炉 7. ph 计 或 ph 试 纸 8. 高 压 消 毒 锅 9. 灭 温 吸 管 10. 灭 菌 平 皿 二 培 养 基 和 试 剂 1. 乳 糖 胆 盐 培 养 基 蛋 白 胨 猪 胆 盐 乳 糖 质 量 分 数 为 0.4% 的 溴 甲 酚 紫 水 溶 液 20g 5g 5g 2.5mL 22

24 蒸 馏 水 1000mL 将 蛋 白 胨 胆 盐 及 乳 糖 溶 于 蒸 馏 水 中, 调 ph 到 7.4, 加 入 指 示 剂, 混 匀, 分 装 试 管 ( 每 支 试 管 中 加 一 个 小 倒 管 ) min 灭 菌 2. 双 倍 浓 度 乳 糖 胆 盐 培 养 基 按 上 述 乳 糖 胆 盐 培 养 基 成 分, 蒸 馏 水 量 不 变, 其 他 成 分 量 加 倍 3. 伊 红 美 蓝 (EMB) 琼 脂 蛋 白 胨 乳 糖 磷 酸 氢 二 钾 琼 脂 质 量 分 数 为 2% 的 伊 红 水 溶 液 质 量 分 数 为 0.5% 的 美 蓝 水 溶 液 蒸 馏 水 l0g 10g 5g 20g 20mL 13mL 1000mL 先 将 琼 脂 加 到 900mL 蒸 馏 水 中, 加 热 溶 解, 然 后 加 入 磷 酸 氢 二 钾 蛋 白 胨, 混 匀, 使 之 溶 解 再 以 蒸 馏 水 补 足 至 1000mL 校 正 ph 值 为 7.2~7.4, 分 装 于 烧 瓶 内,121 15min 高 压 灭 菌 备 用 临 用 时 加 入 乳 糖 并 加 热 溶 化 琼 脂 冷 至 60 左 右 以 无 菌 手 续 加 入 灭 菌 的 伊 红 美 蓝 溶 液, 摇 匀 倾 注 平 皿 中 备 用 4. 蛋 白 胨 水 ( 作 靛 基 质 试 验 用 ) 蛋 白 胨 ( 或 胰 蛋 白 胨 ) 氯 化 钠 蒸 馏 水 20g 5g 1000mL 将 上 述 成 分 加 热 溶 化, 调 ph 值 为 7.0~7.2, 分 装 小 试 管, 高 压 灭 菌 min 5. 靛 基 质 试 剂 (1) 柯 凡 克 试 剂 将 5g 对 二 甲 氨 基 苯 甲 醛 溶 解 于 75mL 戊 醇 中, 然 后 缓 慢 加 入 浓 盐 酸 25mL (2) 试 验 方 法 接 种 细 菌 于 蛋 白 胨 水 中, 于 44 培 养 24h 沿 管 壁 加 柯 凡 克 试 剂 0.3~0.5mL, 轻 摇 试 管 阳 性 者 于 试 剂 层 显 深 玫 瑰 红 色 训 练 内 容 23

25 1. 取 10mL 1:10 稀 释 的 样 品, 加 到 10mL 双 倍 浓 度 的 乳 糖 胆 盐 培 养 基 中, 置 44 培 养 箱 中 培 养 24~48h, 如 不 产 酸 也 不 产 气, 则 报 告 为 粪 大 肠 菌 群 阴 性 如 产 酸 产 气, 则 划 线 接 种 到 伊 红 美 蓝 琼 脂 平 板 上, 置 37 培 养 18~24h 同 时 该 取 培 养 液 1~2 滴 接 种 到 蛋 白 胨 水 中, 置 44 培 养 24h 经 培 养 后, 在 上 述 平 板 上 观 察 有 无 典 型 菌 群 生 长 大 肠 菌 群 在 伊 美 红 蓝 琼 脂 培 养 基 上 的 典 型 菌 群 呈 深 紫 黑 色, 圆 形, 边 缘 整 齐, 表 面 光 滑 湿 润, 常 具 有 金 属 光 泽 也 有 的 呈 紫 黑 色, 不 带 或 略 带 金 属 光 泽, 或 粉 紫 色, 中 心 较 深 的 菌 群 亦 常 为 大 肠 菌 群, 均 应 注 意 挑 选 2. 挑 取 上 述 可 疑 菌 群, 涂 片 作 革 兰 氏 染 色 镜 检 3. 在 蛋 白 胨 水 培 养 液 中, 加 入 靛 基 质 试 剂 约 0.5mL, 观 察 靛 基 质 反 应 阳 性 者 液 面 呈 玫 瑰 红 色 ; 阴 性 反 应 液 面 呈 试 剂 本 色 4. 检 验 结 果 报 告 平 板 上 有 典 型 菌 群, 并 经 证 实 为 革 兰 氏 阴 性 短 杆 菌, 靛 基 质 试 验 阳 性, 则 可 报 告 被 检 样 品 中 检 出 粪 大 肠 菌 群 说 明 1. 注 意 革 兰 氏 染 色 的 正 确 操 作 2. 注 意 无 菌 操 作 训 练 要 求 实 训 10 腐 烂 食 品 中 微 生 物 的 分 离 培 养 和 鉴 定 24

26 1. 熟 练 掌 握 培 养 基 制 备 和 灭 菌 技 术 2. 掌 握 划 线 分 离 稀 释 平 板 涂 布 等 微 生 物 纯 培 养 方 法 3. 掌 握 区 别 不 同 种 类 微 生 物 的 方 法 理 论 知 识 概 要 造 成 食 物 变 质 的 因 素 可 归 纳 为 物 理 化 学 酶 及 微 生 物 等 4 个 方 面, 其 中 微 生 物 对 食 物 品 质 的 影 响 最 为 严 重 引 起 食 物 腐 败 的 微 生 物 种 类 较 多, 除 众 多 革 兰 氏 阴 性 或 阳 性 产 生 或 不 产 生 过 氧 化 氢 酶 可 形 成 芽 孢 或 不 形 成 芽 孢 的 杆 菌 及 球 菌 外, 还 有 酵 母 与 霉 菌 等 通 过 配 置 合 适 的 培 养 基, 对 腐 败 食 品 进 行 预 处 理, 采 用 划 线 分 离 稀 释 涂 布 等 纯 培 养 方 法 对 引 起 食 品 腐 败 的 微 生 物 进 行 分 离 培 养, 然 后 根 据 单 菌 落 的 菌 落 特 征 结 合 显 微 镜 的 形 态 观 察 初 步 鉴 定 腐 烂 食 品 中 微 生 物 的 类 型 主 要 仪 器 及 材 料 一 仪 器 1. 显 微 镜 2. 载 玻 片 3. 接 种 环 4. 电 炉 5. ph 计 或 ph 试 纸 6. 高 压 灭 菌 锅 7. 灭 菌 吸 管 8. 灭 菌 平 皿 9. 灭 菌 试 管 10. 玻 璃 珠 + 三 角 瓶 二 培 养 基 及 试 剂 1. 牛 肉 膏 蛋 白 胨 培 养 基 (g/l) 蛋 白 胨 10 牛 肉 膏 5 NaCl 5 25

27 2. 豆 芽 汁 培 养 基 制 法 ( 略 ) 3. 生 理 盐 水 (g/l) NaCl 8.5 训 练 内 容 一 玻 璃 仪 器 的 清 洗 及 包 扎, 培 养 基 及 生 理 盐 水 的 制 备 及 灭 菌 1. 灭 菌 所 用 玻 璃 器 皿 2. 配 制 所 用 的 两 种 培 养 基 3. 培 养 基 灭 菌 及 倒 平 板 二 样 品 的 预 处 理 及 稀 释 1. 样 品 的 预 处 理 称 取 待 测 样 品 2g, 放 入 装 有 10ml 无 菌 水 并 放 有 小 玻 珠 的 100mL 三 角 瓶 中, 用 手 或 置 摇 床 上 振 荡 15min, 使 微 生 物 细 胞 分 散, 三 层 擦 镜 纸 过 滤, 即 得 样 品 液 2. 样 品 液 的 稀 释 用 1ml 无 菌 移 液 管, 吸 取 样 品 液 0.5ml 移 入 装 有 4.5ml 无 菌 水 的 试 管 中, 吹 吸 3 次, 让 菌 液 混 合 均 匀, 即 成 10-1 稀 释 液 ; 再 换 一 支 无 菌 吸 管 吸 取 10-1 菌 液 0.5mL 移 入 装 有 4.5ml 无 菌 水 试 管 中, 即 成 10-2 稀 释 液 ; 以 此 类 推, 一 定 要 每 次 更 换 吸 管, 连 续 稀 释, 制 成 等 一 系 列 稀 释 度 的 菌 液, 供 平 板 接 种 使 用 三 划 线 分 离 和 平 板 涂 布 1. 划 线 分 离 : 样 品 液 划 线 2. 平 板 涂 布 : 牛 肉 膏 蛋 白 胨 培 养 基, 用 以 分 离 细 菌, 采 用 稀 释 度 的 菌 液 麦 芽 汁 培 养 基, 用 以 分 离 真 菌 和 酵 母 菌, 采 用 稀 释 度 的 菌 液 注 意 涂 布 均 匀 每 个 平 皿 中 的 菌 落 数, 细 菌 放 线 菌 酵 母 菌 以 每 皿 个 菌 落 为 宜, 霉 菌 以 每 皿 个 菌 落 为 宜 这 是 因 为 稀 释 度 过 高, 菌 数 少, 误 差 大, 稀 释 度 过 低 菌 数 多, 不 易 得 到 分 散 的 菌 落, 也 不 易 数 清 四 培 养 细 菌 :37,24h 霉 菌 酵 母 :30,24-48h 26

28 五 菌 落 形 态 菌 体 形 态 的 观 察 及 革 兰 氏 染 色 细 菌 : 观 察 菌 落 大 小 形 态 质 地 色 泽 挑 取 不 同 菌 落 单 染 色 观 察 菌 体 形 态 革 兰 氏 染 色 霉 菌 酵 母 : 观 察 菌 落 大 小 形 态 质 地 色 泽 挑 取 不 同 菌 落 单 染 色 观 察 菌 体 形 态 六 初 步 鉴 定 结 合 菌 落 特 征 及 镜 检 结 果, 根 据 不 同 微 生 物 的 特 征 初 步 鉴 定 微 生 物 各 大 类 别, 并 进 行 计 数 计 算 结 果 时, 常 按 下 列 标 准 从 接 种 后 的 3 个 稀 释 度 中, 选 择 一 个 合 适 的 稀 释 度, 求 出 每 克 待 测 样 品 中 的 含 菌 数 1. 从 三 个 稀 释 度 中 先 出 一 个 稀 释 度 ( 即 计 算 稀 释 度 ), 每 个 平 皿 中 的 菌 落 数, 细 菌 放 线 菌 酵 母 菌 以 每 皿 个 菌 落 为 宜, 霉 菌 以 每 皿 个 菌 落 为 宜 这 是 因 为 稀 释 度 过 高, 菌 数 少, 误 差 大, 稀 释 度 过 低 菌 数 多, 不 易 得 到 分 散 的 菌 落, 也 不 易 数 清 选 出 计 算 稀 释 度 后, 数 出 该 稀 释 度 中 三 个 重 复 的 菌 落 数, 并 求 出 平 均 的 菌 落 数 2. 同 一 稀 释 度 的 各 个 重 复 的 菌 数 相 差 ( 平 行 误 差 ) 不 能 太 悬 殊 3. 从 低 稀 释 度 到 高 稀 释 度, 以 菌 落 数 递 减 10 倍 为 标 准, 各 稀 释 度 间 的 误 差 ( 递 减 误 差 ) 越 小 越 好 4. 含 菌 数 的 计 算 含 菌 数 通 常 以 每 克 样 品 ( 烘 干 重 或 风 干 重 ) 中 含 有 的 测 定 菌 的 数 量 来 表 示 说 明 1. 在 整 个 实 验 过 程 中 的 无 菌 操 作 2. 应 根 据 实 验 所 测 的 样 品 决 定 最 高 稀 释 度 实 训 11 蔗 糖 酶 的 分 离 提 取 训 练 要 求 27

29 1. 了 解 酶 得 分 离 纯 化 及 活 力 测 定 的 一 般 原 理 和 方 法 2. 掌 握 使 用 粗 分 离 阶 段 常 用 的 有 机 溶 剂 沉 淀 法 3. 掌 握 进 一 步 分 离 中 常 用 的 柱 层 析 法 分 离 纯 化 酶 理 论 知 识 概 要 要 在 分 子 水 平 上 对 某 种 生 物 体 内 物 质 进 行 研 究 和 应 用, 首 先 必 须 把 该 物 质 从 细 胞 内 提 前 出 来, 并 使 之 与 其 他 物 质 分 离, 这 就 需 应 用 到 各 种 生 化 分 离 技 术 生 化 分 离 技 术 各 种 各 样, 发 展 很 快, 常 用 的 主 要 有 沉 淀 分 离 层 析 分 离 电 泳 分 离 和 超 离 心 分 离 技 术 属 于 生 物 大 分 子 的 酶 的 分 离 纯 化 是 酶 学 研 究 的 基 础 和 重 要 前 提 步 骤, 如 酶 的 性 质 和 结 构 功 能 的 研 究, 机 体 内 物 质 代 谢 途 径 的 阐 明, 酶 作 用 机 理 的 深 入 了 解 以 及 酶 在 生 产 实 践 中 的 应 用 等 方 面 在 酶 的 整 个 制 备 过 程 中, 必 须 通 过 活 力 测 定 来 监 测 酶 的 去 向, 只 有 在 各 个 分 离 纯 化 步 骤 中 了 解 酶 的 比 活 力 的 提 高 倍 数 及 纯 化 效 果, 从 而 决 定 下 一 步 骤 的 取 舍, 这 是 判 断 分 离 纯 化 方 法 和 操 作 条 件 优 劣 的 重 要 指 标 因 此, 酶 的 分 离 纯 化 和 酶 的 活 力 测 定 总 是 分 不 开 的 由 于 酶 是 蛋 白 质, 因 而 酶 的 分 离 纯 化 方 法 也 就 是 蛋 白 质 分 离 纯 化 常 用 的 方 法 在 分 离 纯 化 过 程 中, 外 界 各 种 物 理 化 学 因 素 的 影 响, 常 易 引 起 酶 蛋 白 的 变 性 或 失 活 所 以 应 特 别 注 意 操 作 条 件 酶 的 分 离 纯 化 方 法 很 多, 通 常 采 用 的 方 法 有 沉 淀 法 ( 包 括 盐 析 有 机 溶 剂 沉 淀 法 ) 柱 层 析 法 ( 包 括 离 子 交 换 分 子 筛 吸 附 层 析 亲 和 层 析 高 效 液 相 层 析 ) 电 泳 分 离 法 等 这 些 方 法 的 原 理 主 要 是 依 据 蛋 白 质 间 溶 解 度, 分 子 所 带 的 电 荷, 分 子 量 的 大 小 及 形 状, 吸 附 作 用 的 亲 和 力 等 不 同 或 差 异, 从 而 使 各 种 蛋 白 质 得 到 分 离 纯 化 为 了 制 备 出 纯 度 较 高 的 酶 制 剂, 往 往 需 要 各 种 方 法 配 合 使 用, 至 于 选 择 什 么 方 法 以 及 效 果 如 何, 必 须 根 据 酶 自 身 的 性 质 和 实 验 室 具 体 条 件 来 决 定 蔗 糖 酶 是 一 种 水 解 酶, 它 能 使 蔗 糖 水 解 为 葡 萄 糖 和 果 糖 本 实 验 先 用 有 机 溶 剂 对 蔗 糖 酶 进 行 粗 分 离, 用 Sephadex G-25 进 行 缓 冲 液 交 换 后, 进 一 步 采 用 DEAE- 纤 维 素 离 子 交 换 层 析 进 行 纯 化 主 要 仪 器 及 材 料 28

30 一 主 要 仪 器 1. 磁 力 搅 拌 器 2. 烧 杯 量 筒 滴 管 3. 分 液 漏 斗 A- 紫 外 检 测 仪 及 其 电 源 1 台 5. SephadexG-25 柱 Φ 根 6. 离 交 色 谱 柱 Φ 根 6. 恒 流 泵 1 台 7. BS 一 100A 型 自 动 分 部 收 集 器 1 台 8. XWT S 小 型 台 式 记 录 仪 1 台 8. 铁 架 台 自 由 夹 9. 烧 杯 试 管 滴 管 玻 棒 滤 纸 二 材 料 和 试 剂 1. 粗 细 胞 抽 提 液 El 2. 无 水 乙 醇 (A.R) 3. 4mol/L,HAC mol/l ph 5.8 醋 酸 一 醋 酸 钠 缓 冲 液 mol/LNa0H mol/LHCl mol/LpH 5.8 HAC-NaAC 缓 冲 液 mol/L ph3.5 HAC-NaAC 缓 冲 液 9. DEAE 一 纤 维 素 训 练 内 容 一 酵 母 蔗 糖 酶 的 沉 淀 1. 粗 酶 El 用 4mol/L 稀 醋 酸 调 ph 至 %(V) 乙 醇 浓 度 沉 淀 除 杂 按 X 1 = 0.32 ( 其 中 v 为 粗 酶 体 积 ) 算 出 所 需 乙 醇 体 29

31 V+X 1 积, 将 在 冰 箱 中 已 预 冷 的 粗 酶 及 乙 醇 拿 出, 把 酶 液 置 于 烧 杯 中, 放 在 磁 力 搅 拌 器 上, 在 一 定 的 搅 拌 下 缓 慢 滴 加 乙 醇, 滴 加 时 酶 液 逐 渐 混 浊, 滴 加 完 毕,4000rpm 离 心 10min, 得 上 清 液 倒 入 另 一 烧 杯 中 待 用, 弃 去 沉 淀 %(V) 乙 醇 浓 度 沉 淀 蔗 糖 酶 按 X 2 = V+X 2 计 算 出 使 乙 醇 浓 度 达 47.5% 所 需 无 水 乙 醇 量 X 2, 再 按 X 2 X 1 算 出 需 补 加 之 无 水 乙 醇 体 积 按 前 面 方 法 所 述 继 续 补 滴 加 乙 醇, 使 乙 醇 浓 度 达 47.5%, 于 4000rpm 离 心 10min, 弃 去 上 清 液 得 少 量 沉 淀, 用 15mL 起 始 缓 冲 液 溶 解, 不 溶 物 10000rpm 离 心 10min 除 去, 得 上 清 液 即 为 较 纯 蔗 糖 酶 E2 4. 对 蔗 糖 酶 E 2 量 体 积 并 记 录, 测 酶 活 及 蛋 白 质 浓 度, 并 计 算 比 活 二 蛋 白 质 溶 液 的 缓 冲 液 交 换 1. 装 柱 : 将 柱 垂 直 固 定 在 铁 架 台 上, 沿 玻 棒 将 溶 胀 好 的 凝 胶 一 次 性 倒 入 ( 若 分 次 倒 入, 一 定 要 先 搅 拌, 以 防 产 生 接 缝 ) 然 后 开 下 口, 使 其 自 然 沉 降 装 柱 时 注 意 垂 直, 稳 定 避 免 阳 光 气 流, 以 防 气 泡 产 生 2. 缓 冲 液 交 换 (1) 平 衡 : 先 将 恒 流 泵 与 柱 上 口 相 连, 柱 下 口 连 接 紫 外 检 测 仪, 紫 外 检 测 仪 打 开 预 热 30min 左 右, 检 测 仪 的 量 程 旋 钮 在 丁 包 开 恒 流 泵 用 2~3 倍 床 体 积 的 起 始 缓 冲 液 对 柱 进 行 平 衡, 调 节 吸 光 度 旋 钮 使 其 读 数 在 95 和 100 之 间 (2) 加 样 : 平 衡 好 后, 关 泵, 将 柱 上 口 打 开, 当 柱 中 缓 冲 液 近 床 面 ( 凹 液 面 与 床 面 相 切 ) 时, 用 滴 管 将 样 品 沿 柱 壁 慢 慢 加 入, 并 待 其 自 然 下 降 近 床 面 时, 加 缓 冲 液 到 柱 顶 再 把 盖 旋 好, 开 泵 用 起 始 缓 冲 液 进 行 洗 脱 ( 洗 脱 速 度 控 制 在 2mL/min 左 右 ) (3). 洗 脱 : 待 紫 外 检 测 仪 数 字 下 降 时, 就 用 试 管 ( 或 小 烧 杯 ) 进 行 收 集, 直 至 数 字 下 降 后 又 上 升 到 某 一 值 基 本 不 动 为 止 三 离 子 交 换 色 谱 法 纯 化 酵 母 蔗 糖 酶 1. DEAE 一 纤 维 素 处 理 称 50 克 DEAE- 纤 维 素 于 烧 杯 中, 用 蒸 馏 水 浸 泡, 留 下 30min 沉 集 部 分, 30

32 用 4 mol/lhac 调 ph5.8 后, 浸 泡 在 ph mol/LHAC-NaAC 缓 冲 液 中 2. 装 柱 及 安 装 仪 器 将 柱 垂 直 固 定, 将 处 理 好 的 DEAE 一 纤 维 素 倒 入 柱 中 ( 沿 玻 棒 缓 慢 加 入, 如 不 能 一 次 加 入, 每 次 加 都 需 用 长 玻 棒 自 下 而 上 轻 轻 搅 拌 一 下 ), 打 开 下 口, 使 其 自 然 沉 降 沉 降 完 毕 吸 出 上 层 多 余 的 DEAE- 纤 维 素, 使 柱 高 至 所 需 处, 然 后 将 装 好 的 柱 用 起 始 缓 冲 液 平 衡 2~3 个 柱 体 积 色 谱 仪 器 的 安 装 连 接 图 : 3. 上 柱 将 整 套 色 谱 连 接 好 后, 将 紫 外 检 测 仪 开 机 稳 定 20~30min, 同 时 用 起 始 缓 冲 液 将 流 动 池 平 衡 至 ph 与 起 始 缓 冲 液 一 致, 调 整 并 观 察 记 录 的 基 线 是 否 平 稳, 然 后 关 闭 恒 流 泵, 打 开 柱 盖, 在 柱 中 缓 冲 液 面 刚 排 干 时, 用 滴 管 吸 经 缓 冲 液 交 换 的 酶 液 E2, 沿 壁 缓 慢 加 入 床 面, 再 待 其 自 然 下 沉 近 床 面 时, 加 入 缓 冲 液 至 柱 顶 加 上 柱 顶 盖, 重 新 启 动 恒 流 泵, 用 0.05mol/L ph5.8 起 始 缓 冲 液 平 衡, 完 成 吸 附 ( 流 速 控 制 在 2mL/min 左 右 ) 4. 洗 脱 平 衡 时, 注 意 观 察 出 峰 情 况, 待 未 吸 附 的 杂 蛋 白 峰 下 降 至 基 本 完 全 后, 换 用 0.05mol/LpH3.5 HAC-NaAC 缓 冲 液 洗 脱, 并 进 行 分 部 收 集, 通 过 恒 流 泵 调 节 洗 脱 速 度 2mL/min, 以 分 部 收 集 器 计 时, 控 制 每 分 部 8mL 左 右, 记 录 仪 输 入 电 压 100mV, 走 纸 速 度 6cm/hr 出 峰 时 可 通 过 分 部 收 集 器 的 手 动 按 钮 控 制 出 峰 部 分 收 集 在 同 一 分 部 出 31

33 峰 完 全 后, 停 止 收 集 在 记 录 仪 的 记 录 上, 确 定 各 个 峰 位 所 对 应 的 分 部, 作 好 标 记, 以 待 测 定 先 量 出 各 出 峰 分 部 的 体 积, 测 出 其 中 有 酶 活 的 分 部, 即 为 E3 5. 再 生 用 1~2 个 柱 体 积 的 1mol/L NaCl 洗 涤 DEAE- 纤 维 素 层 析 柱, 然 后 用 0.05 mol/l ph5.8 起 始 缓 冲 液 重 新 平 衡 后 层 析 柱 可 再 次 使 用 多 次 使 用 后 的 DEAE 一 纤 维 素 需 进 行 更 为 有 效 的 洗 涤, 将 DEAE 一 纤 维 素 从 层 析 柱 中 转 移 至 烧 杯, 用 0.5mol/LNaOH+0.5 mol/l NaCl 浸 泡 O.5 小 时, 采 用 抽 滤 法 洗 至 中 性, 用 4 mol/lhac 调 ph5.8 后 重 新 用 起 始 缓 冲 液 平 衡 并 重 新 装 柱 实 训 12 水 质 中 磷 的 测 定 训 练 要 求 32

34 1. 理 解 分 光 光 度 法 测 定 磷 的 原 理 ; 2. 掌 握 分 光 光 度 计 的 使 用 技 能 ; 3. 学 会 标 准 溶 液 的 配 制 技 术 ; 4. 学 会 数 据 处 理 方 法 理 论 知 识 概 要 食 物 中 的 有 机 物 经 酸 氧 化, 使 磷 在 酸 性 条 件 下 与 钼 酸 铵 结 合 生 成 磷 钼 酸 铵 溶 液, 此 化 合 物 被 对 苯 二 酚 亚 硫 酸 钠 还 原 成 蓝 色 化 合 物 - 钼 蓝 用 分 光 光 度 计 在 波 长 660nm 处 测 定 钼 蓝 的 吸 光 值, 以 定 量 分 析 磷 的 含 量 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 1. 分 光 光 度 计 2.50mL 具 塞 试 管 3. 洗 瓶 4. 滴 管 5. 坐 标 纸 1.50mL 容 量 瓶 2. 电 炉 3.5mL 移 液 管 二 试 剂 1. 硫 酸 : 相 对 密 度 高 氯 酸 - 硝 酸 消 化 液 :1+4 混 合 液 3.15% 硫 酸 溶 液 : 取 15mL 硫 酸 徐 徐 加 入 到 80mL 水 中 混 匀, 冷 却 后 用 水 稀 释 至 100mL 4. 钼 酸 铵 溶 液 : 称 取 5g 钼 酸 铵 [(NH 4 ) 6 Mo 7 O 24 4H 2 O] 用 15% 硫 酸 稀 释 至 100mL 5. 维 生 素 C 溶 液 :100g/L 7. 磷 标 准 储 备 液 (100µg/mL): 精 确 称 取 在 105 下 干 燥 的 磷 酸 二 氢 钾 ( 优 级 纯 )0.4394g, 置 于 1000mL 容 量 瓶 中, 加 水 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 此 溶 液 每 毫 升 含 100µg 磷 8. 磷 标 准 使 用 液 (10µg/mL): 准 确 吸 取 10mL 磷 标 准 储 备 液, 置 于 100mL 容 量 瓶 中, 加 水 稀 释 至 刻 度, 混 匀 此 溶 液 每 毫 升 含 磷 10µg 33

35 训 练 内 容 1. 试 样 处 理 称 取 各 类 食 物 的 均 匀 干 试 样 0.1g~0.5g 或 湿 样 2~5g 于 100mL 凯 氏 烧 瓶 中, 加 入 3mL 硫 酸 3mL 高 氯 酸 - 硝 酸 消 化 液, 置 于 消 化 炉 上 瓶 中 液 体 初 为 棕 黑 色, 待 溶 液 变 成 无 色 或 微 带 黄 色 清 亮 液 体 时, 即 消 化 完 全, 将 溶 液 放 冷, 加 20mL 水, 赶 酸 冷 却, 转 移 至 100mL 容 量 瓶 中, 用 水 多 次 洗 涤 凯 氏 烧 瓶, 洗 液 合 并 倒 入 容 量 瓶 内, 加 水 至 刻 度, 混 匀 此 溶 液 为 试 样 测 定 液 取 与 消 化 试 样 同 量 的 硫 酸 高 氯 酸 - 硝 酸 消 化 液, 按 同 一 方 法 做 空 白 溶 液 2. 磷 标 准 曲 线 工 作 曲 线 的 绘 制 取 6 支 50mL 具 塞 刻 度 管 分 别 加 入 0.00,0.50,1.00,3.00,5.00,10.00 磷 酸 盐 标 准 溶 液, 用 水 稀 释, 加 入 1mL 抗 坏 血 酸 溶 液, 混 匀,30s 后 加 2mL 钼 酸 盐 溶 液 充 分 混 匀 以 水 定 容 至 50mL,15 分 钟 后, 用 1cm 的 比 色 皿, 在 700nm 波 长 下, 以 零 管 做 参 比, 测 定 吸 光 度 吸 取 10.00mL 消 解 液 于 50mL 具 塞 刻 度 管 中, 用 水 稀 释, 加 入 1mL 抗 坏 血 酸 溶 液, 混 匀,30s 后 加 2mL 钼 酸 盐 溶 液 充 分 混 匀, 以 水 定 容 至 50mL 重 复 2 次 3. 结 果 计 算 : 若 水 样 体 积 为 50mL, 消 解 后 试 样 定 容 体 积 为 50mL; 请 计 算 水 样 中 总 磷 的 含 量, 以 C(µg/mL) 表 示 并 计 算 相 对 偏 差 说 明 1. 根 据 上 述 内 容 提 示 设 计 好 测 定 步 骤 ; 2. 学 生 自 拟 数 据 记 录 处 理 表 及 结 果 评 价 分 析 报 告 训 练 要 求 实 训 13 植 物 组 织 培 养 基 本 技 能 训 练 34

36 1. 熟 练 掌 握 常 用 组 织 培 养 基 的 配 制 及 灭 菌 技 术 ; 2. 熟 练 掌 握 外 植 体 材 料 的 预 处 理 技 术 ; 3. 熟 练 掌 握 无 菌 操 作 室 的 使 用 规 范 ; 4. 熟 练 掌 握 组 培 苗 的 接 种 技 术 ; 5. 了 解 企 业 的 生 产 技 术 和 生 产 方 法 理 论 知 识 概 要 植 物 组 织 培 养 技 术 是 一 种 理 论 性 技 术 性 和 实 践 性 强 的 技 术, 通 过 实 训, 要 求 学 生 掌 握 植 物 组 织 培 养 基 础 知 识 基 本 理 论 和 基 本 技 术, 如 : 常 用 组 织 培 养 基 的 配 制 及 灭 菌 技 术 外 植 体 材 料 的 预 处 理 技 术 无 菌 操 作 室 的 使 用 规 范 组 培 苗 的 接 种 技 术, 着 眼 于 培 养 学 生 应 职 岗 位 综 合 能 力 和 创 新 精 神, 提 高 学 生 实 践 动 手 能 力 主 要 仪 器 及 试 剂 一 仪 器 用 具 1. 超 净 工 作 台 2. 空 调 机 3. 蒸 汽 发 生 器 或 纯 水 发 生 器 4. 高 压 灭 菌 锅 5. 冰 箱 6. 光 照 培 养 箱 7. 电 炉 8. 显 微 镜 9. 电 子 分 析 天 平 10. 恒 温 箱 11. 烘 箱 12. 超 净 工 作 台 13. 不 锈 钢 打 孔 器 14. 分 注 器 15. 烧 杯 16. 培 养 皿 35

37 17. 移 液 管 18. 定 容 瓶 19. 量 筒 20. 母 液 瓶 21. 解 剖 刀 22. 刮 皮 刀 23. 长 镊 子 24. 工 作 服 25. 口 罩 26. 手 套 27. 标 签 28. 喷 雾 器 二 试 剂 1.2% 新 洁 尔 灭 2. 高 锰 酸 钾 3. 甲 醛 4.70% 酒 精 5. 洗 涤 剂 6. 配 制 MS 培 养 基 母 液 所 需 要 的 药 品 7. 蒸 馏 水 8.95% 的 酒 精 或 0.1mol/L 的 NaOH 0.1mol/LHCL 9. 培 养 基 (MS+10mg/L2,4-D+2mg/L6-BA) 10. 饱 和 漂 白 粉 溶 液 % 甲 苯 胺 蓝 12. 大 而 新 鲜 的 胡 萝 卜 训 练 内 容 一 参 观 植 物 组 织 培 养 实 验 室 1. 由 实 验 指 导 教 师 先 集 中 介 绍 组 织 培 养 实 验 室 守 则 及 有 关 注 意 事 项 然 后 讲 解 本 次 实 验 的 目 的 仪 器 设 备 和 器 皿 用 具 36

38 2. 讲 解 组 织 培 养 实 验 室 的 构 建 情 况, 包 括 缓 冲 室 无 菌 操 作 室 和 培 养 室 的 设 计 要 求 以 及 内 部 仪 器 设 备 的 名 称 及 作 用 ; 准 备 室 的 各 种 仪 器 设 备 和 器 皿 用 具 的 名 称 与 用 途 及 实 习 基 地 的 基 本 情 况 二 植 物 组 织 培 养 实 验 室 器 皿 的 洗 涤 与 灭 菌 1. 地 面 墙 壁 和 工 作 台 的 灭 菌 将 配 好 的 2% 新 洁 尔 灭 溶 液 倒 人 喷 雾 器 中, 对 地 面 墙 壁 角 落 均 匀 地 喷 务 在 喷 房 顶 时 间, 注 意 不 要 让 药 液 滴 入 眼 睛 2. 无 菌 室 和 培 养 室 的 灭 菌 首 先 将 房 子 关 闭, 然 后 用 10ml 甲 醛 和 5g 高 锰 酸 钾 的 配 比 液 进 行 熏 蒸 操 作 时 要 戴 好 口 罩 和 手 套, 用 甲 醛 与 高 锰 酸 钾 配 比 时 要 注 意 避 开 烟 雾 3. 培 养 器 皿 的 洗 涤 与 灭 菌 将 培 养 器 皿 先 用 肥 皂 水 或 洗 衣 粉 浸 泡 几 小 时, 然 后 用 清 水 冲 洗, 最 后 用 蒸 馏 水 冲 一 遍, 烘 干 后 备 用 三 MS 培 养 基 母 液 的 配 制 与 保 存 1. 母 液 的 配 制 (1) 母 液 1 的 配 制 称 量 : 用 电 子 天 平 称 取 下 列 药 品, 分 别 放 入 烧 杯 NH 4 NO g KNO 3 9.5g MgSO 4.H 2 O 1.85g 混 合 : 用 少 量 蒸 馏 水 将 药 品 分 别 溶 解, 然 后 依 次 混 合 定 容 : 加 蒸 馏 水 定 容 至 1000ml 成 50 倍 液 (2) 母 液 2 的 配 制 称 量 : 用 电 子 天 平 称 取 CaCL 2.2H 2 O 22.0g 定 容 : 加 蒸 馏 水 定 容 至 500ml 成 100 倍 液 (3) 母 液 3 的 配 制 称 量 : 用 电 子 天 平 称 取 KH 2 PO 4 8.5g 定 容 : 加 蒸 馏 水 定 容 至 500ml 成 100 倍 液 (4) 母 液 4 的 配 制 称 量 : 用 电 子 天 平 称 取 下 列 药 品, 分 别 放 入 烧 杯 37

39 Na 2 -EDTA 1.85g FeSO 4.7H 2 O 1.39g 混 合 : 用 少 量 蒸 馏 水 将 药 品 分 别 溶 解 后 混 合 定 容 : 加 蒸 馏 水 定 容 至 500ml 成 100 倍 液 (5) 母 液 5 的 配 制 称 量 : 用 电 子 天 平 称 取 下 列 药 品, 分 别 放 入 烧 杯 H 3 BO g NaMoO 4.2H 2 O g MnSO 4.4H 2 O 1.115g CuSO 4.5H 2 O g ZnSO 4.7H 2 O 0.43g CoCL 2.6H 2 O g KI g 混 合 : 用 少 量 蒸 馏 水 将 药 品 分 别 溶 解, 然 后 依 次 混 合 定 容 : 加 蒸 馏 水 定 容 至 500ml 成 100 倍 液 (6) 母 液 6 的 配 制 称 量 : 用 电 子 天 平 称 取 下 列 药 品, 分 别 放 入 烧 杯 肌 醇 5.0 g VB g 甘 氨 酸 0.1g VB g 烟 酸 0.025g 混 合 : 用 少 量 蒸 馏 水 将 药 品 分 别 溶 解 后 混 合 定 容 : 加 蒸 馏 水 定 容 至 500ml 成 100 倍 液 (7) 植 物 生 长 调 节 物 质 母 液 的 配 制 称 量 : 用 电 子 天 平 称 取 生 长 素 或 细 胞 分 裂 素 mg 溶 解 : 生 长 素 用 少 量 95% 的 酒 精 或 0.1mol/L 的 NaOH 溶 解, 细 胞 分 裂 素 用 0.1mol/LHCL 加 热 溶 解 定 容 : 加 蒸 馏 水 定 容 至 100ml 配 制 成 0.5-1mg/L 的 溶 液 2 母 液 的 保 存 (1) 装 瓶 : 将 配 制 好 的 母 液 分 别 倒 入 瓶 中, 贴 好 标 签, 注 明 培 养 基 名 称 母 液 倍 数 与 配 制 日 期 (2) 储 藏 : 将 母 液 瓶 放 在 冰 箱 中 备 用 四 胡 萝 卜 离 体 根 培 养 1. 将 胡 萝 卜 用 自 来 水 冲 洗 干 净, 用 刮 皮 刀 除 去 表 皮 1-2mm, 横 切 成 大 约 10mm 厚 的 切 片 以 下 步 骤 全 部 在 无 菌 条 件 下 进 行 2. 胡 萝 卜 片 经 70% 乙 醇 处 理 几 秒 钟 后, 用 无 菌 水 冲 洗 一 遍, 再 用 饱 和 漂 白 粉 溶 液 浸 泡 38

40 10 分 钟, 无 菌 水 冲 洗 3~4 次 3. 将 胡 萝 卜 片 放 入 培 养 皿 中, 一 手 用 镊 子 固 定 胡 萝 卜 片, 一 手 用 打 孔 器 垂 直 打 孔, 每 个 小 孔 打 在 靠 近 维 管 形 成 层 的 区 域, 务 必 打 穿 组 织 然 后 从 组 织 片 中 抽 出 打 孔 器, 将 胡 萝 卜 组 织 片 收 集 在 装 有 无 菌 水 的 培 养 皿 重 复 打 孔 步 骤, 直 至 收 集 到 足 够 数 量 的 组 织 圆 片 4. 用 镊 子 取 出 组 织 圆 片, 放 入 培 养 皿 中, 用 刀 片 将 组 织 圆 片 切 成 2mm 长 的 小 块, 放 入 装 有 无 菌 水 的 培 养 皿 中 在 整 个 操 作 过 程 中 要 多 次 火 焰 消 毒 镊 子 和 解 剖 刀, 冷 却 后 再 使 用 5. 将 胡 萝 卜 组 织 小 块 转 移 到 灭 菌 过 的 滤 纸 上, 吸 干 水 分 后 接 种 培 养 基 表 面 6. 将 培 养 物 一 部 分 置 于 25 温 箱 中 暗 培 养, 另 一 部 分 到 光 照 培 养 室 中 进 行 培 养, 以 比 较 光 照 和 暗 培 养 对 愈 伤 组 织 诱 导 的 反 映 五 组 培 苗 的 驯 化 与 移 栽 ( 观 看 录 像 参 观 工 厂 ) 进 行 录 像 观 看, 以 及 相 关 组 培 工 厂 的 实 地 观 察 说 明 1. 每 天 的 实 训 内 容 都 需 整 理 成 实 训 报 告 2. 每 人 设 计 一 个 植 物 组 织 培 养 实 验 室 的 构 建 方 案 3. 简 述 组 织 培 养 实 验 室 的 灭 菌 过 程 与 注 意 事 项 4. 将 本 次 实 验 整 理 成 实 训 报 告 并 探 讨 提 高 组 培 苗 移 栽 成 活 率 的 措 施 有 哪 些 5. 第 四 步 骤 中 结 果 及 观 察 : 培 养 约 一 周 后, 外 植 体 表 面 开 始 变 得 粗 糙, 有 许 多 光 亮 点 出 现, 这 是 愈 伤 组 织 开 始 形 成 的 症 状 大 约 经 3 周 后, 将 长 大 的 愈 伤 组 织 切 成 小 块 转 移 到 新 的 培 养 基 上 用 放 大 镜 观 察 愈 伤 组 织 表 面 特 征 用 解 剖 针 挑 取 一 些 细 胞 于 玻 片 上, 在 显 微 镜 下 观 察 愈 伤 组 织 细 胞 的 特 征, 也 可 用 0.05% 甲 苯 胺 蓝 染 色 后 再 进 行 观 察 39